CN106770852B - 一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法 - Google Patents
一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106770852B CN106770852B CN201710039600.2A CN201710039600A CN106770852B CN 106770852 B CN106770852 B CN 106770852B CN 201710039600 A CN201710039600 A CN 201710039600A CN 106770852 B CN106770852 B CN 106770852B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sugar
- solvent
- adverse current
- current chromatogram
- phase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002904 solvent Substances 0.000 title claims abstract description 37
- 230000002411 adverse Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 26
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 25
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 24
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 12
- HZQXXYJHLCSUGQ-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate hexane methanol hydrate Chemical group O.OC.CCCCCC.CCOC(C)=O HZQXXYJHLCSUGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- -1 galactolipin Chemical compound 0.000 claims description 8
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims description 3
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 2
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 20
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 45
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241000332747 Dysosma versipellis Species 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 13
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 13
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 13
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 8
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 7
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N podophyllotoxin Chemical class COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QGBSISYHAICWAH-UHFFFAOYSA-N dicyandiamide Chemical compound NC(N)=NC#N QGBSISYHAICWAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000004185 countercurrent chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- AZLPEJUVWWGLHA-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane;methanol Chemical compound OC.CCCCCC.CCOC(C)=O AZLPEJUVWWGLHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- ODDQLMIHEILGPJ-UHFFFAOYSA-N O.OC.CC(O)=O.CCCCCC Chemical compound O.OC.CC(O)=O.CCCCCC ODDQLMIHEILGPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- FVIZARNDLVOMSU-UHFFFAOYSA-N ginsenoside K Natural products C1CC(C2(CCC3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O FVIZARNDLVOMSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 238000009923 sugaring Methods 0.000 description 2
