CN106749571A

CN106749571A - 一种植物淀粉合成相关蛋白OsNPPR及其编码基因与应用

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Publication number: CN106749571A
Application number: CN201610990300.8A
Authority: CN
Inventors: 万建民; 王益华; 郝媛媛; 刘喜; 江玲; 张文伟; 刘世家; 赵志刚; 刘裕强
Original assignee: Nanjing Agricultural University
Current assignee: Nanjing Agricultural University
Priority date: 2016-11-10
Filing date: 2016-11-10
Publication date: 2017-05-31
Anticipated expiration: 2036-11-10
Also published as: CN106749571B

Abstract

本发明属于基因工程领域，涉及一种植物淀粉合成相关蛋白OsNPPR及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物谷蛋白分选相关的由序列1衍生的蛋白质。本发明的植物淀粉合成相关蛋白影响植物胚乳中淀粉的合成。将所述蛋白的编码基因导入淀粉合成异常的植物中，可以培育淀粉合成正常的转基因植物。所述蛋白及其编码基因可以应用于植物遗传改良。

Description

一种植物淀粉合成相关蛋白OsNPPR及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种植物淀粉合成相关蛋白OsNPPR及其编码基因与应用。

背景技术

在植物中，淀粉是主要的储能物质，其合成途径中的许多合成酶和调控因子都已经被很好地鉴定和研究。淀粉是稻米籽粒最主要的组成成分，其含量和特性直接影响稻米的各项品质指标及最终适口性，同时淀粉的积累水平还可能影响水稻的产量，因此，深入研究水稻这一单子叶模式植物淀粉合成途径中的关键因子及调控网络具有重要的理论意义与应用价值。

叶片光合作用产物首先以蔗糖的形式运输到淀粉合成器官的胚乳细胞，转化为1-磷酸-葡萄糖(G-1-P)后进入造粉体体内，分别在ADP-葡萄糖焦磷酸化酶、淀粉合成酶、淀粉分支酶、淀粉脱支酶的作用下形成直链淀粉和支链淀粉。

由于淀粉的生物合成是一个复杂且精细的过程，人类至今还无法在体外系统中合成淀粉，淀粉合成过程中还有许多环节是未知的。因此挖掘新的参与淀粉合成的因子并进行深入研究尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种淀粉合成相关蛋白及其编码基因与应用。

本发明提供的淀粉合成相关蛋白(OsNPPR)，来源于稻属水稻(Oryza sativaIndica N22)，是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与淀粉合成相关的由SEQ ID NO.2衍生的蛋白质。

序列表中的SEQ ID NO.1由804个氨基酸残基组成，自氨基末端第183至743位为PPR重复结构域。

为了使(a)中的OsNPPR便于纯化，可在由序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tag II	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL

上述(b)中的OsNPPR可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的OsNPPR的编码基因可通过将序列表中SEQ ID NO.2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码上述淀粉合成相关蛋白的基因(OsNPPR)也属于本发明的保护范围。

所述基因OsNPPR可为如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：

1)序列表中SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)序列表中SEQ ID NO.3所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码淀粉合成相关蛋白的DNA分子。

序列表中的SEQ ID NO.2由4185个核苷酸组成。

所述严格条件可为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下杂交并洗膜。

含有以上任一所述基因的重组表达载体也属于本发明的保护范围。

可用现有的植物表达载体构建含有所述基因的重组表达载体。

所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。

使用所述基因构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或组成型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、玉米的泛素启动子(Ubiquitin)，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

所述重组表达载体可为在1300-221-3^*Flag载体的多克隆位点XbaI和SalI之间重组插入所述基因(OsNPPR)得到的重组质粒。所述重组质粒具体可为1300-221-3^*Flag-OsNPPR；所述1300-221-3^*Flag-OsNPPR是将由OsNPPR基因组编码序列通过重组技术插入到1300-221-3^*Flag多克隆位点XbaI和SalI之间得到的(Clontech公司，Infusion重组试剂盒)。

将含有OsNPPR的1300-221-3^*Flag命名为1300-221-3^*Flag-OsNPPR。

含有以上任一所述基因(OsNPPR)的表达盒及重组菌均属于本发明的保护范围。

扩增所述基因(OsNPPR)全长或任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种培育淀粉合成正常的转基因植物的方法。

本发明提供的培育淀粉合成正常的转基因植物的方法，是将所述基因导入淀粉合成异常的植物中，得到淀粉合成正常的转基因植物；所述淀粉合成异常植物为胚乳表现为粉质表型的植物；所述淀粉合成正常的转基因植物为胚乳表现透明非粉质的转基因植物。具体来说，所述基因通过所述重组表达载体导入淀粉合成异常植物中；所述淀粉合成异常植物可为N112。

所述蛋白、所述基因、所述重组表达载体、表达盒或重组菌或所述方法均可应用于水稻育种。

利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将编码所述蛋白的基因导入植物细胞，可获转基因细胞系及转基因植株。携带有所述基因的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：烟草、百脉根、拟南芥、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草、苜宿等。

本发明的淀粉合成相关蛋白影响水稻胚乳中谷淀粉合成的过程。将所述蛋白的编码基因导入淀粉合成异常的粉质胚乳植物中，可以得到胚乳透明非粉质的转基因植物。所述蛋白及其编码基因可以应用于植物遗传改良。

附图说明

图1为突变基因在第8染色体上的精细定位。

图2为野生型N22和突变体N112的籽粒表型。

图3为野生型N22和突变体N112的籽粒扫描电镜观察。

图4为野生型N22和突变体N112胚乳发育9天半薄切片观察。

图5为野生型N22和突变体N112灌浆速率及千粒重对比。

图6为野生型N22和突变体N112理化性质比较。

图7为转1300-221-3^*Flag-OsNPPR的T₀代植株的T₁籽粒提蛋白western检测结果。

图8为转1300-221-3^*Flag-OsNPPR的T₀代植株的T₁籽粒表型。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

