CN106906297A

CN106906297A - 检测肿瘤耐药性变异的检测剂

Info

Publication number: CN106906297A
Application number: CN201710240894.5A
Authority: CN
Inventors: 严令华; 韩宁宁
Original assignee: Changzhou Tung Biotechnology Co Ltd
Current assignee: Changzhou Tung Biotechnology Co Ltd
Priority date: 2017-04-13
Filing date: 2017-04-13
Publication date: 2017-06-30

Abstract

本发明公开了一种检测肿瘤耐药性变异的检测剂，该检测剂包括分别针对EGFR基因及/或ALK基因的继发突变设计的第一检测剂、针对旁路激活基因的变异设计的第二检测剂以及针对驱动转换基因的变异设计的第三检测剂。从而更加全面而具有针对性的检测由EGFR或者ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异性质，使治疗更具有针对性，减少耐药性。

Description

检测肿瘤耐药性变异的检测剂

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种检测肿瘤耐药性变异的检测剂。

背景技术

肿瘤是一组由肿瘤驱动基因所致的恶性疾病，具有高发病率、高死亡率的特征。较为常见的肿瘤驱动基因例如有ALK基因、EGFR基因、AKT1基因、CDK6基因等。近10年来，我国肿瘤的发病率快速增长，严重危害公众健康。临床研究发现，约87％的患者已有可知驱动基因，其中约有81％驱动基因已有明确的靶向抑制剂，66％患者可接受已上市药物的个体化靶向治疗。然而，肿瘤治疗过程中遇到的最大挑战是治疗耐药的问题。靶向治疗导致耐药这一点已经被临床实践证实，因此，迫切需要从源头上搞清楚肿瘤为什么会耐药，才能真正的“对症下药”，从而尽可能的延缓耐药。然而肿瘤时时刻刻在动态变化，不断诞生出新肿瘤细胞，其中就包括一些变异的后代，因此可以说耐药是“肿瘤进化”的结果。以肺腺癌为例，与其他肿瘤相比，肺腺癌显得比较“单纯”一点，肺腺癌主要由EGFR和ALK两个占主要优势驱动基因引起，可通过小分子靶向药TKI在肿瘤细胞内阻断与之相关的信号通道造成肿瘤细胞凋亡。然而，针对EGFR和ALK开发的第一代靶向药TKI，尽管开始治疗效果明显，但往往用不到一年就产生耐药了，而靶向药PFS的耐药周期更短。肿瘤治疗后耐药的情况是普遍存在的，因此有必要通过耐药基因检测识别耐药变异形式，因为只有研究清楚耐药分子机制，才能使治疗更具有针对性，减少耐药性。然而，传统的检测肿瘤耐药性变异的检测剂较为片面，无法针对性的检测由肿瘤驱动基因EGFR或ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性。

发明内容

基于此，有必要提供一种检测肿瘤耐药性变异的检测剂，针对性的用于检测由肿瘤驱动基因EGFR或者由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异形式。

一种检测肿瘤耐药性变异的检测剂，用于检测由EGFR基因或ALK基因驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异，包括第一检测剂、第二检测剂以及第三检测剂；

所述第一检测试剂包括EGFR突变检测剂和/或ALK突变检测剂，所述EGFR突变检测剂用于检测所述EGFR基因的继发突变，所述ALK突变检测剂用于检测所述ALK基因的继发突变；

所述第二检测剂用于检测旁路激活基因的变异，变异后的所述旁路激活基因能够旁路激活EGFR信号通路或者ALK信号通路；

所述第三检测剂用于检测驱动转换基因的变异，所述驱动转换基因为除所述EGFR和所述ALK以外的肿瘤驱动基因。

在一个实施方式中，所述EGFR突变检测剂包括T790M突变检测剂、C797S突变检测剂、L798Q突变检测剂以及L844V突变检测剂，所述T790M突变检测剂用于检测所述EGFR基因的T790M突变，所述C797S突变检测剂用于检测所述EGFR基因的C797S突变，所述L798Q突变检测剂用于检测所述EGFR基因的L798Q突变，所述L844V突变检测剂用于检测所述EGFR基因的L844V突变；及/或，

所述ALK突变检测剂包括I1151T突变检测剂、C1156Y突变检测剂、F1174L突变变检测剂、L1196M突变变检测剂、G1202R突变变检测剂以及G1269A突变变检测剂，所述I1151T突变检测剂用于检测ALK基因的I1151T突变，所述C1156Y突变检测剂用于检测所述ALK基因的C1156Y突变，所述F1174L突变检测剂用于检测所述ALK基因的F1174L突变，所述L1196M突变检测剂用于检测所述ALK基因的L1196M突变，所述G1202R突变检测剂用于检测所述ALK基因的G1202R突变，所述G1269A突变检测剂用于检测所述ALK基因的G1269A突变。

在一个实施方式中，所述T790M突变检测剂包括如SEQ ID No.1所示的核苷酸链；及/或，

所述C797S突变检测剂包括如SEQ ID No.2所示的核苷酸链；及/或，

所述L798Q突变检测剂包括如SEQ ID No.3所示的核苷酸链；及/或，

所述L844V突变检测剂包括如SEQ ID No.4所示的核苷酸链；及/或，

所述I1151T突变检测剂包括如SEQ ID No.5所示的核苷酸链；及/或，

所述C1156Y突变检测剂包括如SEQ ID No.6所示的核苷酸链；及/或，

所述F1174L突变检测剂包括如SEQ ID No.7所示的核苷酸链；及/或，

所述L1196M突变检测剂包括如SEQ ID No.8所示的核苷酸链；及/或，

所述G1202R突变检测剂包括如SEQ ID No.9所示的核苷酸链；及/或，

所述G1269A突变检测剂包括如SEQ ID No.10所示的核苷酸链。

在一个实施方式中，所述第一检测试剂还包括EGFR融合检测剂、ALK融合检测剂以及ALK扩增检测剂；

所述EGFR融合检测剂用于检测所述EGFR基因与融合片段融合后形成的EGFR融合基因，所述EGFR融合检测剂针对7号染色体第55267769～55269109位点区域内的EGFR基因设计；

所述ALK融合检测剂用于检测所述ALK基因与融合片段融合后形成的ALK融合基因，所述ALK融合检测剂针对2号染色体第29446129～29448537位点区域内的ALK基因设计；

所述ALK扩增检测剂用于检测所述ALK基因扩增后形成的ALK扩增基因，所述ALK扩增检测剂针对2号染色体第29576606～30146457位点区域内的ALK基因设计。

在一个实施方式中，所述EGFR融合检测剂包括如SEQ ID No.11～SEQ ID No.12所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述ALK融合检测剂包括如SEQ ID No.13～SEQ ID No.14所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述ALK扩增检测剂包括如SEQ ID No.15～SEQ ID No.16所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，所述第二检测剂包括MET扩增检测剂、IGF1R激活检测剂、FGFR1激活检测剂以及FGFR2激活检测剂；

所述MET扩增检测剂用于检测MET基因扩增后形成的MET扩增基因，所述MET扩增检测剂针对7号染色体第116310403～116438428位点区域内的MET基因设计；

所述IGF1R激活检测剂用于检测IGF1R激活后形成的IGF1R激活基因，所述IGF1R激活检测剂针对15号染色体第99192797～99500720位点区域内的IGF1R基因设计；

所述FGFR1激活检测剂用于检测FGFR1激活后形成的FGFR1激活基因，所述FGFR1激活检测剂针对8号染色体第38268105～38328281位点区域内的FGFR1基因设计；

所述FGFR2激活检测剂用于检测FGFR2激活后形成的FGFR2激活基因，所述FGFR2激活检测剂针对10号染色体第123239075～123353337位点区域内的FGFR2基因设计。

在一个实施方式中，所述MET扩增检测剂包括如SEQ ID No.17～SEQ ID No.18所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述IGF1R激活检测剂包括如SEQ ID No.19～SEQ ID No.20所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述FGFR1激活检测剂包括如SEQ ID No.21～SEQ ID No.22所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述FGFR2激活检测剂包括如SEQ ID No.23～SEQ ID No.24所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，所述第三检测剂包括PIK3CA检测剂、PTEN检测剂、BRAF检测剂、KRAS检测剂、RET检测剂以及ROS1检测剂；

所述PIK3CA检测剂用于检测PIK3CA基因是否发生变异；

所述PTEN检测剂用于检测PTEN基因是否发生变异；

所述BRAF检测剂用于检测BRAF基因是否发生变异；

所述KRAS检测剂用于检测KRAS基因是否发生变异；

所述RET检测剂用于检测RET基因是否发生变异；

所述ROS1检测剂用于检测ROS1基因是否发生变异。

在一个实施方式中，所述PIK3CA检测剂包括如SEQ ID No.25～SEQ ID No.26所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述PTEN检测剂包括如SEQ ID No.27～SEQ ID No.28所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述BRAF检测剂包括如SEQ ID No.29～SEQ ID No.30所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述KRAS检测剂包括如SEQ ID No.31～SEQ ID No.32所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述RET检测剂包括如SEQ ID No.33～SEQ ID No.34所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

