CN106754542A - 一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌sr9‑3及用途 - Google Patents

一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌sr9‑3及用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9‑3，其特征是：从贵州少数民族传统发酵酸肉中分离得到的乳酸菌，经抗氧化试验并鉴定过的乳酸菌，鉴定结果为胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum) SR9‑3，于2016年9月26日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No:M 2016529；是一种功能性乳酸菌，特别在降低胆固醇和抗氧化方面具有良好的特性，对鸡蛋黄源的胆固醇去除率为21.98%，添加1%卵磷脂培养基中的胆固醇去除率为31.84%；抗氧化方面，总还原能力为24.62%，DPPH·和·OH清除能力分别为46.32%、257.92%，抗脂质过氧化能力为67.13%。该菌株具有开发益生菌株的潜力，应用于保健食品或发酵食品当中。

Description

一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9-3及 用途
技术领域
本发明涉及一种微生物，进一步来说，涉及一株能够降低胆固醇和抗氧化功能的胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SR9-3，及其筛选方法和工业用途。
背景技术
医学研究证明，人体血清胆固醇含量升高被认为是诱发动脉粥样硬化、冠心病等心血管疾病的最主要危险因素之一。临床研究也表明，正常血清胆固醇水平为 5.20mmol/L，超过正常值的1mmol，冠心病发生几率增加35%，而减少1%的血清胆固醇水平可能降低2%-3%的患病风险。此外，活性氧自由基等会引起机体代谢异常，从而造成一些疾病。
益生菌(Probiotics)是一类能够改善宿主特定部位微生物平衡并兼有其他益生生理功能的微生物，这类微生物可以通过改善肠道微生物的平衡来控制肠道菌群紊乱引起的肠道疾病，具有抗氧化活性，也能够降低胆固醇水平，也可通过对乳的发酵进而改善乳糖不耐症人群对乳糖的利用，能够通过非特异性或特异性免疫反应，增强免疫作用。益生菌制品中活菌应当代谢稳定，活性强，经过消化道能够大量存活并在肠道内定植而发挥益生功能。当前应用于生产益生菌剂的优良乳酸菌主要有乳杆菌属、双歧杆菌属、乳球菌属中部分菌种等。
乳酸菌(lactic acid bacteria, LAB)是一类能够利用糖类物质产生主要产物之一的乳酸的一类细菌的通称。它们在自然界分布广泛，且有丰富的物种多样性。
随着人们日常生活水平的提高，日常饮食的杂乱以及人们对健康的追求，功能产品的需求逐渐增加，例如益生菌发酵乳产品、发酵肉制品等，不仅要求有良好的风味和滋味，更要有一定的功能特性。因此，寻找相对安全且具有良好发酵特性和良好功能活性的乳酸菌发酵剂势在必行。
目前，中国专利数据库中，涉及具有降胆固醇功能的胚芽乳杆菌的申请件不多，主要有 CN201010034128.1号《一株具有降胆固醇功能的胚芽乳杆菌及其应用》、CN201080045298.8《胚芽乳杆菌菌株用作降血胆固醇试剂》、CN201410272956.7《一株具有降低胆固醇能力的胚芽乳杆菌》、CN201510223068.0《一株具有降解胆固醇功能的胚芽乳杆菌L01及其应用》、CN201510038278.2《一种降胆固醇胚芽乳杆菌菌制剂发酵泡菜的方法》以及CN201510039808.5《一种降胆固醇胚芽乳杆菌I4增菌培养基响应面优化方法》等；而涉及具有抗氧化功能的胚芽乳杆菌的申请件也不多，主要有CN201510419415.7《一株具高抗氧化活性的胚芽乳杆菌及其应用》、CN201610188977.X《一株高抗氧化耐胆盐耐酸胚芽乳杆菌JR4及其应用》等。尽管有这些申请件，但仅单一涉及降胆固醇或抗氧化抗氧化功能。
然而，涉及具有降胆固醇和清除自由基的胚芽乳杆菌的专利申请件仅有CN201610182616.4《一株有效去除胆固醇和自由基的胚芽乳杆菌及其应用》，但并未涉及产酸性能、耐渗透压特性及抑菌特性，抗氧化方面，此件也未涉及到总还原能力和抗氧化能力的检验，该申请件中胆固醇测定方法采用P-Fe-S试剂显色法。研究已有报道，P-Fe-S法受很多因素影响，且检测结果不稳定。
发明内容
本发明结合降胆固醇和抗氧化能力两个内容进行筛选研究，筛选的菌种来源是选自少数民族原生态传统发酵酸肉制品。本发明的目的是提供一株具有良好降低胆固醇和抗氧化功能的胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum) SR9-3，以期将其开发为优良发酵制剂、保健食品或药品，使其能够具有降胆固醇和抗氧化的功能。
本发明另一目的是提供上述降胆固醇和抗氧化乳酸菌的筛选方法，使其具备特定的工业用途。
为达到上述目的，本发明提供的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌是从贵州少数民族传统发酵酸肉中分离得到的乳酸菌，经抗氧化试验并鉴定过的乳酸菌，鉴定结果为胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum) SR9-3，于2016年9月26日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No: M 2016529。保藏地址为中国武汉武汉大学。
所述一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌的筛选方法，包括以下步骤：
（1）实验室分离、筛选并鉴定出的乳酸菌中的胚芽乳杆菌SR9-3，该菌株分离筛选自贵州少数民族传统发酵酸肉中，用MRS肉汤培养基培养；
（2）通过酶沉淀法、邻苯二甲醛比色法鉴定筛选得到抗氧化活性菌株具有降胆固醇能力；
（3）通过总还原能力、DPPH·和·OH自由基清除能力以及抗脂质过氧化能力检验得出该菌株具有良好的抗氧化能力；
（4）通过产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力、耐渗透压能力以及抗菌活性的检验进行复筛，确定该菌株是否具有良好的产酸能力、是否耐受胃肠道环境、是否抑制致病菌，达到益生作用；具有良好的产酸能力、较强的耐酸、耐胆盐和耐渗透压能力以及抗菌能力。
上述步骤（2）中，所述酶沉淀法的步骤是：在普通的MRS肉汤培养基中加入2%的琼脂和5%的牛黄脱氧胆酸TDCA，划线培养乳酸菌，具有胆盐水解酶活性的乳酸菌菌落会呈现乳白菌落或白色菌落，即为具有降胆固醇能力的乳酸菌；
所述邻苯二甲醛比色法的步骤是将菌株分别接种于含有2.5%鸡蛋黄胆固醇来源的MRS液体培养基和胆固醇浓度为100μg/mL、含1%卵磷脂的MRS液体培养基中，于37℃生化培养箱中培养24h后测定其对胆固醇的清除能力，即准确吸取不同体积的胆固醇工作液于洁净的试管中，再以无水乙醇将体积补至1mL并用氮气吹干，然后向各试管中加入邻苯二甲醛OPA指示剂2mL，并于室温下静置10min；再向其中加入1mL浓硫酸，混合均匀后室温静置10min，空白对照以1mL无水乙醇代替胆固醇溶液，于波长550nm测定吸光值，以胆固醇浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，进行比色。
上述步骤（3）中，所述总还原能力的检验步骤为：取0.5mL菌悬液，加入浓度为0.2mol/L，pH 6.6的PBS溶液0.5mL及质量分数为1%的铁氰化钾0.5mL，于50℃水浴20min，急速冷却，再加入0.5mL 10%三氯乙酸，3500r/min离心5min，取上清液1mL，加入1mL蒸馏水，及质量分数为0.1%三氯化铁，混合均匀，10min后，于700nm处测定其吸光值，为As；用PBS代替菌悬液，为Ab；计算公式如下：
还原能力(%)=［(As—Ab)/ Ab］×100；
所述DPPH·清除能力的检验步骤为：反应时1mL菌液中加入1mL 0.2mmol/L DPPH·，室温下避光反应30min，3500r/min离心10min，在517nm处测定上清液吸光度；
菌株对DPPH·的清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/ Ac]×100；
注：Ai为1mL DPPH·+1mL样品的吸光度，
Aj为1mL PBS +1mL样品的吸光度，
Ac为1mL DPPH·+1mL PBS的吸光度；
所述·OH清除能力的检验步骤为：取1mL 0.75mM邻二氮菲于试管中，依次加入pH 7.4的PBS 2mL，蒸馏水1mL，充分混匀后，加入1mL 0.75mM的FeSO4，混匀，加1mL 0.12% H2O2，置于37℃水浴90 min，于536nm处测其吸光度值为Ap；用1mL蒸馏水代替1mL H2O2，为Ab；用1mL菌悬液代替1mL的蒸馏水，为As；
·OH清除率(%)=(As-Ap)/(Ab-Ap)×100；
所述抗脂质过氧化能力的检验步骤为：新鲜蛋黄中加入等体积的pH7.4的PBS ，磁力搅拌10min后，加入PBS稀释成1︰25的蛋黄悬液；将1mL蛋黄悬液，0.5mL菌悬液，1mL PBS和1mL、25mM 的FeSO4 溶液混匀，37℃保温振荡15min；然后加入1mL 20%的三氯乙酸溶液，静置10min，3500r/min，离心10min；取上清液3mL加入2mL 0.8%的TBA，混匀后沸水浴中加热10min；冷却后于532nm处测定吸光度；
脂质过氧化抑制率%=[(Ao–As)/Ao]×100；
注：Ao为对照组吸光度，As为样品吸光度。
上述步骤（4）中，所述产酸能力的检验步骤为：将菌株以3%的接种量接种于新鲜的MRS肉汤培养基中，37℃静置培养24h，于10000r/min离心10min，收集上清液；以不接种乳酸菌的MRS肉汤培养基为空白，采用pH计法测定发酵液pH值以确定乳酸菌的产酸特性；
所述耐酸能力的检验方法是：将菌株以3%的接种量接种于pH分别为1.5、2.5、3.5、4.5、5.5的新鲜MRS肉汤培养基中，37℃静置培养24h，于600nm处测定菌液的吸光值，以各自对应pH值培养基作调零；
所述耐胆盐能力的检验步骤为：将菌株以3%的接种量接种于胆盐质量分数分别为0.1%和0.3%的新鲜MRS肉汤培养基中，37℃静置培养0、2h、24h，分别于600nm处测定菌液的吸光值，以各自对应胆盐浓度的培养基作调零；
所述耐渗透压能力的检验步骤为：将菌株以3%的接种量接种于MRS肉汤培养基中，调整培养基的初始NaCl浓度值分别为 0%、2%、4%、6%、8%、10%，置于37 ℃下培养0、2、4、8、24h，测定菌悬液在600nm处的OD600值；
所述抗菌活性的检验步骤是：将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌指示菌制备成菌悬液，接种于牛肉膏蛋白胨平板，贴入含有胚芽乳杆菌菌株发酵液的纸片，分别放入各指示菌对应的最适生长温度进行培养，24h后测量抑菌圈大小。
本发明的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌是一种功能性乳酸菌，特别在降低胆固醇和抗氧化方面具有良好的特性，对鸡蛋黄源的胆固醇去除率为21.98%，添加1%卵磷脂培养基中的胆固醇去除率为31.84%；抗氧化方面，总还原能力为24.62%，DPPH·和·OH清除能力分别为46.32%、257.92%，抗脂质过氧化能力为67.13%；用途是开发成发酵菌剂、保健食品或药品，长期服用可改善肠道菌群，降低血清胆固醇，清除机体有害自由基，提高机体的免疫能力；或将其投入到发酵制品中，缩短发酵周期，提高发酵制品的营养和功能，改善产品风味和滋味，开发具有降胆固醇和抗氧化双重功能的功能性食品。
本发明所用胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SR9-3是从少数民族农户采用传统方法自制的发酵酸肉中分离纯化出来的一种益生乳酸菌，具有降低胆固醇的能力，还具有抗氧化功能活性。该菌株降低胆固醇的机理是胚芽乳杆菌(Lactobacillusplantarum)SR9-3能够吸收同化和共沉淀胆固醇以及产生胆盐水解酶来降低胆固醇含量。
附图说明
图1 是本发明菌株胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum) SR9-3的菌落形态；
图2 是本发明菌株胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum) SR9-3的菌体形态；
图3 是本发明菌株SR9-3划线筛选---酶沉淀法；
图4 是胆固醇标准曲线；
图5 是耐酸能力；
图6 是耐胆盐能力；
图7 是耐渗透压能力；
图8 是本发明菌株SR9-3对大肠杆菌抑制效果；
图9 是本发明菌株SR9-3对金黄色葡萄球菌抑制效果。
具体实施方式
以下结合较佳实施例及附图，对依据本发明提出的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9-3及用途具体实施方式、特征及其功效，详细说明如后。
一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌是从贵州少数民族传统发酵酸肉中分离得到的乳酸菌，经抗氧化试验并鉴定过的乳酸菌，鉴定结果为胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum) SR9-3，于2016年9月26日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No: M 2016529。
所述一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌的筛选方法，包括以下步骤：
（1）实验室分离、筛选并鉴定出的乳酸菌中的胚芽乳杆菌SR9-3，该菌株分离筛选自贵州少数民族传统发酵酸肉中，用MRS肉汤培养基培养；
（2）通过酶沉淀法、邻苯二甲醛比色法鉴定筛选得到抗氧化活性菌株具有降胆固醇能力；
（3）通过总还原能力、DPPH·和·OH自由基清除能力以及抗脂质过氧化能力检验得出该菌株具有良好的抗氧化能力；
（4）通过产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力、耐渗透压能力以及抗菌活性的检验进行复筛，确定该菌株是否具有良好的产酸能力、是否耐受胃肠道环境、是否抑制致病菌，达到益生作用；具有良好的产酸能力、较强的耐酸、耐胆盐和耐渗透压能力以及抗菌能力。
具体筛选方法如下：
1.采用酶沉淀法测定菌株降胆固醇能力
在MRS肉汤培养基中加入2%的琼脂和5%的牛黄脱氧胆酸(TDCA)，划线培养乳酸菌，37℃培养24h，乳酸菌菌落会呈现乳白菌落。见图1、2、3。
2.采用邻苯二甲醛比色法测定菌株降胆固醇能力
将菌株分别接种于含2.5%鸡蛋黄的鸡蛋黄源胆固醇MRS液体培养基和100μg/mL、含1%卵磷脂的MRS液体培养基中，于37℃培养24h后测定其胆固醇清除能力。
2.1邻苯二甲醛法标准曲线的绘制
准确吸取不同体积的胆固醇工作液于洁净的试管中，再以无水乙醇将体积补至1mL并用氮气吹干，然后向各试管中加入邻苯二甲醛(OPA)指示剂2mL，并于室温下静置10min；再向其中加入1mL浓硫酸，混合均匀后室温静置10min，空白对照以1mL无水乙醇代替胆固醇溶液，于波长550nm测定吸光值，以胆固醇浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，计算出线性回归方程为y=0.0074+0.0024，R2=0.9994。
2.2胚芽乳杆菌降胆固醇能力的测定
将待测菌液吸光值调至2.50后按体积比1%接种量分别接种于含2.5%鸡蛋黄（V/V）的蛋黄源胆固醇MRS液体培养基和胆固醇浓度为100μg/mL、含1%卵磷脂的MRS液体培养基中中，于37℃培养24h。菌液以4℃、6000r/min离心10min，除去菌体，上清液用于测定胆固醇含量，以未接种的胆固醇培养基作为对照。采用邻苯二甲醛比色法测定菌株的胆固醇去除能力。
胆固醇清除率CR按以下公式计算：
CR（%）=（1-As/Ao）×100
注：CR---胆固醇清除率；
As---实验组发酵上清液中胆固醇的浓度，μg/mL；
Ao---对照组发酵上清液中胆固醇的浓度，μg/mL。
以胆固醇清除率为指标，菌株胚芽乳杆菌SR9-3在2.5%鸡蛋黄胆固醇来源的培养基中的胆固醇清除率为21.98%，在1%卵磷脂-胆固醇培养基中的胆固醇清除率为31.84%。胆固醇标准曲线见图4。
