CN106834430B - 一种脑卒中预警和早期诊断相关标志物及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种脑卒中预警和早期诊断相关标志物，所述标志物为MALAT1，其可用于制备脑卒中预警和早期诊断药物和试剂盒。

Description

一种脑卒中预警和早期诊断相关标志物及应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种脑卒中预警和早期诊断相关标志物及应用。

背景技术

脑卒中(stroke)为一组器质性脑损伤导致的脑血管疾病，以突然发病、迅速出现局限性或弥散性脑功能缺损为共同临床特征，包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中。前者又称脑梗死(cerebral infarction，CI)，是卒中最常见类型，约占70％-80％；后者包括脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)及蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)。脑卒中是世界范围内第二大常见死亡原因，也是成人致残的第一位原因，2008年卫生部公布的全国第三次死因回顾抽样调查报告显示，卒中(136.64/10万)已超过恶性肿瘤(135.88/10万)成为中国第一致死病因。我国卒中发病率120-180/10万，患病率400-700/10万，每年新发病例>200万，每年死亡病例>150万，存活者600万-700万，且2/3存活者遗留有不同程度的残疾。卒中也是单病种致残率最高的疾病。脑卒中高发病率、高死亡率和高致残率的特征严重危害人类的身心健康，给患者及家庭带来了沉重的负担和痛苦。

脑卒中主要是在诸多危险因素长期、共同作用中发生的，这些主要危险因素包括脑卒中家族史、高血压病、糖尿病、血脂异常、房颤、吸烟、肥胖和缺乏运动。对脑卒中高危人群进行普遍筛查，可以强化高危人群健康意识，降低我国脑血管病的发病率与死亡率，对预防脑卒中的发生具有重要的意义，有助于减轻个人、家庭及社会的经济负担。如今神经影像诊断技术的发展、早期溶栓、血管内介入、卒中一级、二级预防等临床技术和理念的进步，促使脑卒中的诊疗有较大改进，较大程度改善了患者预后。但脑卒中的巨大危害仍提示脑卒中临床诊疗技术有巨大的发展空间。寻求稳定易测、特异性和敏感性均较高且能反映脑组织损伤及修复情况的血液生物标志物，使之应用于脑卒中高危人群筛查、预警及对脑卒中患者的早期诊断、病情监测和疗效评估，对于脑卒中的防治将具有重要意义。

长链非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)与脑卒中密切相关。LncRNA约占ncRNA的80％，长度200-100000个核苷酸不等，位于细胞核内或胞质内。lncRNA具有类型多、作用模式多和数量多的特点。它们在表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等不同水平进行基因表达调控，并且参与了X染色体沉默，基因组印记现象以及染色质修饰、转录激活、转录干扰，及转录后调控、核内运输、调节原癌基因活化等多种重要的调控过程。NcRNA几乎可以调控基因表达的任何阶段，参与了神经系统不同生理和病理过程的调控。MALAT1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,肺腺癌转移相关转录子1)属lncRNA家族重要成员，在神经细胞中的表达相当丰富，能通过调控参与突触形成或维持的基因的表达来调节突触形成，其基因敲除后突触密度将减小。MALAT1也高度表达于人类内皮细胞，参与调控内皮细胞的血管生成；低氧状态可以诱导人类内皮细胞中MALAT1的表达增加，使血管增殖，提示其可能在脑卒中后脑血管内皮细胞的病理过程中起调控作用，MALAT1是脑卒中潜在的生物标志物，可能作为脑卒中预警、早期诊断和疗效评估的指标。

随着对长链非编码RNA研究的日益深入，对非编码RNA的更深层次的认识及其调控靶点的研究，将有助于阐明非编码RNA在脑卒中发生、发展中的调节机制，为脑卒中的预警筛查、诊断和治疗提供新方法和新靶点。目前对脑卒中患者血浆MALAT1的表达情况还没有相关报道；已有的临床研究多仅初步筛选出脑卒中急性期有变化的非编码RNA，它们在脑卒中预警、早期诊断和疗效评估中的应用价值及与脑卒中患者病情严重程度的关系尚不明确。

发明内容

本发明旨在通过检测健康人群、脑卒中高危人群及脑卒中急性期患者血浆中长链非编码RNA MALAT1)的表达水平,结合卒中患者的病情严重程度及转归情况寻找并评价其在脑卒中预警、早期诊断及疗效评估中可能的临床意义。本发明提出MALAT1与脑卒中相关，是脑卒中预警和早期诊断相关标志物，可用作制备脑卒中预警和早期诊断药物、脑卒中预防和治疗药物(靶点设计)，可用作制备脑卒中预警和早期诊断芯片、制剂或试剂盒。本发明所述MALAT1序列如SEQ ID N.1所示。

下面结合相关技术对本发明作进一步说明：

本发明研究发现相对健康对照组，血浆MALAT1在脑卒中高危人群组的相对表达量降低(p＝0.002)；而在脑梗死、脑出血及蛛网膜下腔出血患者发病24h内的相对表达量均显著增高(p<0.01)，但这三组之间血浆MALAT1的表达差异无统计学意义(p>0.05)。缺血性脑卒中患者发病24h内血浆MALAT1表达增高，再次证明了缺血刺激后可诱导MALAT1的表达增加，这与以往的研究结论一致。本发明的结果还首次观察到出血性脑卒中患者发病24h内MALAT1的表达同样明显增高，而脑卒中高危人群较健康对照的相对表达量降低。虽然MALAT1在脑卒中高危人群及脑卒中急性期患者血浆中表达改变的原因及其调控机制仍不清楚，但提示了MALAT1很可能在脑卒中发生发展过程中发挥作用。

进一步对脑卒中急性期患者组(包括脑梗死组、脑出血组及蛛网膜下腔出血组)、脑卒中高危人群组及健康对照组之间血浆MALAT1的表达差异进行ROC曲线分析，发现在脑卒中急性期患者组与健康对照组之间、脑卒中高危人群与健康对照组之间、脑卒中高危人群与脑卒中急性期患者组之间，MALAT1均有中等水平的诊断价值。尤其是脑卒中高危人群与脑卒中急性期患者组之间的诊断效率、敏感性及特异性均较高，提示MALAT1可能作为脑卒中高危人群筛查、预警的指标和脑卒中发病早期潜在的分子诊断标志物。

本发明运用qRT-PCR检测同一脑卒中急性期患者不同发病时间点(发病后24h内、2d、7d、14d、21d)血浆中MALAT1的相对表达水平，结果表明血浆MALAT1在脑梗死患者组发病24h内与发病7d时的相对表达量差异具有统计学意义(p＝0.016)；而在脑出血及蛛网膜下腔出血患者组不同发病时间点的相对表达量差异均无统计学意义(p>0.05)。此外，本发明收集了入选脑卒中急性期患者的临床资料(发病时间、症状、入院时NHISS评分、影像及化验结果、临床诊断、脑梗死TOAST分型、在院诊疗及神经功能恢复状况等)，结合这些资料进行统计分析发现，MALAT1在不同严重程度、脑梗死不同TOAST分型、不同疗效的脑卒中患者发病24h内血浆中的相对表达量差异均无统计学意义(p>0.05)。鉴于本发明仅为初步探索，脑卒中急性期患者组研究对象数目较少，动态追踪采血时间点较短，血浆MALAT1在同一脑卒中患者不同发病时间点的相对表达量变化及其与病情严重程度、脑梗死TOAST分型、疗效预后的真正关系尚需要进一步大样本的实验分析来验证其在脑卒中病情监测、疗效评估中的潜在价值。另一方面，如果能够对同一脑卒中急性期患者发病前后血浆中MALAT1的表达进行检测分析，将有助于更准确地阐明MALAT1在脑卒中发生发展过程中的作用。这些都是我们在以后的实验中需要解决的问题。

目前人们对于循环lncRNAs的生物学认识还不足，到底是lncRNAs表达水平的改变引起了某些疾病，还是疾病状态引起了lncRNAs表达水平的改变仍然不清楚。MALAT1在脑卒中发生发展中的作用途径、调节机制及网络通路等方面尚不清楚，仍需要人们进行深入研究。这些作用机制的阐明将有助于加深我们对脑卒中的理解和认识，为脑卒中的预防、临床诊疗及预后判断提供全新的思路。

总之，本发明证明了血浆中可稳定测得MALAT1的表达；首次发现了MALAT1在脑卒中高危人群血浆中表达降低，在脑卒中急性期患者血浆中表达增高，预示其作为脑卒中预警指标和脑卒中早期诊断标志物的潜在可能性。