- 206010019133 Hangover Diseases 0.000 description 1
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000000205 computational method Methods 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N ethyl acetoacetate Chemical compound CCOC(=O)CC(C)=O XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/38—Flow patterns
- G01N30/42—Flow patterns using counter-current
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法，该方法是利用糖来增加天然产物分配系数和选择逆流色谱溶剂，具体是将一系列不同剂量的糖加入已选定的两相体系中并彻底混匀，分析糖剂量与分配系数的关系，然后根据这一关系确定需要的糖剂量，从而确定合适的逆流色谱溶剂的组成。采用该方法可以很容易的获得合适的溶剂，使得目标化合物在这一溶剂中具有合适的K值，尤其适用于成分复杂的天然产物，该方法简单实用，可大大减少逆流色谱溶剂选择的难度和时间，便于推广应用。
Description
技术领域
本发明属于逆流色谱技术领域，涉及一种确定逆流色谱溶剂的方法，尤其涉及一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法。
背景技术
逆流色谱是一种无需固相载体的全液－液相分配色谱，由于其不使用固相载体而仅使用液相作固定相，因此与其它色谱相比，逆流色谱有显著的优势，不仅可以避免固相载体造成的吸附、变性、拖尾等不利因素，使样品几乎100％回收，而且对于一些结构类似而分配系数不同的化合物，也常常有较好的选择性。此外，逆流色谱也容易较好地与其它色谱进行联用，解决分离中的问题。但是，由于天然产物成分复杂，逆流色谱分离天然产物仍有很多挑战，其关键还是在于两相分配。选择合适的溶剂体系是逆流色谱分离过程中的第一步也是最重要的一步，约占据了整个工作量的90％。尽管已经存在许多两相溶剂体系家族和相对应的溶剂选择策略，例如在Ito规律上建立的Ito溶剂体系、Arizona溶剂体系、以薄层色谱为基础的HEMWat溶剂体系猜测法、九九表式定向溶剂选择策略和别的以实验为基础的计算方法。但是选择合适的溶剂仍然需要专业的知识并且非常繁琐和耗时。因此，选择一个合适的溶剂，使目标化合物在这一溶剂中具有合适的K值，仍是当前研究的重点和难点。
发明内容
本发明的目的是针对上述现有逆流色谱分离过程中溶剂选择复杂、耗时长、需要专业知识等缺点，提供一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法，经大量实验验证该方法是一种可行且简单的溶剂选择策略，可以快速地分离高纯度的黄酮类化合物和鬼臼毒素类化合物。
本发明提供一种利用糖来增加天然产物分配系数和选择逆流色谱溶剂的方法，该方法是将一系列不同质量分数的糖的水溶液加入已选定的两相溶剂中并彻底混匀得到两相体系，分析糖剂量与分配系数的关系，然后根据所需的分配系数确定合适的糖剂量，从而获得逆流色谱溶剂的组成。
上述技术方案中，所述的糖是蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖、山梨糖、甘露糖、鼠李糖、木糖中的一种或多种组合。
上述的用来调节分配系数以获得糖剂量与分配系数关系的糖水溶液的质量分数可以是5-30％。
所述的两相体系是正己烷－乙酸乙酯－甲醇－糖的水溶液。
本发明的有益效果在于：
该方法简单实用，可大大减少逆流色谱溶剂选择的难度和时间，便于推广应用。
(1)糖是一种甜的、短链、可溶性的碳水化合物。作为添加剂，和盐析制备化合物的策略相比，糖析制备的策略更绿色更环保，不会产生盐腐蚀等并发症。
(2)本发明中添加糖到正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水的两相体系，可以改变溶剂以及化合物在两相体系中的分配，从而可以快速有效地找到合适的溶剂体系。
(3)采用正己烷、乙酸乙酯、甲醇、糖的水溶液两相体系进行逆流色谱分离，可以实现高纯度的逆流色谱制备。
(4)当吸附有含糖的纯品的反相C18色谱柱用甲醇和水洗脱时，也可良好地实现逆流色谱和柱色谱的连用，提高单位时间的生产效率，同时也降低能耗；也可以重复进行，便于自动化生产。
附图说明
图1在正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4:6:4:6，v/v)体系中，蔗糖与化合物K值关系图；
图2.在正已烷－乙酸乙酯－甲醇－水(5:5:5:5，v/v)体系中，蔗糖与化合物K值关系图；
图3.在正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4.5:5.5:4.5:5.5，v/v)体系中，蔗糖与化合物K值关系图；
图4.每种糖对化合物在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-20％糖溶液4.5:5.5:4.5:5.5(v/v)中分配系数的影响关系图；
图5.糖影响两相的溶剂分配；
图6.逆流色谱分离过程中，八角莲粗品在不加糖的两相体系和质量分数为20％蔗糖的体系(4:6:4:6v/v)中的糖析作用比较。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步的描述。