实施例1、植物淀粉合成相关蛋白及其编码基因的发现

一、水稻淀粉合成突变体N112表型分析及其遗传分析

在N22的MNU诱变突变体库中筛选出籽粒粉质的株系N112。

图2上图为N22成熟种子整体和横断面的扫描图，表现为胚乳完全透明的表型，下图为N112成熟种子整体和横断面的扫描图，表现为胚乳完全粉质的表型。

图3为N22和N112扫描电镜分析图。N22的成熟种子扫描电镜表现为淀粉颗粒排列紧密，大小均一，而N112中淀粉颗粒排列松散，使得颗粒之间存在间隙。因此在光线通过时会发生散射，导致N112籽粒外观呈现不透明表型。

利用半薄切片后的I₂-KI染色来观察N22和N112复合淀粉颗粒的形态(图4)。在开花后9天的野生型N22胚乳里层细胞中，每个造粉体内部产生多个独立存在的淀粉颗粒，这是水稻典型的复合淀粉颗粒结构，淀粉颗粒排列紧密(图4)。进一步观察突变体N112，发现其胚乳里层细胞的胞质中，存在许多小的、零散分布的单粒淀粉颗粒，而且淀粉颗粒之间排列不紧密，表明突变体中淀粉发育的滞后性(图4)。

在整个种子发育过程中，N112突变体的灌浆速率明显低于野生型(图5)。从开花后12天开始，突变体的干物质积累开始显著低于野生型，并且这个差异一直维持到灌浆结束。与灌浆速率明显降低相对应的结果是，成熟的N112突变体种子千粒重明显低于N22(图5)。

N112突变体的种子具有较高含量的脂肪，同时淀粉含量较野生型显著降低(图6)。相应地，直链淀粉含量显著降低(图6)。

二、突变基因定位

1、突变基因初步定位

用突变体N112与Nip杂交，在N112/Nip的F₂分离群体中随机选取籽粒粉质的种子，发芽后，分别将各株的叶片等量混合后提取DNA。首先，用覆盖水稻全基因组的565对SSR引物在N22和Nip之间进行多态性分析，之后每间隔10cM挑选一对在两个亲本间有多态的引物。两个亲本DNA连同群体DNA共计三个DNA样本，利用挑选好的覆盖12条染色体的且具有多态的引物进行分析，最后将淀粉合成关键基因OsNPPR定位在第8染色体SSR标记I8-5和N8-25之间。

上述SSR标记分析的方法如下所述：

(1)提取上述选取单株的总DNA作为模板，具体方法如下：

①取0.2克左右的水稻幼嫩叶片，置于Eppendorf管中，管中放置一粒钢珠，把装好样品的Eppendorf管在液氮中冷冻5min，置于2000型GENO/GRINDER仪器上粉碎样品1min。

②加入660μL提取液(含100mM Tris-HCl(pH 8.0)，20mM EDTA(pH 8.0)，1.4MNaCl,0.2g/mL CTAB的溶液)，漩涡器上剧烈涡旋混匀，冰浴30min。

③加入40μL 20％SDS，65℃温浴10min，每隔两分钟轻轻上下颠倒混匀。

④加入100μL 5M NaCl，温和混匀。

⑤加入100μL 10×CTAB，65℃温浴10min，间断轻轻上下颠倒混匀。

⑥加入900μL氯仿，充分混匀，12000rpm离心3min。

⑦转移上清液至1.5mL Eppendorf管中，加入600μL异丙醇，混匀，12000rpm离心5min。

⑧弃上清液，沉淀用70％(V/V)乙醇漂洗一次，室温晾干。

⑨加入100μL 1×TE(121g Tris-base溶于1L水中，用盐酸调pH值至8.0得到的溶液)溶解DNA。

⑩取2μL电泳检测DNA质量，并用DU800分光光度仪测定浓度(Beckman InstrumentInc.U.S.A)。

(2)将上述提取的DNA稀释成约20ng/μL，作为模板进行PCR扩增；

PCR反应体系(10μL)：DNA(20ng/μL)1μL，上游引物(2pmol/μL)1μL，下游引物(2pmol/μL)1μL，10×Buffer(MgCl₂free)1μL，dNTP(10mM)0.2μL，MgCl₂(25mM)0.6μL，rTaq(5U/μL)0.1μL，ddH₂O 5.1μL，共10μL。

PCR反应程序：94.0℃变性5min；94.0℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，共循环35次；72℃延伸7min；10℃保存。PCR反应在Biometro热循环仪中进行。

(3)SSR标记的PCR产物检测

扩增产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。以50bp的DNA Ladder为对照比较扩增产物的分子量大小，银染显色。

2、突变基因精细定位

根据初步定位的结果，在突变位点所在区域间隔一定区段自行开发SSR标记，以便在该染色体的相关区段筛选更多标记进一步定位突变体位点。从N22/NiP杂交组合获得的F₂分离群体中挑出确认为突变表型的F₂种子，用于突变位点的精细定位。利用公共图谱上的分子标记和基于水稻基因组序列数据自行开发的SSR、Indel分子标记对突变位点进行了精细定位，并根据定位结果初步确定突变位点，具体方法如下：

(1)SSR标记开发

将公共图谱的SSR标记与水稻基因组序列进行整合，下载突变位点附近的BAC/PAC克隆序列。用SSRHunter(李强等，遗传，2005，27(5):808-810)或SSRIT软件搜索克隆中潜在的SSR序列(重复次数≥6)；将这些SSR及其邻近400～500bp的序列在NCBI通过BLAST程序在线与相应的籼稻序列进行比较，如果两者的SSR重复次数有差异，初步推断该SSR引物的PCR产物在籼、粳间存在多态性；再利用Primer Premier 5.0软件设计SSR引物,并由上海英俊生物技术有限公司合成。将自行设计的SSR成对引物等比例混合，检测其在N22和Nip之间的多态性，表现多态者用作精细定位OsNPPR基因的分子标记。用于精细定位的分子标记见表2。

表2用于精细定位的分子标记

标记	正向引物	反向引物	遗传距离	类型
					HY8-24	5'ATTAAGATGATATGGGAAGT 3'	5'ACATTGACCTGGTAGAAAC 3'	57.8cM	InDel
HY8-19	5'TTTGTTGCTTTTCTGATTC 3'	5'ATGATAAAGCGATAAACCA 3'	54.4cM	InDel
					HY8-25	5'TATTCCCAACCATCATTC 3'	5'TTCTACCTGCTTGTTCTACT 3'	54.3cM	InDel
HY8-32	5'ACAAAATGGGTCCCTATGC 3'	5'TTGCTTGCTACTACTGTCTAATG 3'	53.7CM	SSR
					HY8-34	5'AGCACATCACAAACCTACCC 3'	5'AAGGCAATCCGAACAACC 3'	54.1cM	SSR
HY8-61	5'TACCAACACCCGGTCTACG 3'	5'GGAAACGGAATCCACAACA 3'	53.9cM	InDel
					HY8-39	5'TGGACCAACCTAAGCAGT 3'	5'ACAACTCCAAGGCGATT 3'	53.8cM	SSR

根据F₂群体中胚乳粉质单株的分子数据和表型数据，按照Zhang等报道的“隐性极端个体基因作图”方法，最终把OsNPPR基因精细定位在HY8-61和HY8-34之间，物理距离约为293kb(图1)。候选区段基因组测序显示，在N112中，基因Os08g0290000中存在一个碱基的突变，由T突变为C,编码一个新的氨基酸，使原来的异亮氨酸变为苏氨酸。

(3)突变基因的获得

根据定位的位点设计引物，序列如下所述：

primer1：5'-CGAACCTCCGCCATGAGA-3'(SEQ ID NO.4)

primer2：5'-CAGGCTGTCTAGTCACCAGGTAC-3'(SEQ ID NO.5)

以primer1和primer2为引物，以N22的cDNA为模板，进行PCR扩增获得目的基因。该对引物位于序列2上游12bp和下游577bp，扩增产物为3033bp的目的基因的5’UTR区，CDS区(ATG到TGA，ATG红色字体标出，TGA蓝色字体标出)和3’UTR区。

扩增反应在PTC-200(MJ Research Inc.)PCR仪上进行：94℃3min；94℃30sec，60℃45sec，72℃2min，35个循环；72℃5min。将PCR产物回收纯化后克隆到载体pEASY(北京全式金公司)，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(北京Tiangen公司CB101)，挑选阳性克隆后，进行测序。序列测定结果表明，PCR反应获得的片段具有序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，编码804个氨基酸残基组成的蛋白质(从ATG到TGA)(见序列表的SEQ ID NO.1)。将SEQID NO.1所示的蛋白命名为OsNPPR(即为基因定位中所述的OsNPPR基因)，将SEQ ID NO.1所示的蛋白的编码基因命名为OsNPPR。

实施例2、转基因植物的获得和鉴定

一、重组表达载体构建

以N22的cDNA为模板，进行PCR扩增获得OsNPPR基因的编码序列，PCR引物序列如下：

primer3(下划线所示的序列为XbaI酶切位点)：

5'GAGAACACGGGGGACTCTAGAATGAGACCACCACCACCCC 3'(SEQ ID NO.6)

primer4(下划线所示的序列为SalI酶切位点)：

5'GTCCTTGTAGTCCATGTCGACTTCAACACTGGAAGCAGCT 3'(SEQ ID NO.7)

上述引物位于SEQ ID NO.2所示基因的ATG开始到TGA前结束，不包括TGA，扩增产物包含了该基因的全部编码区部分，将PCR产物回收纯化。采用Infusion重组试剂盒(Clontech)将PCR产物克隆到载体1300-221-3^*Flag中，构建成1300-221-3^*Flag-OsNPPR。重组反应体系(10.0μL)：PCR产物5.4μL(50-100ng)，1300-221-3^*Flag载体1.6μL(30-50ng)，5×Infusion buffer 2.0μL，Infusion enzyme mix1μL。短暂离心后将混合体系37℃水浴0.5h以上，取2.5μL反应体系用热激法转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(北京Tiangen公司；CB101)。将全部转化细胞均匀涂布在含50mg/L卡那霉素的LB固体培养基上。

37℃培养16h后，挑取克隆阳性克隆，进行测序。测序结果表明，得到了含有SEQ IDNO.3所示基因的重组表达载体，将含有OsNPPR的1300-221-3^*Flag命名为1300-221-3^*Flag-OsNPPR,OsNPPR基因插入在多克隆位点XbaI和SalI之间。

二、重组农杆菌的获得

用电击法将1300-221-3^*Flag-OsNPPR转化农杆菌EHA105菌株(购自美国英俊公司)，得到重组菌株，提取质粒进行PCR及酶切鉴定。将PCR及酶切鉴定正确的重组菌株命名为EH-1300-221-3^*Flag-OsNPPR。

三、转基因植物的获得

分别将1300-221-3^*Flag-OsNPPR转化突变体N112具体方法为：

(1)28℃培养EH-1300-221-3^*Flag-OsNPPR培养16小时，收集菌体，并稀释到含有100μmol/L乙酰丁香酮的N6液体培养基(Sigma公司，C1416)中至浓度为OD₆₀₀≈0.5，获得菌液；

(2)将培养至一个月的N112水稻成熟胚胚性愈伤组织与步骤(1)的菌液混合侵染30min，滤纸吸干菌液后转入共培养培养基(N6固体共培养培养基，Sigma公司)中，24℃共培养3天；

(3)将步骤(2)的愈伤接种在含有100mg/L巴龙霉素(Phyto TechnologyLaboratories公司)的N6固体筛选培养基上第一次筛选(16天)；

(4)挑取健康愈伤转入含有100mg/L巴龙霉素的N6固体筛选培养基上第二次筛选，每15天继代一次；

(5)挑取健康愈伤转入含有50mg/L巴龙霉素的N6固体筛选培养基上第三次筛选，每15天继代一次；

(6)挑取抗性愈伤转入分化培养基上分化；得到分化成苗的T₀代阳性植株。

四、转基因植株的鉴定

1、Western Blot鉴定

对T₀代植株所结的T₁代种子提取总蛋白，种子蛋白提取液配方(5M UREA,4％SDS,0.125M Tris-HCl pH6.8，β-Me 5％，少量溴酚蓝)，每一粒种子加入350μL提取液，于50℃烘箱放置12-16个小时，上下颠倒混匀，12000rpm离心2分钟，吸取10μL进行SDS-PAGE，转到尼龙膜后，用Flag一抗和兔二抗分别进行孵育。T₀代不同家系植株所结的T₁代种子中，挑取变透明的个体在目标位置(88kDa)有条带的，即为阳性互补家系。图7前两条泳道在目的位置有条带，表明这两个T₁代种子所对应T0代植株为转基因阳性植株，第三条泳道为对照，用N22和N112种子作为对照。