附图说明

图1血浆MALAT1检测的敏感性和特异性：图中，(A,B)分别为血浆MALAT1扩增产物的熔解峰及扩增曲线；(C,D)分别为内参GAPDH扩增产物的熔解峰及扩增曲线；(E)琼脂糖凝胶电泳检验MALAT1及GAPDH的PCR产物，NC：阴性对照，S：样本；(F,G)分别为MALAT1及GAPDH扩增产物的测序结果；

图2血浆MALAT1在不同组中差异表达：图中，(A)健康对照组(HC)、脑卒中高危人群组(HR)与脑梗死组(CI)血浆MALAT1相对表达量比较；(B)健康对照组(HC)、脑卒中高危人群组(HR)与脑出血组(ICH)血浆MALAT1相对表达量比较；(C)健康对照组(HC)、脑卒中高危人群组(HR)与蛛网膜下腔出血组(SAH)血浆MALAT1相对表达量比较；

图3MALAT1在脑卒中急性期患者不同发病时间点血浆中的表达：图中，(A-C)分别为血浆MALAT1在脑梗死组(CI)、脑出血组(ICH)及蛛网膜下腔出血组(SAH)中不同发病时间点的表达情况；

图4MALAT1对脑卒中高危人群筛查及脑卒中发病早期的诊断价值：图中，(A-G)分别为血浆MALAT1在脑卒中高危人群组与健康对照组、脑梗死与健康对照组、脑出血与健康对照组、蛛网膜下腔出血与健康对照组、脑梗死与脑卒中高危人群组、脑出血与脑卒中高危人群组、蛛网膜下腔出血与脑卒中高危人群组之间所对应的ROC曲线及曲线下面积。

具体实施方式

研究对象：

(1)脑卒中急性期患者组：选取2014年10月至2015年10月发病24小时内来南华大学附属郴州医院就诊且临床诊断为脑卒中的住院患者97例，诊断标准参照《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》、《中国脑出血诊治指南2014》及《神经病学》(第7版)，包括脑梗死患者50例、脑出血患者25例及蛛网膜下腔出血患者22例；并对入选的脑卒中急性期患者进行动态追踪采血，分别于发病后24h内、2d、7d、14d(视住院时间而定)采集其外周静脉血样，其中有52例采血次数达3次及以上(脑梗死患者29例、脑出血患者13例及蛛网膜下腔出血患者10例)。同时收集其个人基本资料和临床资料(发病时间、症状、入院时按美国国立卫生研究院卒中量表(the national institutes of health stroke scale，NHISS)进行的神经功能缺损评分、影像及检验结果、临床诊断、脑梗死TOAST分型、在院诊疗及转归情况等)。

(2)脑卒中高危人群组：选取在2014年度脑卒中筛查与干预项目中被评估为脑卒中高危人群的调查对象51例(存在有高血压、糖尿病、血脂异常、肥胖、房颤、吸烟、卒中家族史、缺乏运动这8项脑卒中高危因素中的3项及以上者，同时排除既往有脑卒中病史者)，评估标准详见《卫计委脑卒中筛查与干预项目脑卒中高危人群风险评估表》(附件1)。并于早晨采集入选脑卒中高危人群的空腹外周静脉血样，同时记录其存在的脑卒中高危因素及影像检验结果。

(3)健康对照组：选取来南华大学附属郴州医院的健康体检者50例，于早晨采集其空腹外周静脉血样，并收集其各项体检结果。

所有研究对象中均排除患者或家属不同意参与或拒绝留取标本者、有动脉炎和其它血管炎者、有严重肝肾疾病和(或)肝肾功能损害者、有严重贫血、凝血功能障碍或其它严重血液系统疾病者、有严重自身免疫性疾病和(或)恶性肿瘤者、近期有手术史、妊娠史、传染性疾病以及寄生虫疾病史者。以上每组研究对象的性别、年龄相匹配。在遵循研究对象知情同意原则的前提下，共收集325例血液样本。

实验试剂与耗材

Tri

LS(美国MRC公司)

氯仿，异丙醇，无水乙醇(天津市北联精细化学品开发有限公司)

GoScript^TM Reverse Transcription System(美国Promega公司)

480SYBR Green I Master(瑞士Roche公司)

2×Es Taq MasterMix(北京康为世纪生物科技有限公司)

PCR引物(上海生工生物工程有限公司)

Base，EDTA，boric acid，琼脂糖(Sigma-Aldrich公司)

Good View^TM Nuclelc Acid Stain(上海赛百盛基因技术有限公司)

6×DNA Loading Buffer(天根生化科技(北京)有限公司)

100bp DNA Ladder(天根生化科技(北京)有限公司)

RNase-free Tip头、离心管(美国AXYGEN公司)

荧光定量PCR96孔板(瑞士Roche公司)

血浆总RNA的抽提

(1)取血浆样本(300ul/管)，加入Trizol LS 900ul，漩涡振荡10s，室温静置5min，4℃12000rpm离心10min；

(2)取上层粉红色液体(约1000ul)至1.5mlRNase-free离心管中；

(3)加0.2ml氯仿，漩涡振荡10s，室温静置5min，4℃12000rpm离心15min；

(4)取上层水相至1.5mlRNase-free离心管中；

(5)加入等体积异丙醇，混匀，4℃静置20min后，4℃12000rpm离心10min，弃上清；

(6)加入-20℃预冷的用无酶水配制的75％乙醇1ml，颠倒数次，洗涤RNA沉淀，4℃12000rpm离心5min，弃上清；

(7)重复洗涤一次，4℃12000rpm离心5min，弃上清；

(8)4℃12000rpm离心1min，用移液器缓慢吸除残余液体，注意不要吸弃RNA沉淀；

(9)将RNA沉淀于室温下干燥1min；

(10)加入10ul无酶水溶解RNA，反复吹打，得RNA提取液，至完全溶解后用分光光度计测得RNA的浓度和纯度，-80℃保存。

逆转录(Reverse Transcription，RT)反应合成cDNA

按以下步骤配制20ul RT反应体系(反应体系的配制在冰上进行)：

(1)于200ul RNase-Free离心管中加入RNA提取液和RT引物，混合后进行预变性，预变性反应体系如表1所示。

表1 预变性反应体系

将离心管置于预热的PCR仪进行预变性反应，70℃5min,反应结束立即将离心管置于冰上至少5min，小离心机离心10s，冰上保存。

(2)配制RT反应体系(如表2)，向每个反应管中加入10ul RT反应液，混合后进行RT反应合成cDNA。

表2 RT反应体系

利用PCR扩增仪进行RT反应，反应条件为：25℃5min，42℃60min，70℃15min。反应结束后，将其放在冰上待用或-20℃保存。

实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR，qPCR)检测

(1)用引物设计软件Primer 5.0设计qPCR特异性引物(见表3)，并由上海生工生物工程有限公司合成。

表3 qPCR特异性引物序列

(2)按下列组份配制qPCR反应体系(如表4)，反应液配制在冰上进行。

表4 qPCR反应体系

(3)向每个qPCR96孔板对应的孔中加入18ul反应液，再加对应的cDNA模板2ul，qPCR总反应体系为20ul。每个样本设3个复孔(所得结果取平均值用于计算)。使用专用封口膜封板，短暂离心混合。

(4)将96孔板放入

480Ⅱ实时荧光定量PCR仪中，启动qPCR程序(如表5)，系统自动记录实时荧光信号动态曲线，分析每个反应管中的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数(Ct值)，并建立PCR产物熔解曲线。

表5 qPCR反应程序

(5)记录所有样本3个复孔的Ct值，取平均值用于计算。以GAPDH作为内参，以健康对照组作为对照样本；采用2^-△△Ct法计算各样本MALAT1的相对含量：ΔCt＝Ct(MALAT1)–Ct(GAPDH)；ΔΔCt＝ΔCt样本－ΔCt对照。

琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物

(1)制备2％琼脂糖凝胶：按2％比例将琼脂糖加于1×TBE电泳缓冲液中，微波炉加热至完全熔化，冷却至60℃后加入Good View核酸染色剂，摇匀后倒入凝胶板，室温放置至胶凝固。胶凝后取出梳子，将凝胶板放进电泳槽内，加足量的1×TBE电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。

(2)电泳：将qPCR产物与DNA Loading Buffer混匀后取10ul上样于胶孔中，调整电压至100V，约半小时后电泳完成。取出凝胶置于紫外透射光下观察并拍照。

PCR产物测序

由上海生工生物工程有限公司对PCR产物进行克隆测序，得到PCR产物的碱基序列。

统计学处理

采用SPSS19.0软件进行统计学分析。分类资料组间比较采用卡方检验；运用单样本K-S检验方法对连续性变量进行正态性检验，定量资料中服从正态分布者采用均数±标准差

表示，两样本均数比较行独立样本t检验，多个样本均数比较行单因素ANOVA检验。定量资料中不满足正态分布的资料釆用中位数和四分位数间距表示，两组或多组样本间比较采用Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验，两关联样本间的比较采用Wilcoxon检验。两组变量相关性分析采用Pearson积矩相关分析或Spearman秩相关分析。采用ROC曲线分析评价MALAT1的诊断价值。本发明研究所有运用到的统计检验，均为双侧检验，当p<0.05时为差异有统计学意义。

研究对象的一般临床资料如下：

本研究共收集了97例脑卒中急性期患者(包括脑梗死患者50例、脑出血患者25例及蛛网膜下腔出血患者22例)、51例脑卒中高危人群及50例健康对照组的一般临床资料及血液样本。对研究对象的一般临床资料进行分析，各组间人员性别和年龄组成上的差异无统计学意义(p>0.05)。通过对各组研究对象的高血压、糖尿病、冠心病、高血脂的患病情况与MALAT1的相对表达水平进行分析，发现在高血压与非高血压人群、糖尿病与非糖尿病人群、冠心病与非冠心病人群、髙血脂与非高血脂人群之间MALAT1表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。表6所示为各组研究对象的一般临床资料，数据采用均数土标准差或例(％)表示。

表6 研究对象的一般临床资料

注：NHISS：美国国立卫生研究院卒中量表；mRS：改良RANKIN量表；LAA:大动脉粥样硬化性卒中；SAA：小动脉闭塞性卒中或腔隙性卒中；CE：心源性脑栓塞；SOE：其他原因所致的缺血性卒中；SUE：不明原因的缺血性卒中。

血浆MALAT1检测的敏感性和特异性

通过qRT-PCR对所有研究对象血浆中的MALAT1进行扩增，同时以GAPDH作为内参。结果显示qPCR产物的扩增曲线、熔解曲线以及熔解峰稳定。扩增曲线中可见明显的对数扩增前期、对数扩增期及平台期，说明PCR产物丰富，MALAT1及内参GAPDH的PCR引物敏感度较高(图1B,D)；qPCR产物的熔解峰均为单峰，产物单一，表明引物特异性较好(图1A,C)。琼脂糖凝胶电泳检验qPCR产物同样可见产物条带特异，无引物二聚体干扰，条带位置正确(图1E)。通过对PCR产物进行测序得到其碱基序列，与理论上MALAT1及GAPDH的扩增产物序列相同(图1F-G)。以上都说明血浆MALAT1及GAPDH得到了特异性扩增，结果可信。

血浆MALAT1在不同组中差异表达

通过qRT-PCR的检测，可以得到血浆MALAT1在脑卒中急性期患者组、脑卒中高危人群组及健康对照组样本中相对于内参GAPDH的表达水平。选取脑卒中急性期患者组发病24小时以内的血样检测结果进行统计，结果表明：血浆MALAT1在脑卒中高危人群组的相对表达量为0.92(0.97)，低于健康对照组的相对表达量1.79(7.44)，两者差异具有统计学意义(p＝0.002)。血浆MALAT1在脑梗死组、脑出血组及蛛网膜下腔出血组的相对表达量(以中位数和四分位数间距表示)分别为5.66(28.4)、6.68(40.56)、20.39(39.19)，均高于健康对照及脑卒中高危人群组的相对表达量，差异具有统计学意义(p<0.01)；但三种脑卒中亚组间的表达差异无统计学意义(p>0.05)，见图2A-C。

MALAT1在脑卒中急性期患者不同发病时间点血浆中的表达

对入选脑卒中急性期患者进行动态追踪采血，分别于发病24h内、2d、7d、14d(视住院时间而定)采集其外周静脉血样，其中有52例在3个及以上不同时间点采血(脑梗死患者29例、脑出血患者13例及蛛网膜下腔出血患者10例)。通过qRT-PCR的检测，可以得到血浆MALAT1在脑梗死组、脑出血组及蛛网膜下腔出血组不同时间点的相对表达量(以中位数和四分位数间距表示)。血浆MALAT1在脑梗死组发病24h内、2d、7d、14d、21d不同时间点的相对表达量分别为5.66(28.41)、4.78(9.62)、3.44(4.54)、7.62(31.42)、7.26(27.32)，发病24h内与发病7d时的相对表达量差异具有统计学意义(p＝0.016),见图3A；血浆MALAT1在脑出血组发病24h内、2d、7d、14d不同时间点的相对表达量分别为6.68(40.56)、5.45(19.07)、4.03(20.96)、9.25(15.87)，各时间点的表达差异无统计学意义(p>0.05)，见图3B。血浆MALAT1在蛛网膜下腔出血组发病24h内、2d、7d、14d不同时间点的相对表达量分别为20.39(39.19)、7.31(11.51)、3.63(34.44)、3.3(2.51)，各时间点的表达差异无统计学意义(p>0.05)，见图3C。