3.胚芽乳杆菌SR9-3抗氧化能力的测定
3.1总还原能力
取0.5mL菌悬液，加入浓度为0.2mol/L，pH 6.6的PBS溶液0.5mL及质量分数为1%的铁氰化钾0.5mL，于50℃水浴20min，急速冷却，再加入0.5mL 10%三氯乙酸，3500r/min离心5min，取上清液1mL，加入1mL蒸馏水，及质量分数为0.1%三氯化铁，混合均匀，10min后，于700nm处测定其吸光值，为As；用PBS代替菌悬液，为Ab。该菌株的总还原能力为24.62%。
3.2 DPPH·清除能力
反应时1mL菌液中加入1mL 0.2mmol/L DPPH·，室温下避光反应30min，3500r/min离心10min，在517nm处测定上清液吸光度。该菌株对DPPH·的清除能力达到46.32%。
3.3·OH清除能力的测定
取1mL 0.75mM邻二氮菲于试管中，依次加入PBS (pH 7.4) 2mL，蒸馏水1mL，充分混匀后，加入1mL 0.75mM的FeSO4，混匀，加1mL 0.12% H2O2，置于37℃水浴90 min，于536nm处测其吸光度值为Ap。用1mL蒸馏水代替1mL H2O2，为Ab；用1mL菌悬液代替1mL的蒸馏水，为As。该菌株对·OH清除能力高达257.92%。
3.4抗脂质过氧化能力的测定
新鲜蛋黄中加入等体积的PBS (pH7.4)，磁力搅拌10min后，加入PBS稀释成1︰25的蛋黄悬液。将1mL蛋黄悬液，0.5mL菌悬液，1mL PBS和1mL FeSO4 (25mM)溶液混匀，37℃保温振荡15min；然后加入1mL 20%的三氯乙酸溶液，静置10min，3500r/min，离心10min；取上清液3mL加入2mL 0.8%的TBA，混匀后沸水浴中加热10min；冷却后于532nm处测定吸光度。该菌株的抗脂质过氧化能力高达67.13%。
4.产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力以及抑菌活性
4.1产酸能力
将菌株接种于新鲜的MRS肉汤培养基中，37℃静置培养24h，于10000r/min离心10min，收集上清液，采用pH计法测定发酵液pH值。该菌株的发酵液pH达3.75。
4.2耐酸能力
将菌株接种于pH分别为1.5、2.5、3.5、4.5、5.5的新鲜MRS肉汤培养基中，37℃静置培养24h，不接菌的培养基做空白，测定600nm处吸光值。该菌株在pH1.5条件下仍能存活，并随pH值增大而活性增强。见图5.
4.3耐胆盐能力
将菌株接种于胆盐质量分数分别为0.1%和0.3%的新鲜MRS肉汤培养基中，37℃静置培养24h，不接菌的培养基做空白，测定菌液的吸光值。该菌株能够在0.1%和0.3%的培养基中生长繁殖；0、2h、24h后，2h和24h在0.3%胆盐浓度下菌液浊度较0h分别增加39.94%、21.43%。见图6。
4.4耐渗透压能力
将菌株以3%的接种量接种于MRS肉汤培养基中，调整培养基的初始NaCl浓度值分别为0%、2%、4%、6%、8%、10%，置于37 ℃下培养0、2、4、8、24h，以不接菌的对应NaCl浓度培养基为空白，测定菌悬液在600nm处的OD600值。该菌株在10%NaCl浓度条件下仍能够生长繁殖，在8%NaCl下可以很好的生长繁殖。24h后，8%NaCl浓度下菌液浊度占不添加NaCl组的63.66%。见图7。
4.5抗菌活性
将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌指示菌制备成菌悬液，接种于牛肉膏蛋白胨平板，贴入含有胚芽乳杆菌菌株发酵液的纸片，分别放入各指示菌对应的最适生长温度进行培养，24h后测量抑菌圈大小。菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为11.85mm和12.87mm，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有明显的抑制效果。见图8、9。