2、表型鉴定

分别将T₀代转1300-221-3^*Flag–OsNPPR的阳性植株，N112和N22种植在南京农业大学牌楼试验基地。对T₁代种子进行表型鉴定，发现在T₁代显示出(透明：粉质＝3:1)的表型，透明籽粒的表型与N22相同，不透明籽粒的表型与N112相同(图8)，说明导致N112突变体表型确实是OsNPPR基因控制的，即该OsNPPR基因为淀粉合成相关基因。

<110> 南京农业大学

<120> 一种植物淀粉合成相关蛋白OsNPPR 及其编码基因与应用

<160> 8

<210> 1

<211> 804

<212> PRT

<213> 稻属水稻（Oryza sativa Indica N22）

<220>

<223> 淀粉合成相关蛋白OsNPPR 氨基酸序列

<400> 1

Met Arg Pro Pro Pro Pro His Leu Leu Leu Pro Arg Arg Arg Arg His

1 5 10 15

Ala Ser Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Glu Leu Val Gly

20 25 30

Ala Leu Ser Ala Leu Pro Ser Pro Asp Ser Ala Arg His Leu Asp Ala

35 40 45

Leu Leu Arg Arg Ile Gly Gly Gly Gly Leu Ala Ala Val Leu Ser Ser

50 55 60

Leu Pro Ser Pro Leu Pro Ala Ala Ser Ala Leu Arg Leu Leu Leu His

65 70 75 80

Leu Leu Ser Arg Thr Ser Ser Thr Ser Ser Arg Ser Glu Asp Asp Leu

85 90 95

Leu Thr Pro Arg Val Ser Ala Leu Leu Leu Pro Ser Leu Ile Ala Asp

100 105 110

Arg Thr Ala Ile Arg Thr Ala Arg Arg Leu Leu Ser Arg Leu Leu His

115 120 125

Val His Pro Leu Arg Thr Ala Ala Glu Ala Val Ala Asp Ala Ala Ser

130 135 140

Thr Pro Ser Ser Asp Phe Leu Ile His Thr Phe Ile Thr Ser Pro Ala

145 150 155 160

Gln Gly Ser Leu Cys Arg Ala Ala Asp Ala Phe Arg Val Leu Ser Ser

165 170 175

Arg Gly Ala Pro Pro Ser Asn Ile Lys Thr Cys Asn Phe Leu Glu Ala

180 185 190

Leu Val Arg Ala Gly Gln Leu Asp Ala Ala Arg Glu Val Phe Asp Glu

195 200 205

Met Arg Glu Ser Arg Asn Val Ala Leu Asn Glu Tyr Ser Tyr Thr Ala

210 215 220

Met Ile lys Ala Leu Cys Lys Ala Gly Lys Val Asp Ala Gly Phe Glu

225 230 235 240

Met Leu Ala Glu Leu Trp Arg Ala Gly Leu Gln Pro Thr Val Val Thr

245 250 255

Tyr Asn Val Leu Met Asp Ala Leu Cys lys Ser Gly Arg Val Glu Glu

260 265 270

Ala Phe Arg Leu Lys Gly Arg Met Glu Glu Gly Gly Met Thr Pro Ser

275 280 285

Val Val Thr Phe Gly Ile Leu Ile Asn Gly Leu Ala Arg Gly Glu Arg

290 295 300

Phe Gly Glu Val Gly Ile Val Leu Gln Glu Met Glu Gln Leu Gly Val

305 310 315 320

Ser Pro Asn Glu Val Ile Tyr Asn Glu Leu Ile Gly Trp His Cys Arg

325 330 335

lys Gly His Cys Ser Gln Ala Leu Arg Leu Phe Asp Glu Met Val Leu

340 345 350

Lys Lys Met Lys Pro Thr Ala Val Thr Tyr Asn Leu Ile Ala Lys Ala

355 360 365

Leu Cys Lys Glu Gly Glu Met Glu Arg Ala Glu Arg Ile Leu Glu Asp

370 375 380

Met Leu Ser Ile Gly Met Thr Val His Cys Gly Leu Phe Asn Thr Val

385 390 395 400

Val Ala Trp Leu Leu Gln Arg Thr Arg Arg Leu Glu Ser Val Val Ser

405 410 415

Ile Thr Asn Glu Met Val Thr Arg Gly Met Arg Pro Asn Asp Pro Leu

420 425 430

Met Thr Ala Cys Met Arg Glu Leu Cys Lys Gly Gly Lys His Gln Glu

435 440 445

Ala Val Gly Ile Trp Phe Lys Thr Leu Asn Lys Gly Leu Gly Val Asn

450 455 460

Leu Ala Thr Ser Asn Ala Leu Ile His Gly Leu Cys Glu Gly Lys Tyr

465 470 475 480

Met Lys Glu Ala Thr Lys Val Ile Gln Thr Met Leu Asn Lys Gly Ile

485 490 495

Glu Leu Asp Ser Ile Thr Tyr Asn Ile Met Ile Arg Gly Cys Cys Lys

500 505 510

Asp Ser Lys Met Glu Glu Ala Ile Lys Leu His Gly Asp Met Thr Arg

515 520 525

Arg Gly Phe Lys Pro Asp Leu Phe Thr Phe Asn Thr Leu Leu His Ala

530 535 540 545

Tyr Cys Asn Leu Gly Lys Met Glu Glu Thr Phe His Leu Leu Asp Gln

550 555 560

Met Lys Thr Glu Gly Leu Gln Pro Asp Ile Val Ser Tyr Gly Thr Ile

565 570 575

Ile Asp Gly His Cys Lys Ala Lys Asp Ile Arg Lys Ala Lys Glu Tyr

580 585 590

Leu Thr Glu Leu Met Asp Arg Gly Leu Lys Pro Asn Val Phe Ile Tye

595 600 605

Asn Ala Leu Ile Gly Gly Tyr Gly Arg Asn Gly Asp Ile Ser Gly Ala

610 615 620 625

Ile Asp Ala Val Glu Thr Met Lys Ser Asn Gly Ile Gln Pro Thr Asn

630 635 640

Val Thr Tyr Gly Ser Leu Met Tyr Trp Met Cys His Ala Gly Leu Val

645 650 655

Glu Glu Ala Lys Thr Ile Phe Ser Gln Ala Arg Glu Asn Asn Val Asp

660 665 670

Leu Gly Val Ile Gly Tyr Thr Ile Met Ile Gln Gly Tyr Cys Lys Leu

675 680 685

Gly Lys Met Val Glu Ala Val Ala Tyr Phe Glu Glu Met Arg Ser Arg

690 695 700 705

Gly Ile Ser Pro Asn Lys Leu Thr Tyr Thr Thr Leu Met Tyr Ala Tyr

710 715 720

Ser Lys Ser Gly Asn Ser Glu Glu Ala Ser Lys Leu Phe Asp Glu Met

725 730 735

Val Gly Ser Gly Val Ile Pro Asp Asn Ile Thr Tyr Gly Thr Leu Ile

740 745 750

Ala Arg Cys Ser Glu Val Asn Ser Leu Asp Lys Asp Ile Gly His Thr

755 760 765

Ala Glu Leu Ser Ser Gly Ala Leu Thr Lys Asp Asp Arg Met His Asn

770 775 780 785

Ile Leu Ser Asn Gly Ile Asn Ala Pro Trp Cys Gln Lys Glu Ala Ala

790 795 800

Ser Ser Val Glu

804

<210> 2

<211> 4185

<212> DNA

<213> 稻属水稻（Oryza sativa Indica N22）

<220>

<223> 淀粉合成相关蛋白OsNPPR 的CDS 序列

<400> 2

accacgccct cgacgcgtcg cccctctcga cctcccactc ctcgatccaa tcctcgccgt 60

ccatccttcc ctgcgtccaa tccccaccct ccattcgacc tccttcttaa ctttcagcgc 120

cgcccaccgt tccacatcga acctccgcca tgagaccacc accaccccac ctcctcctcc 180

tcctcccccg ccgccgccgc cacgcctcct cctcctccgc cgccgccgcc gccgccggag 240

agctcgtcgg cgccctctcc gccttgccct cccccgactc ggcgcgacac ctcgacgccc 300

tcctccgtcg catcggcggc ggtggcctcg ccgccgtcct ctcgtccctg ccctcccctc 360

tccccgcggc ctccgccctc cgcctcctcc tccacctcct ctccaggacc tcctccacct 420

cctcccgctc cgaggatgac ctcctcaccc cgcgcgtctc ggcgctcctc ctgccctccc 480

tcatcgccga tcgcaccgcc atccggacgg cgcgccgcct cctctcacga ctcctccacg 540

tccacccgct ccgcaccgcc gcggaggcgg tcgccgacgc cgcctccacc ccctcctcgg 600

acttcctcat ccacaccttc atcacctccc cggcccaagg ctccctctgc agggccgccg 660

acgcgttccg cgttctctcc tcgcgcggcg cgccgccctc catcaagacc tgcaatgcgt 720

tcctcgaagc ccttgttcgt gcaggtcagc tcgatgccgc ccgcgaggtg ttcgacgaaa 780

tgcgtgaaag caggaacgtc gctctgaatg agtactcgta taccgccatg atcaaggcgc 840

tctgcaaggc tggaaaggtg gatgctggtt ttgagatgct tgcagagtta tggcgggctg 900

ggcttcagcc aacggttgtg acgtacaatg tgcttatgga tgcactgtgt aagagtggga 960

gggtggagga ggcctttcga ttgaaaggga ggatggaaca gggagggatg acaccaagcg 1020

tggtcacatt cggtatattg atcaatggtc ttgcaagggg cgagcggttt ggggaggttg 1080

gcattgtatt gcaggagatg gaacagttag gggtttcccc caatgaggtt atttacaatg 1140

agcttattgg ttggcattgt aggaagggcc attgctcaca ggcactcagg ttgtttgatg 1200

aaatggtttt aaagaagatg aagccaacag ccgtgactta taacttgatt gcaaaggcac 1260

tgtgcaagga aggggagatg gagcgggctg agaggatatt ggaggatatg ttgtcaattg 1320

gaatgacagt tcattgtggt ttgttcaata cagtggttgc atggcttctt caaagaacca 1380

gaagattgga gtcagtggta agcattacaa atgaaatggt tacacgaggt atgcgcccaa 1440

atgatcctct gatgacagct tgtatgaggg agctttgcaa gggagggaaa catcaagaag 1500

cagttgggat ttggttcaag acattgaaca aaggtttagg tgttaatctt gcaacttcca 1560

atgcgctaat tcatggtctt tgtgaaggta agtacatgaa agaagctaca aaggttatac 1640

agaccatgtt aaataaggga attgaattgg atagcatcac atataacatt atgattcgag 1700

gttgctgcaa agacagtaaa atggaggaag ctattaaact ccatggcgac atgaccagaa 1760

gagggtttaa gcctgatctt ttcacattta atactttatt gcatgcttat tgcaatttgg 1840

gtaaaatgga ggaaaccttt catctgttgg atcagatgaa aactgagggc cttcagcctg 1900

atatagtgtc atatggcact ataatagatg gtcattgtaa agcaaaggat attcgtaaag 1960

caaaagaata tttgactgaa ttgatggatc gtggacttaa acctaatgtg ttcatttata 2040

atgcacttat tggtggttat ggtaggaatg gtgacatctc tggtgcaatt gatgctgttg 2100

agactatgaa gtctaatggc atacaaccaa ctaatgtgac ttatggtagt cttatgtact 2160

ggatgtgtca tgctggtcta gttgaagagg ccaagaccat tttttcacaa gccagggaaa 2240

acaatgttga cctgggagta attggttaca caattatgat tcaaggttac tgcaaactag 2300

gaaaaatggt tgaagctgtt gcatactttg aggagatgcg ttccaggggt atatctccaa 2360

ataagcttac ttacactact cttatgtatg cttactctaa atctggtaac agtgaagaag 2420

cttccaagct tttcgatgag atggtgggct caggtgttat tcctgacaat attacttatg 2480

gtacactaat tgcaaggtgt tctgaggtaa attcattgga taaggatata ggacatactg 2540

ctgaattgtc ctcaggcgct ttaacaaaag atgatcgtat gtataacata ttatctaatg 2600

gaattaatgc tccttggtgc cagaaagaag ctgcttccag tgttgaatga tgtgtggtca 2660

aggaacctta gggcacacct tctttgttct gacaagaacc gtccaagaat gaacagggag 2740

tagggagaac atgtggccac tgattctgcc tttgatctta tgaattttac atctcctaac 2800

agttccctcc aattcatttg gtcatggtca atctttggga gctatccagc aacagcagag 2860

gttgttctga acatttctgc tcaagtttac atgatcatcc acctactgtc ttgggtgggg 2940

