CN106771151B - 一种可偶联抗体的酵母的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种可偶联抗体的酵母的制备方法，利用高碘酸钠、双酰肼类化合物、双醛类化合物和酸性缓冲液，制备可偶联抗体的酵母，由此生物偶联修饰的酵母可以结合抗体，用于流式微球免疫分析、酶联免疫分析、电化学发光/化学发光免疫分析、以及亲和层析、免疫沉淀等生物技术领域。本发明的一种可偶联抗体的酵母的制备方法具有简便、高效和稳定的显著优点。

Description

一种可偶联抗体的酵母的制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种可偶联抗体的酵母的制备方法。
背景技术
在生物技术领域，可结合(偶联)抗体的微球广泛用于免疫分析(包括流式微球免疫分析、酶联免疫分析、电化学发光/化学发光免疫分析等)、免疫沉淀和亲和层析。目前常见的微球为细菌和聚苯乙烯微球。金黄色葡萄球菌表面有蛋白A(protein A)，能通过蛋白A与抗体Fc段识别而与抗体结合。基于此特性，金黄色葡萄球菌可以与特异性抗体结合用于免疫分析、免疫沉淀和亲和层析。羧基修饰的聚苯乙烯微球能通过羧基与抗体的伯胺发生缩合反应，进而与抗体结合。羧基聚苯乙烯微球常用于流式微球免疫分析、酶联免疫分析、电化学发光/化学发光免疫分析等。此外，聚苯乙烯微球也可包被蛋白A，用于免疫沉淀和亲和层析。
但是，由于蛋白A只能与一些哺乳动物的IgG、IgM、IgA抗体结合，导致金黄色葡萄球菌的使用受限；聚苯乙烯微球虽然使用方便，但制备过程繁冗、质量控制不易。发展一种方法简明、性质稳定、应用广泛的可偶联抗体的微球具有重大价值。
发明内容
针对已有可偶联抗体的微球的不足，本发明提供了一种可偶联抗体的酵母的制备方法，能快速制备性质稳定、应用广泛的可结合抗体的酵母。
本发明的技术方案如下：
一种可偶联抗体的酵母的制备方法，步骤如下：
(1) 称取酵母粉溶于磷酸盐缓冲液中，pH 7.2；
(2) 96孔滤板中，真空抽滤洗涤酵母2次，重悬于含高碘酸钠的酸性缓冲液中，4℃反应30分钟；
(3) 洗涤2次，重悬于含双酰肼类化合物的酸性缓冲液中，室温反应6小时；
(4) 洗涤2次，重悬于含双醛类化合物的酸性缓冲液中，室温反应6小时；
(5) 洗涤2次，重悬于酸性缓冲液中，4℃保存备用。
上述步骤(1)中的酵母浓度为1×104个/mL-1×108个/mL，(2)中高碘酸钠的浓度为0.5%-20%，(3)中的双酰肼类化合物的浓度为0.5%~10%，(4)中双醛类化合物的浓度为0.1%-20%，(2)-(5)中的酸性缓冲液的pH值范围为2.0-6.9。
本发明的上述方法，酵母表面的糖基被高碘酸钠氧化为醛基，醛基再偶联双酰肼类化合物中的一个酰肼基；双酰肼类化合物中的另一个酰肼基继续偶联双醛类化合物中醛基；双醛基化合物中的另一个醛基可与抗体的氨基结合，由此生物偶联修饰的酵母可以结合抗体，用于流式微球免疫分析、酶联免疫分析、电化学发光/化学发光免疫分析、免疫沉淀和亲和层析、等。图1是可偶联抗体的酵母的制备流程图。
所述的酸性缓冲液选自甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、2-吗啉代乙磺酸(MES)缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液之一或组合。
所述的酸性缓冲液pH值范围2.0-6.9。
所述的双酰肼类化合物选自乙二酰肼、马来酸二酰肼、乙二酸二酰肼、己二酸二酰肼、葵二酸二酰肼、草酸二酰肼之一或组合。
所述的双醛类化合物选自乙二醛、丁二醛、己二醛、戊二醛、辛二醛之一或组合。
本发明所述的酵母可以通过市场购买，也可以使用常规方法培养获得。
本发明的优选技术方案如下：
(1) 称取2mg干酵母粉溶于磷酸盐缓冲液中，pH 7.2；
(2) 96孔滤板中，真空抽滤洗涤酵母2次，重悬于含2%高碘酸钠的酸性缓冲液中，pH 5.6，4℃反应30分钟；
(3) 洗涤2次，重悬于含2%双酰肼类化合物的酸性缓冲液中，pH5.6，室温反应6小时；
(4) 洗涤2次，重悬于含2%双醛类化合物的酸性缓冲液中，pH5.6，室温反应6小时；
(5) 洗涤2次，重悬于酸性缓冲液中，pH5.6，4℃保存备用。
本发明一种可偶联抗体的酵母的制备方法，包括酵母、高碘酸钠、双酰肼类化合物、双醛类化合物、酸性缓冲液，其特点在于利用高碘酸钠、双酰肼类化合物、双醛类化合物、酸性缓冲液，修饰酵母表面糖基形成末端为醛基的长链“空间臂”，此“空间臂”末端的醛基在碳二亚胺的介导下可与抗体氨基结合，进而达到酵母偶联(结合)抗体的目的，能应用于流式微球免疫分析、酶联免疫分析、电化学发光/化学发光免疫分析、免疫沉淀和亲和层析等生物技术领域。与现有方法比较，本发明一种可偶联抗体的酵母的制备方法具有简便、高效及稳定等显著优点。
本发明是一种简便、高效、稳定的可偶联抗体的酵母的制备方法，能广泛应用于免疫分析、免疫沉淀和亲和层析等生物技术领域。
附图说明
图1是可偶联抗体的酵母的制备流程图；
图2是藻红蛋白标记的羊抗鼠抗体识别与酵母偶联的鼠源抗体的流式验证图。
具体实施方式
下面给出本发明的实施例，这是对本发明的进一步说明，而不是限制本发明的范围。
实施例中使用的酵母是市售酿酒酵母，高碘酸钠、双酰肼类化合物、双醛类化合物为市售分析纯，鼠源抗体、藻红蛋白标记的羊抗鼠抗体为美国BD公司产品。
实施例1、可偶联抗体的酵母的制备方法
称取2mg干酿酒酵母粉溶于磷酸盐缓冲液中，pH 7.2；96孔滤板中，真空抽滤洗涤酵母2次，重悬于含2%高碘酸钠的MES液中，pH 5.6，4℃反应30分钟；抽滤洗涤2次，重悬于含2%己二酸二酰肼的MES液中，pH 5.6，室温反应6小时；抽滤洗涤2次，重悬于含2%戊二醛的MES液中，pH5.6，室温反应6小时；抽滤洗涤2次，重悬于MES缓冲液中，pH5.6，4℃保存，制得可偶联抗体的酵母。图2是藻红蛋白标记的羊抗鼠抗体识别与酵母偶联的鼠源抗体的流式验证图，藻红蛋白荧光强度为5979.85，表明本实施例中的酵母能与鼠源抗体偶联。
实施例2、可偶联抗体的酵母的制备方法，步骤如下:
称取2mg干酿酒酵母粉溶于磷酸盐缓冲液中，pH 7.2；96孔滤板中，真空抽滤洗涤酵母2次，重悬于含2%高碘酸钠的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，pH 5.6，4℃反应30分钟；抽滤洗涤2次，重悬于含2%马来酸二酰肼的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，pH5.6，室温反应6小时；抽滤洗涤2次，重悬于含2%丁二醛的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，pH5.6，室温反应6小时；抽滤洗涤2次，重悬于磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，pH5.6，4℃保存，制得可偶联抗体的酵母。