所述ROS1检测剂包括如SEQ ID No.35～SEQ ID No.36所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，所述第三检测剂还包括AKT1检测剂、CCND1检测剂、CDK4检测剂、CDK6检测剂、COL22A1检测剂、CREBBP检测剂、CUL3检测剂、DDR2检测剂、DHFR检测剂、DYNC2H1检测剂、ERBB2检测剂、ERCC1检测剂、FGFR3检测剂、FLT1检测剂、FLT3检测剂、FMN2检测剂、FOLR3检测剂、FPR1检测剂、GGH检测剂、HRAS检测剂、KDR检测剂、KEAP1检测剂、KIAA1211检测剂、KIT检测剂、MAP2K1检测剂、MTHFR检测剂、NF1检测剂、NFE2L2检测剂、NOTCH1检测剂、NOTCH3检测剂、NRAS检测剂、NTRK1检测剂、PARP1检测剂、PDGFRA检测剂、PIK3R1检测剂、RASA1检测剂、RB1检测剂、RBL1检测剂、RBL2检测剂、RGS7检测剂、RICTOR检测剂、SLC19A1检测剂、SMO检测剂、SOX2检测剂、TP53检测剂、TP63检测剂、TSC1检测剂、UGT1A1检测剂、VEGFA检测剂以及XRCC1检测剂；

所述AKT1检测剂用于检测AKT1基因是否发生变异；

所述CCND1检测剂用于检测CCND1基因是否发生变异；

所述CDK4检测剂用于检测CDK4基因是否发生变异；

所述CDK6检测剂用于检测CDK6基因是否发生变异；

所述COL22A1检测剂用于检测COL22A1基因是否发生变异；

所述CREBBP检测剂用于检测CREBBP基因是否发生变异；

所述CUL3检测剂用于检测CUL3基因是否发生变异；

所述DDR2检测剂用于检测DDR2基因是否发生变异；

所述DHFR检测剂用于检测DHFR基因是否发生变异；

所述DYNC2H1检测剂用于检测DYNC2H1基因是否发生变异；

所述ERBB2检测剂用于检测ERBB2基因是否发生变异；

所述ERCC1检测剂用于检测ERCC1基因是否发生变异；

所述FGFR3检测剂用于检测FGFR3基因是否发生变异；

所述FLT1检测剂用于检测FLT1基因是否发生变异；

所述FLT3检测剂用于检测FLT3基因是否发生变异；

所述FMN2检测剂用于检测FMN2基因是否发生变异；

所述FOLR3检测剂用于检测FOLR3基因是否发生变异；

所述FPR1检测剂用于检测FPR1基因是否发生变异；

所述GGH检测剂用于检测GGH基因是否发生变异；

所述HRAS检测剂用于检测HRAS基因是否发生变异；

所述KDR检测剂用于检测KDR基因是否发生变异；

所述KEAP1检测剂用于检测KEAP1基因是否发生变异；

所述KIAA1211检测剂用于检测KIAA1211基因是否发生变异；

所述KIT检测剂用于检测KIT基因是否发生变异；

所述MAP2K1检测剂用于检测MAP2K1基因是否发生变异；

所述MTHFR检测剂用于检测MTHFR基因是否发生变异；

所述NF1检测剂用于检测NF1基因是否发生变异；

所述NFE2L2检测剂用于检测NFE2L2基因是否发生变异；

所述NOTCH1检测剂用于检测NOTCH1基因是否发生变异；

所述NOTCH3检测剂用于检测NOTCH3基因是否发生变异；

所述NRAS检测剂用于检测NRAS基因是否发生变异；

所述NTRK1检测剂用于检测NTRK1基因是否发生变异；

所述PARP1检测剂用于检测PARP1基因是否发生变异；

所述PDGFRA检测剂用于检测PDGFRA基因是否发生变异；

所述PIK3R1检测剂用于检测PIK3R1基因是否发生变异；

所述RASA1检测剂用于检测RASA1基因是否发生变异；

所述RB1检测剂用于检测RB1基因是否发生变异；

所述RBL1检测剂用于检测RBL1基因是否发生变异；

所述RBL2检测剂用于检测RBL2基因是否发生变异；

所述RGS7检测剂用于检测RGS7基因是否发生变异；

所述RICTOR检测剂用于检测RICTOR基因是否发生变异；

所述SLC19A1检测剂用于检测SLC19A1基因是否发生变异；

所述SMO检测剂用于检测SMO基因是否发生变异；

所述SOX2检测剂用于检测SOX2基因是否发生变异；

所述TP53检测剂用于检测TP53基因是否发生变异；

所述TP63检测剂用于检测TP63基因是否发生变异；

所述TSC1检测剂用于检测TSC1基因是否发生变异；

所述UGT1A1检测剂用于检测UGT1A1基因是否发生变异；

所述VEGFA检测剂用于检测VEGFA基因是否发生变异；

所述XRCC1检测剂用于检测XRCC1基因是否发生变异。

上述检测剂包括针对原有驱动基因EGFR基因及/或ALK基因的继发突变设计的第一检测剂、针对旁路激活基因的变异设计的第二检测剂以及针对驱动转换基因的变异设计的第三检测剂。分别针对原有驱动基因的继发突变、旁路激活或者驱动基因转换等可能的肿瘤变异形式均分别设计检测剂，从而更加全面而具有针对性的检测由肿瘤驱动基因EGFR或者由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异的形式，使治疗更具有针对性，减少耐药性。

具体实施方式

下面主要结合具体实施例对本发明做进一步的解释说明。

一实施方式的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，用于检测由EGFR基因或ALK基因驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异，该检测剂包括第一检测剂、第二检测剂以及第三检测剂。

其中，第一检测剂包括EGFR突变检测剂和/或ALK突变检测剂，EGFR突变检测剂用于检测EGFR基因的继发突变，ALK突变检测剂用于检测ALK基因的继发突变。在由EGFR驱动的肿瘤及/或由ALK驱动的肿瘤中，EGFR、ALK分别为原有驱动基因，参与EGFR信号通路或者ALK信号通路内。原有驱动基因的原发性突变将可能驱动肿瘤，用药后，原有驱动基因可能产生继发突变，也称二次突变。原有驱动基因继发突变发生后，导致原有驱动基因的空间构象改变，靶向药物无法有效封锁住原有的信号通道，使得EGFR信号通路或者ALK信号通路重新激活，从而导致耐药。本实施方式中，第一检测剂针对EGFR基因的继发突变或者ALK基因的继发突变设计，针对性的检测原有驱动基因的是否发生继发突变。

第二检测剂用于检测旁路激活基因的变异。具体的，旁路激活基因是指能够旁路激活EGFR信号通路或者ALK信号通路的驱动基因。例如MET基因、IGF1R基因、FGFR1基因或者FGFR2基因。一般的，对肿瘤采取药物治疗后，信号通路内的原有驱动基因受抑制，但可能会出现新的旁路激活基因。例如MET的扩增可能会导致信号通路改变激活途径，导致靶向药物对信号通路的封锁失效。本实施方式中，第二检测剂针对这些变异后能够旁路激活EGFR信号通路或者ALK信号通路的基因设计，针对性的检测是否有旁路激活基因变异改变导致耐药。

第三检测剂用于检测驱动转换基因，具体地，驱动转换基因包括了除EGFR和ALK以外的肿瘤驱动基因。例如PIK3CA基因、PTEN基因、BRAF基因、KRAS基因、RET基因或ROS1基因等。在一些肿瘤中，即使EGFR基因或者ALK基因为主要驱动基因，但由于肿瘤中也同时存在大量的不同突变，且肿瘤具有增殖快、遗传不稳定的特征，因此几十代增殖后会可能会积累大量变异细胞，其中很可能已经出现了对靶向制剂耐药的驱动基因，即驱动肿瘤的基因发生了转换而导致了耐药。本实施方式中，第三检测剂针对这些驱动转换基因设计，针对性的检测是否有驱动转换基因变异导致耐药。

上述检测剂包括针对原有驱动基因EGFR基因及/或ALK基因的继发突变设计的第一检测剂、针对旁路激活基因的变异设计的第二检测剂以及针对驱动转换基因的变异设计的第三检测剂。分别针对原有驱动基因的继发突变、旁路激活或者驱动基因转换等可能的肿瘤变异形式均分别设计检测剂，这种设计方案能够更加全面而具有针对性的检测由肿瘤驱动基因EGFR或者由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异形式，使肿瘤治疗更具有针对性，减少耐药性。

具体地，根据检测方法不同，上述检测剂例如可以是探针或引物等。本实施方式中，检测剂为探针，探针捕获灵敏度高、特异性好。

在一个实施方式，EGFR突变检测剂包括T790M突变检测剂、C797S突变检测剂、L798Q突变检测剂以及L844V突变检测剂。其中，T790M突变检测剂用于检测EGFR基因的T790M突变。C797S突变检测剂用于检测EGFR基因的C797S突变。L798Q突变检测剂用于检测EGFR基因的L798Q突变。L844V突变检测剂用于检测EGFR基因的L844V突变。T790M突变是指EGFR的外显子第790位点由原来的苏氨酸突变为甲硫氨酸，C797S突变是指EGFR的外显子第797位点由原来的半胱氨酸突变为丝氨酸。L798Q突变指EGFR的外显子第798位点由原来的亮氨酸突变为谷氨酰胺。L844V突变指EGFR的外显子第844位点由原来的亮氨酸突变为缬氨酸。

在一个实施方式，ALK突变检测剂包括I1151T突变检测剂、C1156Y突变检测剂、F1174L突变变检测剂、L1196M突变变检测剂、G1202R突变变检测剂以及G1269A突变变检测剂。I1151T突变检测剂用于检测ALK基因的I1151T突变。C1156Y突变检测剂用于检测ALK基因的C1156Y突变。F1174L突变检测剂用于检测ALK基因的F1174L突变。L1196M突变检测剂用于检测ALK基因的L1196M突变。G1202R突变检测剂用于检测ALK基因的G1202R突变。G1269A突变检测剂用于检测ALK基因的G1269A突变。I1151T是指ALK的外显子第1151位点由原来的异亮氨酸突变为苏氨酸，其他的C1156Y突变、F1174L突变、L1196M突变、G1202R突变以及G1269A突变也类似的分别为ALK的外显子相应的位点上产生基因突变。

进一步地，在一个实施方式中，T790M突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.1所示。

在一个实施方式中，C797S突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.2所示。

在一个实施方式中，L798Q突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.3所示。

在一个实施方式中，L844V突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.4所示。

在一个实施方式中，I1151T突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.5所示。

在一个实施方式中，C1156Y突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.6所示。

在一个实施方式中，F1174L突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.7所示。

在一个实施方式中，L1196M突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.8所示。

在一个实施方式中，G1202R突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.9所示。

在一个实施方式中，G1269A突变检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.10所示。

具体地，第一检测试剂包括如SEQ ID No.1～SEQ ID No.10所示的核苷酸链中的至少一条。更进一步的，第一检测试剂包括如SEQ ID No.1～SEQ ID No.10所示的10条核苷酸链。例如，当EGFR基因中，有T790M突变时，SEQ ID No.1所示的核苷酸链能够特异性的捕获到该突变基因，其他的突变检测试剂也类似。经试验表明，上述核苷酸链灵敏度高，能够特异性的捕获相应位点的突变基因，从而获知由肿瘤驱动基因EGFR或者由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异形式。

在一个实施方式中，第一检测试剂包括上述的EGFR突变检测剂与ALK突变检测剂，第一检测试剂还包括EGFR融合检测剂、ALK融合检测剂以及ALK扩增检测剂。EGFR融合检测剂用于检测EGFR基因与融合片段融合后形成的EGFR融合基因，EGFR融合检测剂针对7号染色体第55267769～55269109位点区域内的EGFR基因设计。ALK融合检测剂用于检测ALK基因与融合片段融合后形成的ALK融合基因，ALK融合检测剂针对2号染色体第29446129～29448537位点区域内的ALK基因设计。ALK扩增检测剂用于检测ALK基因扩增后形成的ALK扩增基因，ALK扩增检测剂针对2号染色体第29576606～30146457位点区域内的ALK基因设计。

一般地，基因融合是指两个或多个基因编码区相连，在调控序列(包括启动子、增强子、核糖体结合序列、终止子等)的控制之下，部分或全部的序列构成一个新的杂合基因。发生基因融合后，相应的位点区域的基因发生改变。EGFR或者ALK与融合片段发生基因融合后，原有的构象发生改变，原有的靶向制剂的不能有效抑制肿瘤的增殖，从而导致耐药。通过特异性的针对EGFR、ALK设计相应的融合检测剂。例如当EGFR基因与融合片段发生融合时，EGFR基因内部的某些位点区域的序列会发生改变，通过EGFR融合检测剂能够针对性的捕获到发生融合后的EGFR融合基因，从而检测EGFR在特定的位点区域是否与融合片段发生基因融合。ALK融合检测剂的设计方案也类似。

在一个实施方式中，EGFR融合检测剂、ALK融合检测剂设计针对的融合片段可源自CCDC6基因、CD74基因、CLTC基因、ERC1基因、EZR基因、GOLGA5基因、GOPC基因、KIF5B基因、KLC1基因、KTN1基因、LRIG3基因、NCOA4基因、NPM1基因、PRKAR1A基因、PURB基因、RAD51基因、SDC4基因、SLC34A2基因、STRN基因、TFG基因、TPM3基因、TRIM24基因及TRIM33基因中的至少一种。上述基因中的一些片段容易与EGFR基因或者ALK基因发生基因融合。因此针对性的对上述融合片段设计相应的EGFR融合检测剂、ALK融合检测剂，能够提高检测的确确性。

ALK扩增可能会导致肿瘤的增殖迅速，原有剂量的靶向药物可能不足以抑制肿瘤，从而到导致肿瘤的耐药。本实施方式中特异性的针对ALK扩增设计ALK扩增检测剂，从而更加全面的获知肿瘤耐药的产生变异形式。

具体地，在一个实施方式中，EGFR融合检测剂包括如SEQ ID No.11～SEQ IDNo.12所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，ALK融合检测剂包括如SEQ ID No.13～SEQ ID No.14所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，ALK扩增检测剂包括如SEQ ID No.15～SEQ ID No.16所示的核苷酸链中的至少一条。

具体地，第一检测试剂包括如SEQ ID No.11～SEQ ID No.16所示的核苷酸链中的至少一条。更进一步的，第一检测试剂包括如SEQ ID No.1～SEQ ID No.16所示的16条核苷酸链。例如，当EGFR基因中有EGFR融合时，SEQ ID No.11或者SEQ ID No.12所示的核苷酸链能够特异性的捕获到该融合基因，ALK融合检测剂也类似。当ALK扩增异常时，通过ALK扩增检测剂能够检测ALK基因的基准SNP位点是否异常，从而检测ALK的扩增。经试验表明，上述核苷酸链灵敏度高，能够特异性的捕获相应位点的融合基因或者扩增基因，从而获知由肿瘤驱动基因EGFR或者由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异形式。

在一个实施方式中，第二检测剂包括MET扩增检测剂、IGF1R激活检测剂、FGFR1激活检测剂以及FGFR2激活检测剂。MET扩增检测剂用于检测MET基因扩增后形成的MET扩增基因，MET扩增检测剂针对7号染色体第116310403～116438428位点区域内的MET基因设计。IGF1R激活检测剂用于检测IGF1R激活后形成的IGF1R激活基因，IGF1R激活检测剂针对15号染色体第99192797～99500720位点区域内的IGF1R基因设计。FGFR1激活检测剂用于检测FGFR1激活后形成的FGFR1激活基因，FGFR1激活检测剂针对8号染色体第38268105～38328281位点区域内的FGFR1基因设计。FGFR2激活检测剂用于检测FGFR2激活后形成的FGFR2激活基因，FGFR2激活检测剂针对10号染色体第123239075～123353337位点区域内的FGFR2基因设计。MET扩增、IGF1R激活、FGFR1激活以及FGFR2激活均可能会导致EGFR或者ATK的信号通路的激活途径改变，从而导致靶向药物对信号通路的封锁失效。

具体地，在一个实施方式中，MET扩增检测剂包括如SEQ ID No.17～SEQ ID No.18所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，IGF1R激活检测剂包括如SEQ ID No.19～SEQ ID No.20所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，FGFR1激活检测剂包括如SEQ ID No.21～SEQ ID No.22所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，FGFR2激活检测剂包括如SEQ ID No.23～SEQ ID No.24所示的核苷酸链中的至少一条。

具体地，第二检测试剂包括如SEQ ID No.17～SEQ ID No.24所示的核苷酸链中的至少一条。更进一步的，第二检测试剂包括如SEQ ID No.17～SEQ ID No.24所示的8条核苷酸链。例如，当MET扩增异常时，通过MET扩增检测剂能够检测MET基因的基准SNP位点是否异常，从而检测MET的扩增。当IGF1R激活异常时，通过IGF1R激活检测剂检测，并对比耐药的肿瘤患者与对正常人的IGF1R基因激活水平，从而检测IGF1R的激活。其他的激活检测剂也类似。经试验表明，上述核苷酸链灵敏度高，能够特异性的捕获相应位点的者激活基因。

在一个实施方式中，第三检测剂包括PIK3CA检测剂、PTEN检测剂、BRAF检测剂、KRAS检测剂、RET检测剂以及ROS1检测剂。PIK3CA检测剂用于检测PIK3CA基因是否发生变异。PTEN检测剂用于检测PTEN基因是否发生变异。BRAF检测剂用于检测BRAF基因是否发生变异。KRAS检测剂用于检测KRAS基因是否发生变异。RET检测剂用于检测RET基因是否发生变异。ROS1检测剂用于检测ROS1基因是否发生变异。由肿瘤驱动基因EGFR或者由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后，可能会导致上述驱动基因的变异，使得该患者的肿瘤驱动基因发生转换，产生耐药性。

具体地，PIK3CA检测剂针对3号染色体第178865894～178957921位点区域内的PIK3CA基因设计。PTEN检测剂针对10号染色体第89624205～89725256位点区域内的PTEN基因设计。BRAF检测剂针对7号染色体第140453074～140481494位点区域内的BRAF基因设计。KRAS检测剂针对12号染色体第25357700～25403960位点区域内的KRAS基因设计。RET检测剂针对10号染色体第43572385～43625909位点区域内的RET基因设计。ROS1检测剂针对6号染色体第117609414～117747037位点区域内的ROS1基因设计。

在一个实施方式中，PIK3CA检测剂包括如SEQ ID No.25～SEQ ID No.26所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，PTEN检测剂包括如SEQ ID No.27～SEQ ID No.28所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，BRAF检测剂包括如SEQ ID No.29～SEQ ID No.30所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，KRAS检测剂包括如SEQ ID No.31～SEQ ID No.32所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，RET检测剂包括如SEQ ID No.33～SEQ ID No.34所示的核苷酸链中的至少一条。

在一个实施方式中，ROS1检测剂包括如SEQ ID No.35～SEQ ID No.36所示的核苷酸链中的至少一条。

具体地，如SEQ ID No.25所示的序列能够特异性的诱导正常的PIK3CA基因的扩增，通过SEQ ID No.25所示的序列检测并对比耐药的肿瘤患者与对正常人的检测结果，判定PIK3CA基因是否发生变异，其他的检测剂例如PTEN检测剂、BRAF检测剂、KRAS检测剂、RET检测剂以及ROS1检测剂等原理类似。

具体地，第三测试剂包括如SEQ ID No.25～SEQ ID No.36所示的核苷酸链中的至少一条。更进一步的，第三检测试剂包括如SEQ ID No.25～SEQ ID No.36所示的12条核苷酸链。

在一个实施方式中，第三检测剂还包括AKT1检测剂、CCND1检测剂、CDK4检测剂、CDK6检测剂、COL22A1检测剂、CREBBP检测剂、CUL3检测剂、DDR2检测剂、DHFR检测剂、DYNC2H1检测剂、ERBB2检测剂、ERCC1检测剂、FGFR3检测剂、FLT1检测剂、FLT3检测剂、FMN2检测剂、FOLR3检测剂、FPR1检测剂、GGH检测剂、HRAS检测剂、KDR检测剂、KEAP1检测剂、KIAA1211检测剂、KIT检测剂、MAP2K1检测剂、MTHFR检测剂、NF1检测剂、NFE2L2检测剂、NOTCH1检测剂、NOTCH3检测剂、NRAS检测剂、NTRK1检测剂、PARP1检测剂、PDGFRA检测剂、PIK3R1检测剂、RASA1检测剂、RB1检测剂、RBL1检测剂、RBL2检测剂、RGS7检测剂、RICTOR检测剂、SLC19A1检测剂、SMO检测剂、SOX2检测剂、TP53检测剂、TP63检测剂、TSC1检测剂、UGT1A1检测剂、VEGFA检测剂以及XRCC1检测剂。

具体地，AKT1检测剂用于检测AKT1基因是否发生变异，其中一实施方式的AKT1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.37所示。CCND1检测剂用于检测CCND1基因是否发生变异，其中一实施方式的CCND1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.38所示。CDK4检测剂用于检测CDK4基因是否发生变异，其中一实施方式的CDK4检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.39所示。CDK6检测剂用于检测CDK6基因是否发生变异，其中一实施方式的CDK4检测剂的核苷酸链如SEQID No.40所示。COL22A1检测剂用于检测COL22A1基因是否发生变异，其中一实施方式的COL22A1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.41所示。CREBBP检测剂用于检测CREBBP基因是否发生变异。其中一实施方式的CREBBP检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.42所示。CUL3检测剂用于检测CUL3基因是否发生变异，其中一实施方式的CUL3检测剂的核苷酸链如SEQ IDNo.43所示。DDR2检测剂用于检测DDR2基因是否发生变异，其中一实施方式的DDR2检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.44所示。DHFR检测剂用于检测DHFR基因是否发生变异，其中一实施方式的DHFR检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.45所示。DYNC2H1检测剂用于检测DYNC2H1基因是否发生变异，其中一实施方式的DYNC2H1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.46所示。ERBB2检测剂用于检测ERBB2基因是否发生变异，其中一实施方式的ERBB2检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.47所示。ERCC1检测剂用于检测ERCC1基因是否发生变异，其中一实施方式的ERBB2检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.48所示。FGFR3检测剂用于检测FGFR3基因是否发生变异，其中一实施方式的FGFR3检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.49所示。FLT1检测剂用于检测FLT1基因是否发生变异，其中一实施方式的FLT1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.50所示。FLT3检测剂用于检测FLT3基因是否发生变异，其中一实施方式的FLT3检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.51所示。FMN2检测剂用于检测FMN2基因是否发生变异，其中一实施方式的FMN2检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.52所示。FOLR3检测剂用于检测FOLR3基因是否发生变异，其中一实施方式的FOLR3检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.53所示。FPR1检测剂用于检测FPR1基因是否发生变异，其中一实施方式的FPR1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.54所示。GGH检测剂用于检测GGH基因是否发生变异，其中一实施方式的GGH检测剂的核苷酸链如SEQID No.55所示。HRAS检测剂用于检测HRAS基因是否发生变异，其中一实施方式的HRAS检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.56所示。KDR检测剂用于检测KDR基因是否发生变异，其中一实施方式的KDR检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.57所示。KEAP1检测剂用于检测KEAP1基因是否发生变异，其中一实施方式的KEAP1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.58所示。KIAA1211检测剂用于检测KIAA1211基因是否发生变异，其中一实施方式的KIAA1211检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.59所示。KIT检测剂用于检测KIT基因是否发生变异，其中一实施方式的KIT检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.60所示。MAP2K1检测剂用于检测MAP2K1基因是否发生变异，其中一实施方式的MAP2K1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.61所示。MTHFR检测剂用于检测MTHFR基因是否发生变异，其中一实施方式的MTHFR检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.62所示。NF1检测剂用于检测NF1基因是否发生变异，其中一实施方式的NF1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.63所示。NFE2L2检测剂用于检测NFE2L2基因是否发生变异，其中一实施方式的NFE2L2检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.64所示。NOTCH1检测剂用于检测NOTCH1基因是否发生变异，其中一实施方式的NOTCH1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.65所示。NOTCH3检测剂用于检测NOTCH3基因是否发生变异，其中一实施方式的NOTCH3检测剂的核苷酸链如SEQ IDNo.66所示。NRAS检测剂用于检测NRAS基因是否发生变异，其中一实施方式的NRAS检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.67所示。NTRK1检测剂用于检测NTRK1基因是否发生变异，其中一实施方式的NTRK1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.68所示。PARP1检测剂用于检测PARP1基因是否发生变异，其中一实施方式的PARP1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.69所示。PDGFRA检测剂用于检测PDGFRA基因是否发生变异，其中一实施方式的PDGFRA检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.70所示。PIK3R1检测剂用于检测PIK3R1基因是否发生变异，其中一实施方式的PIK3R1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.71所示。RASA1检测剂用于检测RASA1基因是否发生变异，其中一实施方式的RASA1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.72所示。RB1检测剂用于检测RB1基因是否发生变异，其中一实施方式的RB1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.73所示。RBL1检测剂用于检测RBL1基因是否发生变异，其中一实施方式的RBL1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.74所示。RBL2检测剂用于检测RBL2基因是否发生变异，其中一实施方式的RBL2检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.75所示。RGS7检测剂用于检测RGS7基因是否发生变异，其中一实施方式的RGS7检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.76所示。RICTOR检测剂用于检测RICTOR基因是否发生变异，其中一实施方式的RICTOR检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.77所示。SLC19A1检测剂用于检测SLC19A1基因是否发生变异，其中一实施方式的SLC19A1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.78所示。SMO检测剂用于检测SMO基因是否发生变异，其中一实施方式的SMO检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.79所示。SOX2检测剂用于检测SOX2基因是否发生变异，其中一实施方式的SOX2检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.80所示。TP53检测剂用于检测TP53基因是否发生变异，其中一实施方式的TP53检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.81所示。TP63检测剂用于检测TP63基因是否发生变异，其中一实施方式的TP63检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.82所示。TSC1检测剂用于检测TSC1基因是否发生变异，其中一实施方式的TSC1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.83所示。UGT1A1检测剂用于检测UGT1A1基因是否发生变异，其中一实施方式的UGT1A1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.84所示。VEGFA检测剂用于检测VEGFA基因是否发生变异，其中一实施方式的VEGFA检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.85所示。XRCC1检测剂用于检测XRCC1基因是否发生变异，其中一实施方式的XRCC1检测剂的核苷酸链如SEQ ID No.86所示。

