CN106883307A - 一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其具体步骤包括：1）灰树花子实体原料浸泡脱脂，离心得到一次固相物和一次提取液；2）一次固相物进行沸水冷凝回流浸提，离心得到二次固相物和二次提取液；3）二次提取液水提得灰树花水提多糖；4）二次固相物进行浸提后固液分离，得到三次提取液；5）三次提取液碱提得灰树花碱提多糖；采用本发明对灰树花子实体进行多糖提取，结合了水提和碱提两种提取方式，综合提取灰树花多糖，可以综合提高灰树花多糖的提取率，提取率达到现有提取率的122%，同时大幅度降低了原料的浪费，是一种高利用率、高提取率的灰树花多糖分离纯化的方法，适合大范围推广。
Description
技术领域
本发明涉及灰树花生产领域，特别是一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法。
背景技术
灰树花(舞茸)多糖是灰树花中的一种提取物，由葡聚糖、葡萄糖、木糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、丰乳糖及少量蛋白质的异聚糖复合物组成。灰树花多糖中含有一种蛋白多糖，中文名叫舞茸地复仙（舞茸D-fraction）它的蛋白和多糖的比例是7：3平均分子量是100万。多糖部分由具有β-(1-3)侧链的β-(1-6)葡聚糖和具有β-(1-6)侧链的β-(1-3)葡聚糖组成。多糖成分中只有这种舞茸地复仙最有抗癌防癌的作用。
灰树花（Grifolafrondosa）是一种药食两用菌，其多糖是主要的一类活性成分，作为一种生物反应调节剂，灰树花多糖具有增强免疫功能、抑制肿瘤、抗HIV病毒、稳定血压、降低血糖、改善脂肪代谢等生理活性，且无毒副作用。热水浸提法是多糖提取最普遍应用的方法之一，但该方法存在耗时长，提取率不高等缺点，并存在很大程度的原料浪费。
发明内容
本发明对现有的灰树花多糖提取方法，进行了综合性研究，结合现有技术，针对热水浸提法存在的提取率不高、原料浪费严重的问题，公开了一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，本发明的灰树花多糖分离纯化方法，具有提取率高，原料利用率高的特点。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是:
一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）使用醇溶液对灰树花子实体原料进行浸泡脱脂，脱脂完毕后，通过离心设备，进行固液分离，得到一次固相物和一次提取液；
（2）使用去离子水对步骤 （1）中所得的一次固相物，进行沸水冷凝回流浸提，浸提完毕后，再次通过离心设备，进行固液分离，得到二次固相物和二次提取液；
（3）将步骤（2）中所得的二次提取液，经浓缩、去蛋白、碱中和、透析脱盐、醇沉、洗涤后，喷雾干燥，得灰树花水提多糖；
（4）使用碱性水溶液对步骤 （2）中所得的二次固相物进行浸提，浸提完毕后固液分离，得到三次提取液；
（5）将步骤（4）中所得的三次提取液，经酸中和、透析脱盐、醇沉、洗涤后，喷雾干燥，即得灰树花碱提多糖。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤（1） 中，所述醇溶液与灰树花子实体原料的重量比为 8-10 ：1，醇溶液为85－95%乙醇（w/v）溶液。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （2） 中，进行沸水冷凝回流浸提时，水体温度控制在90－100℃之间，煎煮时间控制在2－4小时。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （2） 中，所述离子水与灰树花原料的重量比为 8－10 ：1，提取次数共计2次。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （3）中，对二次提取液进行浓缩时，通过框架式薄膜浓缩器或真空浓缩机，进行浓缩，直至二次提取液的波美度达到25°～30°。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （3）中，去蛋白的具体条件为，向经过浓缩的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混浊，并于3－6℃下静置12－24小时，离心去蛋白。