实施例1：
黄酮类化合物和鬼臼毒素类化合物的物理性质测定，包括以下步骤：
1、提取和富集
首先八角莲提取液直接进行柱色谱吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯体积比2:1进行洗脱，除去大极性杂质，收集洗脱液。洗脱液中化合物的物理性质根据ChemBioOffice Ultra 13.0,Cambridge Soft计算如表1所示。当石油醚和乙酸乙酯体积比2:1洗脱得到的粗产品包括亲水性的鬼臼毒素类化合物和疏水性的黄酮类化合物。
表1.所选择的化合物物理性质b
b根据ChemBioOffice Ultra 13.0,Cambridge Soft计算
实施例2：
黄酮类化合物和鬼臼毒素类化合物在以蔗糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4:6:4:6，v/v)体系中的分配系数测定，包括以下步骤：
1、提取和富集
同实施例1类似，首先八角莲提取液直接进行柱色谱吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯体积比2:1进行洗脱，除去大极性杂质，收集洗脱液。
2.糖溶液配制
将蔗糖溶解到一定质量的水中分别配制形成质量浓度10％、20％、30％的糖溶液。
3.八角莲中化合物在以蔗糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4:6:4:6，v/v)体系中的分配系数的测定
将八角莲粗品加入到装有两相体系体积比为4：6：4：6的2mL离心管中，包括正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水或者一定糖浓度的水溶液。两相溶剂平衡建立以后，分别取上相和下相进行HPLC分析。HPLC分析条件为：C18反相色谱柱(Zorbax SB-C18,250mm×4.6mmI.D.,5μm)，保护柱(10mm×4.6mm I.D.,5μm)；流动相为甲醇和0.1％三氟乙酸(TFA)。洗脱采用梯度模式，具体参数如下：0-5min，甲醇由10％梯度变化到30％，三氟乙酸由90％梯度变化到70％；5-35min，甲醇由30％梯度变化到70％，三氟乙酸由70％梯度变化到30％；35-45min,甲醇由70％梯度变化到100％，三氟乙酸由30％梯度变化到0％。流速为0.8mL/min，样本进样量10μL,柱温控制在30℃。洗脱物利用DAD检测器进行检测，检测波长为254nm。分配系数为化合物在上相的峰面积和下相的峰面积的比值。结果表明(图1)八角莲粗品以不同浓度的蔗糖为添加剂的两相体系中的分配系数变化，在正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4:6:4:6，v/v)体系中，蔗糖明显地增加化合物的K值。
实施例3：
黄酮类化合物和鬼臼毒素类化合物在以蔗糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(5:5:5:5，v/v)体系中的分配系数测定，包括以下步骤：
1、提取和富集
同实施例1类似，首先八角莲提取液直接进行柱色谱吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯体积比2:1进行洗脱，除去大极性杂质，收集洗脱液。
2.糖溶液配制
将蔗糖溶解到一定质量的水中分别配制形成质量浓度10％、20％、30％的糖溶液。
3.八角莲中化合物在以蔗糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(5:5:5:5，v/v)体系中的分配系数的测定
将八角莲粗品加入到装有两相体系体积比为5：5：5：5的2mL离心管中，包括正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水或者一定糖浓度的水溶液。两相溶剂平衡建立以后，分别取上相和下相进行HPLC分析。HPLC分析条件同实施例2相同，分配系数为化合物在上相的峰面积和下相的峰面积的比值。结果表明(图2)八角莲粗品以不同浓度的蔗糖为添加剂的两相体系中的分配系数变化，在正已烷－乙酸乙酯－甲醇－水(5:5:5:5，v/v)体系中，蔗糖明显地增加化合物的K值。
实施例4：
黄酮类化合物和鬼臼毒素类化合物在以蔗糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4.5:5.5:4.5:5.5，v/v)体系中的分配系数测定，包括以下步骤：
1、提取和富集
同实施例1类似，首先八角莲提取液直接进行柱色谱吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯体积比2:1进行洗脱，除去大极性杂质，收集洗脱液。
2.糖溶液配制
将蔗糖溶解到一定质量的水中分别配制形成质量浓度10％、20％、30％的糖溶液。
3.八角莲中化合物在以蔗糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4.5:5.5:4.5:5.5，v/v)体系中的分配系数的测定
将八角莲粗品加入到装有两相体系体积比为4.5:5.5:4.5:5.5的2mL离心管中，包括正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水或者一定糖浓度的水溶液。两相溶剂平衡建立以后，分别取上相和下相进行HPLC分析。HPLC分析条件同实施例2相同，分配系数为化合物在上相的峰面积和下相的峰面积的比值。结果表明(图3)八角莲粗品以不同浓度的蔗糖为添加剂的两相体系中的分配系数变化，在正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4.5:5.5:4.5:5.5，v/v)体系中，蔗糖明显地增加化合物的K值。
