CN106771157A - 一种强力霉素检测方法及检测卡 - Google Patents

一种强力霉素检测方法及检测卡 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种强力霉素检测卡，包括制备检测卡的制作材料和制备检测卡的制作仪器，制备检测卡的制作材料包括：TC‑BSA、抗DC单抗、兔抗鼠IgG、氯金酸溶液（HAuCl4·4H2O）、柠檬酸三钠溶液、K2CO3溶液、牛血清白蛋白（BSA）和PBS‑BSA液（0.01mol/L，pH：7.2），制作仪器包括：冷冻离心机、自动点膜机、玻璃纤维、PVC板、吸水棉浆纸和NC膜。该强力霉素检测方法及检测卡，具有快速、准确和高精度特点，更加省时省力，能够有效的满足快速检测的要求，检测效果好，方便实用，操作简单，可对强力霉素进行快速的检测，可以极大地提高检测效率，节约检测成本。

Description

一种强力霉素检测方法及检测卡
技术领域
本发明涉及强力霉素检测技术领域，具体为一种强力霉素检测方法及检测卡。
背景技术
强力霉素是抗生素类药，四环素类药物，可以治疗衣原体支原体感染。其性状为淡黄色或黄色结晶性粉末，气味微臭，在水中或甲醇中易溶，在乙醇或丙酮中微溶，在氯仿中不溶，强力霉素具有抗菌活性和组织穿透力更强、体内分布广、生物利用度高和半衰期较长等优点，现已广泛应用于水产养殖中多种感染性疾病的预防和治疗或是用作促生长剂。如果长期使用强力霉素会引起消化机能障碍。
目前大多采用微生物法或色谱法的方式对强力霉素进行检测，但这些方法过于繁琐，耗时较长，检测成本较高，不能满足快速检测的要求，检测效果差，为此，我们提出一种新型的强力霉素检测方法及检测卡。
发明内容
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种强力霉素检测方法及检测卡，解决了检测效果差和检测耗时较长的问题。
（二）技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种强力霉素检测卡，包括制备检测卡的制作材料和制备检测卡的制作仪器，制备检测卡的制作方法包括如下步骤：
S1，取90-110mL的氯金酸溶液（浓度为0.01%）置于烧杯中，加热至煮沸，随即加入2-5mL的柠檬酸三钠溶液（10mg/mL），继续煮沸15-30min，直至颜色变为澄清透明红色胶体，即为稳定的金溶胶；
S2，取100mL配制好的金溶胶放入烧杯内，用0.1mol/L的K2CO3溶液调pH值至7.0；
S3，向S2的溶液内加入0.3-0.5mg抗DC单抗，继续搅拌混匀20-30min，搅拌完成后，加入0.1-0.5mL的牛血清白蛋白（BSA，100mg/mL），继续搅拌混匀10-15min；
S4，当S3完成后，将混合液放入冷冻离心机中，在4℃-8℃的环境下，2500-3000r/min离心5-8min；
S5，当S4完成后，取出上清液，并在4-10℃的环境下，10000-12000r/min离心5-10min，操作完成后，留取沉淀并标记为A粉，用PBS-BSA液（0.01mol/L，pH：7.2）对A粉进行溶解，即得金标记抗DC单抗溶胶；
S6，将玻璃纤维放入金标记抗DC单抗溶胶中，浸泡10-20min后，取出进行自然干燥，将TC-BSA和兔抗鼠IgG分别装入专用扫描笔中，在NC膜中部设定检测线（D线）和质控线（C线），宽度均为0.2cm，两者间距为1.5cm，启动自动点膜机进行包被，并做好标记，包被完成后，放入PBS-BSA液（0.01mol/L，pH：7.2）中，在4℃的环境下，封闭20h后，进行自然干燥；
S7，检测卡由PVC板和覆膜两部分组成，PVC板上的覆膜由前向后依次为玻璃纤维（包括引水玻璃纤维和载体玻璃纤维）、NC膜和吸水棉浆纸，色膜覆盖于吸水棉浆纸上，MARK标记膜覆盖于玻璃纤维上，载体玻璃纤维吸附有金标记抗TC单抗，NC膜内包被有D线和C线，各部件粘合固定组装好后，即可制作完成检测卡。
一种强力霉素检测方法，包括：检测强力霉素的检测试剂和检测强力霉素的检测仪器，检测强力霉素的检测方法包括如下步骤：
S1，用电子天平分别称取5-10mg的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、10-15mg的水溶性碳二亚胺（EDC）、和150-180mg的牛血清白蛋白（BSA），取5-10mL的磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5，2mol/L），并将取出的NHS、EDC、BSA、和PBS放入旋涡混合仪内共溶1-3min，共溶完毕后，反应10-15h；
S2，当S1完成后，将S1的共溶液放入冷冻离心机内，4500-5500r/min离心10-20min，离心完毕后，取出上清液，并标记为A液；
