CN106771214A - 一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法及试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法及试剂盒，包括盒体，所述盒体的一侧面通过合页活动连接有盒盖，所述盒体的内壁上固定连接有第一分隔板，所述第一分隔板的一侧面固定连接有海绵块，所述第一分隔板的另一侧面固定连接有固定板。本发明禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法中，使用乙腈‑甲醇作为提取液，在经过一系列的离心、混合和提取将三甲氧苄氨嘧啶从禽肉中分离出来，形成溶液，最后配合三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体‑胶体金标记物和试纸条测出禽肉中三甲氧苄氨嘧啶的含量，能够准确高效的检测分析禽肉中三甲氧苄氨嘧啶的含量，方便对市场上的禽肉中的三甲氧苄氨嘧啶的含量检测，减少三甲氧苄氨嘧啶对人类身体的危害。

Description

一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及禽肉检测技术领域，具体为一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法及试剂盒。
背景技术
三甲氧苄氨嘧啶是一种抗菌增效药，单独用于呼吸道感染、泌尿道感染、肠道感染等病症，作为抗菌增效药，也可以治疗家禽细菌感染和球虫病，新型口服广谱抗菌药物。抗菌谱与磺胺药物相似而效力较强，对多种革兰氏阳性和阴性细菌有效。由于细菌对本品将易产生耐药性，故不宜单独作为抗菌药使用。用作饲料添加剂，与磺胺类药物及抗生物并用时具有明显增效作用，可增加十至数十倍的效果。不单独使用，一般按1：5的比例使用，可治疗禽畜大肠杆菌引起的败血症、鸡白痢、禽伤寒、霍乱和呼吸系统继发性细菌感染等。还可用于球虫病的治疗，抗菌范围和磺胺药相近，与磺胺药联合使用时，可增强其疗效几倍到几十倍。适用于呼吸道感染、老年性慢性支气管炎、菌痢、泌尿系统感染、肠炎、伤寒和疟疾等症。
而三甲氧苄氨嘧啶则禁止添加于动物饲料中，但是三甲氧苄氨嘧啶经常作为抗菌增效药添加进禽类药品中，因为三甲氧苄氨嘧啶药物理化性质稳定，能通过食物链在动物体内长期存在而造成危害，最后进入人类的身体，威胁到人们的身体健康，为了有效地检测禽肉中三甲氧苄氨嘧啶的含量，急需开发一个准确高效的检测分析方法。
发明内容
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法及试剂盒，能够准确高效的检测分析禽肉中三甲氧苄氨嘧啶的含量。
（二）技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测试剂盒，包括盒体，所述盒体的一侧面通过合页活动连接有盒盖，所述盒体的内壁上固定连接有第一分隔板，所述第一分隔板的一侧面固定连接有海绵块，所述第一分隔板的另一侧面固定连接有固定板，所述海绵块的上表面开设有放置孔，所述放置孔的内部活动连接有试管、离心管和滴管，所述盒体一侧面开设的通槽内活动连接有抽屉，所述抽屉的内壁上固定连接有第二分隔板，且抽屉位于固定板的下方。
一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，包括以下步骤：
S1、将待检测的禽肉在纯净水洗干净，放置在干净的放置板上。
S2、配置提取液，从试剂盒中取出乙腈-甲醇按照1-2∶8-9的比例加入干净的试管中混合。
S3、准确称取2g禽肉样品于干净的离心管中，取5g无水硫酸钠加入塑料离心管中，混匀后加入再10mL甲酸-乙腈提取液，涡漩混匀，超声提取15-25min后，再离心8-12min，静置3-5min，取上清液2mL置于10mL离心管中待净化。
S4、取待净化溶液，升温至30-50℃浓缩至干，加入1mL水溶解残渣，再加入3mL正己烷离心1-3min后，离层液过0.2μm滤膜，将所得滤液置于干净的试管中。
S5、取1mL的三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体-胶体金标记物于试管中，再使用微量移液器移取2mLS4中所得的滤液于试管中，将标记好的试纸条插入微孔中，印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中，室温20~25℃下放置5min后，取出试纸条，判定结果，如果C线显色，T线显色，无论颜色深浅，均表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度低于检测限，如果C线显色，T线不显色，表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度高于检测限。
优选地，在S3中，称取2g禽肉样品时，禽肉的重量应精确到0.01g。
优选地，在S3中，在超声的过程中，超声的功率为800-1000W。
优选地，在S3中，在离心过程中，离心的功率为8000r/min。
优选地，在S4中，在离心过程中，离心的功率为5000r/min。
（三）有益效果
本发明提供了一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法及试剂盒。具备以下有益效果：
本发明禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法中，使用乙腈-甲醇作为提取液，在经过一系列的离心、混合和提取将三甲氧苄氨嘧啶从禽肉中分离出来，形成溶液，最后配合三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体-胶体金标记物和试纸条测出禽肉中三甲氧苄氨嘧啶的含量，能够准确高效的检测分析禽肉中三甲氧苄氨嘧啶的含量，方便对市场上的禽肉中的三甲氧苄氨嘧啶的含量检测，减少三甲氧苄氨嘧啶对人类身体的危害。
附图说明
图1为本发明结构示意图。
图中：1盒体、2合页、3盒盖、4第一分隔板、5海绵块、6固定板、7放置孔、8抽屉、9第二分隔板。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1所示，本发明提供一种技术方案：一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测试剂盒，包括盒体1，盒体1的一侧面通过合页2活动连接有盒盖3，盒体1的内壁上固定连接有第一分隔板4，第一分隔板4的一侧面固定连接有海绵块5，第一分隔板4的另一侧面固定连接有固定板6，海绵块5的上表面开设有放置孔7，放置孔7的内部活动连接有试管、离心管和滴管，试管和离心管均使用橡胶套密封，一是防止细菌污染试管和离心管，还可以将一些溶液类试剂放进试管中保存，将试管、离心管和滴管放置在海绵块5内，防止试管、离心管和滴管发生碰撞，损坏试管、离心管和滴管，盒体1一侧面开设的通槽内活动连接有抽屉8，抽屉8的内壁上固定连接有第二分隔板9，且抽屉9位于固定板6的下方，抽屉8中可以放置微孔试剂和其他物品，在拿取时方便简单。
实施例1
一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，包括以下步骤：
S1、将待检测的禽肉在纯净水洗干净，放置在干净的放置板上。
S2、配置提取液，将乙腈-甲醇按照2∶8的比例加入干净的试管中混合。
S3、准确称取2g禽肉样品于干净的离心管中，称取2g禽肉样品时，禽肉的重量应精确到0.01g，加入5g无水硫酸钠，混匀后加入10mL甲酸-乙腈提取液，涡漩混匀，超声提取20min后，在超声的过程中，超声的功率为800-1000W，再离心10min，在离心过程中，离心的功率为8000r/min，静置4min，取上清液2mL置于10mL离心管中待净化。
S4、取待净化溶液，升温至40℃浓缩至干，加入1mL水溶解残渣，再加入3mL正己烷离心2min后，在离心过程中，离心的功率为5000r/min，离层液过0.2μm滤膜，将所得滤液置于干净的试管中。
S5、取1mL的三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体-胶体金标记物于试管中，再使用微量移液器移取2mLS4中所得的滤液于试管中，将标记好的试纸条插入微孔中，印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中，室温20~25℃下放置5min后，取出试纸条，判定结果，如果C线显色，T线显色，无论颜色深浅，均表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度低于检测限，如果C线显色，T线不显色，表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度高于检测限，试纸条是用pH值为7.2，浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液将三甲氧苄氨嘧啶-OVA偶联物稀释到质量浓度为1g/L，用点膜仪将其包被于NC膜上的检测线（T线），包被量为1μL/cm，在距离检测线3mm处用pH值为7.2，浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液将羊抗鼠二抗稀释到质量浓度为20g/L，用点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控线（C线），包被量为1μL/cm，包被完毕后将包被好的NC膜置于37℃烘干60min后取出制作成。
实施例2
一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，包括以下步骤：
S1、将待检测的禽肉在纯净水洗干净，放置在干净的放置板上。
S2、配置提取液，将乙腈-甲醇按照1∶9的比例加入干净的试管中混合。
S3、准确称取2g禽肉样品于干净的离心管中，称取2g禽肉样品时，禽肉的重量应精确到0.01g，加入5g无水硫酸钠，混匀后加入10mL甲酸-乙腈提取液，涡漩混匀，超声提取20min后，在超声的过程中，超声的功率为800-1000W，再离心10min，在离心过程中，离心的功率为8000r/min，静置4min，取上清液2mL置于10mL离心管中待净化。
S4、取待净化溶液，升温至40℃浓缩至干，加入1mL水溶解残渣，再加入3mL正己烷离心2min后，在离心过程中，离心的功率为5000r/min，离层液过0.2μm滤膜，将所得滤液置于干净的试管中。
S5、取1mL的三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体-胶体金标记物于试管中，再使用微量移液器移取2mLS4中所得的滤液于试管中，将标记好的试纸条插入微孔中，印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中，室温20~25℃下放置5min后，取出试纸条，判定结果，如果C线显色，T线显色，无论颜色深浅，均表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度低于检测限，如果C线显色，T线不显色，表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度高于检测限，试纸条是用pH值为7.2，浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液将三甲氧苄氨嘧啶-OVA偶联物稀释到质量浓度为1g/L，用点膜仪将其包被于NC膜上的检测线（T线），包被量为1μL/cm，在距离检测线3mm处用pH值为7.2，浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液将羊抗鼠二抗稀释到质量浓度为20g/L，用点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控线（C线），包被量为1μL/cm，包被完毕后将包被好的NC膜置于37℃烘干60min后取出制作成。
实施例3
一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，包括以下步骤：
S1、将待检测的禽肉在纯净水洗干净，放置在干净的放置板上。
S2、配置提取液，将乙腈-甲醇按照2∶8的比例加入干净的试管中混合。
S3、准确称取2g禽肉样品于干净的离心管中，称取2g禽肉样品时，禽肉的重量应精确到0.01g，加入5g无水硫酸钠，混匀后加入10mL甲酸-乙腈提取液，涡漩混匀，超声提取20min后，在超声的过程中，超声的功率为800-1000W，再离心10min，在离心过程中，离心的功率为8000r/min，静置4min，取上清液2mL置于10mL离心管中待净化。
S4、取待净化溶液，升温至30℃浓缩至干，加入1mL水溶解残渣，再加入3mL正己烷离心2min后，在离心过程中，离心的功率为5000r/min，离层液过0.2μm滤膜，将所得滤液置于干净的试管中。
S5、取1mL的三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体-胶体金标记物于试管中，再使用微量移液器移取2mLS4中所得的滤液于试管中，将标记好的试纸条插入微孔中，印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中，室温25℃下放置5min后，取出试纸条，判定结果，如果C线显色，T线显色，无论颜色深浅，均表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度低于检测限，如果C线显色，T线不显色，表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度高于检测限，试纸条是用pH值为7.2，浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液将三甲氧苄氨嘧啶-OVA偶联物稀释到质量浓度为1g/L，用点膜仪将其包被于NC膜上的检测线（T线），包被量为1μL/cm，在距离检测线3mm处用pH值为7.2，浓度为0.01mol/L磷酸盐缓冲液将羊抗鼠二抗稀释到质量浓度为20g/L，用点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控线（C线），包被量为1μL/cm，包被完毕后将包被好的NC膜置于37℃烘干60min后取出制作成。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测试剂盒，包括盒体（1），其特征在于：所述盒体（1）的一侧面通过合页（2）活动连接有盒盖（3），所述盒体（1）的内壁上固定连接有第一分隔板（4），所述第一分隔板（4）的一侧面固定连接有海绵块（5），所述第一分隔板（4）的另一侧面固定连接有固定板（6），所述海绵块（5）的上表面开设有放置孔（7），所述放置孔（7）的内部活动连接有试管、离心管和滴管，所述盒体（1）一侧面开设的通槽内活动连接有抽屉（8），所述抽屉（8）的内壁上固定连接有第二分隔板（9），且抽屉（9）位于固定板（6）的下方。
2.一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将待检测的禽肉在纯净水洗干净，放置在干净的放置板上；
S2、配置提取液，从试剂盒中取出乙腈-甲醇按照1-2∶8-9的比例加入干净的试管中混合；
S3、准确称取2g禽肉样品于干净的离心管中，取5g无水硫酸钠加入塑料离心管中，混匀后加入再10mL甲酸-乙腈提取液，涡漩混匀，超声提取15-25min后，再离心8-12min，静置3-5min，取上清液2mL置于10mL离心管中待净化；
S4、取待净化溶液，升温至30-50℃浓缩至干，加入1mL水溶解残渣，再加入3mL正己烷离心1-3min后，离层液过0.2μm滤膜，将所得滤液置于干净的试管中；
S5、用微量移液器移取200μl滤液于微孔中，将标记好的试纸条插入微孔中，将标记好的试纸条插入微孔中，印有“MAX”线端朝下，使之充分浸入溶液中，室温20~25℃下放置5min后，取出试纸条，判定结果，如果C线显色，T线显色，无论颜色深浅，均表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度低于检测限，如果C线显色，T线不显色，表示禽肉样品中三甲氧苄氨嘧啶浓度高于检测限。
3.根据权利要求2所述的一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，其特征在于，在S2中，称取2g禽肉样品时，禽肉的重量应精确到0.01g。
4.根据权利要求2所述的一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，其特征在于，在S3中，在超声的过程中，超声的功率为800-1000W。
5.根据权利要求2所述的一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，其特征在于，在S3中，在离心过程中，离心的功率为8000r/min。
6.根据权利要求2所述的一种禽肉中三甲氧苄氨嘧啶检测方法，其特征在于，在S4中，在离心过程中，离心的功率为5000r/min。
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