实施例5：
黄酮类化合物和鬼臼毒素类化合物在分别以葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖、山梨糖、甘露糖、鼠李糖、木糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4.5:5.5:4.5:5.5，v/v)体系中的分配系数测定，包括以下步骤：
1、提取和富集
同实施例1类似，首先八角莲提取液直接进行柱色谱吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯体积比2:1进行洗脱，除去大极性杂质，收集洗脱液。
2.糖溶液配制
将每种糖溶解到一定质量的水中分别配制形成质量浓度10％、20％、30％的糖溶液。
3.八角莲中化合物在以糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水(4.5:5.5:4.5:5.5，v/v)体系中的分配系数的测定
将八角莲粗品加入到装有两相体系体积比为4.5:5.5:4.5:5.5的2mL离心管中，包括正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水或者一定糖浓度的水溶液。两相溶剂平衡建立以后，分别取上相和下相进行HPLC分析。HPLC分析条件同实施例2相同，分配系数为化合物在上相的峰面积和下相的峰面积的比值。结果表明(图4)八角莲粗品以不同糖种类以及不同浓度的糖为添加剂的两相体系中的分配系数变化，每种糖对化合物在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-20％糖溶液4.5:5.5:4.5:5.5(v/v)中分配系数的影响都有些不同。
实施例6：
1、提取和富集
同实施例1类似，首先八角莲提取液直接进行柱色谱吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯体积比2:1进行洗脱，除去大极性杂质，收集洗脱液。
2.糖溶液配制
将蔗糖溶解到一定质量的水中分别配制形成质量浓度10％、20％、30％的糖溶液。
3.以糖为添加剂的正己烷－乙酸乙酯－甲醇－蔗糖水水溶液体系配制将八角莲粗品加入到装有两相体系体积比为4:6:4:6和4.5:5.5:4.5:5.5的定容瓶，包括正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水或者一定蔗糖浓度的水溶液。结果表明(图5)糖影响两相的溶剂分配。
实施例7：
1、提取和富集
同实施例1类似，首先八角莲提取液直接进行柱色谱吸附和富集，然后用石油醚和乙酸乙酯体积比2:1进行洗脱，除去大极性杂质，收集洗脱液。作为进一步逆流色谱分离的样品。
2.糖溶液配制
将葡萄糖溶解到一定体积的水中配制形成质量分数为20％的糖溶液。例如，250g葡萄糖溶解到1000mL(1000g)中，得到质量分数为20％的蔗糖溶液。
3.逆流色谱分离及纯品脱糖
将所得到的250mg八角莲粗品进行逆流色谱(900rpm，柱体积260mL)分离。溶剂体系为正己烷、乙酸乙酯、甲醇和质量分数为20％蔗糖水溶液(4:6:4:6v/v)，上相为固定相，下相为保留相，流速3mL/min。CCC洗脱，如图6为逆流色谱分离过程中，八角莲粗品在不加糖的两相体系和质量分数为20％蔗糖的体系(4:6:4:6v/v)中的糖析作用比较。各个馏分在波长254nm检测。根据CCC洗脱图6,主峰部分收集在离心管中，并且每根离心管收集4min。
Claims (3)
1.一种利用糖来优化逆流色谱溶剂的方法，其特征在于,该方法为将一系列不同质量分数的糖的水溶液加入已选定的两相溶剂中，彻底混匀得到两相体系，获取糖剂量与分配系数的关系，根据所需的分配系数获得相对应的糖剂量，从而确定出逆流色谱溶剂；所述的糖是蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、半乳糖、山梨糖、甘露糖、鼠李糖、木糖中的一种或多种组合，所述的两相溶剂是正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水。
2.根据权利要求1所述的利用糖来优化逆流色谱溶剂的方法，其特征在于，所述的糖的水溶液质量分数是5-30%。
3.根据权利要求1所述的利用糖来优化逆流色谱溶剂的方法，其特征在于，所述的两相体系是正己烷－乙酸乙酯－甲醇－糖的水溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710039600.2A CN106770852B (zh) | 2017-01-19 | 2017-01-19 | 一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710039600.2A CN106770852B (zh) | 2017-01-19 | 2017-01-19 | 一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106770852A CN106770852A (zh) | 2017-05-31 |
| CN106770852B true CN106770852B (zh) | 2018-08-07 |
Family
ID=58944212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710039600.2A Active CN106770852B (zh) | 2017-01-19 | 2017-01-19 | 一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106770852B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111157646B (zh) * | 2020-01-03 | 2023-02-03 | 山东中医药大学 | 一种高速逆流色谱溶剂系统高通量筛选方法及应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101353363B (zh) * | 2008-09-09 | 2011-02-09 | 广西师范大学 | 高速逆流色谱分离纯化罗汉果叶黄酮化合物的方法及产品 |
| JP5668206B2 (ja) * | 2010-12-06 | 2015-02-12 | 株式会社サウスプロダクト | クロロフィルｃおよび／またはキサントフィルを分離精製する方法 |
| CN102702289A (zh) * | 2012-06-05 | 2012-10-03 | 曲靖师范学院 | 应用高速逆流色谱法从大叶白麻中纯化三种黄酮苷的方法 |
| CN103610800A (zh) * | 2013-11-13 | 2014-03-05 | 浙江大学 | 从瓯柑油胞层中分离纯化七种黄酮类化合物的方法 |
-
2017
- 2017-01-19 CN CN201710039600.2A patent/CN106770852B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106770852A (zh) | 2017-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ma et al. | Separation of four flavonoids from Rhodiola rosea by on-line combination of sample preparation and counter-current chromatography | |
| CN103304613B (zh) | 一种从瓜蒌皮中分离纯化4种核苷类化学成分的方法 | |
| CN105717207A (zh) | 一种同时检测食品中多种糖及糖醇的方法 | |
| Zhao et al. | The isolation of 1, 2, 3, 4, 6-penta-O-galloyl-beta-D-glucose from Acer truncatum Bunge by high-speed counter-current chromatography | |
| Kou et al. | An integrated strategy for production of four anthocyanin compounds from Ribes nigrum L. by deep eutectic solvents and flash chromatography | |
| CN106770852B (zh) | 一种利用糖来优选逆流色谱溶剂的方法 | |
| Carmali et al. | Recovery of lupanine from Lupinus albus L. leaching waters | |
| CN102321135A (zh) | 一种利用高速逆流色谱分离纯化虫草素的方法 | |
| CN105601693B (zh) | 人参皂苷f1的制备及其抗肿瘤作用 | |
| Yang et al. | A sample pretreatment strategy for pH-zone-refining counter-current chromatography | |
| CN105111061B (zh) | 一种抗肿瘤活性化合物的制备方法 | |
| CN103995079A (zh) | β-胡萝卜素提取物中β-胡萝卜素含量的定量检测方法 | |
| CN108017554B (zh) | 一种从海洋球石藻中提取神经酰胺的方法 | |
| CN107778337B (zh) | 超临界二氧化碳萃取螺旋藻中糖脂的方法 | |
| CN104399280A (zh) | 一种富集纯化化合物的装置及其使用方法 | |
| CN103012519B (zh) | 一种兽用抗生素阿维拉霉素分离纯化的方法 | |
| Du et al. | Excellent combination of counter-current chromatography and preparative high-performance liquid chromatography to separate galactolipids from pumpkin | |
| CN102617656B (zh) | 从对萼猕猴桃叶中分离制备高纯度黄酮苷类化合物的方法 | |
| CN104892686A (zh) | 一种黄绿蜜环菌子实体核苷类化合物的分离纯化方法 | |
| CN104130127B (zh) | 一种从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法 | |
| Sun et al. | Separation of salidroside from the fermentation broth of engineered Escherichia coli using macroporous adsorbent resins | |
| CN104083453A (zh) | 一种水蓼总黄酮的提取方法 | |
| CN106749303B (zh) | 一种制备鬼臼毒素和八角莲双黄酮及其类似物的方法 | |
| CN110066306A (zh) | 一种异鼠李素-3-o-新橙皮苷制备液相色谱分离方法 | |
| CN108409804A (zh) | 一种分离东魁杨梅叶中杨梅素3-o(3〞-o-没食子酰基)-鼠李糖吡喃糖苷的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |