CN106905409A - 毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用 - Google Patents

毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106905409A
CN106905409A CN201710113978.2A CN201710113978A CN106905409A CN 106905409 A CN106905409 A CN 106905409A CN 201710113978 A CN201710113978 A CN 201710113978A CN 106905409 A CN106905409 A CN 106905409A
Authority
CN
China
Prior art keywords
protein extract
polytricha
parts
immersion
extract preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710113978.2A
Other languages
English (en)
Inventor
施春华
张美芬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shengzhou City Paitepu Technology Development Co Ltd
Original Assignee
Shengzhou City Paitepu Technology Development Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shengzhou City Paitepu Technology Development Co Ltd filed Critical Shengzhou City Paitepu Technology Development Co Ltd
Priority to CN201710113978.2A priority Critical patent/CN106905409A/zh
Publication of CN106905409A publication Critical patent/CN106905409A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/145—Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明提供一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，包括以下步骤：1）选取毛木耳用清水清洗，干燥，粉碎至220‑250目，得毛木耳粉末；2）毛木耳粉末中加入2‑3倍的清水，搅拌，浸泡，再加入盐酸浓度1‑2%的盐酸水溶液调节pH值至2.4~3.2后浸泡，在回流条件下浸提2‑3次，合并得浸提液；3）在浸提液中加入饱和度为95‑98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；4）在沉淀物中加入去离子水后透析，干燥，得蛋白质提取物，本发明提供的这种毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用，制备简单，制备中加入蛋白酶抑制剂防止蛋白质酶解以及在制备过程中降解，加入提取剂粕坏毛木耳的细胞壁提高蛋白质的溶解度，提高制备蛋白质提取物的纯度。

Description

毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及蛋白质提取技术领域，尤其是一种毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用。
背景技术
随着社会的不断发展，人们的生活品质也不断提高，但人们得肿瘤癌症的几率也越来越高，毛木耳是木耳目(Auriculariales)，木耳科(Auriculariaceae)，木耳属(Auricularia)中的毛木耳种(A.polytricha) 的真菌，是重要的食用菌，亦入药。富含蛋白质、多种矿物质元素和维生素，子实体背面绒毛层丰富的木耳多糖，具有较高的抗肿瘤活性，在目前的研究中以毛木耳栽培技术，毛木耳多糖提取工艺和多糖功能的研究，毛木耳蛋白质提取工艺和毛木耳蛋白质提取物功能的研究。
例如毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用，CN103285046A，该发明公开了毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用。该应用是毛木耳蛋白质提取物在制备抑制肿瘤细胞增殖产品中的应用，所述毛木耳蛋白质提取物，按照包括如下步骤的方法制备：1）将毛木耳子实体粉碎后用水浸提，收集水溶性物质得到毛木耳水溶性提取物；2）对所述毛木耳水溶性提取物进行饱和度为80% 的硫酸铵沉淀，收集沉淀，对所述沉淀用去离子水透析后，得到所述毛木耳蛋白质提取物。该毛木耳蛋白质提取物处理人肝癌HepG2 细胞、人乳腺癌MCF-7细胞和人肺腺癌A-549 细胞72h 后，HepG2、MCF-7、A-549 细胞的增殖均明显受到抑制，且IC50值分别为45μg/mL,20μg/mL,25μg/mL。
该发明的这种毛木耳蛋白质提取物，制备方法较为简单，提取的纯度较差，提取量较小。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种制备简单，蛋白活性高，提取效率高且提取蛋白质纯度较高的毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用。
为解决上述现有的技术问题，本发明采用如下方案：一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，包括以下步骤：
1）选取毛木耳用清水清洗，干燥，粉碎至220-250目，得毛木耳粉末；
2）毛木耳粉末中加入2-3倍的清水，搅拌，浸泡，再加入盐酸浓度1-2%的盐酸水溶液调节pH值至2.4~3.2后浸泡，在回流条件下浸提2-3次，合并得浸提液；
3）在浸提液中加入饱和度为95-98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；
4）在沉淀物中加入去离子水后透析，干燥，得蛋白质提取物。
作为优选，步骤2中浸泡时采用超声波助溶，超声波助溶的频率为30000-40000Hz，采用超声波助溶提高毛木耳粉末在水中的溶解度。
作为优选，步骤2中加入盐酸水溶液浸泡时还需加入毛木耳粉重量3~7倍的提取剂，后浸泡1~2h，并搅拌5~15min，所述提取剂的成分及其重量份为：水5-60份、纤维素酶0.5-3.8份、果胶酶0-3份、金属螯合剂0.1-3份、葡萄糖2-8份、有机酸0.2-25份、醋酸纤维素0.02-0.05份、三羟基聚醚0.01-0.04份、乙醇45-75份，通过纤维素酶和果胶酶破坏毛木耳粉末的细胞壁，提高蛋白质的溶解度，并且提取剂可促进纤维素酶和果胶酶作用效果缩短破坏毛木耳粉末的细胞壁的时间，而且醋酸纤维素和三羟基聚醚提高蛋白质活性。
作为优选，步骤2中加入盐酸水溶液浸泡时还需加入0.1-0.2%的蛋白质抑制剂，防止蛋白质在提取过程中降解。
作为优选，蛋白酶抑制剂为二异丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一种或两种。
作为优选，步骤2中浸提时温度为2-4℃，每隔25-30min搅拌一次，每次搅拌3-5min，提高浸提效率，在2-4℃的低温下可在浸提时降低酶的活性起到灭酶作用，防止蛋白质降解。
作为优选，步骤3中加入乙醇的体积为浸提液体积的3-5倍，浸泡时温度为2-4℃，采用高浓度的乙醇溶液防止蛋白质溶解。
作为优选，步骤4中透析的方法为：将沉淀物溶解在去离子水中液倒入截留分子为10ku～50ku的透析袋进行透析，提高所提取的蛋白质纯度。
毛木耳蛋白质提取物在抵抗肝癌、乳腺癌、肺癌的产品中应用。
有益效果：本发明提供的这种毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用，制备简单，制备中加入蛋白酶抑制剂防止蛋白质酶解以及在制备过程中降解，加入纤维素酶破坏毛木耳的细胞壁提高蛋白质的溶解度，提高制备蛋白质提取物的纯度。
本发明采用了上述技术方案提供一种毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
具体实施方式
以下实施例作进一步详细描述：
实施例1：
一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，包括以下步骤：
1）选取毛木耳用清水清洗，干燥，粉碎至220目，得毛木耳粉末；
2）毛木耳粉末中加入2倍的清水，搅拌，浸泡，再加入盐酸浓度1-2%的盐酸水溶液调节pH值至3.0后浸泡，在回流条件下浸提3次，合并得浸提液；
3）在浸提液中加入饱和度为98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；
4）在沉淀物中加入去离子水后透析，干燥，得蛋白质提取物。
步骤2中浸泡时采用超声波助溶，超声波助溶的频率为40000Hz，采用超声波助溶提高毛木耳粉末在水中的溶解度。
步骤2中加入盐酸水溶液浸泡时还需加入毛木耳粉重量4倍的提取剂，后浸泡1h，并搅拌8min，所述提取剂的成分及其重量份为：水43份、纤维素酶2.8份、果胶酶2份、金属螯合剂2.1份、葡萄糖6份、有机酸7份、醋酸纤维素0.028份、三羟基聚醚0.018份、乙醇66份，通过纤维素酶和果胶酶破坏毛木耳粉末的细胞壁，提高蛋白质的溶解度，并且提取剂可促进纤维素酶和果胶酶作用效果缩短破坏毛木耳粉末的细胞壁的时间，而且不会破坏蛋白质活性。
步骤2中加入盐酸水溶液浸泡时还需加入0.2%的蛋白质抑制剂，防止蛋白质在提取过程中降解。
蛋白酶抑制剂为二异丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一种或两种。
步骤2中浸提时温度为4℃，每隔25-30min搅拌一次，每次搅拌3-5min，提高浸提效率，在4℃的低温下可在浸提时降低酶的活性起到灭酶作用，防止蛋白质降解。
步骤3中加入乙醇的体积为浸提液体积的3.7倍，浸泡时温度为4℃，采用高浓度的乙醇溶液防止蛋白质溶解。
步骤4中透析的方法为：将沉淀物溶解在去离子水中液倒入截留分子为20ku的透析袋进行透析，提高所提取的蛋白质纯度。
毛木耳蛋白质提取物在抵抗肝癌、乳腺癌、肺癌的产品中应用。
实施例2：
选取毛木耳后通过本发明的制备方法：
1）选取毛木耳用清水清洗，干燥，粉碎至220目，得毛木耳粉末；
2）毛木耳粉末中加入2倍的清水，搅拌，浸泡，再加入盐酸浓度1-2%的盐酸水溶液调节pH值至6.3后浸泡，在回流条件下浸提3次，合并得浸提液；
3）在浸提液中加入饱和度为98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；
4）在沉淀物中加入去离子水后透析，干燥，得蛋白质提取物。
将制备的蛋白质提取物进行抑制肿瘤细胞增殖实验：
选取癌细胞，人肝癌HepG2细胞（购自美国ATCC）、人乳腺癌MCF-7细胞（购自美国ATCC）和人肺腺癌A-549细胞（购自美国ATCC），人肝癌HepG2细胞、人乳腺癌MCF-7细胞和人肺腺癌A-549细胞按照常规培养方法进行活化和传代。其中，人肝癌HepG2细胞的传代和活化培养基是DMEM- 高糖+1% 双抗+10%FBS（在DMEM- 高糖（Hyclone，SH30022.01B）中加入青霉素和链霉素混合液（青霉素10000U/mL、链霉素10000μg/mL）和胎牛血清（FBS，Hyclone，SV30087.02），使前两者最终体积百分含量为1%，FBS 的体积百分含量为10%得到的培养液），人乳腺癌MCF-7细胞和人肺腺癌A-549细胞的传代和活化培养基是RPMI1640+1% 双抗+10%FBS（在RPMI1640（Invitrogen，11875-093）中加入青霉素、链霉素混合液和胎牛血清（FBS），使前两者最终体积百分含量为1%，FBS的体积百分含量为10%得到的培养液）。
在不同癌细胞内加入不同剂量的毛木耳蛋白质提取物，采用MTT法测定结果，结果如表一所示：
表一毛木耳蛋白质提取物对三株癌症细胞体外抑制率
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的或者超越所附权利要求书所定义的范围。