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （3）中，向经过去蛋白的二次提取液中，滴加10%氢氧化钠水溶液，进行中和，直至PH为6.8-7.2之间。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （3）和（5）中，进行透析脱盐时，透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇或甘油中，分别对步骤（3）中经过碱中和的二次提取液和步骤（5）中经过酸中和的三次提取液，进行透析36－48小时。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （3）和（5）中，醇沉的具体步骤为：
A、冷却的步骤 （3）中的二次提取液和步骤 （5）中的三次提取液至10℃；
B、随后采用三慢二快的搅拌节奏，缓慢向二次提取液和三次提取液中加入乙醇，并控制二次提取液和三次提取液内的含醇量达54％～65％；
C、最后，将加入了乙醇的二次提取液和三次提取液密封，并保存于低温环境下，环境温度控制在5℃~10℃。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （3）和（5）中，进行洗涤时，通过无水乙醇和丙酮依次洗涤两次。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤（3）和步骤（5）中，进行喷雾干燥时，采用超声波喷雾干燥工艺，设定进风温度为85~95℃，进气压力设定为0.1~0.25MPa，进料量控制在30~50mL/min，同时设定出风温度为70~90℃。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （4） 中，所述碱性水溶液与二次固相物的重量比为 8-10 ：1，碱性水溶液为5%氢氧化钠水溶液。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤 （4） 中，进行浸提时，水体温度控制在90－100℃之间，煎煮时间控制在2－4 小时。
上述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其中，步骤（5） 中，进行酸中和时，通过向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液进行中和，直至PH值为7.0。
本发明的有益效果为：
本发明公开的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其具体步骤包括：1）灰树花子实体原料浸泡脱脂，离心得到一次固相物和一次提取液；2）一次固相物进行沸水冷凝回流浸提，离心得到二次固相物和二次提取液；3）二次提取液水提得灰树花水提多糖；4）二次固相物进行浸提后固液分离，得到三次提取液；5）三次提取液碱提得灰树花碱提多糖；采用本发明对灰树花子实体进行多糖提取，结合了水提和碱提两种提取方式，综合提取灰树花多糖，可以综合提高灰树花多糖的提取率，提取率达到现有提取率的122%，同时大幅度降低了原料的浪费，是一种高利用率、高提取率的灰树花多糖分离纯化的方法，适合大范围推广。
附图说明
图1本发明流程图。
具体实施方式
实施例一
一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）使用醇溶液对灰树花子实体原料进行浸泡脱脂，脱脂完毕后，通过离心设备，进行固液分离，得到一次固相物和一次提取液；
（2）使用去离子水对步骤 （1）中所得的一次固相物，进行沸水冷凝回流浸提，浸提完毕后，再次通过离心设备，进行固液分离，得到二次固相物和二次提取液；
（3）将步骤（2）中所得的二次提取液，经浓缩、去蛋白、碱中和、透析脱盐、醇沉、洗涤后，喷雾干燥，得灰树花水提多糖；
（4）使用碱性水溶液对步骤 （2）中所得的二次固相物进行浸提，浸提完毕后固液分离，得到三次提取液；
（5）将步骤（4）中所得的三次提取液，经酸中和、透析脱盐、醇沉、洗涤后，喷雾干燥，即得灰树花碱提多糖。
其中，步骤（1） 中，所述醇溶液与灰树花子实体原料的重量比为 9.5 ：1，醇溶液为85－95%乙醇（w/v）溶液。
其中，步骤 （2） 中，进行沸水冷凝回流浸提时，水体温度控制在95℃，煎煮时间控制在3.3小时。
其中，步骤 （2） 中，所述离子水与灰树花原料的重量比为 8.5 ：1，提取次数共计2次。
其中，步骤 （3）中，对二次提取液进行浓缩时，通过框架式薄膜浓缩器或真空浓缩机，进行浓缩，直至二次提取液的波美度达到28°。
其中，步骤 （3）中，去蛋白的具体条件为，向经过浓缩的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混浊，并于3－6℃下静置24小时，离心去蛋白。
其中，步骤 （3）中，向经过去蛋白的二次提取液中，滴加10%氢氧化钠水溶液，进行中和，直至PH为6.8-7.2之间。
其中，步骤 （3）和（5）中，进行透析脱盐时，透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇或甘油中，分别对步骤（3）中经过碱中和的二次提取液和步骤（5）中经过酸中和的三次提取液，进行透析36－48小时。
其中，步骤 （3）和（5）中，进行洗涤时，通过无水乙醇和丙酮依次洗涤两次。
其中，步骤（3）和步骤（5）中，进行喷雾干燥时，采用超声波喷雾干燥工艺，设定进风温度为90℃，进气压力设定为0.2MPa，进料量控制在40mL/min，同时设定出风温度为82℃。
其中，步骤 （4） 中，所述碱性水溶液与二次固相物的重量比为 8-10 ：1，碱性水溶液为5%氢氧化钠水溶液。
其中，步骤 （4） 中，进行浸提时，水体温度控制在90℃之间，煎煮时间控制在3小时。
其中，步骤（5） 中，进行酸中和时，通过向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液进行中和，直至PH值为7.0。
实施例二
一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）使用醇溶液对灰树花子实体原料进行浸泡脱脂，脱脂完毕后，通过离心设备，进行固液分离，得到一次固相物和一次提取液；
（2）使用去离子水对步骤 （1）中所得的一次固相物，进行沸水冷凝回流浸提，浸提完毕后，再次通过离心设备，进行固液分离，得到二次固相物和二次提取液；
（3）将步骤（2）中所得的二次提取液，经浓缩、去蛋白、碱中和、透析脱盐、醇沉、洗涤后，喷雾干燥，得灰树花水提多糖；
（4）使用碱性水溶液对步骤 （2）中所得的二次固相物进行浸提，浸提完毕后固液分离，得到三次提取液；
（5）将步骤（4）中所得的三次提取液，经酸中和、透析脱盐、醇沉、洗涤后，喷雾干燥，即得灰树花碱提多糖。
其中，步骤（1） 中，所述醇溶液与灰树花子实体原料的重量比为 8.2 ：1，醇溶液为85－95%乙醇（w/v）溶液。
其中，步骤 （2） 中，进行沸水冷凝回流浸提时，水体温度控制在97℃之间，煎煮时间控制在3.8小时。
其中，步骤 （2） 中，所述离子水与灰树花原料的重量比为 8－10 ：1，提取次数共计2次。
其中，步骤 （3）中，对二次提取液进行浓缩时，通过框架式薄膜浓缩器或真空浓缩机，进行浓缩，直至二次提取液的波美度达到28°。
其中，步骤 （3）中，去蛋白的具体条件为，向经过浓缩的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混浊，并于3－6℃下静置24小时，离心去蛋白。
其中，步骤 （3）中，向经过去蛋白的二次提取液中，滴加10%氢氧化钠水溶液，进行中和，直至PH为6.8-7.2之间。
其中，步骤 （3）和（5）中，进行透析脱盐时，透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇或甘油中，分别对步骤（3）中经过碱中和的二次提取液和步骤（5）中经过酸中和的三次提取液，进行透析36－48小时。
其中，步骤 （3）和（5）中，进行洗涤时，通过无水乙醇和丙酮依次洗涤两次。
其中，步骤（3）和步骤（5）中，进行喷雾干燥时，采用超声波喷雾干燥工艺，设定进风温度为92℃，进气压力设定为0.25MPa，进料量控制在43mL/min，同时设定出风温度为87℃。
其中，步骤 （4） 中，所述碱性水溶液与二次固相物的重量比为 8.9：1，碱性水溶液为5%氢氧化钠水溶液。
其中，步骤 （4） 中，进行浸提时，水体温度控制在92℃之间，煎煮时间控制在3.6小时。
其中，步骤（5） 中，进行酸中和时，通过向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液进行中和，直至PH值为7.0。
实施例三
如实施例一、实施例二中所述，步骤 （3）和（5）中，醇沉的具体步骤为：
A、冷却的步骤 （3）中的二次提取液和步骤 （5）中的三次提取液至10℃；
B、随后采用三慢二快的搅拌节奏，缓慢向二次提取液和三次提取液中加入乙醇，并控制二次提取液和三次提取液内的含醇量达54％～65％；
