CN106729186A - 用于肝病合并营养不良的药食组合物及其制剂和制备应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物组合物领域,具体涉及一种治疗肝病合并营养不良的药食组合物及制剂和制备应用。所述组合物含有下述几种组分:枸杞、山药、山楂、麦芽和莱菔子。一种中药制剂,包括所述药食组合物作为活性成分和辅料。一种试剂盒,含有中药制剂试剂单元,每个试剂单元含有所述药食组合物的有效用量为0.1g‑3g。还提供了以上药食组合物或中药制剂或试剂盒在制备治疗肝病合并营养不良的药物领域或者在制备保肝护肝的保健品或食品领域中的应用。所述药食组合物具有补充营养素和改善肝功能,改善食欲和减轻腹胀的多种作用,安全性好,口感良好,价格低廉,对于肝病患者的营养补充,具有明显的优势。
Description
技术领域
本发明属于药物组合物领域,具体涉及中药药物组合物领域,尤其涉及一种治疗肝病合并营养不良的药食组合物及其制剂和制备应用。
背景技术
肝病患者普遍存在营养不良,特别是肝硬化和肝癌等重症患者营养不良发生率极高。肝病患者存在的营养不良问题,近年来受到业内高度重视,对营养不良的危害性和营养干预的重要性高度重视。肝脏具有极其复杂的功能,是糖、脂肪、蛋白质代谢的中心器官。以肝硬化为例,由于肝脏结构发生异常,功能发生改变,与之相关的各条代谢途径存在不同程度代谢障碍,肝硬化患者几乎都存在不同程度的营养不良。即使Child-Pugh分级为A级的患者,营养不良率也高达25%。并且随着Child-Pugh分级的增加,营养不良的发生率亦随之增加。肝硬化进展与营养不良的严重程度密切相关,对肝硬化患者的治疗和预后也有着非常严重的影响。(注:Child-Pugh分级是目前国际上对肝病患者肝功能状态优劣的一种最通用的分级方法,分为A、B、C三级,A级肝功能状态最好,C级则最差)
蛋白质-能量营养不良在肝硬化患者中最常见。肝脏受损时,主要影响白蛋白的合成、氨基酸代谢异常和尿素的合成变化。其中氨基酸的代谢异常表现尤为突出。氨基酸代谢异常是引起肝硬化并发症的重要发病机制,如肝性脑病、低蛋白血症、胰岛素抵抗等。首先,氨基酸是构成蛋白质的基本单位,其中血浆(清)氨基酸尤其是支链氨基酸浓度与白蛋白浓度密切相关,而白蛋白浓度与肝硬化腹水等并发症的出现有很大关系。其次,氨基酸失衡(支链氨基酸和芳香族氨基酸比值的下降)是肝性脑病的重要发病机制之一。支链氨基酸主要包括亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸,是维持人体大脑正常功能的必需物质。芳香族氨基酸主要包括苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸,能促进假性神经递质的合成而竞争内源性的多巴胺和去甲肾上腺素。因此,如何改善氨基酸代谢异常是减少肝硬化并发症的关键。有研究表明:补充支链氨基酸可明显促进肝性脑病的恢复,并且可以对抗分解代谢,促进血浆白蛋白合成,加速肝脏再生。如何通过适当营养素进行营养干预改善肝硬化患者氨基酸失衡状态从而治疗肝硬化及其合并症是临床医师及研究者关注的热点问题。
肝病患者最常出现的症状有食欲不振、腹胀等,这些症状会导致病人摄食减少,营养摄入不足,是导致患者营养不良的常见病因。另外,患者口服多种药物,往往会进一步影响食欲和胃的摄入量。而住院病人还会由于大量输液而增加腹胀感,频繁抽血、放腹水等导致的营养物质丢失,以及为配合检查和治疗而频繁的限制饮食,因为很多检查需要空腹进行。肝硬化的病人还会经常被限制钠盐、葡萄糖、蛋白质的摄入,以上多种因素都会导致肝病患者的营养不良进入恶性循环,即营养不良造成肝病进行性加重,反过来肝病又进一步限制了饮食营养的摄入和消化吸收。如何打破这一恶性循环是医学上的难题。
目前临床最常用的解决方案是肠内营养方案和肠外营养方案。肠内营养也就是经口补充营养素,目前临床常用的口服营养素有多种,但存在的问题主要是:①缺少针对肝病患者专用的口服营养补充剂,目前市售的仅有美国生产的“纽娃(Noveliver)”是专门针对肝病的营养素,是目前全球唯一针对肝病患者的新型复合营养及免疫调节素,含有丰富的氨基酸等营养物质,广泛应用于营养不良的肝硬化患者。其他非针对性营养素则需要专业人员的调配才能服用。②目前所有的营养补充剂均为单纯补充营养素,而没有考虑患者的基础肝病是导致患者营养摄入及吸收障碍的根本因素。单纯补充营养素往往由于患者肝功能不全,消化吸收功能差等原因而导致摄入或吸收障碍而作用不佳,达不到预期的目的。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是如何将补充营养素与改善肝功能和消化吸收功能同步进行的问题。
针对肝病患者及其同时存在的营养不良问题,现有技术存在很多不足:
西医对肝病营养不良的干预可以分为肠外营养补充和肠内营养补充两大方法。肠外营养即指经静脉营养补充,常用的为白蛋白、葡萄糖、脂肪乳、氨基酸等,该方案的优点是起效快,但缺点较多:①价格高昂,人血白蛋白在肝病患者最常用,但除了价格高昂之外,还常出现货源紧张,另外因为人血白蛋白是血液制品,存在一定程度的用药风险。②效果不持久,经静脉补充营养素常在短时间内被代谢掉,而作用不持久。③静脉输注脂肪乳可增加感染风险,并有很强的血管刺激,因而临床应用受到很大的限制。
肠内营养是指经口补充营养素,目前临床有很多配方营养素,较多用于外科术后患者。对于肝功能失代偿的患者,常因恶心、腹胀等因素导致患者不能很好接受肠内营养治疗方案。肠内营养素不能解决食欲和腹胀的问题,是其明显不足。
本发明的目的是克服现有技术的不足之处,解决以上现有技术所带来的问题,为合并营养不良的肝病患者,特别是重症肝病患者提供一种由药食两用中药配方而成的,既能补充营养素又能保肝且促进营养吸收的制剂,以克服既往营养方案不能同时解决补充营养素和促进吸收同时进行的缺陷。
本发明的发明人在长期从事肝病临床诊疗过程中,认识到营养不良是导致肝病患者预后不良的重要因素。结合临床经验,开发了一种养肝运脾方,兼顾了营养素补充、保肝、增进食欲、减轻腹胀等多个环节,临床具有明显的优势。
具体而言,本发明提供了一种治疗肝病合并营养不良的药食组合物及其制剂和制备应用。
具体而言,本发明提供了一种用于肝病合并营养不良的药食组合物,其含有下述几种组分:枸杞、山药、山楂、麦芽和莱菔子。
优选的,上述药食组合物,按重量份计,包含枸杞6-12份,山药15-30份,山楂9-15份,麦芽9-15份,和莱菔子1-10份。
优选的,上述药食组合物,按重量份计,包含枸杞10-12份,山药20-28份,山楂12-15份,麦芽12-15份,和莱菔子5-10份。
优选的,上述药食组合物,按重量份计,包括枸杞15份、山药15份、山楂15份、麦芽15份和莱菔子9份。
第二方面,本发明提供了一种用于肝病合并营养不良的中药制剂,所述中药制剂包括以上任一项所述的药食组合物作为活性成分和辅料。
优选的,所述辅料包括乳清蛋白、维生素、蜂蜜、糊精、淀粉和/或蛋白粉中的至少一种。
优选的,所述制剂的剂型包括汤剂、冲剂、片剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂或注射剂。
第三方面,本发明提供了一种用于肝病合并营养不良的试剂盒,所述中药制剂试剂盒含有中药制剂试剂单元,每个试剂单元含有以上任一项所述的药食组合物的有效用量为0.1g-3g。
优选的,所述中药制剂试剂盒含有1-5个试剂单元。
第四方面,本发明提供了一种用于肝病合并营养不良的汤剂的制备方法,包括如下步骤:将以上任一项所述的药物组合物中的各原料浸泡煎煮,分出水煎剂;向剩余药材中加水煎煮过筛,分出水煎剂;合并水煎剂。
第五方面,本发明提供了以上任一项所述的药食组合物或任一项所述的中药制剂或者所述的试剂盒在制备治疗肝病合并营养不良的药物领域或者在制备保肝护肝的保健品或食品领域中的应用。本发明所取得的有益效果为:(1)价格低廉。纽娃含有极为丰富与平衡的氨基酸、维生素、微量元素,以及特殊的生物碱、黄酮、腺苷,是肝细胞白蛋白原料提供剂和蛋白合成激活剂,有益于促进肝脏白蛋白自发合成,缓解肝硬化时的低蛋白状态。纽娃(Noveliver)是目前全球唯一针对肝病患者的新型复合营养及免疫调节素,含有丰富的氨基酸等营养物质,广泛应用于营养不良的肝硬化患者。但是纽娃的价格为每月1920元,价格高,使肝硬化患者在治疗疾病的同时还需大量费用花在改善营养方面。养肝运脾方五味中药,价格低廉,每月的价格为几十元。
(2)口感良好。纽娃服用时配合酸奶或水,成糊状,无味。肝硬化患者食欲下降,这种口感必然会影响进食。养肝运脾方口味酸甜,水煎剂质稀便于服用。
(3)本方面提供的药物组合物具有补充营养素和改善肝功能,改善食欲和减轻腹胀的多种作用,同时安全性好,口感良好,价格低廉,在肝病患者的营养补充方面,具有明显的优势。
附图说明
图1为实施例二建立大鼠肝硬化模型时正常组大鼠肾组织电镜图。
图2为实施例二建立大鼠肝硬化模型时低剂量组大鼠肾组织电镜组。
图3为实施例二建立大鼠肝硬化模型时高剂量组大鼠肾组织电镜组。
图4为实施例三动物实验部分,给药期大鼠体重变化图。
图5为实施例三动物实验部分,正常组与模型组大鼠氨基酸变化图。
图6为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠酪氨酸水平变化图。
图7为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠色氨酸水平变化图。
图8为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠苯丙氨酸水平变化图。
图9为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠异亮氨酸水平变化图。
图10为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠缬氨酸水平变化图。
图11为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠亮氨酸水平变化图。
图12为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠支链氨基酸水平变化图。
图13为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠芳香族氨基酸水平变化图。
图14为实施例三动物实验部分,模型组、纽娃治疗组和中药治疗组大鼠支芳比水平变化图。
具体实施方式
如上所述,针对现有技术的不足,本发明的目的在于提供了一种治疗肝病合并营养不良的药食组合物,在保证药效的基础上,增加患者的耐受性。
本发明所述的药食组合物,是指可以作为药物,用于肝病合并营养不良的患者;同时,也可以用来作为食品或者保健品,用于健康人群的保健和食用。
中医学一般根据患者的症状体征及临床特点,把肝硬化分属于:胁痛,黄疸,癥积,痞块,臌胀,水臌,蜘蛛蛊等。中医证型大致分为肝气郁结证、脾虚湿盛证、湿热内蕴证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚、肝血瘀阻证等,养肝运脾方包括枸杞、山药、山楂、麦芽、莱菔子等5味,枸杞滋补肝肾且能补血;山药大补肺脾肾三脏之气;枸杞配合山药,气血双补,补益肝脾肺肾四脏;山楂善消肉积且能活血柔肝;麦芽善消面积且能理气。四药合用,具有养血柔肝、健脾消导之功效。既能补充肝脏所需的营养物质,又能调整脏器代谢功能,促进营养素的吸收,优于单纯的营养素补充方案,而且以上药物具有安全、廉价的优势。现代研究表明:五药含有丰富氨基酸、微量元素等,在改善肝硬化营养不良、氨基酸代谢失常中,具有一定的意义。
养肝运脾方是首都医科大学附属北京佑安医院中西医结合肝病重点学科开发的中药经验秘方,学科在长期从事肝病临床诊疗过程中,认识到营养不良是导致肝病患者预后不良的重要因素。我们基于肝硬化合并营养不良的病因病机,采用养血柔肝、健脾消导法组方,选用山药、山楂、麦芽、枸杞、莱菔子等5味药食同源的中药组成,用于治疗肝硬化患者的营养不良。前期临床研究表明,本方具有安全、无副作用、口感良好、服用方便、成本低廉等优势,通过改善肝硬化患者的消化吸收功能以及补充微量元素和抗氧化作用机制,对肝硬化合并营养不良具有一定的治疗作用,较目前西医的营养素补充具有明显优势。
而且,本发明提供的主要活性成分配方,其包含枸杞、山药、山楂、麦芽、莱菔子等5味中药组成,一方面可以用于治疗肝病营养不良,另一方面可以作为保肝护肝的产品,用于正常人群的食用和保健。本发明提到的五味中药可以经过处理,例如包括各味中药的各种炮制方法,如麦芽,包括生麦芽、炒麦芽、焦麦芽等。也可以不经过特殊处理,将中药药材调配进行常规的浸泡煎煮等。
具体的,在本发明的一种优选实施方式中,所述药食组合物按重量份计,包含以下物质作为活性成分:枸杞6-12份、山药15-30份、山楂9-15份、麦芽9-15份和莱菔子1-10份;在此基础上还可以添加黄精5-40份、和/或鸡内金3-30份。黄精以根茎入药,味甘,性平,具有补气养阴,健脾,润肺,益肾功能,可以作为滋补之品;鸡内金味甘,性平,可以健胃消食。
本发明的养肝健脾方包含枸杞、山药、山楂、麦芽和莱菔子等5味药食同源的中药作为活性成分,在此基础上可在主方的基础上随证加减。同时可以添加其他辅料制备成不同的中药剂型。所述辅料包括赋形剂以及其他营养性的原料,例如乳清蛋白、蛋白粉和/或维生素等等。所述辅料例如可以占到所述制剂的20%到90%,优选占到30%-90%,优选占到40%-90%,优选占到50%-90%,优选占到60%-90%,优选占到70%-90%。例如可以加入蜂蜜等辅料,按照本领域常用的比例,作成蜜丸食用。
其中在一种优选实施方式中,本发明提供了一种用于肝病合并营养不良的中药制剂试剂盒,所述中药制剂试剂盒含有试剂单元,每个试剂单元含有枸杞、山药、山楂、麦芽和莱菔子作为活性组分,所述的药食组合物的有效用量为每个试剂单元每kg体重人群对应0.1g/天-3g/天。患者或者是健康人群在药用或者食用时,可以根据个人需要每天摄取一个或者三个试剂单元。作为药物使用时,其临床用量可以参照上述值,即为0.1g/kg/天-3g/kg/天。
另外,所述试剂单元可以根据实际制成的剂型的不同,在0.1g/kg/天-3g/kg/天变化。例如,如果是制成丸剂、散剂、片剂等剂型时给药量要小,而制成汤剂或者口服液时给药量要大。
其中,枸杞、山药、山楂、麦芽、莱菔子等均为本领域常用的中药原料,同时收录在《中国药典》中。
枸杞:浆果红色,卵状,栽培者可成长矩圆状或长椭圆状,顶端尖或钝,长7-15毫米,栽培者长可达2.2厘米,直径5-8毫米。种子扁肾脏形,长2.5-3毫米,黄色。花果期6-11月。《神农本草经》中称枸杞“味苦寒,主五内邪气,热中,消渴,周痹。久服能坚筋骨,轻身不老”。现代药理研究表明,枸杞含蛋白质、脂肪、糖、微量元素、胡萝卜素、核黄素以及钙、磷、铁等多种矿物质和18种氨基酸。
山药:本品略呈圆柱形,弯曲而稍扁,长15~30cm,直径1.5~6cm。表面黄白色或淡黄色,有纵沟、纵皱纹及须根痕,偶有浅棕色外皮残留。体重,质坚实,不易折断,断面白色,粉性。无臭,味淡、微酸,嚼之发黏。光山药呈圆柱形,两端平齐,长9~18cm,直径1.5~3cm。表面光滑,白色或黄白色。又称薯蓣,《神农本草经》中记载:薯蓣,味甘,温。主伤中,补虚羸,除寒热邪气。补中,益气力,长肌肉。久服耳目聪明,轻身,不饥,延年。现代学分析,山药含皂苷、粘液质、蛋白质、胆碱、淀粉、多糖、氨基酸、多酚氧化酶、维生素及微量元素等成分。
山楂:果实近球形或梨形,直径1-1.5厘米,深红色,有浅色斑点;小核3-5,外面稍具稜,内面两侧平滑;萼片脱落很迟,先端留一圆形深洼。花期5-6月,果期9-10月,干制后可入药。《日用本草》:化食积,行结气,健胃宽膈,消血痞气块。《本草纲目》:化饮食,消肉积,癥瘕,痰饮痞满吞酸,滞血痛胀。现代学研究表明,山楂含有山楂的主要成分为黄酮类及有机酸类化合物(儿茶精、槲皮素、金丝桃甙、绿原酸、山楂酸、柠檬酸、苦杏仁甙等),另外尚含有磷脂、维生素等。
麦芽:本品呈梭形,长8~12mm,直径3~4mm。表面淡黄色,背面为外稃包围,具5脉;腹面为内稃包围。除去内外稃后,腹面有1条纵沟;基部胚根处生出幼芽和须根,幼芽长披针状条形,长约5mm。须根数条,纤细而弯曲。质硬,断面白色,粉性。气微,味微甘。《本草纲目》:麦糵、谷芽、粟糵,能消导米面诸果食积。现代学研究表明,麦芽含有淀粉、微量元素、氨基酸等成分。
莱菔子:为十字花科植物萝卜Raphanus sativus L.的干燥成熟种子。夏季果实成熟时采割植株,晒干,搓出种子,除去杂质,再晒干。本品呈类卵圆形或椭圆形,稍扁,长2.5~4mm,宽2~3mm。表面黄棕色、红棕色或灰棕色。一端有深棕色圆形种脐,一侧有数条纵沟。种皮薄而脆,子叶2,黄白色,有油性。气微,味淡、微苦辛。辛、甘,平。归肺、脾、胃经。消食除胀,降气化痰。用于饮食停滞,脘腹胀痛,大便秘结,积滞泻痢,痰壅喘咳。
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。但是这些实施例仅为本发明的代表举例而已,不应理解为本发明实施的限定范围。此外,凡是对本发明配方、生产工艺步骤的简单替换或变化,均属于本发明的保护范围。本发明组合物中所用的原料均为本领域技术人员常用的原料。
其中,本发明所提到的氨基酸,参照本领域通用的氨基酸的表述方式,即用三个字母表示氨基酸,分别如下:
丝氨酸(Ser);甘氨酸(Gly);组氨酸(His);苏氨酸(Thr);谷氨酸(Glu);谷氨酰胺(Gln);天门冬氨酸(Asp);天门冬酰胺(Asn);丙氨酸(Ala);精氨酸(Arg);脯氨酸(Pro);半胱氨酸(Cys);赖氨酸(Lys);甲硫氨酸(Met);缬氨酸(Val);酪氨酸(Tyr);异亮氨酸(Ile);亮氨酸(Leu);苯丙氨酸(Phe);色氨酸(Trp);支链氨基酸(BCAA);芳香族氨基酸(AAA)。
实施例一
配制方法:以重量份计算,称取枸杞15g、山药15g、山楂15g、麦芽15g和莱菔子9g等五味中药,煎药前首先将药物加凉水浸泡20分钟左右,有利于药物有效成分的析出。加水后使中药完全浸泡于水中,水面要高出中药2-3cm,煎药先用大火煮沸后,再用文火煮,每剂应煎两次,第一次煎制时间为开锅后30分钟,第二次用开水量较第一次应少,煎制的时间为开锅后40分钟,两次各取药汁200毫升,共计400毫升,混合均匀后,备用。最终制得的药液为69g中药组合物对应于400mL药液。
实施例二 大鼠肝硬化模型的建立
1.材料
1.1实验动物
SPF级健康SD大鼠,雄性,4-6周龄,体重为180±20g/只,共30只。由北京军事研究所提供,在北京市肝病研究所动物房饲养。所有动物在实验前均予普通饲料适应性喂养一周。所有饲料、饮水及垫料达到清洁标准,环境清洁安静,温度控制在26±2℃,湿度控制在60±10%。
1.2主要试剂
四氯化碳 国药集团化学试剂有限公司
橄榄油 北京华源生命科贸发展有限公司
1.3仪器设备
2.方法
2.1四氯化碳油溶液的制备
四氯化碳(CCl4)与橄榄油按体积比配置40%及50%浓度的四氯化碳油溶液,充分搅拌溶解,室温保存,备用。
2.2动物造模
选取30只SPF级SD大鼠,体重200±20g,随机分为三组,每组10只。其中低剂量组给予腹腔注射40%CCl4橄榄油溶液,每周2次,持续8周,2.0mL/100g;高剂量组给腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,持续8周2.0mL/100g;正常组注射生理盐水,每周2次,持续8周2.0mL/100g。
8周后观察大鼠生长状态及存活率,留取大鼠肝脏组织病理以选取最佳的造模注射剂量。
2.3.大鼠一般状况及相关测定
2.3.1大鼠的一般情况
观察大鼠精神状态、皮毛光泽、活动摄食及死亡情况。
2.3.2大鼠肝脏病理观察
处死大鼠留取新鲜肝脏组织用HE染色,电镜下观察肝脏病理切片超微结构并拍照记录。
2.4统计学分析
所有数据处理均采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析,采用x2检验或Fisher精确检验对定性资料进行组间比较;采用t-test或ANOVA检验对定量资料进行组间比较。P<0.05为差异有统计学意义。
3.实验结果
3.1大鼠的一般状况
造模过程中,正常组大鼠表现机警,皮毛整齐有光泽,进食及活动情况均无明显异常,无死亡。
造模组大鼠精神萎靡,皮毛欠光泽,食欲不振,活动迟缓,体形消瘦。
3.2死亡率
造模过程中,高剂量组大鼠死亡7只,死亡率70%,低剂量组死亡2只,死亡率20%。
3.3大鼠肝脏组织电镜观察
对各组肝脏组织进行电镜观察,在电镜放大倍数为12000倍时,如附图1-3所示。其中图1为正常组大鼠电镜图片,图2为低剂量组大鼠电镜图片,图3为高剂量组大鼠电镜图片。如图所示,正常组肝脏组织细胞结构清楚,未见明显异常;低剂量组和高剂量组均可见肝脏纤维增生明显,肝小叶结构紊乱,并形成不典型假小叶。
本发明通过40%、50%四氯化碳油溶液,干预大鼠模型,观察两组大鼠生长变化及成模率,以寻找最佳造模浓度和剂量,尽量避免大鼠对四氯化碳反应的个体差异,以减少大鼠死亡概率,提高模型成功率。
本实验腹腔注射四氯化碳油溶液建造大鼠肝硬化模型,所有模型组大鼠肝脏切片均可见肝脏纤维增生明显,肝小叶结构紊乱,并形成不典型假小叶,造模成功。但在造模过程中,高剂量组死亡率为70%,考虑可能与高剂量四氯化碳肝毒作用迅速剧烈,导致大鼠急性肝衰竭而死亡,不适合进行下一步实验研究。故本实验确定予大鼠腹腔注射40%四氯化碳橄榄油溶液为制备肝硬化模型的适宜剂量。
实施例三 动物实验
在造模成功的基础上,进一步研究本发明的中药配方对于肝硬化大鼠模型氨基酸水平以及一般生长状态的影响。其中,具体实验过程和实验结果如下:
1.材料
1.1实验动物
SPF级健康SD大鼠,雄性,4-6周龄,体重为180±20g/只,共37只。由北京军事研究所提供,在北京市肝病研究所动物房饲养。所有动物在实验前均予普通饲料适应性喂养一周。所有饲料、饮水及垫料达到清洁标准,环境清洁安静,温度控制在26±2℃,湿度控制在60±10%。
1.2药物及试剂
四氯化碳(国药集团化学试剂有限公司);橄榄油(北京华源生命科贸发展有限公司);养肝运脾方(山楂、山药、枸杞、麦芽和莱菔子)由北京佑安医院中药房提供,均购自于北京杏林药业责任有限公司,按照等效剂量系数折算法换算(参考徐叔云教授主编的《药理实验方法学》),水煎浓缩至所需浓度(即将实施例一制备的400mL的药液浓缩至63.5mL);纽娃(北京美澳嘉事生物技术有限公司,配制浓度为0.18g/mL);氨基酸试剂盒:北京质谱医学研究有限公司MSLAB-45+AA批号:MSLAB451561#;甲醇、已腈等均购自fisher。
1.3主要仪器
电子天平(德国Sartorius公司,BP1215);低温离心机(美国sigma公司,3-18k);超速离心机(美国Thermo公司,WX100);超低温冰箱(美国Thermo公司);全自动石蜡切片机(德国Leica公司,LEICA RM2235);石蜡包埋机(德国Leica公司,LEICA 1150H);光学显微镜(日本OLYMPUS公司,CH型);展片机(德国Leica公司,HI1210);照相系统(日本尼康公司,Eclipso 501型);显微图像分析系统(日本尼康公司,Image-pro plus 6.0);高效液相色谱串联质谱联用仪仪器型号:HPLC-MS/MS(Ultimate3000-API 3200 Q TRAP)。
2.实验方法
37只大鼠随机分为正常组(7只)、模型组(30只)。所有模型组大鼠给予腹腔注射40%CCl4橄榄油溶液,每周2次,持续8周,2.0mL/100g。8周后模型组大鼠病理切片证实造模成功。
然后将模型组随机等量分为3组,模型组、纽娃治疗组、中药治疗组。纽娃治疗组灌胃纽娃,2mL,每日一次;中药治疗组灌胃养肝运脾方,2mL,每日一次;正常组与模型组均灌胃生理盐水,2mL,每日一次。各组均干预治疗6周。
治疗期间,在0周、2周、4周、6周测量大鼠体重,尾静脉取大鼠静脉血0.5mL,进行血清氨基酸水平分析。治疗结束后处死大鼠,留取肝脏组织行电镜观察病理变化。
3.统计学处理
所有数据处理均采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析,采用x2检验或Fisher精确检验对定性资料进行组间比较;采用t-test或ANOVA检验对定量资料进行组间比较。P<0.05为差异有统计学意义。
4.结果
4.1各组大鼠一般情况的比较
实验过程中,正常组大鼠共计7只,大鼠表现机警,皮毛整齐有光泽,进食及活动情况均无明显异常,造模期无死亡,给药期死亡2只。造模组大鼠共计30只,大鼠精神萎靡,皮毛欠光泽,食欲不振,活动迟缓,体形消瘦;其中大鼠在造模期死亡7只,剩余23只模型组大鼠,随机分为模型组(7只)、纽娃治疗组(8只)和中药治疗组(8只),进行给药处理。给药期模型组死亡3只,纽娃治疗组死亡3只,中药治疗组死亡2只。给药期三组肝硬化大鼠一般情况无明显差异,中药治疗组大鼠体重增长比其他组有增多趋势(P>0.05),如图4所示。从图4可以看出,治疗期内给予中药治疗的大鼠,其体重增长的趋势也比纽娃治疗组更明显。
4.2模型组大鼠与正常大鼠血清氨基酸水平比较
比较正常组大鼠和模型组(肝硬化大鼠)大鼠的血清氨基酸水平变化。与正常组比较,肝硬化大鼠血清氨基酸水平变化较大,氨基酸水平紊乱,水平升高及降低均可见,其中丝氨酸(Ser)、色氨酸(Trp)水平下降、芳香族氨基酸(AAA)水平升高、支链氨基酸(BCAA)与芳香族氨基酸(AAA)比值下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结果见图5和表1所示。
表1 正常组与肝硬化大鼠氨基酸变化
注:与正常组比较,*P<0.05
4.3给药期肝硬化大鼠氨基酸水平变化
在给药期,分别于给药后第0周,第2周,第4周,以及第6周,观察不同组,包括模型组,中药给药组以及纽娃给药组大鼠氨基酸水平变化。在观察支芳比及相关氨基酸水平变化中发现,养肝运脾方在影响肝硬化大鼠氨基酸水平上作用与纽娃相似,组间比较基本无统计学差异;中药治疗组与模型组比较,氨基酸水平差变化异较大,其中以支芳比(BCAA/AAA)升高,芳香族氨基酸水平下降最为明显,且差异均有统计学意义(P<0.05)。随着肝硬化大鼠模型病程进展,大鼠体内支链氨基酸(包括亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)及相关氨基酸水平均呈下降趋势,其中模型组支链氨基酸水平下降明显,其中异亮氨酸(Ile)、缬氨酸(Val)下降具有统计学差异(P<0.05),中药治疗组芳香族氨基酸下降明显,其中色氨酸(Try)下降具有统计学差异(P<0.05)。模型组支芳比值明显下降(P<0.05),中药治疗组及纽娃组支芳比值明显升高(P<0.05),且中药治疗组趋势更加明显。肝硬化进展中,大鼠支链氨基酸及芳香族氨基酸都成下降趋势,支芳比也逐渐降低,中药治疗组在与模型组比较时,支芳比显著提高,说明养肝运脾方有改善肝硬化大鼠支芳比的作用,且主要以减缓支链氨基酸的降低而改善支芳比。结果见表2-10以及图6-图14所示。
表2 酪氨酸水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
表3 色氨酸水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
表4 苯丙氨酸水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
表5 异亮氨酸水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
表6 缬氨酸水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
表7 亮氨酸水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
表8 支链氨基酸水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
表9 芳香族氨基酸水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
表10 支芳比水平变化
注:中药治疗组与模型组比较,*P<0.05;与纽娃治疗组比较,△P<0.05;与治疗前相比#P<0.05
实施例四 临床实验
本发明的养肝健脾方作为中药经验秘方,在临床使用时,大量的临床实践表明其可以有效治疗肝病营养不良患者。其在临床使用时,通常视肝病营养不良的病情严重程度,按照每个成年病人临床剂量即60-150g/天给药,然后按照实施例一的方法配制成药物煎剂使用。作为滋补食品或者药品时,可以缩写用量,将药物组合物的量缩写为10g/天,甚至于更少,以便进行滋补。
肝硬化患者几乎都存在不同程度的营养不良,蛋白质-能量营养不良(PEM)在肝硬化患者中最常见。其中氨基酸的代谢异常表现尤为突出。氨基酸代谢异常是引起肝硬化并发症的重要发病机制,如肝性脑病(HE)、低蛋白血症、胰岛素抵抗等。改善肝硬化患者氨基酸水平对减少并发症十分重要。
在中医方面一般根据患者的症状体征及临床特点,把肝硬化属于:胁痛,黄疸,症积,痞块,臌胀,水臌,蜘蛛蛊等。中医证型大致分为肝气郁结证、脾虚湿盛证、湿热内蕴证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚、肝血瘀证等,养肝运脾方为枸杞、山药、山楂、麦芽和莱菔子等五位组成,枸杞滋补肝肾且能补血;山药大补肺脾肾三脏之气;枸杞配合山药,气血双补,补益肝脾肺肾四脏;山楂善消肉积且能活血柔肝;麦芽善消面积且能理气,同时再辅以莱菔子消胀满。五药合用,具有养血柔肝、健脾消导之功效。从现代研究理论上表明:五药含有丰富氨基酸、微量元素等,在改善肝硬化营养不良、氨基酸代谢失常中,具有一定理论指导意义。
肝硬化患者肝脏受损,氨基酸代谢异常。氨基酸代谢异常是引起肝硬化并发症的重要发病机制。首先其中血清氨基酸尤其是支链氨基酸浓度与白蛋白浓度密切相关,而白蛋白浓度与肝硬化腹水等并发症的出现有很大关系,随着患者病程进展,肝硬化程度的加深,支链氨基酸水平下降,实验证明养肝运脾方有减缓支链氨基酸下降的作用,这对改善患者白蛋白水平及防治腹水形成有一定积极作用。其次,氨基酸失衡(支链氨基酸和芳香族氨基酸比值的下降)是肝性脑病的重要发病机制之一。有研究表明:补充支链氨基酸可明显提高肝性脑病的恢复,并且可以对抗分解代谢,促进血浆白蛋白合成,加速肝脏再生。养肝运脾方正是以减少支链氨基酸的消耗,调整支芳比改善肝硬化大鼠氨基酸水平,故可能具有减少肝性脑病的风险。纽娃(Noveliver)是目前全球唯一针对肝病患者的新型复合营养及免疫调节素,含有丰富的氨基酸等营养物质,广泛应用于营养不良的肝硬化患者,本动物实验显示养肝运脾方在治疗肝硬化大鼠氨基酸水平变化、改善支芳比的过程中,与纽娃组比较结果无统计学差异。养肝运脾方后续可尝试在临床应用,改善肝硬化患者的营养不良和代谢紊乱状态。这为是否能有更经济实惠的中药方剂代替昂贵的营养品提出新思路及证据,可以作为治疗肝硬化患者营养问题的新思路。
以上所述仅为本发明较佳实施例,并不用于局限本发明,凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等,均需要包含在发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种用于肝病合并营养不良的药食组合物,其含有下述几种组分:枸杞、山药、山楂、麦芽和莱菔子。
2.根据权利要求1所述的药食组合物,其特征在于,按重量份计,包含枸杞6-12份、优选10-12份,山药15-30份、优选20-28份,山楂9-15份、优选12-15份,麦芽9-15份、优选12-15份,和莱菔子1-10份、优选5-10份。
3.根据权利要求1或2所述的药食组合物,其特征在于,按重量份计,包括枸杞15份、山药15份、山楂15份、麦芽15份和莱菔子9份。
4.一种用于肝病合并营养不良的中药制剂,其特征在于,所述中药制剂包括权利要求1-3中任一项所述的药食组合物作为活性成分和辅料。
5.根据权利要求4所述的中药制剂,其特征在于,所述辅料包括乳清蛋白、维生素、蜂蜜、糊精、淀粉和/或蛋白粉中的至少一种。
6.根据权利要求4或5所述的中药制剂,其特征在于,所述制剂的剂型包括汤剂、冲剂、片剂、口服液、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂或注射剂。
7.一种用于肝病合并营养不良的试剂盒,所述中药制剂试剂盒含有中药制剂试剂单元,每个试剂单元含有权利要求1-3中任一项所述的药食组合物的有效用量为0.1g-3g。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述中药制剂试剂盒含有1-5个试剂单元。
9.一种用于肝病合并营养不良的汤剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:将权利要求1-3中任一项所述的药物组合物中的各原料浸泡煎煮,分出水煎剂;向剩余药材中加水煎煮过筛,分出水煎剂;合并水煎剂。
10.权利要求1-3中任一项所述的药食组合物或权利要求4-6中任一项所述的中药制剂或者权利要求7或8所述的试剂盒在制备治疗肝病合并营养不良的药物领域或者在制备保肝护肝的保健品或食品领域中的应用。
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20170531 |