CN106754467A - 一株嗜麦芽假单胞菌及其应用 - Google Patents

一株嗜麦芽假单胞菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106754467A
CN106754467A CN201611026648.1A CN201611026648A CN106754467A CN 106754467 A CN106754467 A CN 106754467A CN 201611026648 A CN201611026648 A CN 201611026648A CN 106754467 A CN106754467 A CN 106754467A
Authority
CN
China
Prior art keywords
maltophilia
application
pseudomonas maltophilia
pseudomonas
milk
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201611026648.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106754467B (zh
Inventor
张娟
陈坚
汤恒
堵国成
马浩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201611026648.1A priority Critical patent/CN106754467B/zh
Publication of CN106754467A publication Critical patent/CN106754467A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106754467B publication Critical patent/CN106754467B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/1203—Addition of, or treatment with, enzymes or microorganisms other than lactobacteriaceae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一株嗜麦芽假单胞菌及其应用，属于食品生物技术领域。本发明所述嗜麦芽假单胞菌CCTCC NO:M 2016531是从奶牛场采集了大量土样，通过高通量筛选获得的可水解牛乳蛋白的蛋白酶分泌菌株。该菌株的发酵上清液能有效降解αS1‑酪蛋白、β‑乳球蛋白，因而可用于去除牛乳中的过敏原、制备奶制品，包括配方奶粉，降低婴儿、成人食用奶制品过敏的风险。

