CN106729788A - 一种去除生物医药制剂中内毒素的方法 - Google Patents

一种去除生物医药制剂中内毒素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，该去除生物医药制剂中内毒素的方法，包括如下步骤：S1：预处理，S2：内毒素检测，S3：原料液过滤，S4：样品处理，S5：平衡处理，S6：内毒素去除，S7：内毒素再检测，S8：原料液保存。本发明提供的一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，预处理可初步去除外接微生物、病毒，内毒素检测可以初步判定内毒素的含量，通过调节PH值，可以去除内毒素，非常方便，去除内毒素过程中加热，提高内毒素去除速率。

Description

一种去除生物医药制剂中内毒素的方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，更具体地说，本发明还涉及一种去除生物医药制剂中内毒素的方法。
背景技术
目前，疫苗、注射液、大输液、放射性药品、化学药品、抗生素药品、生物制品(血液制品、疫苗)、中草药注射剂、透析液等生物医药制剂中都含有内毒素；而如何有效去除医药制剂中的内毒素以及研究适用于大批量医药制剂生产过程的内毒素去除材料和方法是今后生物医药领域研究的热点。
内毒素是产生于革兰氏阴性细菌细胞外壁层的脂多糖类物质，亦即细菌尸体的碎片。内毒素一般以聚体形式存在，其磷酸基团与二价金属离子螯合可进一步稳定内毒素分子间的聚合，促成更大的内毒素复合体，这类复合体的分子量可由几千至数千万不等。内毒素具有体积小、热稳定性强、化学稳定性强等特性，使其在被去除方面有一定难度。
人体对内毒素极为敏感。如有微量内毒素混入药剂中注入人体血液系统，会导致严重发热，甚至引起死亡。如极微量(1～5ng/kg体重)内毒素就能引起体温上升，发热反应持续约4小时后逐渐消退。自然感染时，因革兰氏阴性菌不断生长繁殖，同时伴有陆续死亡、释出内毒素，故发热反应将持续至体内病原菌完全消灭为止。当受感病人(或动物)的血液或病灶中的细菌向血液中释放了很多内毒素，或者相当大量的被内毒素污染的液体输入了病人(或动物)体内时，易患上内毒素血症。因此，尽可能降低制剂中内毒素的含量是十分必要的，特别当注射液(如大输液)用量较大时，对内毒素的含量要求应更为严格，国家药典中规定注射品中内毒素应小于1EU/mL。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种去除生 物医药制剂中内毒素的方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，包括如下步骤：
S1、预处理：将生物医药制剂原料液放置在医疗金属杯内，质量为5-8克，医疗金属杯提前要进行杀菌消毒，然后将装有生物医药制剂原料液的医疗金属杯放入高压蒸汽灭菌箱内处理，温度110-130摄氏度，时间40-50分钟；
S2、内毒素检测：采用凝胶法检测内毒素，向高压蒸汽处理后的医疗金属杯内加入细菌内毒素检查用水(水面完全覆盖生物医药制剂原料液)，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.2-0.4毫升，充分搅拌后产生凝胶；
S3、原料液过滤：将S2处理后的生物医药制剂原料液清洗、过滤干净，使原料液中没有混合凝胶；
S4、样品处理：向医疗金属杯内加入再生缓冲液4-6毫升，加入速度缓慢，每分钟8滴，加入完成后搅拌均匀，静置5分钟，继续加入4-6毫升再生缓冲液，方法同上；
S5、平衡处理：向医疗金属杯内逐滴加入6-8毫升平衡缓冲液，滴加速度为每分钟8滴，再按此操作重复两次；
S6、内毒素去除：另配0.2-0.5M的NaCl溶液、0.1M的氢氧化钠溶液和0.1M盐酸溶液以备使用，向医疗金属杯内加入0.2-0.5M的NaCl溶液10-12毫升，再向医疗金属杯内加入加入0.1M的氢氧化钠溶液，逐滴滴加，调节溶液PH值至7-8，0.1M盐酸溶液用于微调PH值；
S7、内毒素再检测：取出S6中处理后的生物医药制剂原料液1-2克，实用缓冲液平衡该生物医药制剂原料液的PH值，然后向原料液中加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.1-0.2毫升，观察是否产生凝胶，若产生凝胶则将剩余原料液重复S6；
S8、原料液保存：将检测合格的生物医药制剂原料液存储在消毒杀菌后的褐色玻璃瓶内，保存温度10-28摄氏度且放置在无阳光直射位置。
优选的，S6中0.1M的氢氧化钠溶液采用滴加的方法加入医疗金属杯内，滴加速度为0.3ml/min。
优选的，所述S6中试剂添加完成后，可对医疗金属杯进行加热处理，使溶液温度处于80-100摄氏度，提高去除内毒素效率，加热过程对溶液进行搅拌，使溶液PH均匀，若溶液PH值低于7，向溶液中加入0.1M盐酸溶液，维持溶液PH值处于7-8。
本发明的技术效果和优点：本发明提供的一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，预处理可初步去除外接微生物、病毒，内毒素检测可以初步判定内毒素的含量，通过调节PH值，可以去除内毒素，非常方便，去除内毒素过程中加热，提高内毒素去除速率。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，该去除生物医药制剂中内毒素的方法，包括如下步骤：