具体地，第三测试剂包括如SEQ ID No.25～SEQ ID No.86所示的核苷酸链中的至少一条。

更进一步的，第三检测试剂包括如SEQ ID No.25～SEQ ID No.86所示的62条核苷酸链。上述设计的第三检测试剂特异性的针对潜在的肿瘤驱动转换基因设计，全面性的检测是否有驱动转换基因导致耐药。

在一个实施方式中，上述检测肿瘤耐药性变异的检测剂包括SEQ ID No.1～SEQID No.86所示的86条核苷酸链。进一步的，上述核苷酸链均为探针的形式排布在基因芯片上。可以理解，在其他实施例中，检测剂的核苷酸链也不限于上述SEQ ID No.1～SEQ IDNo.86所示的序列，还可以根据本设计方案的构思和相应的位点区域，设计其他序列。

上述检测肿瘤耐药性变异的检测剂包括针对原有驱动基因EGFR基因及/或ALK基因的继发突变设计的第一检测剂、针对旁路激活基因的变异设计的第二检测剂以及针对驱动转换基因的变异设计的第三检测剂。分别针对原有驱动基因的继发突变、旁路激活或者驱动基因转换等可能的肿瘤变异形式均分别设计检测剂，这种设计方案能够更加全面而具有针对性的检测由肿瘤驱动基因EGFR或者由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异形式，使肿瘤治疗更具有针对性，减少耐药性。

上述检测剂可以应用于检测由肿瘤驱动基因EGFR及/或由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异形式。例如用于检测肺癌的耐药变异形式。

进一步地，可以根据上述检测剂的临床检测数据，判断肿瘤耐药性的原因，从而指导用药。例如有实验表明，发现MET扩增随后可选择克唑替尼治疗，治疗后肿瘤缩小了56％，并持续了10个月。再例如，在一次实验中，有一个非小细胞肺癌患者，治疗前基因检测显示为ALK基因突变阳性，接受了克唑替尼(靶向ALK基因的小分子药物)一线治疗，治疗效果良好且一直持续到治疗后的第18周。此时CT检查在腹部发现了新的淋巴结病变。基因检测发现了一个ALK基因的C1156Y这个位点的突变，可能导致克唑替尼治疗耐药。建议中断克唑替尼治疗，转而进行色瑞替尼(靶向ALK基因C1156Y位点的小分子药物)二线治疗，有效缓解病情。这次的基因检测非常明确地发现了ALK基因的耐药突变位点，且有证据显示克唑替尼对这两个位点引起的耐药是有抑制作用的。通过耐药性的检测，发现耐药的变异形式，使得用药更具针对性。

综上，上述检测肿瘤耐药性变异的检测剂对样本的需求量少，通过分别针对原有驱动基因的继发突变、旁路激活或者驱动基因转换等可能的肿瘤变异形式均分别设计检测剂，全面而具有针对性的检测由肿瘤驱动基因EGFR或者由肿瘤驱动基因ALK驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异形式，使肿瘤治疗更具有针对性，减少耐药性。

下面为具体实施例部分。

以下实施例中，如无特别说明，未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。

实施例1

在检测肿瘤耐药性的检测芯片上设有86个核苷酸链的探针，核苷酸链的序列分别如SEQ ID No.1～SEQ ID No.86所示。用该检测芯片检测非小细胞肺癌患者的静脉血为样本(由中日医院提供)中的耐药性原因。测序平台为Illumina，参考基因组为GRCh37/hg19，参考转录组为Ensembl-75。参考数据库有COSMIC(版本v74)、dbSNP(版本v142)、iCMDB(版本4.0.0)。过滤条件如下：

1.保留满足以下过滤条件的变异:a.碱基质量>20，b.序列比对质量>50，c.链偏好性<90％，d.P值<0.001支持变异的测序短片段数目vs.期望基准误差，e.变异位点总读数深度>＝30，f.样本中支持SNP变异的测序短片段读数>＝3，g.样本中支持Indel变异的测序短片段数>＝5。2.其它过滤条件使用软件默认参数3.只保留非同义突变，或者位于基因编码区/选择性拼接位点的插入/缺失变异。4.只保留panel目标检测区的变异。5.与靶向药物/化疗药物/预后相关的突变位点列在了临床相关突变列表中。6.不满足条件5的变异位点，但位于文献报道的有临床意义的区域(密码子、外显子、基因或染色体)列在了临床相关变异区域列表中。7.具有临床意义的多态位点列在了临床相关多态位点列表中。

通过检测芯片上的探针检测样本中的序列，并与正常人作对比。

患者EGFR基因发生T790M突变(第790由苏氨酸突变为甲硫氨酸)，T790M突变的突变位点位于7号染色体外显子20上。其他驱动基因KDR突变频率高。

针对该检测结果推荐治疗药物:(1)osimertinib(AZD9291)，FDA已批准。(2)rociletinib(CO-1686)，临床试验阶段。(3)HM61713，临床试验阶段。(4)艾维替尼(AC0010)，临床试验阶段。

以上结果显示，通过该肿瘤耐药性的检测芯片，80％EGFR-TKI耐药变异形式和70％ALK-TKI耐药变异形式可以被识别。该检测芯片灵敏度高，一次检测即能够同时检测包括AKT1、ALK、BRAF、CCND1、CDK4、CDK6、COL22A1、CREBBP、CUL3、DDR2、DHFR、DYNC2H1、EGFR、ERBB2、ERCC1、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FLT1、FLT3、FMN2、FOLR3、FPR1、GGH、HRAS、IGF1R、KDR、KEAP1、KIAA1211、KIT、KRAS、MAP2K1、MET、MTHFR、NF1、NFE2L2、NOTCH1、NOTCH3、NRAS、NTRK1、PARP1、PDGFRA、PIK3CA、PIK3R1、PTEN、RASA1、RB1、RBL1、RBL2、RET、RGS7、RICTOR、ROS1、SLC19A1、SMO、SOX2、TP53、TP63、TSC1、UGT1A1、VEGFA以及XRCC1共62种驱动基因的变异情况，不同的耐药变异形式适用不同的治疗策略，上述肿瘤耐药高度相关的62种基因变异情况，涵盖目前EGFR/ALK耐药通路的基因变异，为患者明确耐药变异形式。

以上所述实施例仅表达了本发明的一种或几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

SEQUENCE LISTING

<110> 常州桐树生物科技有限公司

<120> 检测肿瘤耐药性变异的检测剂

<160> 86

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

cactgacgtg cctctccctc cctccaggaa gcctacgtga tggccagcgt ggacaacccc 60

cacgtgtgcc gcctgctggg catctgcctc acctccaccg tgcagctcat cacgcagctc 120

<210> 2

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

atgcccttcg gctgcctcct ggactatgtc cgggaacaca aagacaatat tggctcccag 60

tacctgctca actggtgtgt gcagatcgca aaggtaatca gggaagggag atacggggag 120

<210> 3

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

atgatgatct gtccctcaca gcagggtctt ctctgtttca gggcatgaac tacttggagg 60

accgtcgctt ggtgcaccgc gacctggcag ccaggaacgt actggtgaaa acaccgcagc 120

<210> 4

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

atgtcaagat cacagatttt gggctggcca aactgctggg tgcggaagag aaagaatacc 60

atgcagaagg aggcaaagta aggaggtggc tttaggtcag ccagcatttt cctgacacca 120

<210> 5

<211> 119

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ggcctccact ggtgacaaac tccagaactt cctggttgct tttgctgggg tatggcatat 60

atccaagaga aaagatttcc catagcagca ctccaaagga cctgggcatg ggacagagg 119

<210> 6

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

tgaaccgggg cagggattgc aggctcaccc caatgcagcg aacaatgttc tggtggttga 60

atttgctgca gagcagagag ggatgtaacc aaaattaact gagctgagtc tgggcaaatc 120

<210> 7

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

gagaagctac cttttaaagc tggggtgtac aggatgccca gtggactgat gaaggaaacc 60

ccatcttccc catccatttc ggggtcattg tttgaggctg cattgccgcc tgagtagcaa 120

<210> 8

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

tctgcctttt gcaacaagaa gttactgtgc tcacatttgt gagctgaacc cttacctgta 60

gggtcaaaga tgggggtctg tcttggtgaa ttttccccgg gtttcagctc cttgtttggg 120

<210> 9

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

gacacatcta acacaatagg ctaccaagga gcgtgggaaa gccagattca gataccttca 60

ctgcagttct tcagggcaaa gaagtccact gcagacaagc tgcggtttcc actggagatg 120

<210> 10

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

cggcggcagc agctgagggc gttcagggca ggggcgcccg aaatcttgcc gccccctcct 60

cacccatcat cagcgcccgc ggctttgggt ggccgaccag agggcggccg gaaagcacct 120

<210> 11

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

ttcctcagaa gctatttgaa tctcatgtag gggctttcaa gcatcaaagg atggttcatg 60

ttttatttta aggcacccac atcatgtcat gaggggaggc agctataatt tagagaacca 120

<210> 12

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

ctatttgaat ctcatgtagg ggctttcaag catcaaagga tggttcatgt tttattttaa 60

ggcacccaca tcatgtcatg aggggaggca gctataattt agagaaccaa gggggatttc 120

<210> 13

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

tgacctgaag gaggtgccgc ggaaaaacat caccctcatt cggtgagcgc cctgctgccg 60

tcctgggagg agaggggtgc agtgtagggg ctgaatgtta tcacagcacc gcagactcct 120

<210> 14

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

ggagcaagta gtttttgtct cagtggggga ggttatttct gacttgggac caactcaaag 60

gagacctggt gtggttgtca ataccccagt gggacctgtc ttccagtgtc acccaccccg 120

<210> 15

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

gacatggaga agtacttacc catgcttccc tggagtgggc atcaggagga tctctcttgc 60

agcctcgttg tggggcagca gctgggcaat gtaccttcca gagggctgca ggtgcctgtg 120

<210> 16

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

caccgagacg gccagtgtgc agtgctcact gctgctcctc atccacggac tcaggatggt 60

gtgcttggag tcagctgagg tgttgagaag gagaaaggag cctggaaaga gacagggaaa 120

<210> 17

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

tgtcttatat gtagtccata aaacccatga gttctgggca ctgggtcaaa gtctcctggg 60

gcccatgata gccgtcttta acaagctctt tctttctctc tgttttaaga tctgggcagt 120

<210> 18

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

gaattagttc gctacgatgc aagagtacac actcctcatt tggataggct tgtaagtgcc 60

cgaagtgtaa gcccaactac agaaatggtt tcaaatgaat ctgtagacta ccgagctact 120

<210> 19

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

ccaaataaaa ggaatgaagt ctggctccgg aggagggtcc ccgacctcgc tgtgggggct 60

cctgtttctc tccgccgcgc tctcgctctg gccgacgagt ggagaaagtg agtatgtgcc 120

<210> 20

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

cttacgccca catgaacggg ggccgcaaga acgagcgggc cttgccgctg ccccagtctt 60

cgacctgctg atccttggat cctgaatctg tgcaaacagt aacgtgtgcg cacgcgcagc 120

<210> 21

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

gccactgaca cttagggcct tgcacctgtg tcatgtctaa ttctaaaatc atcccaaaac 60

gagccacatc agtgctgccc agtttttctg taatgccaaa tctaggctaa agatttccca 120

<210> 22

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

aaataataca aaacaaaaaa tgagaaacaa gaactcatat ctttgttgaa taaatgaact 60

tcagccactg tttatagggt tttcccctaa gagccaccat ttaacctttc agctcctggt 120

<210> 23

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

atcttcccca ggaggagaag aaggtttctg gagcagtgga ctgccacaag ccaccatgta 60

acccctctca cctgccgtgc gtactggctg tggaccagta ggactcaagg tggacgtgcg 120

<210> 24

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

gtaaccatgg tcagctgggg tcgtttcatc tgcctggtcg tggtcaccat ggcaaccttg 60

tccctggccc ggccctcctt cagtttagtt gaggatacca cattagagcc agaaggtaag 120

<210> 25

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

catctgcttc cgggggattg taggctctgc ccctcctcag ctcttaccct cttctgccgg 60

aggagggggg gggccgaggg ggtggggaag agttcgttgt ttgtttacac gatgtgagcg 120

<210> 26

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

agaaactgtc aatgtctgct tttctttaac tctgcagtct gtaacatcac gctgtttatt 60

aaaaaaaaaa agaaaaatta ctttttgtgt ccaaacaatc cttagtgtac tacataagca 120

<210> 27

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

ttcagccaca ggctcccaga catgacagcc atcatcaaag agatcgttag cagaaacaaa 60

aggagatatc aagaggatgg attcgactta gacttgacct gtatccattt ctgcggctgc 120

<210> 28

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

cctgatcatt atagatattc tgacaccact gactctgatc cagagaatga accttttgat 60

gaagatcagc atacacaaat tacaaaagtc tgaatttttt tttatcaaga gggataaaac 120

<210> 29

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

catccacaaa atggatccag acaactgttc aaactgatgg gacccactcc atcgagattt 60

cactgtagct agaccaaaat cacctatttt tactgtgagg tcttcatgaa gaaatatatc 120

<210> 30

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

ccatgccact ttcccttgta gactgttcca aatgatccag atccaattct ttgtcccact 60

gtaatctgcc catcaggaat ctcccaatca tcactcgagt cccgtctacc aagtgttttc 120

<210> 31

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

gttcactaca aaacaaacag ttcctggtaa tgatttaaat gtagttatag aaataaataa 60

tatgtatgga gtcattactt ctgaccttga aatagcctgc tggtgactgg cattaacata 120

<210> 32

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

ccgccgccgc ggccgccgcc taggaaaatc gagctccgag cacaccgatg agttcggggc 60

cgggcggccg cagagggcag agctatcgat gcgttccgcg ctcgattctt cttcagacgg 120

<210> 33

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

agcaagcact ggagccccgc cccttcccgc accccacccg cctccggccc cgcctggccc 60

acccctggac cgcccccgcc ccgccccgcc cctacccgct cctccggcgc agccggcgct 120

<210> 34

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

tatcataaaa tgtgtaaact ttttttcttt ttaacattct agttggaaac aacagatttc 60

tgattttgta gtttccatac aatatttaaa acatcacaaa gaattctatc atgataacca 120

<210> 35

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

ctaagctttc cacatgctta gtgttcatct cataattcta ctgaaagtca ggcagctggt 60

atggggattg ctacaactga aaccaaatgg ctctcagaac caagattaga aatcaggaac 120

<210> 36

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

gatggatttt gctttgtttg ttttgctata ttaggatata cttgcctttt gaaataatac 60

ttagcctttt tcatttagac ctttgaatgc ttgaaagctt gtaacagttc cataagagct 120

<210> 37

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

agaggagcgc gtgagcgtcg cgggagcctc gggcaccatg agcgacgtgg ctattgtgaa 60

ggagggttgg ctgcacaaac gaggttagta cccgctgcca gggctgggcc tggggaggga 120

<210> 38

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

tgcccaggaa gagccccagc catggaacac cagctcctgt gctgcgaagt ggaaaccatc 60

cgccgcgcgt accccgatgc caacctcctc aacgaccggg tgctgcgggc catgctgaag 120

<210> 39

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

agggtctccc ttgatctgag aatggctacc tctcgatatg agccagtggc tgaaattggt 60

gtcggtgcct atgggacagt gtacaaggcc cgtgatcccc acagtggcca ctttgtggcc 120

<210> 40

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

cggcatggag aaggacggcc tgtgccgcgc tgaccagcag tacgaatgcg tggcggagat 60

cggggagggc gcctatggga aggtgttcaa ggcccgcgac ttgaagaacg gaggccgttt 120

<210> 41

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

agaacaggag agccatggcc ggcctccgag ggaacgctgt ggctggcctc ctctggatgc 60

tgctgctgtg gagtgggggc ggcggctgcc aggctcagcg ggcaggtggg gccaccgtgg 120

<210> 42

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

ttcgcgagca ggtgaaaatg gctgagaact tgctggacgg accgcccaac cccaaaagag 60

ccaaactcag ctcgcccggt ttctcggcga atgacagcac aggtgaggag ggggtccggg 120

<210> 43

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

gccgccgccg gggaggggac gagcaccatg tcgaatctga gcaaaggcac gggcagccgg 60

aaggacacca agatgcggat ccgggccttt ccggtgagtc tctcctcggc gtccgggacc 120

<210> 44

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

tgtgcaatcc cagattaact acaaacagag aagagctggt gatagctcca gagctcagag 60

aaaggaggtc tctttacaag aagtctggct ctcaaaggta agctcggtct tcttgacctg 120

<210> 45

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

cggccgcagc gcccccagcg cccccagctc ccgccttccc gccccagctg ccgccgcaca 60

tagtaggttc tgtctgggac tgggcagggc catcggggct gggggggcgg ggcttgtggg 120

<210> 46

<211> 119

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

gagattggaa gtagaaaccc agttatagaa ccaaggccca ttgattgggg gccagtgaca 60

agcctcaact aaggctcagg tatgattaga gagctgctaa taacagttac catctgttg 119

<210> 47

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

gcagaaggtg acagaagggg aaagggtcct ctgatcattg ctcaccccac agagatcttg 60

aaaggagggg tcttgatcca gcggaacccc cagctctgct accaggacac gattttgtgg 120

<210> 48

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

cgccactgaa ttcagagtct ggggaggagg ctcccacagg ccgggacaag aagcggaagc 60

agcagcagca gcagcctgtg tagtctgccc ccgggaaact gaggaactaa agaaagctga 120

<210> 49

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

cccgccatgg gcgcccctgc ctgcgccctc gcgctctgcg tggccgtggc catcgtggcc 60

ggcgcctcct cggagtcctt ggggacggag cagcgcgtcg tggggcgagc ggcaggtaag 120

<210> 50

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

cgggcgagca ggccgcgtcg cgctcaccat ggtcagctac tgggacaccg gggtcctgct 60

gtgcgcgctg ctcagctgtc tgcttctcac aggtgaggcg cggctggggg ccggggcctg 120

<210> 51

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

gggccggcgc ggcctgggga ccccgggctc cggaggccat gccggcgttg gcgcgcgacg 60

gcggccagct gccgctgctc ggtaaggccc cgctcgctcg ctcgcagccc ctcgcggtcc 120

<210> 52

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

tccctaggcc cggacctggg gccgaggagg gccgggatgg cctgagtgcc cgcggcgcgg 60

cggcgcagca gcgggattgc accatgggga accaggatgg gaagctgaag aggagcgcag 120

<210> 53

<211> 119

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 53

gagattggaa gtagaaaccc agttatagaa ccaaggccca ttgattgggg gccagtgaca 60

agcctcaact aaggctcagg tatgattaga gagctgctaa taacagttac catctgttg 119

<210> 54

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 54

caggagcaga caagatggag acaaattcct ctctccccac gaacatctct ggagggacac 60

ctgctgtatc tgctggctat ctcttcctgg atatcatcac ttatctggta tttgcagtca 120

<210> 55

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 55

gagtactctt acctccagtg aagttcagcg gcattgccac gtcaacagta tctgtggcag 60

ttaataagca ctctccacta atcagcagtg aaagctcttc aaatccaagg catgtgcccc 120

<210> 56

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 56

agcgatgacg gaatataagc tggtggtggt gggcgccggc ggtgtgggca agagtgcgct 60

gaccatccag ctgatccaga accattttgt ggacgaatac gaccccacta tagaggtgag 120

<210> 57

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 57

gcatttcgcc cggctcgagg tgcaggatgc agagcaaggt gctgctggcc gtcgccctgt 60

ggctctgcgt ggagacccgg gccgcctctg tgggtaagga gcccactctg gaggaggaag 120

<210> 58

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 58

agtgccagag gtggtggtgt tgcttatctt ctggaacccc atgcagccag atcccaggcc 60

tagcggggct ggggcctgct gccgattcct gcccctgcag tcacagtgcc ctgagggggc 120

<210> 59

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 59

gagcagacag ttcaagcaat gtcacaggac aacatcctgg gcaaagtcaa aactcttcag 60

gtaagacagc ttgagagtgg aattacgagc cataggaggg gcccagttat gaagggaagt 120

<210> 60

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 60

gctcggatcc catcgcagct accgcgatga gaggcgctcg cggcgcctgg gattttctct 60

gcgttctgct cctactgctt cgcgtccaga caggtgggac accgcggctg gcaccccgac 120

<210> 61

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 61

gcgcgttacc cgggtccaaa atgcccaaga agaagccgac gcccatccag ctgaacccgg 60

cccccgacgg ctctgcagtt aacgggacca gctctgcgga gtaagtatgg ggcgggcggt 120

<210> 62

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 62

tgtgaccatt ccggtttggt tctcccgaga ggtaaagaac gaagacttca aagacacttt 60

cttcactggt cagctcctcc ccccacatct tcagcagctc ctccttgggg gacttgctct 120

<210> 63

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 63

cctccgccgc cccccggccg cggggaggac atggccgcgc acaggccggt ggaatgggtc 60

caggccgtgg tcagccgctt cgacgagcag gtaaccggcc cgtggcgggc gggaggtggg 120

<210> 64

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 64

gccgtcgggg agccccaaca cacggtccac agctcatcat gatggacttg gagctgccgc 60

cgccgggact cccgtcccag caggtgctgc ctcggccctc tgggccctgc ggtggtgccg 120

<210> 65

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 65

ccgggcgcag agggcagccg gtggggaggc atgccgccgc tcctggcgcc cctgctctgc 60

ctggcgctgc tgcccgcgct cgccgcacga ggtaggcgcc cacccacccg cgagccccca 120

<210> 66

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 66

cgctgcccct gctgctgctg ctagcggggc cgggggctgc aggtgagggg ccgggacctg 60

gcggatggga cgagggcggc agagggggag tgcaagaacc cccaaggccg gggctggcgg 120

<210> 67

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 67

tcctttcaga gaaaataatg ctcctagtac ctgtagaggt taatatccgc aaatgacttg 60

ctattattga tggcaaatac acagaggaag ccttcgcctg tcctcatgta ttggtctctc 120

<210> 68

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 68

gcctgagctt ccagagggcc taggagcagt aagggagtga gtgggcaact cggcgcatga 60

aggaggtact cctcattttc gttctctctc tctgtgcccc agcccgttgg cagacccgga 120

<210> 69

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 69

gcagcgtgtt tctaggtcgt ggcgtcgggc ttccggagct ttggcggcag ctaggggagg 60

atggcggagt cttcggataa gctctatcga gtcgagtacg ccaagagcgg gcgcgcctct 120

<210> 70

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 70

cttttgactt ttctagtttc ccagagctat ggggacttcc catccggcgt tcctggtctt 60

aggctgtctt ctcacaggta cggagcccag tcctctctga gttccttgtt tgggtgtctt 120

<210> 71