Description

一株嗜麦芽假单胞菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株嗜麦芽假单胞菌及其应用，属于食品生物技术领域。
背景技术
作为工业化的微生物细胞工厂，嗜麦芽假单胞菌已广泛应用于食品，发酵等领域，但目前在乳制品领域的应用相对较少。乳制品是婴幼儿食品的重要组成部分，但婴幼儿乳制品目前存在的主要问题为蛋白过敏。全世界儿童牛乳过敏的发生率为0.3％-7.5％，乳蛋白过敏主要是由特异性IgE抗体介导的I型超敏反应，可引起呼吸道、消化道、皮肤或全身过敏，主要表现为呕吐、腹痛和腹泻等胃肠道不适。特别对于婴儿，牛乳中主要含有的酪蛋白、α-乳白蛋白、β-乳球蛋白等作为异种蛋白，有可能成为过敏原。牛乳蛋白主要分为乳清蛋白(whey)和凝乳蛋白(curd)两部分，凝乳蛋白占乳蛋白总量的80％，αS1-酪蛋白是凝乳蛋白中最主要的一个过敏原，同时乳清蛋白的主要组成是β-乳球蛋白。
在保留乳蛋白营养价值和风味的同时有效的降低其抗原性和过敏原性依旧是一个难题，而蛋白酶水解法在有效降低和消除过敏原的同时不会影响产物的营养价值，相比于其他几种脱敏方法，如加热处理、糖基化反应和乳酸菌发酵法等，不仅可以水解部分过敏源，还可生产出具有调节免疫功能、抗凝血、降血压等其他生理功能的多肽。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一株嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)S2，其于2016年9月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M 2016531，地址：中国，武汉，武汉大学。
所述嗜麦芽假单胞菌CCTCC NO:M 2016531是从奶牛场采集了大量土样，通过高通量筛选获得的可水解牛乳蛋白的蛋白酶分泌菌株。该菌株的发酵上清液能有效降解αS1-酪蛋白、β-乳球蛋白，因而可用于去除牛乳蛋白中的过敏原、制备奶制品，包括配方奶粉，降低婴儿、成人食用奶制品过敏的风险。
“牛乳蛋白”的表述被理解为指的是至少包含一种乳清蛋白组分或一种酪蛋白组分的含水培养基。作为牛奶底物的非限制的例子，可以是提及的牛奶、牛奶浓缩物、乳制食品基质、乳酸基质等等。
生物材料保藏
嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)S2，已于2016年9月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2016531。
具体实施方式
脱脂奶粉培养基：脱脂奶粉10g.L-1。
LB培养基：胰蛋白胨10.0g.L-1，酵母提取物5g.L-1，氯化钠10g.L-1。
CSN1S2酶联反应试剂盒，购自上海岚派生物科技有限公司。
BLG酶联反应试剂盒，购自上海岚派生物科技有限公司。
实施例1嗜麦芽假单胞菌(CCTCC NO:M 2016531)的筛选方法
称取1.0g混匀土样与5mL无菌水于10mL离心管中混合，震荡混匀后，分别使用无菌水10,100,1000倍稀释后涂布脱脂奶粉平板培养基，然后于恒温培养箱内30℃静置培养24h。
挑选有水解圈产生的菌落转接到新的脱脂奶粉平板培养基，然后于恒温培养箱内30℃静置培养24h。而后观察水解圈大小及菌落形态，将筛选到水解圈最大的的单菌落S2转接于LB培养基中活化8小时后，再转接于含20％甘油的LB培养基中，保藏于-80℃。
该菌株S2的16S rRNA序列如SEQ ID NO.1，菌株鉴定结果表明是嗜麦芽假单胞菌。
实施例2嗜麦芽假单胞菌S2(CCTCC NO:M 2016531)发酵液的αS1-酪蛋白去除效率
将保藏于-80℃甘油管中的出发菌株嗜麦芽假单胞菌(CCTCC NO:M 2016531)以2％的接种量接入LB培养基，在30℃，220rpm，培养12h。
以2％的接种量分别取活化好的嗜麦芽假单胞菌转接到新鲜的LB培养基中，在30℃，220rpm，培养12h后收集发酵液，8000rpm离心收集发酵液上清。
将发酵液上清与αS1-酪蛋白标准品按1：1混合后，再30℃下反应1h。以αS1-酪蛋白标准品为对照，使用CSN1S2酶联反应试剂盒，分别检测样品的αS1-酪蛋白含量。
将50μl样品分别加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。用封板膜封板后置37℃温育30分钟。将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。用封板膜封板后置37℃温育30分钟。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定在加终止液后15分钟以内进行。
表1.嗜麦芽假单胞菌S2(CCTCC NO:M 2016531)发酵液的αS1-酪蛋白去除效率
实施例3嗜麦芽假单胞菌S2(CCTCC NO:M 2016531)发酵液的β-乳球蛋白去除效率
将保藏于-80℃甘油管中的出发菌株嗜麦芽假单胞菌(CCTCC NO:M 2016531)以2％的接种量接入LB培养基，在30℃，220rpm，培养12h。
以2％的接种量分别取活化好的嗜麦芽假单胞菌转接到新鲜的LB培养基中，在30℃，220rpm，培养12h后收集发酵液，8000rpm离心收集发酵液上清。
将发酵液上清与β-乳球蛋白标准品按1：1混合后，再30℃下反应1h。以β-乳球蛋白标准品为对照，使用CSN1S2酶联反应试剂盒，分别检测样品的αS1-酪蛋白含量。
将将50μl样品分别加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。用封板膜封板后置37℃温育30分钟。将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用，小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。用封板膜封板后置37℃温育30分钟。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定在加终止液后15分钟以内进行。
表2.嗜麦芽假单胞菌(CCTCC NO:M 2016531)发酵液的β-乳球蛋白去除效率
β-乳球蛋白标准品 反应液 去除效率
β-乳球蛋白浓度(ng/mL) 4.032 3.709 8.02％
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 一株嗜麦芽假单胞菌及其应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1106
<212> DNA
<213> 嗜麦芽假单胞菌
<400> 1
gctcgggcac cgtggcagcg ccctcccgaa ggttaagcta cctgcttctg gtgcaacaaa 60
ctcccatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcagcaatgc 120
tgatctgcga ttactagcga ttccgacttc atggagtcga gttgcagact ccaatccgga 180
ctgagatagg gtttctggga ttggcttacc gtcgccggct tgcagccctc tgtccctacc 240
attgtagtac gtgtgtagcc ctggccgtaa gggccatgat gacttgacgt catccccacc 300
ttcctccggt ttgtcaccgg cggtctcctt agagttccca ccattacgtg ctggcaacta 360
aggacaaggg ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga 420
cagccatgca gcacctgtgt tcgagttccc gaaggcacca atccatctct ggaaagttct 480
cgacatgtca aggccaggta aggttcttcg cgttgcatcg aattaaacca catactccac 540
cgcttgtgcg ggcccccgtc aattcctttg agtttcagtc ttgcgaccgt actccccagg 600
cggcgaactt aacgcgttag cttcgatact gcgtgccaaa ttgcacccaa catccagttc 660
gcatcgttta gggcgtggac taccagggta tctaatcctg tttgctcccc acgctttcgt 720
gcctcagtgt caatgttggt ccaggtagct gccttcgcca tggatgttcc tcctgatctc 780
tacgcatttc actgctacac caggaattcc gctaccctct accacattct agtcgcccag 840
tatccactgc agttcccagg ttgagcccag ggctttcaca acggacttaa acgaccacct 900
acgcacgctt tacgcccagt aattccgagt aacgcttgca cccttcgtat taccgcggct 960
gctggcacga agttagccgg tgcttattct ttgggtaccg tcatcccaac cgggtattac 1020
cagctggatt tctttccaca aaggctttac acccgagctc tcaccacgcg tatgctggat 1080
cagcttgcgc cattgtcaat attcca 1106

Claims (7)

1.一株嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)S2，其特征在于，于2016年9月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2016531，保藏地址为中国武汉，武汉大学。
2.权利要求1所述的嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)S2在奶粉生产中的应用。
3.权利要求1所述的嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)S2在生产蛋白酶中的的应用。
4.权利要求1所述的嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)S2在去除奶粉过敏原中的应用。
5.权利要求1所述的嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)S2在去除αS1-酪蛋白中的应用。
6.权利要求1所述的嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)S2在去除β-乳球蛋白中的应用。
7.权利要求1所述的嗜麦芽假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)S2在生产奶制品中的应用。
CN201611026648.1A 2016-11-15 2016-11-15 一株嗜麦芽假单胞菌及其应用 Active CN106754467B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611026648.1A CN106754467B (zh) 2016-11-15 2016-11-15 一株嗜麦芽假单胞菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611026648.1A CN106754467B (zh) 2016-11-15 2016-11-15 一株嗜麦芽假单胞菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106754467A true CN106754467A (zh) 2017-05-31
CN106754467B CN106754467B (zh) 2019-10-25

Family

ID=58971479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611026648.1A Active CN106754467B (zh) 2016-11-15 2016-11-15 一株嗜麦芽假单胞菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106754467B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107523518A (zh) * 2017-08-18 2017-12-29 郑州轻工业学院 一株嗜麦芽寡养单胞菌及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1781552A (zh) * 2004-11-30 2006-06-07 余国华 嗜麦芽假单胞菌制剂(疫苗)及其制造方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1781552A (zh) * 2004-11-30 2006-06-07 余国华 嗜麦芽假单胞菌制剂(疫苗)及其制造方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
谈铭等: "一株能降解牛奶中过敏原αs1-酪蛋白的蛋白酶产生菌的筛选、鉴定及免疫学研究", 《工业微生物》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107523518A (zh) * 2017-08-18 2017-12-29 郑州轻工业学院 一株嗜麦芽寡养单胞菌及其应用
CN107523518B (zh) * 2017-08-18 2019-12-10 郑州轻工业学院 一株嗜麦芽寡养单胞菌及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN106754467B (zh) 2019-10-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104970252B (zh) 一种发酵液态乳猪饲料及其制备方法
CN102181376B (zh) 同时降解玉米赤霉烯酮和纤维素的枯草芽孢杆菌及其应用
CN103275907B (zh) 一种解淀粉芽胞杆菌及制备方法和应用
CN102986872B (zh) 一种含鹰嘴豆的发酵蛋奶及其制备方法
CN104805040B (zh) 一种枯草芽孢杆菌制剂及制备方法和应用
CN113604404B (zh) 一种凝结芽孢杆菌ysf17及其用途
CN111733117B (zh) 一株产抗菌肽的海洋芽孢杆菌及其发酵方法和应用
CN111304119B (zh) 一种降解伏马毒素的饲用枯草芽孢杆菌及其应用
CN105062921A (zh) 一种高效抑制禽致病性沙门氏菌的唾液乳杆菌及其应用
CN104509695A (zh) 一种液体饲料添加剂的制备方法
CN106011001A (zh) 一种抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂及其制备方法
CN105831534A (zh) 一种复合乳酸菌饮料及其制备方法
CN107006720A (zh) 一种微生态制剂及其应用
CN103987265A (zh) 减少细菌污染的人乳微滤
CN103621774B (zh) 一种去除抗营养因子的大豆、方法及其应用
CN105602865A (zh) 一株枯草芽孢杆菌、发酵方法、粉剂和应用
CN109517759A (zh) 一种适于肠道定植、提高消化率和免疫力的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法
CN102925374B (zh) 酿酒酵母新菌株，及含有其的饲料添加剂，配合料
CN103992969A (zh) 一种具有抗菌活性菌素的植物乳杆菌及其应用
CN106754467A (zh) 一株嗜麦芽假单胞菌及其应用
CN106318892B (zh) 一株寡养单胞菌及其应用
CN106754464B (zh) 一株蜡样芽孢杆菌及其应用
CN107937286A (zh) 一种异常毕赤酵母及其发酵培养物和应用
CN116606777A (zh) 一种植物乳杆菌菌株及其饲料添加剂与饲料
CN103952357B (zh) 一种高效抑制禽源弯曲杆菌的唾液乳酸杆菌

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant