CN106857246A - 一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法 - Google Patents

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CN106857246A CN201710016705.6A CN201710016705A CN106857246A CN 106857246 A CN106857246 A CN 106857246A CN 201710016705 A CN201710016705 A CN 201710016705A CN 106857246 A CN106857246 A CN 106857246A
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Abstract

本发明公开一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，属于珍稀濒危植物组织培养快繁方法。该方法包括外植体灭菌处理、外植体启动培养、继代培养、生根培养以及移栽等过程。本发明显著的优势在于运用1/4MS，添加KT或KT和6‑BA组合，诱导率达到100％。生根培养基通过添加活性炭后生根率达到了100％，添加IBA的培养基平均生根条数达到5.78条，植株生长健壮。运用本发明能够在短期内快速大量繁殖健壮四药门花，达到对珍稀濒危四药门花种群繁殖保育和工厂化生产的目的。本发明外植体灭菌以及初代培养的萌发率可达为51.06％，诱导率与生根率、移栽成活率均可达100％，且培养周期短，繁殖率高，可实现工厂化生产。

Description

一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法
技术领域
本发明属于珍稀濒危植物组织培养快繁方法，具体涉及一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法。
背景技术
四药门花(Loropetalum subcordatum)是金缕梅科(Hamamelidaceae)檵木属常绿灌木或小乔木，是中国特有的残遗植物，是我国二级保护植物(于永福.中国野生植物保护工作的里程碑——《国家重点保护野生植物名录(第一批)》出台[J].植物杂志,1999(05):3.)。四花门花株形优美，花期长，也是一种极具应用价值的景观植物，仅我国分布于广西木论、贵州茂兰、广东中山以及香港几个地区，因其分布区域狭窄，且数量极少，被列为IUCN(International Union ForConservation Of Nature)稀有植物和中国国家重点保护野生植物(张宏达.中国植物志:金缕梅科[M].北京:科学出版社,1979.)。对四药门花的生殖生态学研究发现，种群存在自交衰退现象，其自然结实率仅有4.79％，即使辅以人工异株授粉，其结实率也仅有6.67％(顾垒,张奠湘.濒危植物四药门花的自花授粉[J].植物分类学报,2008,46(5):651–657.)。为保护现有的种质资源，减轻资源压力，扩大种群数量，并能实现推广利用，组织培养快速繁殖成为重要的手段，能够为迁地保护和扩大种群提供新技术支撑。
组织培养是一种能快速无性繁殖的方法，繁殖周期短，繁殖系数大，遗传稳定，能够保存亲本优良的性状，被广泛的用于有性繁殖困难或缓慢的植物种类以及自然种群稀少的濒危植物的保护中。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，包括外植体灭菌处理、外植体启动培养、继代培养、生根培养以及移栽等过程，具体包括如下步骤：
(1)外植体灭菌与外植体启动培养：以四药门花植株新梢茎段为外植体，选取树姿优美，生长健壮，无病虫害的植株采摘当年生枝条，将枝条剪去叶片，保留叶柄，用软毛刷蘸洗洁精水轻轻刷洗枝条，用自来水冲洗干净后置于超净工作台上，剪成长2.0cm左右，含1～2个叶腋芽的茎段，用0.1％升汞溶液灭菌处理5～12min，期间不断摇动，用无菌水冲洗5～6次，接种到外植体启动培养基进行叶腋芽诱导，12天左右开始有芽萌动，35天左右萌芽约2.0cm长，能够进行下一步的继代培养；
(2)继代培养：将步骤(1)诱导得到的叶腋芽分别接种于增殖培养基上进行继代培养，将伸长的叶腋芽剪切成茎段接入新的增殖培养基，如此反复，得到大量丛生芽；继代培养中许多培养瓶中的苗都有生根现象，而且有的根系发育良好，说明四药门花是非常容易生根的树种。
(3)生根培养：将步骤(2)继代培养得到的丛生芽切割成带顶芽茎段接种于生根培养基中进行诱导生根，10天左右开始萌生小根，30天左右长出大量健壮的根系。
(4)炼苗移栽：将步骤(3)获得的生根苗移至温室，将高3cm以上且根系发达、茎叶健壮的无菌生根苗取出，洗净在根系上附着的培养基，移栽到适宜湿度的装入穴盘的基质中，盖上透明塑料穴盘盖保湿，每10天左右根据基质湿度进行喷水管理。约一周左右便有新叶长出，30天内顶芽伸长，叶片长大，叶色由深绿色变成草绿色。30天后揭去塑料盖，45天后移栽至营养钵中，成活率可达100％。
步骤(1)中所述的消毒的时间优选为10～12min；更优选为10min。
步骤(1)中所述的外植体启动培养基为：MS+6-BA 0.5～2.0mg·L-1+IBA 0.1～0.2mg·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0。
优选为：MS+6-BA 1.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0。
步骤(2)中所述的增殖培养基为：1/4MS+KT 2.0～10.0mg·L-1+6-BA 0～2.0mg·L-1+IBA 0～0.3mg·L-1+AC 0.3～0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0；
优选为：1/4MS+KT 2.0～10.0mg·L-1+6-BA 0～2.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+AC0.3g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0；
更优选为：1/4MS+KT 2.0～10.0mg·L-1+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+AC0.3g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0。
步骤(3)中所述的生根培养基为：1/2WPM+KT 0～1.0mg·L-1+IBA 0.5～1.0mg·L-1+AC 0.3～0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖20g·L-1，pH调至5.8～6.0。
优选为：1/2WPM+IBA 0.5～1.0mg·L-1+AC 0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖20g·L-1，pH调至5.8～6.0。
所述的外植体启动培养、继代培养、生根培养三个阶段的培养室条件均为光照时间8～12h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
所述的移栽的条件为温度25±2℃，光照时间8～12h/d，光照强度2000～5000lx。
所述的移栽的基质为腐殖土、黄心土:腐殖土＝2:1或黄心土:腐殖土:沙＝2:1:1。
所述的外植体灭菌处理、外植体启动培养、继代培养、生根培养阶段培养时间分别根据所调查的丛生芽分化率、丛生芽增殖率和生根确定。
上述所述MS成分和含量：KNO3 1900mg·L-1，NH4NO3 1650mg·L-1，KH2PO4 170mg·L-1，MgSO4·7H2O 370mg·L-1，CaCl2·2H2O 440mg·L-1，KI 0.83mg·L-1，H3BO3 6.2mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，Na2MoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1，Na2-EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O27.8mg·L-1，肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg·L-1，VB1 0.1mg·L-1，VB6 0.5mg·L-1，烟酸0.5mg·L-1。
上述所述1/4MS成分和含量：KNO3 475mg·L-1，NH4NO3 412.5mg·L-1，KH2PO442.5mg·L-1，MgSO4·7H2O 92.5mg·L-1，CaCl2·2H2O 110mg·L-1，KI 0.83mg·L-1，H3BO36.2mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，Na2MoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1，Na2-EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1，肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg·L-1，VB1 0.1mg·L-1，VB6 0.5mg·L-1，烟酸0.5mg·L-1。
上述所述1/2WPM成分和含量：K2SO4 495mg·L-1，MgSO4·7H2O 185mg·L-1，KH2PO485mg·L-1，NH4NO3 200mg·L-1，Ca(NO3)2·4H2O 278mg·L-1，CaCl2·2H2O 48mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，H3BO3 6.2mg·L-1，CuSO4·5H2O0.25mg·L-1，Na2MoO4·2H2O 0.25mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1，Na2-EDTA·2H2O37.3mg·L-1，肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg·L-1，VB1 1mg·L-1，VB6 0.5mg·L-1，烟酸0.5mg·L-1。
本发明所用的试剂全称：IBA，Indole-3-butytric acid，吲哚丁酸；6-BA，6-Benzylaminopurine，6-苄氨基腺嘌呤；NAA，1-Naphthylacetic acid，萘乙酸；KT，Kinetin，6-糠氨基嘌呤；AC，Active carbon，活性炭。
本发明在外植体启动培养中用0.1％升汞进行不同时间的灭菌处理，筛选出存活率最高，褐化率最低的灭菌时间。在继代培养中，进行不同基本培养基与激素配比的组合，筛选出增殖率最高，生长最优的组合。在生根培养中，进行不同激素配比的组合，筛选出生根率最高，组培苗最健壮的组合。本实验启动培养为接种后35天统计，继代培养为60天后统计，生根培养为接种后30天统计，移栽存活率为移栽后45天统计。
表1 0.1％HgCl2处理时间对四药门花茎段外植体叶腋芽萌发的影响
编号 处理时间/min 接种茎段数/段 污染率/％ 褐化率/％ 萌发率/％
1 5 45 17.50 12.50 45.00
2 8 45 25.64 12.82 30.77
3 10 45 6.38 13.02 51.06
4 12 45 14.58 23.81 50.00
5 15 45 11.90 29.17 27.08
在本发明中，使用HgCl2灭菌不同时间，灭菌10min的污染率最低的，褐化率居中，且萌发率最高，而灭菌时间再加长就会增加褐化率，且萌发率也会逐渐减低。因此，本发明选用最佳灭菌时间为10min。
表2不同基本培养基和不同激素配比对四药门花茎段的继代培养影响
在本发明中，继代培养阶段分别研究3种基本培养基与不同激素及激素不同浓度的组合，结果表明，使用1/4MS培养基的平均芽长较其他基本培养基长，在使用1/4MS培养基的处理中，芽的增殖倍数2、3、4号处理明显高于1号处理，区别在于KT的使用，实验结果显示，4号处理的芽增殖倍数和芽长均高于2、3号处理，因此以KT、6-BA与IBA综合效果最佳，且KT使用量要与6-BA相对平衡，不能过高。本发明故选择1/4MS+KT 2.0mg·L-1+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+AC 0.3g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1培养基作为最佳增殖培养基。
表3不同激素组合对四药门花生根的影响
在本发明中，生根培养阶段主要研究了3种激素与活性炭的组合，结果表明，无论是哪种培养基，生根率都达到100.00％，但苗木的生长势有所不同。无活性炭组株高较矮，生长不良，叶小而发黄。其他激素组合，以9号IBA 1.0mg·L-1处理组的平均株高最高，平均生根条数最多，平均根长最长，叶片大，叶色深绿色，植株健壮，因此本发明选择1/2WPM+IBA1.0mg·L-1+AC 0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖20g·L-1培养基作为最佳生根培养基。
在本发明中，移栽基质选用了腐殖土，黄心土:腐殖土＝2:1，黄心土:腐殖土:沙＝2:1:1三种配比，其中腐殖土移栽存活率达到100％，为最优，黄心土：腐殖土＝2:1移栽存活率为96％～98％，黄心土:腐殖土:沙＝2:1:1移栽存活率为98％～99％。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：
本发明显著的优势在于运用1/4MS为基本培养基，添加一定浓度的KT或KT和6-BA组合，诱导率达到100.00％，高于了孙红梅等(孙红梅，陈彦，梁银兴，等.濒危植物四药门花的组织培养研究初探[J].现代园艺.2015(04):12-13.)研究的MS+6-BA 4mg·L-1诱导率96.7％。生根培养基通过添加活性炭后生根率达到了100.00％，添加IBA的培养基平均生根条数达到5.78条，植株生长健壮。运用本发明能够在短期内快速大量繁殖健壮四药门花，达到对珍稀濒危四药门花种群繁殖保育和工厂化生产的目的。
本发明外植体灭菌以及初代培养的萌发率可达为51.06％，诱导率与生根率、移栽成活率均可达100％，且培养周期短，繁殖率高，可实现工厂化生产。
附图说明
图1是本发明四药门花外植体启动阶段示意图。
图2是本发明四药门花增殖阶段示意图。
图3是本发明四药门花生根阶段示意图。
图4是本发明四药门花移栽初期的示意图。
图5是本发明四药门花换袋苗初期的示意图。
图6是本发明四药门花换袋2个月后的示意图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
(1)外植体的选取：实验材料来自于广东省中山市五桂山四药门花自然居群，采集当年生木质化程度较好的枝条，扦插于广东省广州市华南农业大学树木园温室大棚中繁殖一定数量，于10月份采集扦插苗的当年生半木质化枝条作为组培外植体材料，在实验室中剪去叶片，保留叶柄。
(2)外植体消毒与外植体启动培养：将上述的茎段用软毛刷蘸洗洁精水轻轻刷洗，自来水冲洗干净后置于超净工作台上，剪成长2.0cm左右，含1～2个叶腋芽的茎段，用0.1％升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗5～6次，接种到外植体启动培养基(MS+6-BA 1.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0)中，进行叶腋芽诱导，10天左右开始有叶腋芽萌发，35天左右萌芽约2.0cm长，萌发率51.06％，能够进行下一步的继代培养。培养条件为光照时间12h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
(3)继代培养：将外植体启动培养获得的叶腋芽放入1/4MS+KT 2.0mg·L-1+6-BA2.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+AC 0.3g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0的增殖培养基中培养，1周后顶芽开始伸长，10天后基部叶腋处的隐芽开始萌动，60天左右新生叶腋芽可以生长到3.5cm以上，60天左右时将伸长的叶腋芽剪切成1.2cm左右长的茎段接入新的增殖培养基，增殖系数达2.082，如此反复，得到大量丛生芽。培养条件为光照时间12h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
(4)生根培养：将继代培养中获得的丛生芽切割成1.5cm左右高的单个带顶芽植株，转移至1/2WPM+IBA 1.0mg·L-1+AC 0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖20g·L-1，pH调至5.8～6.0的生根培养基，培养10天后，基部顶端开始有小根萌出，培养30天后获得茎叶健壮且生根率达100％、平均生根5.78条，平均根长2.25cm的优质生根苗。培养条件为光照时间12h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
将生好根的组培瓶移至华南农业大学林学与风景园林学院人工气候室内，取出苗木，选择高3cm以上，且根系发达、茎叶健壮的生根苗，洗净在根系上附着的培养基，移栽到适宜湿度的装入穴盘的腐殖土基质中，盖上透明塑料穴盘盖保湿，大约7天便有新叶萌发，每10天左右根据基质湿度进行喷水管理，30天后揭去塑料盖。45天后移栽到16*16cm的营养袋中，基质配比不变，保持土壤适宜湿度，移至广东省广州市华南农业大学树木园温棚中管养，定期抚育管理并检测生长情况。人工气候室温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度5000lx，温棚中温度为25～28℃，湿度为85％，用75％透光率的遮阴网遮荫。
经试验，采用本实施例所有组培苗的苗床移栽成活率为100％。
实施例2
(1)外植体的选取：实验材料来自于广东省中山市五桂山四药门花自然居群，采集当年生木质化程度较好的枝条，扦插于广东省广州市华南农业大学树木园温室大棚中繁殖一定数量，于10月份采集扦插苗的当年生半木质化枝条作为组培外植体材料，在实验室中剪去叶片，保留叶柄。
(2)外植体消毒与外植体启动培养：将上述的茎段用软毛刷蘸洗洁精水轻轻刷洗，在自来水中冲洗干净后置于超净工作台上，剪成长2.0cm左右，含1～2个叶腋芽的茎段，用0.1％升汞溶液消毒5min，用无菌水冲洗5～6次，接种到外植体启动培养基(MS+6-BA0.5mg·L-1+IBA 0.1mg·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0)中，进行叶腋芽诱导。12天左右开始有叶腋芽萌发，35天左右萌芽约2.0cm长，萌发率45.00％能够进行下一步的继代培养。培养条件为光照时间8h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
(3)继代培养：将外植体启动培养获得的叶腋芽放入1/4MS+KT 10.0mg·L-1+IBA0.2mg·L-1+AC 0.3g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0的增殖培养基中培养，1周后顶芽开始伸长，10天后基部叶腋处的隐芽开始萌动，60天左右新生叶腋芽可以生长到3.0cm以上，60天时将伸长的叶腋芽剪切成1.2cm左右长的茎段接入新的增殖培养基，增殖系数达2.00，如此反复，得到大量丛生芽。培养条件为光照时间8h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