本发明的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌是一种功能性乳酸菌，特别在降低胆固醇和抗氧化方面具有良好的特性，对胆固醇鸡蛋黄源的胆固醇去除率为21.98%，添加1%卵磷脂培养基中的胆固醇去除率为31.84%；抗氧化方面，总还原能力为24.62%，DPPH·和·OH清除能力分别为46.32%、257.92%，抗脂质过氧化能力为67.13%；用途是开发成发酵菌剂、保健食品或药品，长期服用可改善肠道菌群，降低血清胆固醇，清除机体有害自由基，提高机体的免疫能力；或将其投入到发酵制品中，缩短发酵周期，提高发酵制品的营养和功能，改善产品风味和滋味，开发具有降胆固醇和抗氧化双重功能的功能性食品。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对发明型作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (6)

1.一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9-3，其特征是：从贵州少数民族传统发酵酸肉中分离得到的乳酸菌，经抗氧化试验并鉴定过的乳酸菌，鉴定结果为胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum) SR9-3，于2016年9月26日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC No: M 2016529；是一种功能性乳酸菌，特别在降低胆固醇和抗氧化方面具有良好的特性，对胆固醇鸡蛋黄源的胆固醇去除率为21.98%，添加1%卵磷脂培养基中的胆固醇去除率为31.84%；抗氧化方面，总还原能力为24.62%，DPPH·和·OH清除能力分别为46.32%、257.92%，抗脂质过氧化能力为67.13%。
2.如权利要求1所述的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9-3的筛选方法，其特征是：包括以下步骤：
（1）实验室分离、筛选并鉴定出的乳酸菌中的胚芽乳杆菌SR9-3，该菌株分离筛选自贵州少数民族传统发酵酸肉中，用MRS肉汤培养基培养；
（2）通过酶沉淀法、邻苯二甲醛比色法鉴定筛选得到抗氧化活性菌株具有降胆固醇能力；
（3）通过总还原能力、DPPH·和·OH自由基清除能力以及抗脂质过氧化能力检验得出该菌株具有良好的抗氧化能力；
（4）通过产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力、耐渗透压能力以及抗菌活性的检验进行复筛，确定该菌株是否具有良好的产酸能力、是否耐受胃肠道环境、是否抑制致病菌，达到益生作用；具有良好的产酸能力、较强的耐酸、耐胆盐和耐渗透压能力以及抗菌能力。
3.如权利要求2所述的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9-3的筛选方法，其特征是：所述步骤（2）中，所述酶沉淀法的步骤是：在普通的MRS肉汤培养基中加入2%的琼脂和5%的牛黄脱氧胆酸TDCA，划线培养乳酸菌，具有胆盐水解酶活性的乳酸菌菌落会呈现乳白菌落或白色菌落，即为具有降胆固醇能力的乳酸菌；
所述邻苯二甲醛比色法的步骤是将菌株分别接种于含有2.5%鸡蛋黄胆固醇来源的MRS液体培养基和胆固醇浓度为100μg/mL、含1%卵磷脂的MRS液体培养基中，于37℃生化培养箱中培养24h后测定其对胆固醇的清除能力，即准确吸取不同体积的胆固醇工作液于洁净的试管中，再以无水乙醇将体积补至1mL并用氮气吹干，然后向各试管中加入邻苯二甲醛OPA指示剂2mL，并于室温下静置10min；再向其中加入1mL浓硫酸，混合均匀后室温静置10min，空白对照以1mL无水乙醇代替胆固醇溶液，于波长550nm测定吸光值，以胆固醇浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，进行比色。