tatccaacag cagcaacaga ttgccctgaa tgtttataat tggttcactt tggtcatcaa 3000

ctaaagcacc ttgagagcca atgtatggat gataatgcaa gatggttgtt gaaccataat 3060

accagctgca aatttcaaaa ggattgccag catactatgg cggcgcaatg tgtggtggga 3120

aacctcacaa tgctggttat tctgcatcct gccacctgct ggcataacag ccatcaggag 3180

tttagtacct ggtgactaga cagcctgtca acatggccac atgggcgttt gcaccatgac 3240

cccaggtcat gtggaatcac ctgtttttat ttacatatgt ttaagaggac aggaagtgag 3300

gaaacttaca gatttactgt tgcttgggtt tatttatggc atcatataaa tatttaggct 3360

atttctatga aaatacaatg tccttaaata ctggtatata agtttagaac aatctctctc 3400

tgatctttat tggtaattgc gttctttctt atcttttttt gtttatgcag ttctctgaat 3460

actgaatttt gtcaggttat ttgcgtcgta tcatcctctc agagatttgc cattttacaa 3520

gctctccaca aagaacacca tattctcctc aattttctga agattgaaat tttgggggga 3580

aacatcaacg ttgattggga tggtgttgag tgtgatcaat tgcaagatgg tgggcattgt 3640

taccatgggg ttttcatgcc attgggttga tggagatgtt gatgccccca gcaggcacaa 3700

ggcaggcctt gtctttctga tgcaactgaa cctactccac taattcgctg tggacattga 3760

catggattaa gatatggcat agctgatcct aaaatcaatt aggcaagaag gctgtcagaa 3820

aatgggaaag gatgacatca tggcagccag gttgtaaatc aactaatgtg cacatgcagt 3880

ttctgttcaa ctagtattat actgacgtgc tgttttgatt tggggaaaga aagatggagc 3940

aaatagtttt catgttttga gtactgtgtt gagatcctgt aagcaatatt acatgttaga 4000

tgtcttcaac aggcgctgaa gttgattgtg gcatatggcc atacctttta ctacctgtac 4060

aattcagggg ttgtatttgt acagtgctga tttatagtct atatgcagaa gtataaataa 4120

tgtagtagta tgacaaattt tggatcttta tgaatgtgtt ggttttgcta ccaaaatttt 4180

gacaa 4185

<210> 3

<211> 7077

<212> DNA

<213> 稻属水稻（Oryza sativa Indica N22）

<220>

<223> 淀粉合成相关蛋白OsNPPR 的基因序列

<400> 3

ccaccacgcc ctcgacgcgt cgcccctctc gacctcccac tcctcgatcc aatcctcgcc 60

gtccatcctt ccctgcgtcc aatccccacc ctccattcga cctccttctt aactttcagc 120

gccgcccacc gttccacatc gaacctccgc catgagacca ccaccacccc acctcctcct 180

cctcctcccc cgccgccgcc gccacgcctc ctcctcctcc gccgccgccg ccgccgccgg 240

agagctcgtc ggcgccctct ccgccttgcc ctcccccgac tcggcgcgac acctcgacgc 300

cctcctccgt cgcatcggcg gcggtggcct cgccgccgtc ctctcgtccc tgccctcccc 360

tctccccgcg gcctccgccc tccgcctcct cctccacctc ctctccagga cctcctccac 420

ctcctcccgc tccgaggatg acctcctcac cccgcgcgtc tcggcgctcc tcctgccctc 480

cctcatcgcc gatcgcaccg ccatccggac ggcgcgccgc ctcctctcac gactcctcca 540

cgtccacccg ctccgcaccg ccgcggaggc ggtcgccgac gccgcctcca ccccctcctc 600

ggacttcctc atccacacct tcatcacctc cccggcccaa ggctccctct gcagggccgc 660

cgacgcgttc cgcgttctct cctcgcgcgg cgcgccgccc tccatcaaga cctgcaatgc 720

gttcctcgaa gcccttgttc gtgcaggtca gctcgatgcc gcccgcgagg tgttcgacga 780

aatgcgtgaa agcaggaacg tcgctctgaa tgagtactcg tataccgcca tgatcaaggc 840

gctctgcaag gctggaaagg tggatgctgg ttttgagatg cttgcagagt tatggcgggc 900

tgggcttcag ccaacggttg tgacgtacaa tgtgcttatg gatgcactgt gtaagagtgg 960

gagggtggag gaggcctttc gattgaaagg gaggatggaa cagggaggga tgacaccaag 1020

cgtggtcaca ttcggtatat tgatcaatgg tcttgcaagg ggcgagcggt ttggggaggt 1080

tggcattgta ttgcaggaga tggaacagtt aggggtttcc cccaatgagg ttatttacaa 1140

tgagcttatt ggttggcatt gtaggaaggg ccattgctca caggcactca ggttgtttga 1200

tgaaatggtt ttaaagaaga tgaagccaac agccgtgact tataacttga ttgcaaaggc 1260

actgtgcaag gaaggggaga tggagcgggc tgagaggata ttggaggata tgttgtcaat 1320

tggaatgaca gttcattgtg gtttgttcaa tacagtggtt gcatggcttc ttcaaagaac 1380

cagaagattg gagtcagtgg taagcattac aaatgaaatg gttacacgag gtatgcgccc 1440

aaatgatcct ctgatgacag cttgtatgag ggagctttgc aagggaggga aacatcaaga 1500

agcagttggg atttggttca agacattgaa caaaggttta ggtgttaatc ttgcaacttc 1560

caatgcgcta attcatggtc tttgtgaagg taagtacatg aaagaagcta caaaggttat 1620

acagaccatg ttaaataagg gaattgaatt ggatagcatc acatataaca ttatgattcg 1680

aggttgctgc aaagacagta aaatggagga agctattaaa ctccatggcg acatgaccag 1740

aagagggttt aagcctgatc ttttcacatt taatacttta ttgcatgctt attgcaattt 1800

gggtaaaatg gaggaaacct ttcatctgtt ggatcagatg aaaactgagg gccttcagcc 1860

tgatatagtg tcatatggca ctataataga tggtcattgt aaagcaaagg atattcgtaa 1920

agcaaaagaa tatttgactg aattgatgga tcgtggactt aaacctaatg tgttcattta 1980

taatgcactt attggtggtt atggtaggaa tggtgacatc tctggtgcaa ttgatgctgt 2040

tgagactatg aagtctaatg gcatacaacc aactaatgtg acttatggta gtcttatgta 2100

ctggatgtgt catgctggtc tagttgaaga ggccaagacc attttttcac aagccaggga 2160

aaacaatgtt gacctgggag taattggtta cacaattatg attcaaggtt actgcaaact 2220

aggaaaaatg gttgaagctg ttgcatactt tgaggagatg cgttccaggg gtatatctcc 2280

aaataagctt acttacacta ctcttatgta tgcttactct aaatctggta acagtgaaga 2340

agcttccaag cttttcgatg agatggtggg ctcaggtgtt attcctgaca atattactta 2400

tggtacacta attgcaaggt gttctgaggt aaattcattg gataaggata taggacatac 2460

tgctgaattg tcctcaggcg ctttaacaaa agatgatcgt atgtataaca tattatctaa 2520

tggaattaat gctccttggt gccagaaaga agctgcttcc agtgttgaat gatgtgtggt 2580

caaggaacct tagggcacac cttctttgtt ctgacaagaa ccgtccaaga atgaacaggg 2640

agtagggaga acatgtggcc actgattctg cctttgatct tatgaatttt acatctccta 2700

acagttccct ccaattcatt tggtcatggt caatctttgg gagctatcca gcaacagcag 2760

aggttgttct gaacatttct gctcaagttt acatgatcat ccacctactg tcttgggtgg 2820

ggtatccaac agcagcaaca gattgccctg aatgtttata attggtgagg catatactct 2880

tacatgatta attagtaatt ttgttttcct gacgttatag catactgtat ttcatttatc 2940

attgctgcat atatgttctc tgccatgtta gttaataagt taaacatacc acctaattca 3000

taagtacttg ttctttggtg tagcactcag ttgatcctga aaatattgga acaaaataat 3060

cattttgtca cgctggacat tcttttgttt ttgtttttga gaaaggggga aaaacaaccc 3120

aatatggaca agaactgcac tgtgacctat caaagctctt atctgcggac tggataatgg 3180

atacacaggt tcactttggt catcaactaa agcaccttga gagccaatgt atggatgata 3240

atgcaagatg gttgttgaac cataatacca gctgcaaatt tcaaaaggta acagtttgta 3300

atgttcaaag ctattattcc gcatgctggc tgttatttac attcatataa attgatcctt 3360

tgtagtgtag tactgtagta ctttgttgta ctatatgatt cttgttaaca gtccagttta 3420

aagtgtctag attagcatca tacttttgtg gggcacactg tctttacatt tcttgttacc 3480

agtccagtct ttatgagtat cattgctata ccatttatac ttttgtttgg gcgctatctt 3540

acatttccct tattttaata gtgcaatatg ctattttctt tgaacagatt gaggaattat 3600

tatgcttact atgtatggta ctatgttctg ttttatttaa ccattggcac atgagaaatg 3660

aacatacact agaatctgta attgaaatga ttggcctgac tccattttca gacttgcaat 3720

accatttgag gaattaaggt ttttgacata tcgcaatctg tctaaggaat taaggatgta 3780

gacattcagt tatatgcaag ttatatcttg accttttatt ttataattga atcatcgcat 3840

tggcttttta cactgacaac tcgaaagaca tgaaaatatg gaatgaggtg ctaggtcaga 3900

caaaaatttt gttggggacg ccatgttcaa cagttaaaca ctccaacagt tctgttgatt 3960

ttaattctag actctagact ctagagtcta gagctcaaga aatgaaaatc agataggatg 4020

ttaaattgtt gctgctgggt ttgtttgttt gatctccctc tcctattgtt gtatggtcag 4080

cttaatgtcg agcttttcac ttgtcttcct caagatgaac tttcaacttt ttctaataac 4140

cttatcagta gttaatcttt ttttttcaga tgtatgaaat gttaattttc tgatctaaca 4200

tagagctcaa tgagcagact ggccttcact aatctcaaat gtttgttctg gattcttttc 4260

actatttttt ttatttcttg tgtattacga catgtggctt atgcacatgt gttatgccat 4320

cagtgtacac aaggaactgg acaaataagt ttggctcggt aattttcata gagtatttta 4380

taatcatcga aaactattaa cttgggttta aaaatacttc taggattgcc agcatactat 4440

ggcggcgcaa tgtgtggtgg gaaacctcac aatgctggtt attctgcatc ctgccacctg 4500

ctggcataac agccatcagg agtttagtac ctggtgacta gacagcctgt caacatggcc 4560

acatgggcgt ttgcaccatg accccaggtc atgtggaatc acctgttttt atttacatat 4620

gtttaagagg acaggaagtg aggaaactta cagatttact gttgcttggg tttatttatg 4680

gcatcatata aatatttagg ctatttctat gaaaatacaa tgtccttaaa tactggtata 4740

taagtttaga acaatctctc tctgatcttt attggtaatt gcgttctttc ttatcttttt 4800

ttgtttatgc agttctctga atactgaatt ttgtcaggtt atttgcgtcg tatcatcctc 4860

tcagagattt gccattttac aagctctcca caaagaacac catattctcc tcagtaagat 4920

cacaacctat atcctcttaa acatattgcg aaaatcgtga tattctgtga gctccatgtt 4980

ttgatgattg agataaacaa aggcttaaaa ttcatcccca cgaaaaatta tgggcctcta 5020

tttattgttc attaccgtct caagttgtca caagattgta gcttcatttg tatttcatta 5080

tatttgaatt ctgaccaggc tgttagattg caattctcct agattttctg aagattgaaa 5140

ttttgggggg aaacatcaac gttgattggg atggtgttga gtgtgatcaa ttgcaagatg 5200

gtgggcattg ttaccatggg gttttcatgc cattgggttg atggagatgt tgatgccccc 5260

agcaggcaca aggcaggcct tgtctttctg atgcaactga acctactcca ctaattcgct 5320

gtggacattg acatggtcag taaagcacta ctttgatgtt atattctatt ataatgtcgc 5380

tgtgaatatc aaataaaatt acattcacat tttcatgtcg actattaaat gcttttggac 5440

atagacagtt aaagctacaa atgtctcact gaacacattc tgggatgatt tacatttgca 5500

tatcagaggg agcaatgttt ctttatgcat tccctgtgct tataaaaatg gattggaagt 5560

caatatccct gagtggagtg gttttgtaag ggaaaaaacc aaactgaccc actctgtagc 5620

ataaatgagt atgcatgtgt gcagatctga tttcttcagg tcatacctga aaaactaaat 5680

taaagacatc cagaaaacaa atctgcatat gaactgttgc actcatgttt cgttgcgtat 5740

atatgctgtg caccactgaa atttcttgtt ggtcacactc tattggttct tgactctatg 5800

agccttacgt gctatcaagc aaggagatat tttcaatcat tttttaatca agttctatta 5860

caaatatctg taattaaacg gtgtttatgg agtacttgtt ttcctactaa ctagtaggct 5920

tcgtttcact gtatttttgt ggcttttgct gcaacaatgt ttgactgtca tgcagtatta 5980

tctgctctga acatcctatg tttcgtgttg ataatagatt caatagatga catacagaaa 6040

gctgcaagtt ctctaaaacg catccaccta gcctgcctag catctagtgc cttaggcaat 6100

cactgttctc ttcgaatcat aatcttgtca ggatcttgat agacttcctg tgaaactcat 6160

gctatattct tttttgatct ctttatgttc tcccccattg ttcttgataa tcttgtcaag 6220

atcttttcat ttatctgatt attcgagcta acatcttctg attgcaaatc atggggtgtt 6280

taagtgcggc aagttttatg aatattttga tgatcactta agttacatgt tattattatt 6340

gtagacaact tgctgctgct gtgctccttg cctccttgtg acttctgagt ttgtctaatc 6400

ttctttgact atgattgaac atgtaccttt taacagaaag tggtcacctt aaaatcacta 6460

aattgtgctc actattacat cacacataat aaaaaggtta acttgaacat ataaaacaat 6520

gattcgagtg ttggatattt tagtaagtaa agtatgattt gttttttagc ttaattgatc 6580

caggtttaca ttgatagtat gaaaccaatg attggttata tatcgacatt tgatggagtt 6640

tttctatttg gatcaggatt aagatatggc atagctgatc ctaaaatcaa ttaggcaaga 6700

aggctgtcag aaaatgggaa aggatgacat catggcagcc aggttgtaaa tcaactaatg 6760

tgcacatgca gtttctgttc aactagtatt atactgacgt gctgttttga tttggggaaa 6820

gaaagatgga gcaaatagtt ttcatgtttt gagtactgtg ttgagatcct gtaagcaata 6880

ttacatgtta gatgtcttca acaggcgctg aagttgattg tggcatatgg ccataccttt 6940

tactacctgt acaattcagg ggttgtattt gtacagtgct gatttatagt ctatatgcag 7000

aagtataaat aatgtagtag tatgacaaat tttggatctt tatgaatgtg ttggttttgc 7060

taccaaaatt ttgacaa 7077

<210> 4

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer1

<400> 4

cgaacctccg ccatgaga 18

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer2

<400> 5

caggctgtct agtcaccagg tac 23

<210> 6

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer3

<400> 6

gagaacacgg gggactctag aatgagacca ccaccacccc 40

<210> 7

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer4

<400> 7

gtccttgtag tccatgtcga cttcaacact ggaagcagct 40

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer5

<400> 8

aaggatacgc gtatcgtgct 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer6

<400> 9

gacgcttgga tggttcttgt 20

序列表

13

Claims

1.一种蛋白质，其特征在于选自如(a)或(b)所示的任一种：

(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与淀粉合成相关的由序列1衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述蛋白的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因是如下1)或2)或3)或4)所示的DNA分子：

1)SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)SEQ ID NO.3所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码SEQ ID NO.1所述蛋白的DNA分子；

4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒或重组菌。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体是在1300-221-3^*Flag载体的多克隆位点XbaI和SalI之间插入权利要求2或3所述基因得到的重组质粒。

6.扩增权利要求2或3所述基因的全长或其任意片段的引物对。

7.权利要求1所述蛋白，权利要求2或3所述基因，权利要求4所述重组表达载体、表达盒或重组菌中的至少一种在植物育种中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于权利要求1所述蛋白，权利要求2或3所述基因，权利要求4所述重组表达载体、表达盒或重组菌中的至少一种在培育淀粉合成正常的转基因植物中的应用。

9.一种培育淀粉合成正常的转基因植物的方法，是将权利要求2或3所述基因导入淀粉合成异常植物中，得到淀粉合成正常的转基因植物；所述淀粉合成异常的植物为胚乳表现为粉质表型的植物；所述淀粉合成正常的转基因植物为胚乳表现透明非粉质的转基因植物。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：权利要求2或3所述基因通过权利要求4或5所述重组表达载体导入淀粉合成异常的植物中。