(4)生根培养：将继代培养中获得的丛生芽切割成1.5cm左右高单个带顶芽植株，转移至1/2WPM+IBA 0.5mg·L-1+AC 0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖20g·L-1，pH调至5.8～6.0的生根培养基，培养10天左右即有小根生成，培养35天后获得生根率100％、平均生根3.83条的枝叶健壮的生根苗。培养条件为光照时间8h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
将生好根的组培瓶移至华南农业大学林学与风景园林学院人工气候室内，取出苗木，选择高3cm以上，且根系发达、茎叶健壮的生根苗，洗净在根系上附着的培养基，移栽到适宜湿度的装入穴盘的黄心土：腐殖土：沙＝2:1:1的混合基质中，盖上透明塑料穴盘盖保湿。约10天左右部分小苗开始有新叶萌发，45天后移栽到16*16cm的营养袋中，使用黄心土：腐殖土：沙＝2:1:1的混合基质，保持基质适宜湿度，移至广东省广州市华南农业大学树木园温棚中管养，定期抚育管理并检测生长情况。人工气候室温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度5000lx温棚中温度为25～28℃，湿度为85％，用75％透光率的遮阴网遮荫。
保持土壤湿度。
经试验，采用本实施例所有组培苗的苗床移栽成活率为98.3％。
实施例3
(1)外植体的选取：实验材料来自于广东省中山市五桂山四药门花自然居群，采集当年生木质化程度较好的枝条，扦插于广东省广州市华南农业大学树木园温室大棚中繁殖一定数量，于10月份采集扦插苗的当年生半木质化枝条作为组培外植体材料，在实验室中剪去叶片，保留叶柄。
(2)外植体消毒与外植体启动培养：将上述的茎段用软毛刷蘸洗洁精水轻轻刷洗，在自来水中冲洗干净后置于超净工作台上，剪成长2.0cm左右，含1～2个叶腋芽的茎段，用0.1％升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗5～6次，接种到外植体启动培养基(MS+6-BA2.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0)中，进行叶腋芽诱导，10天左右开始有芽萌动，35天左右萌芽约2.0cm长，萌发率50.00％，能够进行下一步的继代培养。培养条件为光照时间12h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
(3)继代培养：将外植体启动培养获得的叶腋芽放入1/4MS+KT 10.0mg·L-1+6-BA2.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+AC 0.3g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0的增殖培养基中培养，1周后顶芽开始伸长，10天后基部叶腋处的隐芽开始萌动，60天左右新生叶腋芽可以生长到3.0cm以上，60天时将伸长的叶腋芽剪切成1.2cm左右长的茎段接入新的增殖培养基，增殖系数达1.98，反复继代，得到大量丛生芽。培养条件为光照时间12h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
(4)生根培养：将继代培养中获得的丛生芽切割成1.5cm左右高单个带顶芽植株，转移至1/2WPM+KT 1.0mg·L-1+IBA 0.5mg·L-1+AC 0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖20g·L-1，pH调至5.8～6.0的生根培养基，培养10天后有根系开始萌生，培养35天后获得生根率100％，平均生根4.64条的枝叶健壮的生根苗。培养条件为光照时间12h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
将生好根的组培瓶移至华南农业大学林学与风景园林学院人工气候室内，取出苗木，选择高3cm以上，且根系发达、茎叶健壮的生根苗，洗净在根系上附着的培养基，移栽到适宜湿度的装入穴盘的黄心土：腐殖土＝2:1的混合基质中，盖上透明塑料穴盘盖保湿。约7天左右部分小苗开始有新叶萌发，45天后移栽到16*16cm的营养袋中，使用腐殖土，保持适宜土壤湿度，移至广东省广州市华南农业大学树木园温棚中管养，定期抚育管理并检测生长情况。人工气候室温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度5000lx温棚中温度为27～30℃，湿度为85％，用75％透光率的遮阴网遮荫。
经试验，采用本实施例所有组培苗的苗床移栽成活率为96％。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，包括外植体灭菌处理、外植体启动培养、继代培养、生根培养以及移栽，其特征在于：
所述的外植体灭菌处理为使用0.1％HgCl2灭菌处理5～12min；