4.如权利要求2所述的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9-3的筛选方法，其特征是：所述步骤（3）中，所述总还原能力的检验步骤为：取0.5mL菌悬液，加入浓度为0.2mol/L，pH 6.6的PBS溶液0.5mL及质量分数为1%的铁氰化钾0.5mL，于50℃水浴20min，急速冷却，再加入0.5mL 10%三氯乙酸，3500r/min离心5min，取上清液1mL，加入1mL蒸馏水，及质量分数为0.1%三氯化铁，混合均匀，10min后，于700nm处测定其吸光值，为As；用PBS代替菌悬液，为Ab；计算公式如下：
还原能力(%)=［(As—Ab)/ Ab］×100；
所述DPPH·清除能力的检验步骤为：反应时1mL菌液中加入1mL 0.2mmol/L DPPH·，室温下避光反应30min，3500r/min离心10min，在517nm处测定上清液吸光度；
菌株对DPPH·的清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/ Ac]×100；
注：Ai为1mL DPPH·+1mL样品的吸光度，
Aj为1mL PBS +1mL样品的吸光度，
Ac为1mL DPPH·+1mL PBS的吸光度；
所述·OH清除能力的检验步骤为：取1mL 0.75mM邻二氮菲于试管中，依次加入pH 7.4的PBS 2mL，蒸馏水1mL，充分混匀后，加入1mL 0.75mM的FeSO4，混匀，加1mL 0.12% H2O2，置于37℃水浴90 min，于536nm处测其吸光度值为Ap；用1mL蒸馏水代替1mL H2O2，为Ab；用1mL菌悬液代替1mL的蒸馏水，为As；
·OH清除率(%)=(As-Ap)/(Ab-Ap)×100；
所述抗脂质过氧化能力的检验步骤为：新鲜蛋黄中加入等体积的pH7.4的PBS ，磁力搅拌10min后，加入PBS稀释成1︰25的蛋黄悬液；将1mL蛋黄悬液，0.5mL菌悬液，1mL PBS和1mL、25mM 的FeSO4 溶液混匀，37℃保温振荡15min；然后加入1mL 20%的三氯乙酸溶液，静置10min，3500r/min，离心10min；取上清液3mL加入2mL 0.8%的TBA，混匀后沸水浴中加热10min；冷却后于532nm处测定吸光度；
脂质过氧化抑制率%=[(Ao–As)/Ao]×100；
注：Ao为对照组吸光度，As为样品吸光度。
5.如权利要求2所述的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9-3的筛选方法，其特征是：所述步骤（4）中，所述产酸能力的检验步骤为：将菌株以3%的接种量接种于新鲜的MRS肉汤培养基中，37℃静置培养24h，于10000r/min离心10min，收集上清液；以不接种乳酸菌的MRS肉汤培养基为空白，采用pH计法测定发酵液pH值以确定乳酸菌的产酸特性；
所述耐酸能力的检验方法是：将菌株以3%的接种量接种于pH分别为1.5、2.5、3.5、4.5、5.5的新鲜MRS肉汤培养基中，37℃静置培养24h，于600nm处测定菌液的吸光值，以各自对应pH值培养基作调零；
所述耐胆盐能力的检验步骤为：将菌株以3%的接种量接种于胆盐质量分数分别为0.1%和0.3%的新鲜MRS肉汤培养基中，37℃静置培养0、2h、24h，分别于600nm处测定菌液的吸光值，以各自对应胆盐浓度的培养基作调零；
所述耐渗透压能力的检验步骤为：将菌株以3%的接种量接种于MRS肉汤培养基中，调整培养基的初始NaCl浓度值分别为 0%、2%、4%、6%、8%、10%，置于37 ℃下培养0、2、4、8、24h，测定菌悬液在600nm处的OD600值；
所述抗菌活性的检验步骤是：将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌指示菌制备成菌悬液，接种于牛肉膏蛋白胨平板，贴入含有胚芽乳杆菌菌株发酵液的纸片，分别放入各指示菌对应的最适生长温度进行培养，24h后测量抑菌圈大小。
6.如权利要求1所述的一株具有降低胆固醇和抗氧化活性的胚芽乳杆菌SR9-3的用途，其特征是：开发成发酵菌剂、保健食品或药品，长期服用可改善肠道菌群，降低血清胆固醇，清除机体有害自由基，提高机体的免疫能力；或将其投入到发酵制品中，缩短发酵周期，提高发酵制品的营养和功能，改善产品风味和滋味，开发具有降胆固醇和抗氧化双重功能的功能性食品。
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