CN106866769B - 拟人参皂苷衍生物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了两种构型(Z型和E型)的拟人参皂苷衍生物的制备方法，包括适宜的原料的选取、羟基的保护方法、催化剂条件下侧链结构的转化以及去乙酰还原法和分离纯化步骤。本发明首次使用羟基保护产物在酸催化条件下侧链结构完成向拟皂苷的侧链结构的转化，制备拟人参皂苷Rg2、Rh1和PPT。本发明制备Z型和E型的拟人参皂苷Rg2选取的原料成本低，转化方法简单易行，E型拟人参皂苷Rg2转化率高。制备Z型和E型的拟人参皂苷Rg2、Rh1、PPT及其衍生物所采用的试剂具有普遍使用性，适合生产。

Description

拟人参皂苷衍生物及其制备方法

技术领域

本发明属于稀有皂苷制备技术领域，特别是涉及人参三醇型皂苷拟Rg2、拟Rh1、拟PPT及其衍生物的转化制备方法，包括它们的羟基保护制备方法、酸催化下的侧链转化制备方法和碱条件下的去保护基制备方法及其纯化步骤。

背景技术

人参(Panax ginseng C.A.Meryer)属于五加科多年生草本植物，具有补元气、安神生津、益肺补脾、固脱复脉等作用，在东亚乃至世界范围内已被应用于滋补和保健。研究表明，它对抗肿瘤有很好的功效，同时对神经系统的调节及在抗心脑血管等疾病方面都有着重要的作用。而作为人参中的主要有效成分为人参皂苷，人参皂苷分为三种类型，第一类为达玛烷型四环三萜皂苷，包括糖基团连接在C-3、C-20位的原人参二醇型皂苷，糖基团连接在C-6、C-20位的原人参三醇型皂苷及侧链得到修饰的达玛烷型四环三萜皂苷；第二类为C-20位形成含氧环的奥克梯隆型四环三萜皂苷；第三类为齐墩果酸型非甾体五环三萜皂苷。

关于人参皂苷的构效关系，研究发现人参皂苷母核的构型、糖的数量及位置、C-20立体构型及侧链的结构差异都对人参皂苷的药理作用起到很关键的作用。由于多数人参皂苷在人参中的含量较少、皂苷衍生物的种类匮乏，如今人们对于人参皂苷通过酸降解、碱降解、酶降解、微波降解和微生物降解的方法来获得次级及新型人参皂苷。其中陈燕萍等首先利用碱性条件下醇沉的方法，从西洋参总皂苷中分离出人参二醇组皂苷，然后在催化剂条件下降解的，分离提纯得到人参皂苷Rh2；马成俊等采用碱降解分离得到20(S)-PPD与20(S)-PPT；李绪文等也采用碱降解方法制备了20(S)-Rh2与20(S)-PPD；吴彦君等采用人参皂苷Re通过碱降解生成了20(S)-PPT；丛登立等采用高温高压碱降解转化西洋参总皂苷，经硅胶柱层析分离得到20(S)-Rg3和20(S)-Rh2；赵勇等通过在饱和乙醇钠条件下水解，从西洋参中制备出人参皂苷Rh1；李平亚等采用酸水解制备人参皂苷Rg3；陈英杰等采用碱降解得人参皂苷Rh1；HanB.H等选择人参皂苷Rg1，在0.1mol/HCl乙醇溶液，37℃条件下，薄层板追踪反应，最终制备出人参皂苷Rh1，并同时分离出20(R)-Rh1，该方法降解产率高；李平亚等利用萃取的方法，将人参二醇组从人参总皂苷中萃取分离出来，再用人参二醇组皂苷在1％HCl的乙醇溶液中，恒温水浴75℃，反应半小时，将反应后的白色析出物过滤，采用80％的甲醇重结晶制得纯度很高的20(S)-Rg3；杨凌等在酸性条件下，通过控制反应的温度、酸的浓度、时间及加入保护剂等，确保C-20位置的侧链部分不被反应破坏，进而将人参皂苷直接水解生成PPD，该方法产率高，相同的反应路径还可以制备Rg3、Rk1及Rg5，为临床上抗肿瘤药物的研发提供了较为宽阔的药物来源。

