CN106831714A

CN106831714A - 一种四氢异喹啉化合物及其制备方法和用途

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Publication number: CN106831714A
Application number: CN201710058133.8A
Authority: CN
Inventors: 桑志培; 王柯人; 柳文敏; 潘万里; 马勤阁; 孙丽红
Original assignee: Nanyang Normal University
Current assignee: Nanyang Normal University
Priority date: 2017-01-23
Filing date: 2017-01-23
Publication date: 2017-06-13
Anticipated expiration: 2037-01-23
Also published as: CN106831714B

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种3,4‑二氢‑2(1H)‑喹啉酮‑7‑O‑烷基‑1,2,3,4‑四氢异喹啉化合物及其制备方法和用途。所述化合物化学结构通式如Ⅰ所示。本发明化合物对丁酰胆碱酯酶、乙酰胆碱酯酶、MAO‑A和MAO‑B均具有抑制作用，且对丁酰胆碱酯酶抑制具有选择性，为多靶点抑制剂，进一步在体内实验中展现出较好的治疗阿尔茨海默病的作用，且毒性低，具备很好的临床应用前景。

Description

一种四氢异喹啉化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物及其制备方法和用途。

背景技术

阿尔茨海默氏症(Alzheimer’s disease，AD，老年痴呆症)是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，随着全球人口的急速老龄化，老年人群的健康问题已经成为当前迫切需要解决的社会重大问题。阿尔茨海默症(Alzheimer’sdisease，AD)是老年人中发病率和致死率最高的疾病之一。阿尔茨海默症国际协会(Alzheimer’s disease International,ADI)发布的《2015全球阿尔茨海默症报告》指出，2015年全球已有超过4600万人患上痴呆症，据预测，到2050年，全球将有1.315亿人口受到痴呆的困扰，其中中国痴呆症患者的发病率已达到6.61％。随着人均生存年龄的延长，本病已发展为社会和医疗保健系统的主要负担，并且为社会、患者及家属带来了沉重的精神和经济压力。目前已批准用于治疗轻/中度AD的药物有乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂，以及用于重度AD治疗的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂，但临床使用表明，这些药物可通过提高患者体内乙酰胆碱水平或者抑制兴奋性氨基酸的兴奋毒性来缓解AD症状，但不能有效阻止或逆转病程，而且还会引起幻觉、意识混沌、头晕、头痛、恶心、肝脏毒性、食欲不振以及大便频繁等严重毒副作用，因而长期疗效不甚理想。因此，临床上迫切需要研发具有新型作用机制的AD治疗药物。

AD属多种因素引起的疾病，发病机理复杂，至今还未完全阐明其发病机制，但研究表明，患者脑内乙酰胆碱水平的下降，β-淀粉样蛋白的过度生成与沉积、tau-蛋白过度磷酸化导致的神经纤维缠结、氧化应激产生大量的活性氧(ROS)和自由基以及神经验证反应等多种因素在AD的发病过程中扮演重要角色。针对上述发病因素，研究人员采用传统“一药一靶”药物设计策略，发现了大量对某一靶点具有高活性和高选择性的药物。如：胆碱酯酶抑制剂和N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂等，但这些药物存在作用靶点单一。临床使用毒副作用较多，对AD患者的长期疗效欠佳等问题。

近年来，随着对AD致病机理的不断阐明，发现AD的发生和发展具有多机制、多因素作用的特点，不同机制之间又相互关联相互影响，构成了AD发生和发展过程中复杂的网络调控系统。基于上述结果，研究人员提出了“多靶点导向药物”(Multitarget-directedLigands，MTDLs)策略来研发抗神经退行性疾病药物。所谓“多靶点导向药物”是指单一化学实体同时作用于疾病网络中的多个靶点，对各靶点的作用可产生协同效应，使总效应大于各单效应之和，此类药也称为“Multifunctional”或“Multipotential”药物。多靶点药物与多药联合应用以及复方药物的主要区别在于：可减少服药量，提高治疗效果、避免药物之间的相互作用及由此带来的副作用，均一的药代动力学特性，便于使用等。因此，研发具有新型化学结构、新型作用机制，且具有多靶点作用、低毒副作用的抗阿尔茨海默病药物不仅符合社会老龄化进程的迫切需求，而且具有良好的市场前景。到目前为止，多靶点抑制剂吸引了更多科研工作者的关注。尽管多靶点的优势是清晰的，但多个靶点功能如何在同一个分子中组合，及如何选择最合适治疗靶点仍然是一个关键点。

最近研究表明，随着AD的进程的发展，乙酰胆碱酯酶(AChE)水平逐渐减低，而丁酰胆碱酯酶(BuChE)活性增加到了正常值的165％。在AD的中重度阶段，BuChE取代AChE来水解乙酰胆碱(ACh)，BuChE的抑制可能在AD治疗中是更有效的。另外，AD患者通常呈现抑郁症状，该症状被认为是AD发展的一个重要因素。研究表明，选择性单胺氧化酶A(MAO-A)抑制剂对抗抑郁是有效的，然而选择性单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂能够治疗帕金森病。MAO-B水平的增加是由于AD患者脑内星形胶质细胞增加引起的。因此，对于AD治疗，MOA-A和MAO-B双抑制作用比单独的MAO-B抑制更有价值。综上所述，发现具有抑制丁酰胆碱酯酶、MAO-A和MAO-B的多靶点抑制剂可能为AD，尤其是中重度AD带来曙光。

中国专利CN104151242B公开了一个二氢异喹啉类化合物及其治疗情绪相关的精神类疾病，尤其是抑郁症的用途。本发明的二氢异喹啉类化合物在体外实验中对皮质酮诱导损伤的PC12细胞具有较好的保护活性，暗示该化合物具有保护神经细胞的功能，进一步实验证明该化合物可以有效上调神经细胞胞内BNDF的水平，同时可以有效的增强神经细胞的抗氧化能力，并促进其生长，该药物对神经细胞的这种修复和保护作用使其具有治疗精神类疾病的潜力，优选于治疗情感及认知障碍的精神类疾病，如抑郁症、老年痴呆症、焦虑症、强迫症、精神分裂症等，最优于抑郁症的治疗。在体内实验中，包括强迫游泳和旷场实验中，该化合物均表现出较明显的改善实验动物抑郁状态的作用。中国专利申请CN1566099A涉及各类取代异哇琳-1，3，4-三酮化合物、合成方法及其作为治疗各种神经退行性疾病，特别是老年痴呆症、中风、缺血性脑损伤药物的用途，该化合物的结构式如下：其中R₁为H，C₁-C₁₂的烷基、取代烷基、C₃-C₆的环烷基、取代环烷基、芳基；由C₁-C₁₂的烷基取代芳基；R₂为H、C₁-C₄烷基、取代C₁-C₄烷基；芳基、取代芳基；X为H、CH₂、NH、O、S；Y为CH、N。中国专利申请101553229A公开了7-羟基-6-甲氧基-1,2,3,4-四氢异哇琳衍生物及其合成方法。所述化合物显著抑制激活的小胶质细胞内一氧化氮(NO)和过氧化物的生成，并且抑制TNF-α、IL-1β诱导性NO合成酶和环氧合酶-2基因的表达。这些衍生物还防止NF-kB转移到细胞核，减少活性氧(ROS)抑制GTP环化水解酶I基因的表达和四氢生物蝶吟(Bha)的过量生成，以及保护多巴胺能神经元免受激活的小胶质细胞引起的伤害。但是，上述专利主要针对氧化应激引起的神经细胞损伤来进行研究，氧化应激是AD发展过程中的一个中间环节，可能有过度金属离子紊乱或β-淀粉样蛋白沉积等因素引起，而研究表明AD患者脑内乙酰胆碱水平的缺失才是AD患者记忆力减退的主要原因，水解乙酰胆碱的酶主要包括乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶，随着AD的进程的发展，乙酰胆碱酯酶(AChE)水平逐渐减低，而丁酰胆碱酯酶(BuChE)活性增加到了正常值的165％，而上述专利对胆碱酯酶没有抑制活性。

发明内容

为克服上述缺陷，本发明的目的在于提供一种3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物及其制备方法和用途。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物，其化学结构通式如Ⅰ所示：

其中n＝3-6。

一种上述3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物在药学上可接受的盐，所述药学上可接受的盐为上述3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、C_1-6脂肪羧酸、草酸、苯甲酸、水杨酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、C_1-6烷基磺酸、樟脑磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸反应得到的盐。

一种上述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的制备方法，包括以下步骤：

以3,4-二氢-羟基-2(1H)-喹啉酮和二溴化物为起始原料，在第一溶剂和碱性条件下第一步反应，得相应的中间体溴化物，中间体溴化物在第二溶剂和碱性条件下与仲胺1,2,3,4-四氢异喹啉第二步反应得目标化合物。

其化学反应通式为：

其中：n＝3-6。

优选地，所述第一溶剂或者第二溶剂为乙腈、甲苯或者DMF。

优选地，所述第一步反应温度为60-80℃，时间为6-8h。

优选地，所述第二步反应温度为50-100℃，时间为6-10h。

一种上述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物在制备阿尔茨海默病药物中的用途，所述化合物是选择性丁酰胆碱酯酶抑制剂，且对MAO-A和MAO-B均具有抑制作用。

一种药物组合物，所述药物组合物由上述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体制备而成。

优选地，所述的载体为液体填充剂、固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或者包囊物质。

优选地，所述3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的重量百分含量为5％-99.5％。

本发明的积极有益效果：

1.本发明3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物对丁酰胆碱酯酶的抑制活性IC₅₀为0.9～5.5μM，阳性对照多奈哌齐4.76±0.02μM，对丁酰胆碱酯酶具有显著抑制活性；并且3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物对丁酰胆碱酯酶的抑制活性显著高于对乙酰胆碱酯酶的抑制活性，说明本发明所公开的化合物对丁酰胆碱酯酶具有选择性抑制作用。

2.本发明3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物对MAO-A和MAO-B的抑制活性IC₅₀分别为3.4～8.6μM和4.4～18.8μM，阳性对照异丙烟肼为3.18±0.03μM(MAO-A)，雷沙吉兰为2.13±0.01μM(MAO-A)，异丙烟肼为1.78±0.01μM(MAO-B)，雷沙吉兰为0.086±0.003μM(MAO-B)，对MAO-A和MAO-B均具有显著抑制活性。

3.本发明3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物对乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶、MAO-A和MAO-B均具有抑制作用，为多靶点抑制剂，进一步体内实验中展现出对治疗AD具有积极的效果，且毒性低，而且结构简单，成本低廉，具有良好的临床应用前景。

附图说明

图1为本发明3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物对东莨菪碱所致小鼠记忆获得障碍的实验结果图。

具体实施方式

下面结合一些具体实施方式，对本发明进一步说明。

实施例1

其中n＝3。

上述3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的制备方法包括以下步骤：

将3,4-二氢-7羟基-2(1H)-喹啉酮1(1mmol)、K₂CO₃(1.2mmol)和无水乙腈加入反应瓶中，搅拌均匀后加入二溴化物2(2.2mmol)，加毕，65℃搅拌6h，TLC监测；反应结束后，减压蒸除溶剂，残余物中加入水(40mL)，用二氯甲烷(40mL×2)萃取，有机层合并后用饱和氯化钠水溶液(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，残余物以硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/丙酮＝50/1v/v)，得中间体溴化物3；将中间体溴化物3(1mmol)、仲胺1,2,3,4-四氢异喹啉(1.2mmol)和乙腈(10mL)加入反应瓶中，在碳酸钾(1.2mmol)条件下，升温至65℃反应，TLC监测反应，反应8h，反应结束后，减压蒸干溶剂，经常规处理后，所得粗品经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/丙酮＝50/1v/v)，得相应的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)，其化学结构均经¹H NMR、¹³C NMR和ESI-MS确证。

本发明实施例2-4的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物制备方法参见实施例1，结果见表1。

本发明3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)与酸合成药学上可接受的盐的方法：在反应瓶中加入按照上述实施例1-4所得的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)2.5mmol和丙酮50mL，搅拌均匀后加入10.0mmol相应的酸，升温回流搅拌反应30分钟，反应结束后冷却至室温，减压蒸除溶剂，残余物用丙酮重结晶，过滤析出的固体，即得3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)的盐。

表1本发明实施例1-4的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的性能参数

实施例	化合物编号	n
			1	I-1	3
2	I-2	4
			3	I-3	5
4	I-4	6

目标化合物I-1的制备：7-(3-(3，4-Dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)propoxy)-3，4-dihydroquinolin-2(1H)-one(I-2).Colorless oil,67.6％yield.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.40(s,1H),7.12-6.98(m,5H),6.52(dd,J₁＝6.0Hz,J₂＝2.4Hz,1H),6.41(d,J＝2.0Hz,1H),4.00(t,J＝6.0Hz,2H),3.65(s,2H),2.90(t,J＝5.6Hz,2H),2.85(t,J＝8.0Hz,2H),2.75(t,J＝5.6Hz,2H),2.68(t,J＝7.2Hz,2H),2.59(t,J＝7.6Hz,2H),2.08-2.02(m,2H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)172.53,158.69,138.35,134.74,134.32,128.69,128.53,126.61,126.18,125.66,115.69,108.80,102.43,66.43,56.20,54.93,51.03,31.10,29.11,27.06,24.58.MS(ESI)m/z:337.2[M+H]⁺。

目标化合物I-2的制备：7-(4-(3,4-Dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)butoxy)-3，4-dihydroquinolin-2(1H)-one(I-3).Light yellow oil,73.5％yield.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.52(s,1H),7.15-7.10(m,3H),7.06-7.03(m,2H),6.54(dd,J₁＝6.4Hz,J₂＝2.0Hz,1H),6.38(d,J＝2.0Hz,1H),3.99(t,J＝6.0Hz,2H),3.67(s,2H),2.95-2.88(m,4H),2.77(t,J＝6.0Hz,2H),2.63(t,J＝7.6Hz,2H),2.60(t,J＝6.0Hz,2H),1.90-1.76(m,4H).¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)171.97,158.70,138.18,134.75,134.31,128.66,128.62,126.60,126.14,125.61,115.68,108.78,102.26,67.94,57.93,56.14,50.92,31.11,29.07,27.24,24.59,23.68.MS(ESI)m/z:351.2[M+H]⁺。

目标化合物I-3的制备：7-((5-(3,4-Dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)pentyl)oxy)-3,4-dihydroquinolin-2(1H)-one(I-4).Light yellow oil,78.6％yield.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.34(s,1H)，7.33(d,J＝8.4Hz,4H),7.28-7.24(m,1H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),6.52(dd,J₁＝5.6Hz,J₂＝2.4Hz,1H),6.34(d,J＝2.4Hz,1H),3.93(t,J＝6.4Hz,2H),3.53(s,2H),2.91(t,J＝8.0Hz,2H),2.63(t,J＝8.0Hz,2H),2.54-2.42(m,8H),2.38(t,J＝8.0Hz,2H),1.83-1.75(m,2H),1.61-1.54(m,2H),1.51-1.43(m,2H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)172.17,158.74,138.23,134.77,134.31,128.65,128.57,126.60,126.11,125.59,115.62,108.76,102.30,68.02,58.29,56.18,51.00,31.10,29.18,29.04,26.91,24.58,24.08.MS(ESI)m/z:365.2[M+H]⁺。

目标化合物I-4的制备：7-((6-(3，4-Dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)hexyl)oxy)-3，4-dihydroquinolin-2(1H)-one(I-5).Light yellow oil,76.1％yield.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.96(s,1H),7.12-7.08(m,3H),7.03-7.01(m,2H),6.51(dd,J₁＝6.4Hz,J₂＝2.0Hz,1H),6.38(d,J＝2.0Hz,1H),3.92(t,J＝6.4Hz,2H),3.64(s,2H),2.92-2.86(m,4H),2.74(t,J＝2.0Hz,2H),2.61(t,J＝8.0Hz,2H),2.52(t,J＝8.0Hz,2H),1.81-1.74(m,2H),1.68-1.60(m,2H),1.54-1.46(m,2H),1.45-1.38(m,2H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)172.16,158.77,138.22,134.74,134.31,128.65,128.57,126.61,126.12,125.60,115.61,108.76,102.29,68.09,58.36,56.17,50.98,31.11,29.20,29.01,27.34,27.09,26.03,24.59.MS(ESI)m/z:379.2[M+H]⁺。

生物活性试验

1.3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物对乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶抑制活性

向96孔板中依次加入1.0mmol/L碘化硫代乙酰胆碱或硫代丁酰胆碱(均购自Sigma公司)30μL，pH＝8.0的PBS缓冲液40μL，待测化合物溶液20μL(DMSO含量小于1％)和10μL电鳗乙酰胆碱酯酶(EeAChE)或丁酰胆碱酯酶(equine serum BuChE，eqBuChE)(0.045U，均购自Sigma公司)，加毕混匀后，37℃孵育15min，向各孔中加入质量分数为0.2％的5,5'-二硫代-双(2-硝基)苯甲酸(DTNB，购自Sigma公司)溶液30μL显色，用酶标仪测定405nm处各孔的光密度(OD值)，与不加待测样品的空白孔比较，计算化合物对酶的抑制率[酶抑制率＝(1－样品组OD值/空白组OD值)×100％]；选择化合物的五至六个浓度，测定其酶抑制率，并以该化合物摩尔浓度的负对数与酶的抑制率线性回归，求得50％抑制率时的摩尔浓度即为该化合物的IC₅₀，以多奈哌齐作为阳性对照，结果见表2。

测定结果表明，本发明实施例中所公开的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)对丁酰胆碱酯酶均具有显著抑制活性，其IC₅₀为0.9～5.5μM，并且3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)对丁酰胆碱酯酶的抑制活性显著高于对乙酰胆碱酯酶的抑制活性，说明本发明所公开的化合物对丁酰胆碱酯酶具有选择性抑制作用。

2.3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)的单胺氧化酶活性测试

实验原理及前期准备：以犬尿胺(Kynuramine)为单胺氧化酶(MAO)的底物，在MAO的作用下可以生成在碱性条件下产生荧光的4-羟基喹啉，通过检测荧光值来考察单胺氧化酶的抑制活性。用100mM的pH 7.4磷酸钾缓冲液(含20.2mM的KCl)将重组人MAO-A和MAO-B(购自Sigma-Aldrich Co.)均配成12.5μg/mL样品液。2.5mM化合物DMSO储备液也用相同磷酸钾缓冲液稀释至100μM。犬尿胺分别用磷酸钾缓冲液配成225μM(MAO-A)和150μM(MAO-B)溶液。

实验方法：(1)化合物对MAO-A抑制活性测试：取225μM犬尿胺溶液100μL，加入不同浓度(0-500μM)的待测化合物溶液100μL，12.5μg/mL的MAO-A溶液300μL，使反应体系总体积为500μL(犬尿胺、待测化合物和MAO-A的最终浓度分别为45μM、0-100μM和7.5μg/mL，含4％的DMSO)，混匀，37℃孵育20min。加入2mol/L的NaOH溶液400μL和水1000μL终止反应，16000g离心10min，取上清液，在激发波长310nm，发射波长400nm处测定荧光强度；通过GraphPadPrism以犬尿胺被氧化的初速度对抑制剂浓度的对数作图，绘制剂量相关的S曲线，计算出化合物抑制单胺氧化酶的IC₅₀。绘制S曲线至少选择三个不同数量级的六个抑制剂浓度，每组实验独立重复三次，以异丙烟肼和雷沙吉兰作为阳性对照，结果见表2。

(2)化合物对MAO-B抑制活性测试：方法同MAO-A，但加入犬尿胺的浓度为150μM，步骤和操作过程不变，结果见表2。

测定结果表明，本发明实施例中所公开的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)对MAO-A和MAO-B均具有显著抑制活性，其IC₅₀分别为3.4～8.6μM和4.4～18.8μM。

表2本发明四氢异喹啉化合物的生物活性测试结果

3.化合物(I)的急性毒性试验

试验材料：实验动物为SPF级昆明种小鼠，由四川省中医药科学院提供，

生产合格证号SCXK(川)2008-19。动物饲养于四川省中医药科学院药理毒理研究所SPF屏障系统中。室内温度20～22℃，相对湿度40％-70％左右，照明12小时明亮，12小时黑暗，自由饮水。全营养颗粒饲料由四川省中医药科学院实验动物中心提供。

实验方法：动物随机分组：取SPF级18～22g的小鼠40只，雌雄各半，适应性喂养两天后，按体重随机分为4组。禁食不禁水15h后，分别灌胃化合物(I)1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg、100mg/kg四个剂量组，取给药体积为0.4mL/10g，各组给药一次，连续14天观察并记录各动物的死亡情况，采用Bliss统计软件进行分析。发现各组小鼠未出现毛竖起、行动迟缓、闭眼和呼吸加速以及死亡现象。

测定结果表明：SPF级昆明种小鼠经3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物(I)处理后，未出现急毒和死亡率，也未出现毛竖起、行动迟缓、闭眼和呼吸加速等现象，表明了化合物是无毒的，且最大耐受量为1000mg/kg。

4.动物实验(跳台被动回避实验)

试剂与仪器：多奈哌齐购自Eisai China Inc.；东莨菪碱购自J&K Scientific；18-22g的昆明鼠购自四川中医药科学院实验动物中心(合格证号：SCXK-Sichuan2008-19)；动物饲养于四川省中医药科学院药理毒理研究所SPF屏障系统中。饲养环境12h光照/12h黑暗交替，环境温度控制于20-22℃，湿度控制于50-60％。全营养颗粒饲料由四川省中医药科学院实验动物中心提供。小鼠跳台仪(型号ZXC-5Q)由山东省医学科学院设备维修供应站生产。

实验方法：60只小鼠，18～22g，雌雄各半，按体重随机分为6个组，即空白对照组、模型对照组、多奈哌齐组(5mg·kg^-1)、实施例4化合物(I)高剂量组(10mg·kg^-1)、实施例4化合物(I)中剂量组(5mg·kg^-1)、实施例4化合物(I)低剂量组(2.5mg·kg^-1)。每组小鼠按给药剂量分上下午给药，连续给药3次，末次给药后50min进行造模，除空白对照组以外其他各组腹腔注射东莨菪碱3mg·kg^-1，连续给药24天。造模后20min进行跳台法训练，将动物放入反应箱内适应3min，然后立即通以36V交流电，训练5min，并记录每次小鼠受到电击的次数(错误次数)，并由此作为学习成绩。24h后进行测试，每只小鼠测定5min，记录受到电击的动物数及第一次跳下平台的潜伏期以及5min内的错误次数，结果进行统计学分析，所有数据均用均值±标准误差(Stand error，S.E.)表示。采用SPSS11.5软件分析，方差齐的选择单因素方差分析(One-wayANOVA)。计量资料比较采用单因素方差分析，各组均数的比较采用t检验。代表性化合物I-4的结果见图1。

实验结果表明：本发明3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物均对东莨菪碱所致小鼠记忆再现功能障碍均具有明显改善作用。

Claims

1.一种3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物，其化学结构通式如Ⅰ所示：

其中n＝3-6。

2.一种权利要求1所述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物在药学上可接受的盐，其特征在于，所述药学上可接受的盐为权利要求1所述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、C_1-6脂肪羧酸、草酸、苯甲酸、水杨酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、C_1-6烷基磺酸、樟脑磺酸、苯磺酸或对甲苯磺酸反应得到的盐。

3.一种权利要求1所述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的制备方法，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的制备方法，其特征在于，所述第一溶剂或者第二溶剂为乙腈、甲苯或者DMF。

5.根据权利要求3所述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的制备方法，其特征在于，所述第一步反应温度为60-80℃，时间为6-8h。

6.根据权利要求3所述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的制备方法，其特征在于，所述第二步反应温度为50-100℃，时间为6-10h。

7.一种权利要求1所述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物在制备阿尔茨海默病药物中的用途，其特征在于，所述化合物是选择性丁酰胆碱酯酶抑制剂，且对MAO-A和MAO-B均具有抑制作用。

8.一种药物组合物，所述药物组合物由权利要求1所述的3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体制备而成。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述的载体为液体填充剂、固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或者包囊物质。

10.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述3,4-二氢-2(1H)-喹啉酮-7-O-烷基-1,2,3,4-四氢异喹啉化合物的重量百分含量为5％-99.5％。