S1、预处理：将生物医药制剂原料液放置在医疗金属杯内，质量为5-8克，医疗金属杯提前要进行杀菌消毒，然后将装有生物医药制剂原料液的医疗金属杯放入高压蒸汽灭菌箱内处理，温度110-130摄氏度，时间40-50分钟；
S2、内毒素检测：采用凝胶法检测内毒素，向高压蒸汽处理后的医疗金属杯内加入细菌内毒素检查用水(水面完全覆盖生物医药制剂原料液)，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.2-0.4毫升，充分搅拌后产生凝胶；
S3、原料液过滤：将S2处理后的生物医药制剂原料液清洗、过滤干净，使原料液中没有混合凝胶；
S4、样品处理：向医疗金属杯内加入再生缓冲液4-6毫升，加入速度缓慢，每分钟8滴，加入完成后搅拌均匀，静置5分钟，继续加入4-6毫升再生缓冲液，方法同上；
S5、平衡处理：向医疗金属杯内逐滴加入6-8毫升平衡缓冲液，滴加速度为每分钟8滴，再按此操作重复两次；
S6、内毒素去除：另配0.2-0.5M的NaCl溶液、0.1M的氢氧化钠溶液和0.1M盐酸溶液以备使用，向医疗金属杯内加入0.2-0.5M的NaCl溶液10-12毫升，再向医疗金属杯内加入加入0.1M的氢氧化钠溶液，逐滴滴加，调节溶液PH值至7-8，0.1M盐酸溶液用于微调PH值；
S7、内毒素再检测：取出S6中处理后的生物医药制剂原料液1-2克，实用缓冲液平衡该生物医药制剂原料液的PH值，然后向原料液中加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.1-0.2毫升，观察是否产生凝胶，若产生凝胶则将剩余原料液重复S6；
S8、原料液保存：将检测合格的生物医药制剂原料液存储在消毒杀菌后的褐色玻璃瓶内，保存温度10-28摄氏度且放置在无阳光直射位置。
S6中0.1M的氢氧化钠溶液采用滴加的方法加入医疗金属杯内，滴加速度为0.3ml/min。
所述S6中试剂添加完成后，可对医疗金属杯进行加热处理，使溶液温度处于80-100摄氏度，提高去除内毒素效率，加热过程对溶液进行搅拌，使溶液PH均匀，若溶液PH值低于7，向溶液中加入0.1M盐酸溶液，维持溶液PH 值处于7-8。
综上所述：本发明提供的一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，预处理可初步去除外接微生物、病毒，内毒素检测可以初步判定内毒素的含量，通过调节PH值，可以去除内毒素，非常方便，去除内毒素过程中加热，提高内毒素去除速率。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，该去除生物医药制剂中内毒素的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、预处理：将生物医药制剂原料液放置在医疗金属杯内，质量为5-8克，医疗金属杯提前要进行杀菌消毒，然后将装有生物医药制剂原料液的医疗金属杯放入高压蒸汽灭菌箱内处理，温度110-130摄氏度，时间40-50分钟；
S2、内毒素检测：采用凝胶法检测内毒素，向高压蒸汽处理后的医疗金属杯内加入细菌内毒素检查用水(水面完全覆盖生物医药制剂原料液)，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.2-0.4毫升，充分搅拌后产生凝胶；
S3、原料液过滤：将S2处理后的生物医药制剂原料液清洗、过滤干净，使原料液中没有混合凝胶；
S4、样品处理：向医疗金属杯内加入再生缓冲液4-6毫升，加入速度缓慢，每分钟8滴，加入完成后搅拌均匀，静置5分钟，继续加入4-6毫升再生缓冲液，方法同上；
S5、平衡处理：向医疗金属杯内逐滴加入6-8毫升平衡缓冲液，滴加速度为每分钟8滴，再按此操作重复两次；
S6、内毒素去除：另配0.2-0.5M的NaCl溶液、0.1M的氢氧化钠溶液和0.1M盐酸溶液以备使用，向医疗金属杯内加入0.2-0.5M的NaCl溶液10-12毫升，再向医疗金属杯内加入加入0.1M的氢氧化钠溶液，逐滴滴加，调节溶液PH值至7-8，0.1M盐酸溶液用于微调PH值；
S7、内毒素再检测：取出S6中处理后的生物医药制剂原料液1-2克，实用缓冲液平衡该生物医药制剂原料液的PH值，然后向原料液中加入细菌内毒素检查用水，然后向医疗金属杯内加入鲎试剂0.1-0.2毫升，观察是否产生凝胶，若产生凝胶则将剩余原料液重复S6；
S8、原料液保存：将检测合格的生物医药制剂原料液存储在消毒杀菌后的褐色玻璃瓶内，保存温度10-28摄氏度且放置在无阳光直射位置。
2.根据权利要求1所述的一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，其特征在于：S6中0.1M的氢氧化钠溶液采用滴加的方法加入医疗金属杯内，滴加速度为0.3ml/min。
3.根据权利要求1所述的一种去除生物医药制剂中内毒素的方法，其特征在于：所述S6中试剂添加完成后，可对医疗金属杯进行加热处理，使溶液温度处于80-100摄氏度，提高去除内毒素效率，加热过程对溶液进行搅拌，使溶液PH均匀，若溶液PH值低于7，向溶液中加入0.1M盐酸溶液，维持溶液PH值处于7-8。
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