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 71

cagatttgca aacatgagtg ctgaggggta ccagtacaga gcgctgtatg attataaaaa 60

ggaaagagaa gaagatattg acttgcactt gggtgacata ttgactgtga ataaagggtc 120

<210> 72

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 72

cccgggcctg gtggcccctg gggctcccgg gcgggcaggg tagggcagag tagagcgggc 60

ttcaacatga tggcggccga ggccggcagt gaggagggcg gcccggtaac agccggagct 120

<210> 73

<211> 119

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 73

cgacgtgcgc gcgcgtcgtc ctccccggcg ctcctccaca gctcgctggc tcccgccgcg 60

gaaaggcgtc atgccgccca aaaccccccg aaaaacggcc gccaccgccg ccgctgccg 119

<210> 74

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 74

gaagtcgggg gccgtggcgc gcagcccgcg gggcctgaag ggatgttcga ggacaagccc 60

cacgctgagg gggcggcggt ggtcgccgca gccggggagg cgctacaggc cctgtgccag 120

<210> 75

<211> 119

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 75

cgggcccggg ccctcacctc acctgaggtc cggccgccca ggggtgcgct atgccgtcgg 60

gaggtgacca gtcgccaccg cccccgcctc cccctccggc ggcggcagcc tcggatgag 119

<210> 76

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 76

gtggaccaag ttttgggtga catggcccag gggaataatt atgggcagac cagcaacggg 60

gtggccgatg aatcacccaa catgctggtg tacagaaagg taagaatgtc ttcagtttct 120

<210> 77

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 77

cgaggtttcc ggtgttgtga ctgaaacccg tcaatatggc ggcgatcggc cgcggccgct 60

ctctgaagaa cctccgagta cgaggtaagc ccgctgcaac cctcactccc caccgcccgg 120

<210> 78

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 78

agccccccca aggctgccca gcccaggcaa gcctggcaca taccaaggcc agcacgtccg 60

cggtgaccgg gaccagtccc ctccgggctg gcacaagtgt gggagcagct gaggacccgc 120

<210> 79

<211> 119

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 79

cgcctccgcg gccgccgagg tcgtgcgtgt ggccgggggg ctccgaggag caggcggggg 60

cgccggggct tttgctgagt tggcggggtt ggccatggcc gctgcccgcc cagcgcggg 119

<210> 80

<211> 119

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 80

ggtcggcggc cgccggcggg ccgggcccgc gcacagcgcc cgcatgtaca acatgatgga 60

gacggagctg aagccgccgg gcccgcagca aacttcgggg ggcggcggcg gcaactcca 119

<210> 81

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 81

tccgggtcac tgccatggag gagccgcagt cagatcctag cgtcgagccc cctctgagtc 60

aggaaacatt ttcagaccta tggaaactgt gagtggatcc attggaaggg caggcccacc 120

<210> 82

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 82

atacgtcaag gactctgaag ccgtgagaga gggggaagaa caacagtaga gaggatgccc 60

agctggtaag aatcgagtgt ttatgaagtt ttagtcaatt gatgaatctc attggctaaa 120

<210> 83

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 83

actgttcatc ttcctttttc tcagtttggt agtggcccca atgaagaacc ttcagaacct 60

gtagcacacg tcctggagcc agcacagcgc cttcgagcga gagaatggcc caacaagcaa 120

<210> 84

<211> 119

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 84

aaaggcagtg tgttgaggtt tcaatatttt ctagtggaga aggtcatgat gaagtgagga 60

tctaaaaaaa aaaaaagcat ttattgaagg cttcctatta ggttgaacca gatgaaact 119

<210> 85

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 85

cgcgcgggcg tgcgagcagc gaaagcgaca ggggcaaagt gagtgacctg cttttggggg 60

tgaccgccgg agcgcggcgt gagccctccc ccttgggatc ccgcagctga ccagtcgcgc 120

<210> 86

<211> 120

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 86

attcctggca ttgcccagca caggataagg agcagggttg gcgtgtgagg ccttacctct 60

gggagggcag ccgccgacgc atgcggtgac agtccagcac ccactcctta cgcacgatgc 120

Claims

1.一种检测肿瘤耐药性变异的检测剂，用于检测由EGFR基因或ALK基因驱动的肿瘤用药后产生的耐药性变异，其特征在于，包括第一检测剂、第二检测剂以及第三检测剂；

2.根据权利要求1所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，所述EGFR突变检测剂包括T790M突变检测剂、C797S突变检测剂、L798Q突变检测剂以及L844V突变检测剂，所述T790M突变检测剂用于检测所述EGFR基因的T790M突变，所述C797S突变检测剂用于检测所述EGFR基因的C797S突变，所述L798Q突变检测剂用于检测所述EGFR基因的L798Q突变，所述L844V突变检测剂用于检测所述EGFR基因的L844V突变；及/或，

3.根据权利要求2所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，

所述T790M突变检测剂包括如SEQ ID No.1所示的核苷酸链；及/或，

所述G1269A突变检测剂包括如SEQ ID No.10所示的核苷酸链。

4.根据权利要求1所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，所述第一检测试剂还包括EGFR融合检测剂、ALK融合检测剂以及ALK扩增检测剂；

5.根据权利要求4所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，

所述EGFR融合检测剂包括如SEQ ID No.11～SEQ ID No.12所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

6.根据权利要求1所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，所述第二检测剂包括MET扩增检测剂、IGF1R激活检测剂、FGFR1激活检测剂以及FGFR2激活检测剂；

7.根据权利要求6所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，

所述MET扩增检测剂包括如SEQ ID No.17～SEQ ID No.18所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

8.根据权利要求1所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，所述第三检测剂包括PIK3CA检测剂、PTEN检测剂、BRAF检测剂、KRAS检测剂、RET检测剂以及ROS1检测剂；

所述PIK3CA检测剂用于检测PIK3CA基因是否发生变异；

所述PTEN检测剂用于检测PTEN基因是否发生变异；

所述BRAF检测剂用于检测BRAF基因是否发生变异；

所述KRAS检测剂用于检测KRAS基因是否发生变异；

所述RET检测剂用于检测RET基因是否发生变异；

所述ROS1检测剂用于检测ROS1基因是否发生变异。

9.根据权利要求8所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，所述PIK3CA检测剂包括如SEQ ID No.25～SEQ ID No.26所示的核苷酸链中的至少一条；及/或，

10.根据权利要求8所述的检测肿瘤耐药性变异的检测剂，其特征在于，所述第三检测剂还包括AKT1检测剂、CCND1检测剂、CDK4检测剂、CDK6检测剂、COL22A1检测剂、CREBBP检测剂、CUL3检测剂、DDR2检测剂、DHFR检测剂、DYNC2H1检测剂、ERBB2检测剂、ERCC1检测剂、FGFR3检测剂、FLT1检测剂、FLT3检测剂、FMN2检测剂、FOLR3检测剂、FPR1检测剂、GGH检测剂、HRAS检测剂、KDR检测剂、KEAP1检测剂、KIAA1211检测剂、KIT检测剂、MAP2K1检测剂、MTHFR检测剂、NF1检测剂、NFE2L2检测剂、NOTCH1检测剂、NOTCH3检测剂、NRAS检测剂、NTRK1检测剂、PARP1检测剂、PDGFRA检测剂、PIK3R1检测剂、RASA1检测剂、RB1检测剂、RBL1检测剂、RBL2检测剂、RGS7检测剂、RICTOR检测剂、SLC19A1检测剂、SMO检测剂、SOX2检测剂、TP53检测剂、TP63检测剂、TSC1检测剂、UGT1A1检测剂、VEGFA检测剂以及XRCC1检测剂；

所述AKT1检测剂用于检测AKT1基因是否发生变异；

所述CCND1检测剂用于检测CCND1基因是否发生变异；

所述CDK4检测剂用于检测CDK4基因是否发生变异；

所述CDK6检测剂用于检测CDK6基因是否发生变异；

所述COL22A1检测剂用于检测COL22A1基因是否发生变异；

所述CREBBP检测剂用于检测CREBBP基因是否发生变异；

所述CUL3检测剂用于检测CUL3基因是否发生变异；

所述DDR2检测剂用于检测DDR2基因是否发生变异；

所述DHFR检测剂用于检测DHFR基因是否发生变异；

所述DYNC2H1检测剂用于检测DYNC2H1基因是否发生变异；

所述ERBB2检测剂用于检测ERBB2基因是否发生变异；

所述ERCC1检测剂用于检测ERCC1基因是否发生变异；

所述FGFR3检测剂用于检测FGFR3基因是否发生变异；

所述FLT1检测剂用于检测FLT1基因是否发生变异；

所述FLT3检测剂用于检测FLT3基因是否发生变异；

所述FMN2检测剂用于检测FMN2基因是否发生变异；

所述FOLR3检测剂用于检测FOLR3基因是否发生变异；

所述FPR1检测剂用于检测FPR1基因是否发生变异；

所述GGH检测剂用于检测GGH基因是否发生变异；

所述HRAS检测剂用于检测HRAS基因是否发生变异；

所述KDR检测剂用于检测KDR基因是否发生变异；

所述KEAP1检测剂用于检测KEAP1基因是否发生变异；

所述KIAA1211检测剂用于检测KIAA1211基因是否发生变异；

所述KIT检测剂用于检测KIT基因是否发生变异；

所述MAP2K1检测剂用于检测MAP2K1基因是否发生变异；

所述MTHFR检测剂用于检测MTHFR基因是否发生变异；

所述NF1检测剂用于检测NF1基因是否发生变异；

所述NFE2L2检测剂用于检测NFE2L2基因是否发生变异；

所述NOTCH1检测剂用于检测NOTCH1基因是否发生变异；

所述NOTCH3检测剂用于检测NOTCH3基因是否发生变异；

所述NRAS检测剂用于检测NRAS基因是否发生变异；

所述NTRK1检测剂用于检测NTRK1基因是否发生变异；

所述PARP1检测剂用于检测PARP1基因是否发生变异；

所述PDGFRA检测剂用于检测PDGFRA基因是否发生变异；

所述PIK3R1检测剂用于检测PIK3R1基因是否发生变异；

所述RASA1检测剂用于检测RASA1基因是否发生变异；

所述RB1检测剂用于检测RB1基因是否发生变异；

所述RBL1检测剂用于检测RBL1基因是否发生变异；

所述RBL2检测剂用于检测RBL2基因是否发生变异；

所述RGS7检测剂用于检测RGS7基因是否发生变异；

所述RICTOR检测剂用于检测RICTOR基因是否发生变异；

所述SLC19A1检测剂用于检测SLC19A1基因是否发生变异；

所述SMO检测剂用于检测SMO基因是否发生变异；

所述SOX2检测剂用于检测SOX2基因是否发生变异；

所述TP53检测剂用于检测TP53基因是否发生变异；

所述TP63检测剂用于检测TP63基因是否发生变异；

所述TSC1检测剂用于检测TSC1基因是否发生变异；

所述UGT1A1检测剂用于检测UGT1A1基因是否发生变异；

所述VEGFA检测剂用于检测VEGFA基因是否发生变异；

所述XRCC1检测剂用于检测XRCC1基因是否发生变异。