CN106822999B - 一种乳房修补片及其制备和应用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种乳房修补片及其制备和应用方法，其特征在于：该乳房修补片包括凹凸纹路固定层和多孔层的可降解吸收的双层结构，且该双层结构均为采用动物的小肠粘膜下层组织材料为原料、经过去除免疫原性、保留完整的细胞外基质成分的材料制成。具有全新的、可诱导患者自身细胞长入，为细胞重建受损组织提供模板，修复为血管化、功能化的组织或器官，并且免疫原去除基质会逐步降解，与重建组织再生过程基本同步，最终免疫原去除基质补片完全被宿主组织代替的优点。

Description

一种乳房修补片及其制备和应用方法
技术领域
本发明涉及医用生物材料领域，具体涉及一种用于乳房缺失再造、乳房畸形矫正等病症和隆乳术的乳房修补片及其制备和应用方法。
背景技术
随着社会不断进步，女性追求美改善自身形象而进行乳房整形的手术越来越多，而隆胸手术、整形手术都会造成乳房损伤，涉及乳房修复与重建。乳房缺失及乳房畸形严重都可实施乳房再造术来重新塑造乳房，改善胸部外形。乳房切除术(切除乳腺)后，由于大量肌肉的缺失，自体皮肤无法达到有效的支持植入物的效果，植入物会发生下垂甚至露出等并发症。
隆乳术是美容外科的常见手术，常规的隆乳方法都是将乳房假体置于胸大肌后间隙，缝合胸大肌。患者的乳房都是处于高张力状态下缝合的胸大肌后，手术后患者感觉胸部有压迫感，乳房比较固定，纤维包膜挛缩的发生率较高(5％～8％)，近几年来，由于组织工程学的研究和发展，免疫原去除真皮基质医用材料的研究与应用得以广泛开展，又因其抗拉伸力强，柔软及对人体组织有较好的相容性。
目前已有多项临床试验将免疫原去除基质补片应用于Revisionary AestheticBreast Surgery(包膜挛缩，假体移位，多种原因造成的乳房下垂，乳房双侧不对称，乳房固定术)中，以起到支持假体及乳房下垂，延伸胸大肌，平缓乳房不规则凹陷等作用，并可以同时减少包膜挛缩发生率，增强整形效果的作用。该使用方法已十分普遍，多篇综述性文献报道。目前美国乳房再造的手术约有50％会应用免疫原去除基质产品。
乳房重建过程中，填充乳房假体后，常导致假体移位、脱落、形成包囊挛缩等并发症。为克服此问题，目前临床上采用自体筋膜瓣或肌肉瓣进行加强，再植入乳房假体。国外也已有成熟免疫原去除真皮基质材料产品Alloderm乳房整形手术中。国内广泛的材料为同种异体免疫原去除基质，但异种免疫原去除基质材料和合成材料也在逐步发展。异种免疫原去除基质材料主要有胎牛皮、猪皮、牛心包膜、猪腹膜等原料，合成材料目前有蚕丝补片、钛涂层聚丙烯补片等。
异体免疫原去除基质生物相容性好，能促进受损软组织修复，但是真皮基质、心包基质中含弹性蛋白比较高，无法完全降解，并在体内收缩变形导致手术失败。有研究发现小肠的黏膜下层组织(SIS)弹性蛋白含量少，在体内不易变形，相对于真皮基质免疫原去除材料更适用于乳房重建。发明专利(CN103272278A)曾公开了一种以动物源性免疫原去除小肠黏膜下层组织制备植入性医用生物材料的方法，介绍了通过动物组织材料的前置处理分离、初洗、病毒灭活、免疫原去除、氯化钠处理、成型、包装灭菌获得具有不同的尺寸、厚度和力学强度的医用产品。免疫原去除基质作为组织和器官移植的天然生物医用材料，植入体内后可诱导患者自身细胞长入，为细胞重建受损组织提供模板，修复为血管化、功能化的组织或器官，并且免疫原去除基质会逐步降解，与重建组织再生过程基本同步，最终免疫原去除基质补片完全被宿主组织代替。但是应用于乳房重建的免疫原去除小肠粘膜下层基质材料报道较少。
发明内容
本发明针对现有技术的上述不足，提供一种全新的、可诱导患者自身细胞长入，为细胞重建受损组织提供模板，修复为血管化、功能化的组织或器官，并且免疫原去除基质会逐步降解，与重建组织再生过程基本同步，最终免疫原去除基质补片完全被宿主组织代替的乳房修补片。
为了解决上述技术问题，本发明提供采用的技术方案为：一种乳房修补片，其特征在于：该乳房修补片包括凹凸纹路固定层和多孔层的可降解吸收的双层结构(或可以描述为：该乳房修补片包括可降解吸收的凹凸纹路固定层和多孔层的双层结构)，且该双层结构均为采用动物的小肠粘膜下层组织材料为原料、经过去除免疫原性、保留完整的细胞外基质成分的材料。
本发明所述的动物为哺乳动物，优选猪或牛。
本发明所述去除免疫原性是指细胞残留量小于10个，DNA残留量小于10ng/mg，半乳糖苷酶(α-Gal)清除率为99％以上。
本发明所述保留完整的细胞外基质成分材料是指保留包含胶原蛋白、多糖物质、活性因子及生长因子成分。
本发明所述胶原蛋白为I型胶原蛋白及III型、IV型和VI型胶原蛋白的组合物。
本发明所述多糖物质为包含硫酸软骨素和透明质酸的组合物。
本发明所述活性因子包含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、整合素及其配体的组合。
本发明所述生长因子成分为碱性生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)。
本发明保留胶原蛋白、多糖物质、活性因子及生长因子的成分，上述这些物质可以构成人体组织恢复时细胞生长的支架。
本发明所述乳房修补片为微观多孔结构，整个修补片的孔隙率在60％以上，凹凸纹路固定层和多孔层都是补片的组成部分，也都具有上述孔隙。
本发明所述乳房修补片在体内降解(降解吸收)时间为1-3个月内。
本发明所述乳房修补片拉伸断裂强度大于50N/cm，缝合保持力大于10N。
本发明还提供一种乳房修补片的制备方法，其特征在于：包括：组织前置处理、病毒灭活、免疫原去除、干燥、冷冻干燥、成型。
具体的，本发明上述乳房修补片的制备方法，所述步骤包括：(1)组织前置处理：取小肠粘膜下层组织材料(SIS)，清洗并将水滤干；(2)病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡小肠粘膜下层组织材料；完成后在超声波清洗机中清洗；(3)免疫原去除：采用含有胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，使用包含至少两个频率的超声进行超声振荡处理；完成后在超声波清洗机中处理，得到免疫原去除后的小肠粘膜下层基质材料；(4)干燥：将步骤(3)的免疫原去除的小肠粘膜下层基质材料固定于带有凹凸纹路的模具上，并将模具和小肠粘膜下层基质材料在热循环烘箱中进行干燥；(5)冷冻干燥：将步骤(3)的免疫原去除的小肠粘膜下层基质材料平铺于真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥；(6)成型：将步骤(4)所得的干燥小肠粘膜下层基质材料与步骤(5)所得冻干的小肠粘膜下层基质材料采用胶原蛋白胶粘接成型。
本发明步骤(2)的过氧乙酸-乙醇溶液，其中过氧乙酸的体积百分比浓度为0.1％-5％、乙醇的体积百分比浓度为5％-40％，过氧乙酸-乙醇溶液与小肠粘膜下层组织材料的体积比为(3-20)︰1，灭活时间2-4小时，灭活的温度范围为10-40℃。步骤(2)的清洗过程包括：采用pH6-8中的PBS溶液超声处理，溶液与小肠粘膜下层组织材料体积比为20：1至40：1之间，每次10-30分钟；清洗2-4次，检测pH为6-8之间；采用降温的注射用水清洗，溶液与小肠粘膜下层组织材料比例为20：1至40：1之间，检测电导率为10μS/cm以下终止。清洗过程可在超声波清洗机中进行；频率优选40kHz，功率优选3000W以上。
本发明步骤(3)中的免疫源去除液为含有胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液；所述免疫源去除液中胰蛋白酶质量百分比浓度为0.01-0.2％，EDTA的浓度为0.1-1mmol/L；进一步包括：免疫源去除液中胰蛋白酶的质量百分比浓度为0.02-0.05％，EDTA的浓度为0.4-0.8mmol/L，免疫源去除液pH值为7.0-8.0，优选为7.2-7.5；所述免疫源去除液与小肠粘膜下层组织材料体积比为(20-40)︰1；超声振荡处理，超声至少包括两个频率，其中低频率范围为15-30KHz，高频范围为60-90KHz，其中低频处理5-30min，高频处理5-30min，温度范围为20-35℃。步骤(3)的清洗过程包括：采用pH6-8中的PBS溶液超声处理，溶液与小肠粘膜下层组织材料体积比为20：1至40：1之间，每次10-30分钟；清洗2-4次，检测pH为6-8之间；采用降温的注射用水清洗，注射用水与小肠粘膜下层组织材料比例为20：1至40：1之间，检测清洗前后注射用水电导率差为1μS/cm以下终止。清洗过程可在超声波清洗机中进行；频率优选40kHz，功率优选3000W以上。
本发明步骤(4)所述干燥步骤为将由步骤(3)得到的基质材料置于干燥装置中，干燥温度25-40℃、时间为8-16小时，通过模具成型在固定层上形成凹凸纹路制备出凹凸纹路固定层。由步骤(3)得到的基质材料含有水分，为柔性的，可以贴合在具有凹凸纹路的模具上，经干燥形成相应的纹路。
本发明步骤(5)所述的冷冻干燥步骤为将由步骤(3)得到的基质材料通过冷冻干燥，预冻至-45℃，保温1-2小时，然后调节温度至-15℃，保温5-7小时，再调节温度至0℃，保温2小时，最后调节温度至25℃，保温4小时，制备多孔层。
本发明步骤(6)所述成型步骤为将凹凸纹路固定层与多孔层粘连为一个组合物。
本发明上述的制备步骤还包括成型之后的打孔包装步骤和灭菌解析步骤。
本发明进一步提供上述乳房修补片的应用，具体为：所述一种乳房修补片凹凸纹路固定层有利于修补片固定于受损组织或假体，多孔层有利于引导受损胸大肌、筋膜组织修复。
本发明上述的一种乳房修补片的应用，可用于但不限于乳房切除手术、外伤、萎缩导致的乳房缺失，乳房正畸，乳房整形，乳房假体隔离，丰胸。
本发明中注射用水的使用标准依照国家药典中规定。
与现有技术相比，本发明具有以下显著优点和有益效果：
(1)采用胰蛋白酶和EDTA，使细胞与细胞外基质之间的连接被破坏；采用低频超声对细胞进行破碎，同时使用高频超声作用于破碎的细胞及细胞外基质，进一步使细胞脱离细胞外基质，达到脱细胞目的。采用上述方式，对整个细胞脱离基质过程中的各个步骤进行强化，使细胞被从基质上完全脱离，到达最佳的免疫原去除效果。通过上述脱细胞方法制备的生物组织基质材料为多孔结构，该多孔结构能作为提供细胞生长的支架。
(2)成型工艺技术：模具法真空干燥，将定型与脱水过程同步化，形成凹凸纹路固定层，增加补片与组织的接触面积；
(3)双层复合技术：采用烘干与冻干相结合的方式，形成了具有固定层和多孔层的双层复合结构；多孔层孔隙率大，有利于细胞的长入，能提高组织的修复速度，固定层具有凹凸不平整的表面结构，有助于用于固定组织、乳房假体；
(4)本发明的修补片用于但不限于乳房重建中的软组织修复，乳房假体隔离，乳房整形，乳房正畸，具有可诱导患者自身细胞长入，为细胞重建受损组织提供模板，修复为血管化、功能化的组织或器官，并且免疫原去除基质会逐步降解，与重建组织再生过程基本同步，最终免疫原去除基质补片完全被宿主组织代替的优点。
附图说明
图1所示的是根据本发明实施例的乳房修补片SEM照片；
图2所示的是根据本发明实施例的可用于丰胸的乳房修补片；
图3所示的是根据本发明实施例的可用于乳房假体隔离乳房修补片；
图4所示的是根据本发明实施例的可用于矫正畸形的乳房修补片；
图5所示的是根据本发明实施例的可用于乳房的重建乳房修补片。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步具体描述，但不局限于此。
本发明所述小肠粘膜下层组织材料取自哺乳动物，猪小肠粘膜下层基质材料或牛小肠粘膜下层基质材料均适用于本发明的实施例。
实施例1：
本实施例乳房修补片按如下述方法制备：
(1)组织前置处理：取小肠粘膜下层组织材料分割成规定尺寸，剔除淋巴组织，用自来水冲洗3次，再用纯化水冲洗至表面无污渍，将冲洗后的小肠粘膜下层组织材料放置于滤网等滤水装置上，静置5分钟以上，将水滤干。
(2)病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡小肠粘膜下层组织材料，该过程可在不锈钢桶中进行，过氧乙酸浓度(体积百分比)采用0.1％，乙醇浓度(体积百分比)采用5％，灭活时间2小时，溶液与小肠粘膜下层组织材料比例(体积比)为8：1，温度范围为20℃；完成后在超声波清洗机中先用pH值为7的PBS溶液超声处理多次，PBS溶液与小肠粘膜下层组织材料体积比为20:1，再用纯化水清洗数次至检测清洗后的纯化水电导率为10μS/cm以下终止，纯化水与小肠粘膜下层组织材料体积比为20:1；超声频率3000W。
(3)免疫原去除：采用包含浓度(质量百分比)为0.1％的胰蛋白酶溶液和浓度0.5mmol/L的EDTA的pH＝7的PBS溶液，超声振荡处理，超声至少包括两个频率，其中低频率范围为23KHz，高频范围为76KHz，其中低频处理15min，高频处理8min，温度范围为20-35℃，溶液与小肠粘膜下层组织材料比例(体积比)为20：1，整个过程需要在超声波清洗机中进行，超声波功率至少在5000W以上；完成后在超声波清洗机中采用pH7中的PBS溶液超声处理，PBS溶液与小肠粘膜下层组织材料体积比为20：1，每次10-30分钟；清洗2-4次；然后采用降温的注射用水清洗，注射用水与小肠粘膜下层组织材料比例为20：1至40：1之间，检测清洗前后注射用水电导率差为1μS/cm以下终止。超声波的频率优选40kHz，功率需要在3000W以上，得到小肠粘膜下层基质材料。
(4)干燥：该步骤在热循环烘箱中进行，优选洁净度为百级的烘箱。开启烘箱风机，预热至40℃，将步骤(3)的免疫原去除组织固定于带有凹凸纹路的模具上，保持时间约16小时。
(5)冷冻干燥：将步骤(3)的免疫原去除组织平铺于真空冷冻干燥机中，关闭冻干室的门，打开循环泵约1min，开启压缩机对冻干箱致冷，将产品预冻至-45℃，保温约2小时，开启真空泵，调节产品温度约-15℃升华，约6小时后，调节产品温度0℃，保温2小时，调节产品温度25℃，保温4小时；
(6)成型：将步骤(4)与步骤(5)得到的基质材料采用胶原蛋白胶粘接成型。
本实施例中的制备方法还可以包括以下步骤：
(7)打孔包装：烘干的产品取出后，在模具上切割成固定的形状，再放入机械打孔机中，以间距0.9cm进行打孔，孔直径1.5mm，采用双层特卫强包装袋包装，该过程需要无菌转运与操作。
(8)灭菌解析：产品采用环氧乙烷灭菌，灭菌条件：温度40℃，保温时间4小时，湿度70％，环氧乙烷浓度为500mg/L，灭菌时间6小时；解析过程：通风的解析室中，温度控制在20℃之间，时间约14天。
如图1所示，是本发明实施例的乳房修补片SEM照片，显示本发明的修补片具有多孔结构，作为提供细胞生长的支架。如附图2所示，即为一种可用于丰胸的乳房修补片的结构示意图，表面分布的点状可以认为是凹凸纹路的表面。
实施例2：
对实施例1中样品进行性能检测，检测项目与结果如下：
1)DNA残留：依据生物制剂残留DNA检测方法《中国药典》2015年版第四部，采用荧光染色法检测实施例1所提供的样品DNA残留量，结果：实施例1所提供的样品的DNA残留量小于3.64±0.96ng/mg。
2)半乳糖苷酶(α-Gal)清除率：取动物源性生物材料Gal阳性参考品，Gal抗原阴性参考品各2mg，加裂解液1ml，裂解30-90min，配制成20、10、5、2.5、1.25、0.625μg的Gal标准曲线样品，测试免疫原去除前后的测试品各取50mg，加裂解液2ml，裂解30-90min；取裂解液与M86抗体反应后的上清液，加入96孔板，加二抗，加显色剂，采用ELISA方法450nm检测吸光度值，按标准曲线计算出样品的Gal值，免疫原去除处理前材料的Gal值为17.79±1.89×1014/mg，实施例1中样品的Gal值为0.13±0.01×1014/mg，半乳糖苷酶(α-Gal)清除率在99.27％以上。
3)病毒检测：选择伪狂犬病毒为指示病毒，采用实时定量PCR法检测病毒的DNA拷贝数，检测3批样品。结果：病毒DNA拷贝数为0。
4)细菌内毒：按照GB/T 14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法》进行检测，共3批样品，结果：细菌内毒小于20EU/包装。
5)胶原蛋白亚型鉴别：采用免疫组化染色法检测I、III、IV型和VI型胶原蛋白，3μm厚连续切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水。将切片移入电饭煲水浴中(内含0.01mol/L，pH6.0的枸橼酸三钠缓冲液)，温度保持在95-100℃，煮20min，进行抗原修复，取出后在室温下自然冷却。磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤，5min×3次。二步法免疫组化：分别滴加I、III、IV型和VI型胶原蛋白单克隆抗体一抗，浓度1：100，4℃冰箱过夜室温下孵育60min，PBS洗涤3次。滴加Envision反应液，室温下孵育30min。PBS洗涤3次。0.05％的3，3一二氨基联苯胺+0.03％的H2O2显色5-10min。流水洗，苏木精衬染。递增梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规树脂封固。结果表明，显微镜下观察四种染色标本皆可见棕黄染色，为阳性，表明样品中可检测到I、III、IV型和VI型胶原蛋白。
6)多糖物质含量检测：取10个样品，取样，浸提，用Biocolor硫酸软骨素检测试剂盒测试硫酸软骨素含量，样品中硫酸软骨素含量平均值为5236±185μg/g；用透明质酸检测试剂盒测试透明质酸(HA)含量，结果显示，样品的透明质酸(HA)保留量平均值为296±23μg/g。
7)活性因子种类鉴别：将样品浸泡PBS24h后，固定于4％多聚甲醛5-10min，用0.1mol/LPBS洗3次，每次5min，然后用玻璃细管转至涂有多聚赖氨酸的玻片上,进行免疫组织化学染色。LN抗体、FN抗体和整合素效价均为1∶100，0.5％胰酶消化3-5min暴露抗原，0.1％Triton X100作用10min增加抗体的穿透性。免疫组织化学染色显阳性，表面样品中包含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、整合素及其配体的等物质。
8)生长因子残留量：对实施例1中样品采用ELISA法检测样品中碱性生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)含量，并对免疫原去除前动物组织作为对照。结果发现碱性生长因子(bFGF)免疫原去除前后含量分别为2155±189ng/L、828±90ng/L，保留生长因子35％以上；血管内皮生长因子(VEGF)含量免疫原去除前后含量分别为633±51ng/L、249±16ng/L，保留生长因子35％以上。
9)孔隙率：按照阿基米德原理，以乙醇作为浸提介质，计算样品孔隙率为75.43±8.21％
10)缝合抗拉强度：按照实施例1制备样品，用3-0非吸收缝合线在修补片一端边缘2mm处，将缝合线与修补片的另一端固定在拉力仪上，以20mm/min的速度进行拉伸，直到缝合点被撕裂，记录最大力值，结果显示，最大值可达13N。
11)抗张强度：按照实施例1制备样品，将样品裁剪成2×5cm尺寸，在相对湿度为40％-60％，温度为22℃±2℃的条件下放置2h后立即进行试验。将试样两端固定在拉伸试验机的夹头上，以100mm/min的速度依次向外拉伸直到试样断裂，纵向试样和横向试样分别进行试验。最后的测定结果显示纵向抗张强度可达32N，横向抗张强度可达18N。
12)环氧乙烷残留量：按GB/T14233.1-2008《医用输液、输血、注射器具检验方法第1部分：化学分析法》中9的规定的方法试验，结果：产品环氧乙烷残留量不超过10μg/包装。
13)重金属检查：铅、铬按GB/T 14233.1-2008中5.9.1《医用输液、输血、注射器具检验方法第1部分：化学分析法》规定的方法试验，汞、砷按GB/T 14233.1-2008中5.9.3《医用输液、输血、注射器具检验方法第1部分：化学分析法》规定的方法试验，产品检验液中铅、铬、汞、砷总重金属含量少于1μg/g。
实施例3
对实施例1中样品进行生物相容性实验，检测项目包括：热原、细胞毒性、迟发型超敏反应、皮内反应、急性全身毒性、Ames试验、小鼠淋巴瘤细胞突变试验、染色体畸变、植入、亚慢性毒性。
1)热原
按质量比1：5浸提介质的比例，37±1℃，72±2hr制备试验液，浸提介质：生理盐水。按GB/T 14233.2-2005规定的方法进行，产品无热原反应。
2)细胞毒性
按质量比1：5浸提介质的比例，37±1℃，24±2hr制备试验液，浸提介质：含血清的MEM培养基。取试验液按照GB/T16886.5-2003中规定的试验方法进行试验，结果产品的细胞毒性反应不大于1级。
3)迟发型超敏反应
按质量比1：5浸提介质的比例，37±1℃，72±2hr制备试验液，浸提介质：生理盐水和棉籽油。按照GB/T 16886.10-2005第10部分:刺激与迟发型超敏反应试验方法规定进行试验，结果产品无迟发型超敏反应。
4)皮内反应
按质量比1：5浸提介质的比例，37±1℃，72±2hr制备试验液，浸提介质：生理盐水和棉籽油。按照GB/T 16886.10-2005第10部分:刺激与迟发型超敏反应试验试验方法规定进行试验，结果：试验样品与溶剂对照平均记分之差小于1.0。
5)急性全身毒性
按质量比1：5浸提介质的比例，37±1℃，72±2hr制备试验液，浸提介质：生理盐水和棉籽油。取试验液按照GB/T16886.11-2011规定的试验方法进行试验，结果：产品无急性全身毒性反应。
6)Ames试验
按质量比1：5浸提介质的比例，37±1℃，72±2hr制备试验液，浸提介质：生理盐水和DMSO。按GB/T16886.3-2008规定的方法进行，结果：产品的Ames试验为阴性。
7)小鼠淋巴瘤细胞突变试验
按质量比1：5浸提介质的比例，37±1℃，72±2hr制备试验液，浸提介质：生理盐水和DMSO。按GB/T16886.3-2008规定的方法进行，结果：产品的小鼠淋巴瘤细胞突变试验为阴性结果。
8)染色体畸变试验
按质量比1：5浸提介质的比例，37±1℃，72±2hr制备试验液，浸提介质：生理盐水和DMSO，按GB/T16886.3-2008规定的方法进行，结果：产品的染色体畸变试验为阴性。
9)植入
按GB/T16886.6-1997规定的方法进行，结果：肌肉植入1周：样品周围可见嗜中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞浸润，应无囊腔形成；肌肉植入4周：样品周围可见少量巨噬细胞和淋巴细胞，胶原纤维和纤维母细胞增生，有纤维囊腔形成；肌肉植入12周：样品周围可见少量淋巴细胞、胶原纤维、纤维囊腔较致密规整。
10)亚慢性毒性
按GB/T 16886.11规定的方法进行，结果：无亚慢性毒性反应。
实施例4：
降解性能：每个10×10mm免疫原去除基质乳房修补片样品，用1ml质量百分比为0.03％的蛋白酶K溶液浸泡，56℃水浴，每隔10min对样品进行称重，计算样品剩余质量百分比。测试结果为表1所示：
表1样品剩余质量百分比
实施例5：
动物实验:
健康的实验用新西兰白兔12只，体重2～3kg，雌雄各半。正常饲养，术前背部常规备皮，麻醉成功后，消毒铺巾，取下背部肌肉侧切口约4cm，逐层分离各层组织。取本发明免疫原去除基质乳房修补片剪裁成2×3cm大小，将其置于背部肌肉间隙固定，修补缺损部位，固定补片，缝合切口。术后1个月、3个月、6个月解剖观察背部修复情况，1个月伤口自行愈合，解剖时观察修补片无明显皱缩，无积液；解剖观察背部肌肉基本无粘连。3个月免疫原去除基质材料局部未见感染症状，结构完整，层次清晰，背部肌肉与材料分离，无粘连。6个月免疫原去除基质材料完全降解，局部未见感染症状，结构完整缺，损组织修复完成。
如图3所示，是根据本发明实施例制备的一种可用于乳房假体隔离乳房修补片的结构示意图；如图4所示，是根据本发明实施例制备的一种的可用于矫正畸形的乳房修补片的结构示意图；如图5所示，是根据本发明实施例制备的一种的可用于乳房的重建乳房修补片的结构示意图。从附图可知，本发明的方法可以制备不同微观结构的修补片，根据细微的结构区别可以实现不同功能需求的应用，但均是由本发明的方法获得，均落入本发明的保护反问。
综上，本发明的免疫原去除基质乳房修补片：
(1)DNA残留能够达到10ng/mg以下，较同类产品低30-50ng/mg、半乳糖苷酶去除率较高，能够达到99％；
(2)免疫原去除过程，通过控制产品的超声功率，能够在高功率的情况下，达到破碎细胞、DNA的效果，在低功率的情况下，将破碎的细胞内物质有效的清洗掉；
(3)力学强度更强，能够承受更大的力学性能，能够有效的控制降解时间，使植入体内后与人体组织重生过程相匹配；
(4)塑形较好，不分层；
(5)采用烘干与冻干相结合的方式，形成了一层固定层、一层多孔层的双层复合结构；疏松层孔隙率大，有利于细胞的长入，能提高组织的修复速度，固定层用于固定组织、乳房假体。
本发明的上述实施例是对本发明的说明而不能用于限制本发明，与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。

Claims (10)

1.一种乳房修补片，其特征在于：该乳房修补片包括凹凸纹路固定层和多孔层的可降解吸收的双层结构，且该双层结构均为采用动物的小肠粘膜下层组织材料为原料、经过去除免疫原性、保留完整的细胞外基质成分的材料；
修补片具体的制备步骤包括：组织前置处理、病毒灭活、免疫原去除、干燥、冷冻干燥和成型；
其中：
（1）组织前置处理：取小肠粘膜下层组织材料，清洗并将水滤干；
（2）病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡小肠粘膜下层组织材料；完成后在超声波清洗机中清洗；其中过氧乙酸的体积百分比浓度为0.1%-5%、乙醇的体积百分比浓度为5%-40%，过氧乙酸-乙醇溶液与小肠粘膜下层组织材料的体积比为(3-20)︰1，灭活时间2-4小时，灭活的温度范围为10-40℃；清洗过程包括：采用pH6-8中的PBS溶液超声处理，溶液与小肠粘膜下层组织材料体积比为20：1至40：1之间，每次10-30分钟；清洗2-4次，检测pH为6-8之间；采用纯化水清洗，溶液与小肠粘膜下层组织材料比例为20：1至40：1之间，检测电导率为10μS/cm以下终止；
（3）免疫原去除：采用含有胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，使用包含至少两个频率的超声进行超声振荡处理；完成后在超声波清洗机中处理，得到免疫原去除后的小肠粘膜下层基质材料；所述免疫原去除液中胰蛋白酶质量百分比浓度为0.01-0.2%，EDTA的浓度为0.1-1mmol/L；免疫原去除液pH值为7.0-8.0；所述免疫原去除液与小肠粘膜下层组织材料体积比为(20-40)︰1；超声包括的两个频率，其中低频率范围为15-30KHz，高频范围为60-90KHz，其中低频处理5-30min，高频处理5-30min，温度范围为20-35℃；清洗过程包括：采用pH6-8中的PBS溶液超声处理，溶液与小肠粘膜下层组织材料体积比为20-40：1之间，每次10-30分钟；清洗2-4次，检测pH为6-8之间；采用降温的注射用水清洗，注射用水与小肠粘膜下层组织材料比例为20-40：1之间，检测清洗前后注射用水电导率差为1μS/cm以下终止；
（4）干燥：将步骤（3）的免疫原去除的小肠粘膜下层基质材料固定于带有凹凸纹路的模具上，并将模具和小肠粘膜下层基质材料在热循环烘箱中进行干燥；干燥温度25-40℃、时间为8-16小时，通过模具成型在固定层上形成凹凸纹路制备出凹凸纹路固定层；
（5）冷冻干燥：将步骤（3）的免疫原去除的小肠粘膜下层基质材料平铺于真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥；
（6）成型：将步骤（4）所得的干燥小肠粘膜下层基质材料与步骤（5）所得冻干的小肠粘膜下层基质材料采用胶原蛋白胶粘接成型。
2.根据权利要求1所述的乳房修补片，其特征在于：所述动物为哺乳动物。
3.根据权利要求2所述的乳房修补片，其特征在于：所述哺乳动物为猪或牛。
4.根据权利要求1所述的乳房修补片，其特征在于：所述去除免疫原性是指细胞残留量小于10个，DNA残留量小于10ng/mg，半乳糖苷酶清除率为99 %以上；所述保留完整的细胞外基质成分指保留包含胶原蛋白、多糖物质、活性因子及生长因子成分；所述胶原蛋白为I型胶原蛋白及III型、IV型和VI型胶原蛋白的组合物，所述多糖物质为包含硫酸软骨素和透明质酸的组合物，所述活性因子包含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、整合素及其配体的组合物，所述生长因子成分为碱性生长因子和血管内皮生长因子。
5.根据权利要求1所述的乳房修补片，其特征在于：所述的乳房修补片在体内降解时间1-3个月内；所述的乳房修补片的拉伸断裂强度大于50N/cm，缝合保持力大于10N；所述的乳房修补片为微观多孔结构，整个修补片的孔隙率在60%以上。
6.一种乳房修补片的制备方法，该乳房修补片包括凹凸纹路固定层和多孔层的可降解吸收的双层结构，且该双层结构均为采用动物的小肠粘膜下层组织材料为原料、经过去除免疫原性、保留完整的细胞外基质成分的材料；
其特征在于：制备步骤包括：组织前置处理、病毒灭活、免疫原去除、干燥、冷冻干燥和成型；其中：
（1）组织前置处理：取小肠粘膜下层组织材料，清洗并将水滤干；
（2）病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡小肠粘膜下层组织材料；完成后在超声波清洗机中清洗；其中过氧乙酸的体积百分比浓度为0.1%-5%、乙醇的体积百分比浓度为5%-40%，过氧乙酸-乙醇溶液与小肠粘膜下层组织材料的体积比为(3-20)︰1，灭活时间2-4小时，灭活的温度范围为10-40℃；清洗过程包括：采用pH6-8中的PBS溶液超声处理，溶液与小肠粘膜下层组织材料体积比为20：1至40：1之间，每次10-30分钟；清洗2-4次，检测pH为6-8之间；采用纯化水清洗，溶液与小肠粘膜下层组织材料比例为20：1至40：1之间，检测电导率为10μS/cm以下终止；
（3）免疫原去除：采用含有胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，使用包含至少两个频率的超声进行超声振荡处理；完成后在超声波清洗机中处理，得到免疫原去除后的小肠粘膜下层基质材料；所述免疫原去除液中胰蛋白酶质量百分比浓度为0.01-0.2%，EDTA的浓度为0.1-1mmol/L；免疫原去除液pH值为7.0-8.0；所述免疫原去除液与小肠粘膜下层组织材料体积比为(20-40)︰1；超声包括的两个频率，其中低频率范围为15-30KHz，高频范围为60-90KHz，其中低频处理5-30min，高频处理5-30min，温度范围为20-35℃；清洗过程包括：采用pH6-8中的PBS溶液超声处理，溶液与小肠粘膜下层组织材料体积比为20-40：1之间，每次10-30分钟；清洗2-4次，检测pH为6-8之间；采用降温的注射用水清洗，注射用水与小肠粘膜下层组织材料比例为20-40：1之间，检测清洗前后注射用水电导率差为1μS/cm以下终止；
（4）干燥：将步骤（3）的免疫原去除的小肠粘膜下层基质材料固定于带有凹凸纹路的模具上，并将模具和小肠粘膜下层基质材料在热循环烘箱中进行干燥；干燥温度25-40℃、时间为8-16小时，通过模具成型在固定层上形成凹凸纹路制备出凹凸纹路固定层；
（5）冷冻干燥：将步骤（3）的免疫原去除的小肠粘膜下层基质材料平铺于真空冷冻干燥机中进行冷冻干燥；
（6）成型：将步骤（4）所得的干燥小肠粘膜下层基质材料与步骤（5）所得冻干的小肠粘膜下层基质材料采用胶原蛋白胶粘接成型。
7.根据权利要求6所述的乳房修补片的制备方法，其特征在于：
步骤（5）所述的冷冻干燥步骤为：将组织材料通过冷冻干燥，预冻至-45℃，保温1-2小时，然后调节温度至-15℃，保温5-7小时，再调节温度至0℃，保温2小时，最后调节温度至25℃，保温4小时，制备多孔层。
8.根据权利要求7所述的乳房修补片的制备方法，其特征在于：步骤（2）和（3）清洗过程在超声波清洗机中进行，超声频率为40kHz，功率为3000W以上；步骤（3）免疫原去除液中胰蛋白酶的质量百分比浓度为0.02-0.05%，EDTA的浓度为0.4-0.8mmol/L，免疫原去除液pH值为7.2-7.5。
9.根据权利要求8所述的乳房修补片的制备方法，其特征在于：制备步骤还包括成型之后的打孔包装步骤和灭菌解析步骤。
10.一种如权利要求1-5中任意一项乳房修补片在乳房修复器械中的应用，其特征在于：所述乳房修复器械能用于乳房切除手术、外伤、萎缩导致的乳房缺失，乳房正畸，乳房整形，乳房假体隔离，或丰胸。
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