C、最后，将加入了乙醇的二次提取液和三次提取液密封，并保存于低温环境下，环境温度控制在5℃~10℃。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。
Claims (8)
1.一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）使用醇溶液对灰树花子实体原料进行浸泡脱脂，脱脂完毕后，通过离心设备，进行固液分离，得到一次固相物和一次提取液；
（2）使用去离子水对步骤 （1）中所得的一次固相物，进行沸水冷凝回流浸提，浸提完毕后，再次通过离心设备，进行固液分离，得到二次固相物和二次提取液；
（3）将步骤（2）中所得的二次提取液，经浓缩、去蛋白、碱中和、透析脱盐、醇沉、洗涤后，喷雾干燥，得灰树花水提多糖；
（4）使用碱性水溶液对步骤 （2）中所得的二次固相物进行浸提，浸提完毕后固液分离，得到三次提取液；
（5）将步骤（4）中所得的三次提取液，经酸中和、透析脱盐、醇沉、洗涤后，喷雾干燥，即得灰树花碱提多糖；
其中，步骤（1） 中，所述醇溶液与灰树花子实体原料的重量比为 8-10 ：1，醇溶液为85－95%乙醇（w/v）溶液；
其中，步骤 （2） 中，进行沸水冷凝回流浸提时，水体温度控制在90－100℃之间，煎煮时间控制在2－4小时；
其中，步骤 （2） 中，所述离子水与灰树花原料的重量比为 8－10 ：1，提取次数共计2次；
其中，步骤 （3）中，对二次提取液进行浓缩时，通过框架式薄膜浓缩器或真空浓缩机，进行浓缩，直至二次提取液的波美度达到25°～30°；
其中，步骤 （3）中，去蛋白的具体条件为，向经过浓缩的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混浊，并于3－6℃下静置12－24小时，离心去蛋白。
2.如权利要求1所述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，步骤 （3）中，向经过去蛋白的二次提取液中，滴加10%氢氧化钠水溶液，进行中和，直至PH为6.8-7.2之间。
3.如权利要求1所述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，步骤 （3）和（5）中，进行透析脱盐时，透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇或甘油中，分别对步骤（3）中经过碱中和的二次提取液和步骤（5）中经过酸中和的三次提取液，进行透析36－48小时。
4.如权利要求1所述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，步骤 （3）和（5）中，醇沉的具体步骤为：
A、冷却步骤 （3）中的二次提取液和步骤 （5）中的三次提取液至10℃；
B、随后采用三慢二快的搅拌节奏，缓慢向二次提取液和三次提取液中加入乙醇，并控制二次提取液和三次提取液内的含醇量达54％～65％；
C、最后，将加入了乙醇的二次提取液和三次提取液密封，并保存于低温环境下，环境温度控制在5℃~10℃。
5.如权利要求1所述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，步骤 （3）和（5）中，进行洗涤时，通过无水乙醇和丙酮依次洗涤两次。
6.如权利要求1所述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，步骤（3）和步骤（5）中，进行喷雾干燥时，采用超声波喷雾干燥工艺，设定进风温度为85~95℃，进气压力设定为0.1~0.25MPa，进料量控制在30~50mL/min，同时设定出风温度为70~90℃。
7.如权利要求1所述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，步骤 （4） 中，所述碱性水溶液与二次固相物的重量比为 8-10 ：1，碱性水溶液为5%氢氧化钠水溶液；步骤 （4） 中，进行浸提时，水体温度控制在90－100℃之间，煎煮时间控制在2－4 小时。
8.如权利要求1所述的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其特征在于，步骤（5） 中，进行酸中和时，通过向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液进行中和，直至PH值为7.0。
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