Claims (9)

1.一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）选取毛木耳用清水清洗，干燥，粉碎至220-250目，得毛木耳粉末；
2）毛木耳粉末中加入2-3倍的清水，搅拌，浸泡，再加入盐酸浓度1-2%的盐酸水溶液调节pH值至2.4~3.2后浸泡，在回流条件下浸提2-3次，合并得浸提液；
3）在浸提液中加入饱和度为95-98%的乙醇，搅拌，浸泡，得沉淀物；
4）在沉淀物中加入去离子水后透析，干燥，得蛋白质提取物。
2.根据权利要求1所述的一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于：所述步骤2中浸泡时采用超声波助溶，超声波助溶的频率为30000-40000Hz。
3.根据权利要求1所述的一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于：所述步骤2中加入盐酸水溶液浸泡时还需加入毛木耳粉重量3~7倍的提取剂，后浸泡1~2h，并搅拌5~15min，所述提取剂的成分及其重量份为：水5-60份、纤维素酶0.5-3.8份、果胶酶0-3份、金属螯合剂0.1-3份、葡萄糖2-8份、有机酸0.2-25份、醋酸纤维素0.02-0.05份、三羟基聚醚0.01-0.04份、乙醇45-75份。
4.根据权利要求1所述的一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于：所述步骤2中加入盐酸水溶液浸泡时还需加入0.1-0.2%的蛋白酶抑制剂。
5.根据权利要求4所述的一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于：所述蛋白酶抑制剂为二异丙基氟磷酸或碘乙酸或亮肽素中的一种或两种。
6.根据权利要求1所述的一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于：所述步骤2中浸提时温度为2-4℃，每隔25-30min搅拌一次，每次搅拌3-5min。
7.根据权利要求1所述的一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于：所述步骤3中加入乙醇的体积为浸提液体积的3-5倍，浸泡时温度为2-4℃。
8.根据权利要求1所述的一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于：所述步骤4中透析的方法为：将沉淀物溶解在去离子水中液倒入截留分子为10ku～50ku的透析袋进行透析。
9.根据权利要求1所述的一种毛木耳蛋白质提取物制备方法，其特征在于：所述毛木耳蛋白质提取物在抵抗肝癌、乳腺癌、肺癌的产品中应用。
CN201710113978.2A 2017-02-28 2017-02-28 毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用 Pending CN106905409A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710113978.2A CN106905409A (zh) 2017-02-28 2017-02-28 毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710113978.2A CN106905409A (zh) 2017-02-28 2017-02-28 毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106905409A true CN106905409A (zh) 2017-06-30

Family

ID=59208760

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710113978.2A Pending CN106905409A (zh) 2017-02-28 2017-02-28 毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106905409A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111004788A (zh) * 2019-12-17 2020-04-14 中国农业科学院麻类研究所 一种果胶酯酶及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103285046A (zh) * 2013-05-30 2013-09-11 北京市农林科学院 毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103285046A (zh) * 2013-05-30 2013-09-11 北京市农林科学院 毛木耳蛋白质提取物及其抗肿瘤的应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111004788A (zh) * 2019-12-17 2020-04-14 中国农业科学院麻类研究所 一种果胶酯酶及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104886523B (zh) 一种具有提鲜作用的调味品的制作方法
CN104873761B (zh) 一种蛹虫草复方制品及其制备方法
CN104432388B (zh) 文冠果肽营养品及其制备方法
CN102839075A (zh) 一种无花果酒的生产工艺
CN101449827A (zh) 绿藻口服液生产方法
CN114191455A (zh) 海藻多酚的提取工艺及其制备方法
CN103952451B (zh) 采用黄芪提取液提高羊肚菌深层发酵菌丝体多糖含量的方法
CN105192722A (zh) 一种低聚肽组合物、含有其的鲜味调味品及其制备方法和应用
CN106518377A (zh) 一种橘子专用叶面肥及其制备方法
CN103999946A (zh) 一种冠突散囊菌发酵型米乳保健饮料及其制备方法
CN106349405A (zh) 一种采用酶解超声从柚子皮中提取果胶的方法
CN101225421A (zh) 分步酶法提取金耳多糖的新工艺
CN112007055A (zh) 一种含虫草素和虫草多糖的虫草提取物及其制备方法和应用
CN103734822A (zh) 一种羊栖菜多糖饮品及其制备方法
CN108409880A (zh) 一种羽藻多糖
CN107686856A (zh) 一种火龙果花蛋白多肽的制备方法
CN106854104A (zh) 一种促进番茄生长的植物生长剂
CN106905409A (zh) 毛木耳蛋白质提取物制备方法及其应用
CN106262955A (zh) 一种制备碱蓬膳食纤维的方法
CN111705091B (zh) 一种萝卜硫素提取物的制备方法
GB1356449A (en) Process for extracting water soluble components of the hyphae of edible fungi
CN109364110A (zh) 一种从美藤果壳提取黄酮的方法
CN108633603A (zh) 一种高产富硒樱桃的种植方法
CN108752417A (zh) 一种松花粉活性多肽
CN104862364B (zh) 油菜蜂花粉寡肽组合物及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170630

RJ01 Rejection of invention patent application after publication