MALAT1对脑卒中高危人群筛查及脑卒中发病早期的诊断价值

ROC曲线(receiver operating characteristic curve)即受试者工作特征曲线。可以用ROC曲线下面积(area under the curve，AUC)来评价诊断的准确度，AUC值为0.7-0.9时表示诊断价值中等；AUC值大于0.9时表示诊断价值较高。运用ROC曲线分析评价血浆MALAT1在脑卒中高危人群筛查和脑卒中发病早期的诊断价值。对发病24h以内的脑卒中患者组(包括脑梗死组、脑出血组及蛛网膜下腔出血组)、脑卒中高危人群组及健康对照组之间血浆MALAT1的表达差异进行ROC曲线分析，对脑卒中高危人群筛查及脑梗死、脑出血、蛛网膜下腔出血发病早期的诊断，MALAT1均有中等水平的诊断价值，见表7、图4A-G。

表7 MALAT1在各组间的ROC曲线分析

注：HC：健康对照组；HR：脑卒中高危人群组；CI：脑梗死组；ICH：脑出血组；

SAH：蛛网膜下腔出血组。

MALAT1在不同严重程度脑卒中患者血浆中的表达

对入选的97例脑卒中急性期患者(脑梗死患者50例、脑出血患者25例及蛛网膜下腔出血患者22例)，入院时按美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)进行神经功能缺损评分并记录，评分标准见附件2。按照评分结果进行分组，NIHSSS≤7分为轻型，NIHSS>7分为重型，对轻型和重型脑卒中患者发病24小时以内血浆MALAT1的表达水平进行比较，差异均无统计学意义(p>0.05)，见表8。

表8 MALAT1在不同严重程度脑卒中患者血浆中的表达

注：表中数据以中位数(四分位数间距)表示。

MALAT1在不同TOAST分型脑梗死急性期患者血浆中的表达

类肝素药物治疗急性缺血性脑卒中试验(TOAST)分型标准是目前被广泛应用于临床的缺血性脑卒中的病因学分类标准。按照TOAST分型可以将脑梗死分为五种亚型：(1)大动脉粥样硬化型卒中(large-artery atherosclerosis，LAA)；(2)心源性脑栓塞(cardiogenic embolism，CE)；(3)小动脉闭塞性卒中或腔隙性卒中(small-arteryocclusion，SAA)；(4)其他原因所致的缺血性卒中(stroke of other determinedetiology，SOE)；(5)不明原因的缺血性卒中(stroke of undetermined etiology，SUE)。对入选的50例脑梗死急性期患者进行TOAST分型，可以分为LAA型38例、SAA型6例、CE型6例。对不同TOAST分型脑梗死患者发病24小时以内血浆MALAT1的表达水平进行两两比较，差异均无统计学意义(p>0.05)，见表9。

表9 MALAT1在不同TOAST分型脑梗死急性期患者血浆中的表达

注：表中数据以中位数(四分位数间距)表示。

MALAT1在不同疗效脑卒中患者血浆中的表达

改良Rankin量表(modified Rankin Scales,mRS)可以用来衡量脑卒中后患者的神经功能恢复状况，作为功能残疾水平的疗效判定指标，具体评分标准见附件3。对入选脑卒中患者卒中后半年进行电话随访，通过mRS评分评估其疗效。依据mRS评分≤2作为划分卒中患者是否残疾的分界值，将mRS评分≤2的脑卒中患者视为预后良好，mRS评分＞2者视为预后不佳。对不同疗效的脑卒中患者发病24小时以内血浆MALAT1的表达水平进行比较，差异均无统计学意义(p>0.05)，见表10。

表10 MALAT1在不同疗效脑卒中患者血浆中的表达

注：表中数据以中位数(四分位数间距)表示。

Claims (2)

1.一种检测标志物的试剂在制备脑卒中高危人群筛查试剂中的应用，其特征在于，所述标志物为MALAT1，所述MALAT1序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种检测标志物的试剂在制备脑卒中高危人群筛查芯片、制剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述标志物为MALAT1，所述MALAT1序列如SEQ ID NO.1所示。

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