上述方法从原理看，都是通过水解掉人参皂苷上的一个部分或几个部分得到某一皂苷。中国专利CN 101054400A采用酸水解得到一种侧链改变的人参皂苷PPD；中国专利CN102391345A利用酸水解得到一种侧链改变的人参皂苷Rh2；中国专利CN 201410171653.6通过酸催化得到一种侧链改变的人参皂苷Rh2即伪Rh2；上述报道中的新型人参皂苷侧链具有相同的构造式，但是构型完全不同，其中中国专利101054400A报道的是Z型，中国专利CN102391345A报道的是E型。两者都具有很好的抗肿瘤活性和治疗特定疾病的功效。中国专利CN 102391345A利用酸水解的一种侧链改变的人参皂苷Rh2的产率不到1％，中国专利CN201410171653.6通过酸催化得到一种侧链改变的E型伪人参皂苷Rh2，产率高。

基于上述原因，在分析了一些药理活性较好的人参皂苷后，发现其在天然产物中的含量很低，故本发明选择在人参中含量丰富且容易提取分离的人参皂苷Re、人参三醇组为原料，找到最佳的酸性转化条件，优化其分离路线，定向大量制备次级稀有的拟人参皂苷Rg2、Rh1、PPT。

本发明制备的拟人参皂苷Rg2、拟人参皂苷Rh1及拟人参皂苷PPT的主要构型为E型，还有少量的Z型，其过程首次使用羟基保护产物在低温下酸催化反应得拟人参皂苷Rg2、拟人参皂苷Rh1及拟PPT，利用一步反应同时在人参皂苷侧链不同碳链位置发生消除和醇化过程，制备过程产率高达60％以上，操作简单，试剂使用具有普遍适用性，适合生产。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明将选用的原料首先进行羟基保护，然后在低温下酸催化反应侧链转化，利用一步反应在人参皂苷侧链的不同位置同时发生消除和醇化过程，然后分离纯化，将纯化物去掉保护基，再精致纯化，得到两种不同构型的拟人参皂苷。

具体的，本发明提供的一种拟人参皂苷衍生物的制备方法，所述拟人参皂苷衍生物的通式如式(1)所示：

式(1)中：R选自H、式(2)所示基团或式(3)所示基团；

其制备过程按照以下步骤实施：

a：原料的羟基保护

以人参三醇型皂苷为原料，取一定量的原料，溶于有机溶剂中，加入用于提供酰基的保护试剂和吡啶，于20～40℃反应10～38h，蒸干，得到人参三醇型皂苷乙酰化产物，其中，原料和乙酸酐的添加比例为1g：3～6mL，原料和吡啶的添加比例为1g：3～6mL；

b：酸催化转化

取一定量的人参三醇型皂苷乙酰化产物，溶于有机溶剂中，加入浓度为1～25％酸溶液，于-50～50℃恒温槽中回流3～20小时，调pH为7.0，回收有机溶剂，得到乙酰化拟人参皂苷，其中，人参三醇型皂苷乙酰化产物和酸溶液的添加比例为1g：1mL；

c：脱保护基

取一定量的乙酰化拟人参皂苷，溶于体积分数为50～75％的有机溶剂中，加入50～60％碱溶液，于80～100℃恒温水浴加热回流2～5小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到拟人参皂苷粗产物；

d：分离纯化

取所述拟人参皂苷粗产物，以体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂，进行硅胶柱层析；对层析产物进行液相分离，液相分离洗脱剂为甲醇和水混合物，流速10ml/min，检测波长：203nm，采用含水5～10％的甲醇重结晶，得到拟人参皂苷。

优选地，所述人参三醇型皂苷选自人参皂苷Re、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rh1、人参皂苷F1、人参皂苷PPT中的任意一种，或是人参三醇组皂苷中的至少一种。

更优选地，所述人参三醇组皂苷是从人参、西洋参、三七中任意一种的根、茎叶、花、果实中提取获得的。

优选地，所述原料的羟基保护步骤中，所使用的有机溶剂为吡啶、三乙胺、三甲胺中的任意一种；所述用于提供提供酰基的保护试剂为乙酰氯或乙酸酐。

优选地，所述酸催化转化步骤中，所使用的有机溶剂为二氧六环、吡啶、二氯甲烷、甲醇中的任意一种或是它们的混合物；所述酸为盐酸、硫酸、磷酸、冰醋酸、草酸中的任意一种或是它们的混合物；

优选地，所述脱保护基步骤中，所使用的有机溶剂为二氧六环、乙醇、二氯甲烷、甲醇中的任意一种或是它们的混合物；所述碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碱金属、低级醇钠中的任意一种。

本发明还提供了一种拟人参皂苷衍生物，由上述任一所述的方法制备得到。

优选地，所述拟人参皂苷的化学式如下所示：

本发明提供的技术方案的积极效果具体如下：

首次采用羟基保护在低温下酸催化反应得拟人参皂苷Rg2、拟人参皂苷Rh1、拟PPT及其乙酰化衍生物，该反应在人参皂苷侧链不同位置同时发生消除和羟基化过程，此过程步骤简单，目标性强，所用试剂具有普遍适用性，溶剂成本低，无危险，本制备过程产率高达60％以上，操作简单，适合生产。

附图说明

图1为本发明实施例10制备的拟人参皂苷PPT的E型¹³C-NMR图；

图2为本发明实施例10制备的拟人参皂苷PPT的E型HMQC图；

图3为本发明实施例10制备的拟人参皂苷PPT的E型HMBC图；

图4为本发明实施例10制备的拟人参皂苷PPT的E型一维Roesy图；

图5为本发明实施例10制备的拟人参皂苷PPT的Z型¹³C-NMR图；

图6为本发明实施例10制备的拟人参皂苷PPT的Z型HMQC图；

图7为本发明实施例10制备的拟人参皂苷PPT的Z型HMBC图；

图8为本发明实施例10制备的拟人参皂苷PPT的Z型一维Roesy图。

具体实施方式

为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

本发明的制备原理为：选用的原料首先进行羟基保护，然后在低温下酸催化反应侧链转化，利用一步反应在人参皂苷侧链的不同位置同时发生消除和醇化过程，然后分离纯化，将纯化物去掉保护基，再精致纯化，得到两种不同构型的拟人参皂苷。

基于该发明创造，以下就具体的示例对本发明提供的制备方法进行具体的举例说明。

以下实施例1-6为拟人参皂苷Rg2的制备

实施例1

一种以人参皂苷Rg2为原料制备拟人参皂苷Rg2的方法，将选用的原料羟基保护，然后在低温下酸催化反应侧链转化，利用一步反应在人参皂苷侧链的不同位置同时发生消除和醇化过程，然后分离纯化，将纯化物去掉保护基，再精致纯化，得到两种不同构型的拟人参皂苷Rg2(E-拟人参皂苷Rg2和-Z拟人参皂苷Rg2)。

其制备工艺流程如下所示，其中，a为羟基保护过程；b为酸催化转化过程；c为去保护基过程。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷Rg2的羟基保护：取10g人参皂苷Rg2，溶于50ml二氯甲烷中，加入乙酸酐60ml、吡啶60ml，于40℃恒温水浴加热回流10小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷Rg2乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷Rg2乙酰化产物10g，溶于100ml二氯甲烷中，加入浓度为5％的硫酸溶液10ml，于0℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到拟人参皂苷Rg2乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rg2乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml乙醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于100℃恒温水浴加热回流2小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rg2粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rg2粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水10％甲醇重结晶，得到Z-拟人参皂苷Rg2，产率为10％，E-拟人参皂苷Rg2，产率为60％。

上述得到的E-拟人参皂苷Rg2：分子式：C₄₂H₇₂O₁₃；分子量：785。

化学名称：3β,12β,25-三羟基达玛-(E)-20(22)-烯-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷[3β,12β,25-trihydroxyldammar-(E)-20(22)-ene-6-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]。

Z-拟人参皂苷Rg2：分子式：C₄₂H₇₂O₁₃；分子量：785。

化学名称：3β,12β,25-三羟基达玛-(Z)-20(22)-烯-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷[3β,12β,25-trihydroxyldammar-(E)-20(22)-ene-6-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside]。