S3，用电子天平称取10-15mg的强力霉素标准品（DC），取0.2-0.8mL的N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入烧杯内搅拌1-3min；
S4，用移液器取出S3内的混合液，并逐滴加入到A液内，避光反应3-5h；
S5，当S4完成后，将S4的共溶液放入冷冻离心机内，4500-5500r/min离心10-20min，离心完毕后，取出上清液，并标记为B液；
S6，将B液放入烧杯内，取20-30mL磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5）作为透析液放入烧杯内，透析3-5h；
S7，当S6完成后，对液体进行过滤处理，即可得到DC-BSA抗原，将DC-BSA抗原分装成2mL/份；
S8，将DC-BSA抗原滴在检测卡的引水玻璃纤维上，5-10min后观察结果。
优选的，所述制备检测卡的制作材料包括：TC-BSA、抗DC单抗、兔抗鼠IgG、氯金酸溶液（HAuCl4·4H2O）、柠檬酸三钠溶液、K2CO3溶液、牛血清白蛋白（BSA）和PBS-BSA液（0.01mol/L，pH：7.2）。
优选的，所述制备检测卡的制作仪器包括：冷冻离心机、自动点膜机、玻璃纤维、PVC板、吸水棉浆纸、NC膜、覆膜、色膜、MARK标记膜和烧杯。
优选的，所述检测强力霉素的检测试剂包括：强力霉素样品（DC）、牛血清白蛋白（BSA）、水溶性碳二亚胺（EDC）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5）。
优选的，所述检测强力霉素的检测仪器包括：旋涡混合仪、冷冻离心机、电子天平、移液器、烧杯若干和搅拌棒若干。
（三）有益效果
本发明提供了一种强力霉素检测方法及检测卡，具备以下有益效果：
（1）该强力霉素检测方法及检测卡，根据本申请所提出的检测方法，运用酶联免疫吸附测定的方法对强力霉素进行检测，检测卡能够进行的反馈强力霉素的状况，具有快速、准确和高精度特点，更加省时省力，能够有效的满足快速检测的要求，检测效果好。
（2）该强力霉素检测方法及检测卡，通过检测卡的制作和检测方法的详细介绍，原材料多为实验室常用的仪器设备盒试剂，更加方便实用，操作简单，只需按照本申请所提出的原理步骤进行实施，即可对强力霉素进行快速的检测，可以极大地提高检测效率，节约检测成本。
具体实施方式
基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：一种强力霉素检测方法及检测卡，制备检测卡的制作材料包括：TC-BSA、抗DC单抗、兔抗鼠IgG、氯金酸溶液（HAuCl4·4H2O）、柠檬酸三钠溶液、K2CO3溶液、牛血清白蛋白（BSA）和PBS-BSA液（0.01mol/L，pH：7.2），制备检测卡的制作仪器包括：冷冻离心机、自动点膜机、玻璃纤维、PVC板、吸水棉浆纸、NC膜、覆膜、色膜、MARK标记膜和烧杯，检测强力霉素的检测试剂包括：强力霉素样品（DC）、牛血清白蛋白（BSA）、水溶性碳二亚胺（EDC）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5），检测强力霉素的检测仪器包括：旋涡混合仪、冷冻离心机、电子天平、移液器、烧杯若干和搅拌棒若干。
实施例1
一种强力霉素检测方法，包括：检测强力霉素的检测试剂和检测强力霉素的检测仪器，检测强力霉素的检测方法包括如下步骤：
S1，用电子天平分别称取5mg的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、10mg的水溶性碳二亚胺（EDC）、和150mg的牛血清白蛋白（BSA），取5mL的磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5，2mol/L），并将取出的NHS、EDC、BSA、和PBS放入旋涡混合仪内共溶1min，共溶完毕后，反应10h；
S2，当S1完成后，将S1的共溶液放入冷冻离心机内，4500r/min离心10min，离心完毕后，取出上清液，并标记为A液；
S3，用电子天平称取10mg的强力霉素标准品（DC），取0.2mL的N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入烧杯内搅拌1min；
S4，用移液器取出S3内的混合液，并逐滴加入到A液内，避光反应3h；
S5，当S4完成后，将S4的共溶液放入冷冻离心机内，4500r/min离心10min，离心完毕后，取出上清液，并标记为B液；
S6，将B液放入烧杯内，取20mL磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5）作为透析液放入烧杯内，透析3h；
S7，当S6完成后，对液体进行过滤处理，即可得到DC-BSA抗原，将DC-BSA抗原分装成2mL/份；
S8，将DC-BSA抗原滴在检测卡的引水玻璃纤维上，5min后观察结果。
实施例2
一种强力霉素检测方法，包括：检测强力霉素的检测试剂和检测强力霉素的检测仪器，检测强力霉素的检测方法包括如下步骤：
S1，用电子天平分别称取8mg的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、12mg的水溶性碳二亚胺（EDC）、和160mg的牛血清白蛋白（BSA），取8mL的磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5，2mol/L），并将取出的NHS、EDC、BSA、和PBS放入旋涡混合仪内共溶2min，共溶完毕后，反应12h；
S2，当S1完成后，将S1的共溶液放入冷冻离心机内，5000r/min离心15min，离心完毕后，取出上清液，并标记为A液；
S3，用电子天平称取12mg的强力霉素标准品（DC），取0.5mL的N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入烧杯内搅拌2min；
S4，用移液器取出S3内的混合液，并逐滴加入到A液内，避光反应4h；
S5，当S4完成后，将S4的共溶液放入冷冻离心机内，5000r/min离心15min，离心完毕后，取出上清液，并标记为B液；
S6，将B液放入烧杯内，取25mL磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5）作为透析液放入烧杯内，透析4h；
S7，当S6完成后，对液体进行过滤处理，即可得到DC-BSA抗原，将DC-BSA抗原分装成2mL/份；
S8，将DC-BSA抗原滴在检测卡的引水玻璃纤维上，8min后观察结果。
实施例3
一种强力霉素检测方法，包括：检测强力霉素的检测试剂和检测强力霉素的检测仪器，检测强力霉素的检测方法包括如下步骤：
S1，用电子天平分别称取10mg的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、15mg的水溶性碳二亚胺（EDC）、和180mg的牛血清白蛋白（BSA），取10mL的磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5，2mol/L），并将取出的NHS、EDC、BSA、和PBS放入旋涡混合仪内共溶3min，共溶完毕后，反应15h；
S2，当S1完成后，将S1的共溶液放入冷冻离心机内，5500r/min离心20min，离心完毕后，取出上清液，并标记为A液；
S3，用电子天平称取15mg的强力霉素标准品（DC），取0.8mL的N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入烧杯内搅拌3min；
S4，用移液器取出S3内的混合液，并逐滴加入到A液内，避光反应5h；
S5，当S4完成后，将S4的共溶液放入冷冻离心机内，5500r/min离心20min，离心完毕后，取出上清液，并标记为B液；
S6，将B液放入烧杯内，取30mL磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5）作为透析液放入烧杯内，透析5h；
S7，当S6完成后，对液体进行过滤处理，即可得到DC-BSA抗原，将DC-BSA抗原分装成2mL/份；
S8，将DC-BSA抗原滴在检测卡的引水玻璃纤维上，10min后观察结果。
其中：冷冻离心机就是利用离心力使得需要分离的不同物料得到加速分离的机器，其型号为X-15R；自动点膜机是对覆膜进行包被的一种机器，其型号为Matrix1060；旋涡混合仪能够对所需混合的液体、粉末以高速漩涡形式快速混合，其型号为vortex-5；电子天平是一种精密的称量仪器，其型号为AL204。
综上所述，该强力霉素检测方法及检测卡，若样品中DC的含量小于0.5mg/mL或者不含有DC时，则D线和C线均显红色，结果为阴性；若样品中DC的含量大于0.5mg/mL时，则D线不显色，C线显红色，结果为阳性；若C线不显色，D线不论显红色或不显色，结果均为无效。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下。由语句“包括一个......限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素”。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种强力霉素检测卡，包括制备检测卡的制作材料和制备检测卡的制作仪器，其特征在于：制备检测卡的制作方法包括如下步骤：
S1，取90mL的氯金酸溶液（浓度为0.01%）置于烧杯中，加热至煮沸，随即加入5mL的柠檬酸三钠溶液（10mg/mL），继续煮沸30min，直至颜色变为澄清透明红色胶体，即为稳定的金溶胶；
S2，取100mL配制好的金溶胶放入烧杯内，用0.1mol/L的K2CO3溶液调pH值至7.0；
S3，向S2的溶液内加入0.5mg抗DC单抗，继续搅拌混匀25min，搅拌完成后，加入0.3mL的牛血清白蛋白（BSA，100mg/mL），继续搅拌混匀10min；
S4，当S3完成后，将混合液放入冷冻离心机中，在5℃的环境下，3000r/min离心8min；
S5，当S4完成后，取出上清液，并在5℃的环境下，10000r/min离心8min，操作完成后，留取沉淀并标记为A粉，用PBS-BSA液（0.01mol/L，pH：7.2）对A粉进行溶解，即得金标记抗DC单抗溶胶；
S6，将玻璃纤维放入金标记抗DC单抗溶胶中，浸泡20min后，取出进行自然干燥，将TC-BSA和兔抗鼠IgG分别装入专用扫描笔中，在NC膜中部设定检测线（D线）和质控线（C线），宽度均为0.2cm，两者间距为1.5cm，启动自动点膜机进行包被，并做好标记，包被完成后，放入PBS-BSA液（0.01mol/L，pH：7.2）中，在4℃的环境下，封闭20h后，进行自然干燥；
S7，检测卡由PVC板和覆膜两部分组成，PVC板上的覆膜由前向后依次为玻璃纤维（包括引水玻璃纤维和载体玻璃纤维）、NC膜和吸水棉浆纸，色膜覆盖于吸水棉浆纸上，MARK标记膜覆盖于玻璃纤维上，载体玻璃纤维吸附有金标记抗TC单抗，NC膜内包被有D线和C线，各部件粘合固定组装好后，即可制作完成检测卡。
2.一种强力霉素检测方法，包括：检测强力霉素的检测试剂和检测强力霉素的检测仪器，其特征在于：检测强力霉素的检测方法包括如下步骤：
S1，用电子天平分别称取5-10mg的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、10-15mg的水溶性碳二亚胺（EDC）、和150-180mg的牛血清白蛋白（BSA），取5-10mL的磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5，2mol/L），并将取出的NHS、EDC、BSA、和PBS放入旋涡混合仪内共溶1-3min，共溶完毕后，反应10-15h；
S2，当S1完成后，将S1的共溶液放入冷冻离心机内，4500-5500r/min离心10-20min，离心完毕后，取出上清液，并标记为A液；
S3，用电子天平称取10-15mg的强力霉素标准品（DC），取0.2-0.8mL的N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入烧杯内搅拌1-3min；
S4，用移液器取出S3内的混合液，并逐滴加入到A液内，避光反应3-5h；
S5，当S4完成后，将S4的共溶液放入冷冻离心机内，4500-5500r/min离心10-20min，离心完毕后，取出上清液，并标记为B液；
S6，将B液放入烧杯内，取20-30mL磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5）作为透析液放入烧杯内，透析3-5h；
S7，当S6完成后，对液体进行过滤处理，即可得到DC-BSA抗原，将DC-BSA抗原分装成2mL/份；
S8，将DC-BSA抗原滴在检测卡的引水玻璃纤维上，5-10min后观察结果。
3.根据权利要求1所述的一种强力霉素检测卡，其特征在于：所述制备检测卡的制作材料包括：TC-BSA、抗DC单抗、兔抗鼠IgG、氯金酸溶液（HAuCl4·4H2O）、柠檬酸三钠溶液、K2CO3溶液、牛血清白蛋白（BSA）和PBS-BSA液（0.01mol/L，pH：7.2）。
4.根据权利要求1所述的一种强力霉素检测卡，其特征在于：所述制备检测卡的制作仪器包括：冷冻离心机、自动点膜机、玻璃纤维、PVC板、吸水棉浆纸、NC膜、覆膜、色膜、MARK标记膜和烧杯。
5.根据权利要求2所述的一种强力霉素检测方法，其特征在于：所述检测强力霉素的检测试剂包括：强力霉素样品（DC）、牛血清白蛋白（BSA）、水溶性碳二亚胺（EDC）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和磷酸盐缓冲液(PBS，pH：7.5）。
6.根据权利要求2所述的一种强力霉素检测方法，其特征在于：所述检测强力霉素的检测仪器包括：旋涡混合仪、冷冻离心机、电子天平、移液器、烧杯若干和搅拌棒若干。
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