所述的外植体启动培养所用的外植体启动培养基为：MS+6-BA 0.5～2.0mg·L-1+IBA0.1～0.2mg·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0；
所述的继代培养所用的增殖培养基为：1/4MS+KT 2.0～10.0mg·L-1+6-BA 0～2.0mg·L-1+IBA 0～0.3mg·L-1+AC 0.3～0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0；
所述的生根培养所用的生根培养基为：1/2WPM+KT 0～1.0mg·L-1+IBA 0.5～1.0mg·L-1+AC 0.3～0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖20g·L-1，pH调至5.8～6.0；
所述的移栽的基质为腐殖土、黄心土:腐殖土＝2:1或黄心土:腐殖土:沙＝2:1:1。
2.根据权利要求1所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于具体包括如下步骤：
(1)外植体灭菌与外植体启动培养：以四药门花植株新梢茎段为外植体，选取树姿优美，生长健壮，无病虫害的植株采摘当年生枝条，将枝条剪去叶片，保留叶柄，用软毛刷蘸洗洁精水轻轻刷洗枝条，用自来水冲洗干净后置于超净工作台上，剪成含1～2个叶腋芽的茎段，用0.1％升汞溶液灭菌处理5～12min，期间不断摇动，用无菌水冲洗5～6次，接种到外植体启动培养基进行叶腋芽诱导；
(2)继代培养：将步骤(1)诱导得到的叶腋芽分别接种于增殖培养基上进行继代培养，将伸长的叶腋芽剪切成茎段接入新的增殖培养基，如此反复，得到大量丛生芽；
(3)生根培养：将步骤(2)继代培养得到的丛生芽切割成带顶芽茎段接种于生根培养基中进行诱导生根；
(4)炼苗移栽：将步骤(3)获得的生根苗移至温室，将高3cm以上且根系发达、茎叶健壮的无菌生根苗取出，洗净在根系上附着的培养基，移栽到适宜湿度的装入穴盘的基质中，盖上透明塑料穴盘盖保湿，每10天根据基质湿度进行喷水管理。
3.根据权利要求1或2所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于：
所述的灭菌处理的时间为10～12min。
4.根据权利要求1或2所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于：
所述的外植体启动培养基为：MS+6-BA 1.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0。
5.根据权利要求1或2所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于：
所述的增殖培养基为：1/4MS+KT 2.0～10.0mg·L-1+6-BA 0～2.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+AC 0.3g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0。
6.根据权利要求5所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于：
所述的增殖培养基为：1/4MS+KT 2.0～10.0mg·L-1+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.2mg·L-1+AC 0.3g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖30g·L-1，pH调至5.8～6.0。
7.根据权利要求1或2所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于：
所述的生根培养基为：1/2WPM+IBA 0.5～1.0mg·L-1+AC 0.5g·L-1+卡拉胶9g·L-1+蔗糖20g·L-1，pH调至5.8～6.0。
8.根据权利要求1或2所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于：
所述的外植体启动培养、继代培养、生根培养三个阶段的培养室条件均为光照时间8～12h/d，光照强度2000lx，温度25±2℃。
9.根据权利要求1或2所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于：
所述的移栽的条件为温度25±2℃，光照时间8～12h/d，光照强度2000～5000lx。
10.根据权利要求1或2所述的珍稀濒危植物四药门花组织培养快繁方法，其特征在于：
所述的外植体灭菌处理、外植体启动培养、继代培养、生根培养阶段培养时间分别根据所调查的丛生芽分化率、丛生芽增殖率和生根确定。
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