实施例2

一种以人参皂苷Rg2为原料制备拟人参皂苷Rg2的方法，其制备工艺流程和实施例1相同。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷Rg2的羟基保护：取10g人参皂苷Rg2，溶于50ml二氯甲烷中，加入乙酸酐60ml、吡啶60ml，于40℃恒温水浴加热回流10小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷Rg2乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷Rg2乙酰化产物10g，溶于100ml二氯甲烷中，加入浓度为5％的盐酸溶液10ml，于0℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到拟人参皂苷Rg2乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rg2乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml乙醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于100℃恒温水浴加热回流2小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rg2粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rg2粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水10％甲醇重结晶，得到Z-拟人参皂苷Rg2，产率为12.1％，E-拟人参皂苷Rg2，产率为60％。

实施例3

一种以人参皂苷Re为原料制备拟人参皂苷Rg2的方法，其制备工艺流程如下所示。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷Re的羟基保护：取10g人参皂苷Re，溶于50ml二氯甲烷中，加入乙酸酐60ml、吡啶60ml，于25℃恒温水浴加热回流24小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷Re乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷Re乙酰化产物10g，溶于100ml醋酸中，加入浓度为5％的硫酸10ml，于25℃恒温槽中回流反应5小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到拟人参皂苷Rg2乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rg2乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml乙醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rg2粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rg2粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水10％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷Rg2，产率82％。

实施例4

一种以人参皂苷Re为原料制备拟人参皂苷Rg2的方法，其制备工艺流程和实施例3相同。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷Re的羟基保护：取10g人参皂苷Re，溶于50ml二氯甲烷中，加入乙酸酐60ml、吡啶60ml，于40℃恒温水浴加热回流10小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷Re乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷Re乙酰化产物10g，溶于100ml醋酸中，加入浓度为5％的盐酸10ml，于4℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到拟人参皂苷Rg2乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rg2乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml乙醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于100℃恒温水浴加热回流2小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rg2粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rg2粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水10％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷Rg2，产率80％。

实施例5

一种以人参皂苷Re为原料制备拟人参皂苷Rg2的方法，其制备工艺流程和实施例3相同。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷Re的羟基保护：取10g人参皂苷Re，溶于50ml二氯甲烷中，加入乙酸酐60ml、吡啶60ml，于40℃恒温水浴加热回流10小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷Re乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷Re乙酰化产物10g，溶于100ml醋酸中，加入浓度为5％的盐酸10ml，于4℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到拟人参皂苷Rg2乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rg2乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml甲醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于100℃恒温水浴加热回流2小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rg2粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rg2粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水10％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷Rg2，产率71.1％。

实施例6

一种以人参三醇组皂苷为原料制备拟人参皂苷Rg2的方法，其制备工艺流程如下所示。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参三醇组皂苷的羟基保护：取10g人参三醇组皂苷，溶于50ml二氯甲烷中，加入乙酸酐80ml、吡啶80ml，于40℃恒温水浴加热回流10小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷三醇组乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参三醇组皂苷乙酰化产物10g，溶于100ml醋酸中，加入浓度为5％的盐酸10ml，于4℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，上柱分离得到拟人参皂苷Rg2乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rg2乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml甲醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液3ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rg2粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rg2粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水10％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷Rg2，产率65.6％。

以下实施例7-9为拟人参皂苷Rh1的制备

实施例7

一种以人参皂苷Rh1为原料制备拟人参皂苷Rh1的方法，其制备工艺流程如下所示。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷Rh1的羟基保护：取10g人参皂苷Rh1，溶于25ml二氯甲烷中，加入乙酸酐50ml、吡啶50ml，于20℃恒温水浴加热回流38小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷Rh1乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷Rh1乙酰化产物10g，溶于50ml醋酸中，加入浓度为5％的硫酸10ml，于0℃恒温槽中回流反应3小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，上柱分离得到拟人参皂苷Rh1乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rh1乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml甲醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rh1粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rh1粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水5％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷Rh1(E-拟人参皂苷Rh1和Z-拟人参皂苷Rh1)，产率63.7％。

其中，上述E-拟人参皂苷Rh1和Z-拟人参皂苷Rh1均为已知结构。

E-拟人参皂苷Rh1：分子式：C₃₆H₆₂O₉；分子量：638.87；CAS号:97744-96-2。化学名称：3β,12β,25-三羟基达玛-(E)-20(22)-烯-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，[3β,12β,25-trihydroxyldammar-(E)-20(22)-ene-6-O-β-D-glucopyranoside]。

Z-拟人参皂苷Rh1：分子式：C₃₆H₆₂O₉；分子量：638.87；CAS号:2015215-13-9，化学名称：3β,12β,25-三羟基达玛-(Z)-20(22)-烯-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，[3β,12β,25-trihydroxyldammar-(Z)-20(22)-ene-6-O-β-D-glucopyranoside]。

实施例8

一种以人参皂苷Rh1为原料制备拟人参皂苷Rh1的方法，其制备工艺流程和实施例7相同。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷Rh1的羟基保护：取10g人参皂苷Rh1，溶于25ml二氯甲烷中，加入乙酸酐50ml、吡啶50ml，于40℃恒温水浴加热回流10小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷Rh1乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷Rh1乙酰化产物10g，溶于50ml醋酸中，加入浓度为5％的盐酸10ml，于0℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，上柱分离得到拟人参皂苷Rh1乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rh1乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml甲醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rh1粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rh1粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水5％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷Rh1，产率62.7％。

实施例9

一种以人参皂苷Rg1为原料制备拟人参皂苷Rh1的方法，其制备工艺流程和实施例7相同。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷Rg1的羟基保护：取10g人参皂苷Rg1，溶于25ml二氯甲烷中，加入乙酸酐50ml、吡啶50ml，于40℃恒温水浴加热回流10小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷Rg1乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷Rg1乙酰化产物10g，溶于50ml醋酸中，加入浓度为5％的硫酸10ml，于0℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，上柱分离得到拟人参皂苷Rh1乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷Rh1乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml甲醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷Rh1粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷Rh1粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为8:2，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水5％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷Rh1，产率65％。

以下实施例10-11为拟人参皂苷PPT的制备

实施例10

一种以人参皂苷PPT为原料制备拟人参皂苷PPT的方法，其制备工艺流程如下所示。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷PPT的羟基保护：取10g人参皂苷PPT，溶于25ml二氯甲烷中，加入乙酸酐30ml、吡啶30ml，于20℃恒温水浴加热回流38小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷PPT乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷PPT乙酰化产物10g，溶于50ml醋酸中，加入浓度为5％的硫酸10ml，于0℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，上柱分离得到拟人参皂苷PPT乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷PPT乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml甲醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，加酸调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷PPT粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷PPT粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为9:1，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水5％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷PPT(E-拟人参皂苷PPT和Z-拟人参皂苷PPT)，产率62.7％。

其中，上述E-拟人参皂苷PPT为已知结构，Z-拟人参皂苷PPT为新化合物。

E-拟人参皂苷PPT：分子式：C₃₀H₅₂O₄；分子量：476.73；CAS号:97744-95-1；化学名称：3β,6β12β,25-三羟基达玛-(E)-20(22)-烯，[3β,12β,25-trihydroxyldammar-(E)-20(22)-ene]。

Z-拟人参皂苷PPT：分子式：C₃₀H₅₂O₄；分子量：476.73，化学名称：3β,6β12β,25-三羟基达玛-(Z)-20(22)-烯，[3β,12β,25-trihydroxyldammar-(Z)-20(22)-ene]。

图1为拟人参皂苷PPT的E型¹³C-NMR图；图2为拟人参皂苷PPT的E型HMQC图；图3为拟人参皂苷PPT的E型HMBC图；图4为拟人参皂苷PPT的E型一维Roesy图；图5为拟人参皂苷PPT的Z型¹³C-NMR图；图6为拟人参皂苷PPT的Z型HMQC图；图7为拟人参皂苷PPT的Z型HMBC图；图8为拟人参皂苷PPT的Z型一维Roesy图。

实施例11

一种以人参皂苷F1为原料制备拟人参皂苷PPT的方法，其制备工艺流程和实施例10相同。

具体制备过程按照以下步骤实施：

a.人参皂苷F1的羟基保护：取5g人参皂苷F1，溶于20ml二氯甲烷中，加入乙酸酐20ml、吡啶20ml，于40℃恒温水浴加热回流10小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参皂苷F1乙酰化产物；

b.酸催化转化：取人参皂苷F1乙酰化产物5g，溶于30ml醋酸中，加入浓度为5％的硫酸10ml，于0℃恒温槽中回流反应20小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，上柱分离得到拟人参皂苷PPT乙酰化产物；

c.脱保护基：取拟人参皂苷PPT乙酰化产物约5g，溶于由25ml二氧六环和25ml甲醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，加酸调节pH为7.0，回收有机溶剂，得拟人参皂苷PPT粗产物；

d.分离纯化：取拟人参皂苷PPT粗产物进行硅胶柱层析，采用体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂；将层析产物进行制备液相分离(洗脱剂为甲醇-水体积比为3:1，流速10ml/min，检测波长：203nm)，含水5％甲醇重结晶，得到拟人参皂苷PPT，产率58.7％。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，其保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内，本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (2)

1.一种拟人参皂苷衍生物的制备方法，其特征在于，所述拟人参皂苷衍生物的通式如式(1)所示：

式(1)中：R选自式(3)所示基团；

所述拟人参皂苷的制备过程按照以下步骤实施：

a：原料的羟基保护

取10g人参三醇型皂苷，溶于25ml二氯甲烷中，加入乙酸酐50ml、吡啶50ml，于20℃恒温水浴加热回流38小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参三醇型皂苷乙酰化产物；

b：酸催化转化

取10g的人参三醇型皂苷乙酰化产物，溶于50ml醋酸中，加入浓度为5％的硫酸10ml，于0℃恒温槽中回流反应3小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，上柱分离得到乙酰化拟人参皂苷；

c：脱保护基

取一定量的乙酰化拟人参皂苷，于由25ml二氧六环和25ml甲醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到拟人参皂苷粗产物；

d：分离纯化

取所述拟人参皂苷粗产物，以体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂，进行硅胶柱层析；对层析产物进行液相分离，液相分离洗脱剂为甲醇和水混合物，流速10ml/min，检测波长：203nm，采用含水5％的甲醇重结晶，得到E-拟人参皂苷和Z-拟人参皂苷；

所述人参三醇型皂苷选自人参皂苷Rh1；

所述人参三醇组皂苷是从人参、西洋参、三七中任意一种的根、茎叶、花、果实中提取获得的。

2.一种拟人参皂苷衍生物的制备方法，其特征在于，所述拟人参皂苷衍生物的通式如式(1)所示：

式(1)中：R选自式(2)所示基团；

所述拟人参皂苷的制备过程按照以下步骤实施：

a：原料的羟基保护

取10g人参三醇型皂苷，溶于50ml二氯甲烷中，加入乙酸酐60ml、吡啶60ml，于25℃恒温水浴加热回流24小时，减压蒸馏除去溶剂，得到人参三醇型皂苷乙酰化产物；

b：酸催化转化

取10g的人参三醇型皂苷乙酰化产物，溶于100ml醋酸中，加入浓度为5％的硫酸10ml，于25℃恒温槽中回流反应5小时，加入氢氧化钠溶液调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到乙酰化拟人参皂苷；

c：脱保护基

取5g的乙酰化拟人参皂苷，溶于由25ml二氧六环和25ml乙醇组成的混合溶液中，加入50％氢氧化钠溶液5ml，于90℃恒温水浴加热回流5小时，调节pH为7.0，回收有机溶剂，得到拟人参皂苷粗产物；

d：分离纯化

取所述拟人参皂苷粗产物，以体积比为2：2：4：1的氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水作为洗脱剂，进行硅胶柱层析；对层析产物进行液相分离，液相分离洗脱剂为甲醇和水混合物，流速10ml/min，检测波长：203nm，采用含水10％的甲醇重结晶，得到E-拟人参皂苷和Z-拟人参皂苷；

所述人参三醇型皂苷选自人参皂苷Re；

所述人参三醇组皂苷是从人参、西洋参、三七中任意一种的根、茎叶、花、果实中提取获得的。

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