Claims (5)

1.一种可偶联抗体的酵母的制备方法，其特征在于，包括：
酵母、高碘酸钠、酸性缓冲液、双酰肼类化合物、双醛类化合物；
包含以下步骤:
(1) 称取酵母粉溶于磷酸盐缓冲液中，pH 7.2；
(2) 96孔滤板中，真空抽滤洗涤酵母2次，重悬于含高碘酸钠的酸性缓冲液中，4℃反应30分钟；
(3) 洗涤2次，重悬于含双酰肼类化合物的酸性缓冲液中，室温反应6小时；
(4) 洗涤2次，重悬于含双醛类化合物的酸性缓冲液中，室温反应6小时；
(5) 洗涤2次，重悬于酸性缓冲液中，4℃保存备用。
2.如权利要求1所述的可偶联抗体的酵母的制备方法，其特征在于所述的酸性缓冲液pH值范围为2.0-6.9。
3.如权利要求1所述的可偶联抗体的酵母的制备方法，其特征在于所述的双酰肼类化合物选自乙二酰肼、马来酸二酰肼、乙二酸二酰肼、己二酸二酰肼、葵二酸二酰肼、草酸二酰肼之一或组合。
4.如权利要求1所述的可偶联抗体的酵母的制备方法，其特征在于所述的双醛类化合物选自乙二醛、丁二醛、己二醛、戊二醛、辛二醛之一或组合。
5.如权利要求1所述的可偶联抗体的酵母的制备方法，其特征在于所述的酸性缓冲液选自甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、2-吗啉代乙磺酸(MES)缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液之一或组合。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5412083A (en) * 1992-04-16 1995-05-02 Northeastern University Carbohydrate heterobifunctional cross-linking reagent
CN1241634A (zh) * 1998-06-29 2000-01-19 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 肌醇六磷酸酶制剂

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040229810A1 (en) * 2002-10-22 2004-11-18 Antonio Cruz Gastrin compositions and formulations, and methods of use and preparation
US8679484B2 (en) * 2005-03-02 2014-03-25 Polyrizon Ltd. Method for removal of toxins from mucosal membranes

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5412083A (en) * 1992-04-16 1995-05-02 Northeastern University Carbohydrate heterobifunctional cross-linking reagent
CN1241634A (zh) * 1998-06-29 2000-01-19 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 肌醇六磷酸酶制剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Surface decorated S.cerevisiae for flow cytometric array immunoassay;wen jun lan等;《Analytical Bioanalytical chemistry》;20170704;第409卷(第22期);全文
细菌偶联融合蛋白信号流式传导的研究;闫磊;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医疗卫生科技辑》;20140415(第4期);全文

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