CN106726867B - 一种椴树花提取物的提取方法及该提取物的应用 - Google Patents

一种椴树花提取物的提取方法及该提取物的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及植物提取方法及植物提取物技术领域，具体涉及一种椴树花提取物的提取方法及该提取物的应用。该椴树花提取物的提取方法为通过称取椴树花粉末，以极性溶剂进行超声萃取，提取液减压回收溶剂后经过一次大孔树脂分离后，目标洗脱液浓缩得到椴树花提取物A，再经二次柱层析纯化，乙醇洗脱，收集，冷冻干燥后得椴树花提取物B。椴树花提取物B具有良好的皮肤保湿及抗衰老功效，可应用于化妆品领域；椴树花提取物A添加在卷烟中，能提高卷烟吸食效果，具有增加清甜香，提高烟气量、降低刺激性及改善口感作用。

Description

一种椴树花提取物的提取方法及该提取物的应用
技术领域
本发明涉及植物提取方法及植物提取物技术领域，具体涉及一种椴树花提取物的提取方法及该提取物的应用。
背景技术
我国地大物博，植物种类繁多，所含有效成分的组成也各有特点，为功效性植物添加剂的开发提供了丰富的资源。可通过不同方式方法对植物有效成分进行提取分离，探索植物有效成分在不同领域的应用，以便提升其经济价值。
椴树为椴树科，椴树属，是一个特征非常明显的类群，因其花序或果序上独特的大型叶状苞片和通常基部偏斜的叶片而易于区别于其它类群。葛仁、唐亚等将全世界椴树划分为25种，其中北美2种、欧洲5种、东亚18种，我国共天然分布有椴树属树木14种，特有种10种，而南京椴就是特有种之一。据文献报道，椴树花有益气补胃、止疼解毒，有医治和减轻高血压、心脏病、便秘、失眠等多种疾病的功效。我国目前还没有直接研究椴树花中所含化学成分的报道。欧美树种的研究报道略多，且以黄酮类化合物的研究为主。国外研究发现椴树花浸提物多年来被用作抗焦虑药，还可用于感冒、发寒、支气管炎等，是由于类黄酮物质能与高亲和力苯二氮类物质结合，苯二氮通过与各自的受体作用发挥免疫作用。
椴树花水提物在浓度为0.5-20μg/ml时对淋巴细胞的增殖有刺激作用。目前有文献报道椴树花提取物在防晒化妆品中的应用。
中国发明专利CN201110385359.1发明一种含有椴树花提取物的防晒组合物，其中制备方法针对多种组合物的简单提取和混合，未涉椴树花成分分离纯化工艺；中国发明申请专利（CN201410315746.1）公开了含有椴树花提取液的防晒化妆品组合物配方，但未涉及椴树花提取液的制备方法。
综合现有文献资料，未发现有针对椴树花提取物的提取方法的研究及其在其他领域的应用报道。
发明内容
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种椴树花提取物的提取方法，通过从椴树花中直接提取得到活性物质。
本发明的目的在于提供一种椴树花提取物A及一种椴树花提取物A的应用，其能有效提高卷烟吸食品质，具有增加清甜香，提高烟气量、降低刺激性及改善口感作用。
本发明的目的在于提供一种椴树花提取物B及一种椴树花提取物B的应用，树花提取物B具有抑制弹性蛋白酶及皮肤保湿作用，故该椴树花提取物B可制成具有提高皮肤弹性、减少皱纹以及滋润保湿等功能的化妆品。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种椴树花提取物的提取方法，包括以下步骤：
步骤一：将a重量份的椴树花粉碎，加入极性溶剂进行超声提取1-2次，每次加入极性溶剂为10a-16a重量份，将滤液减压浓缩得到a重量份椴树花粗提液；
步骤二：将步骤一得到的a重量份椴树花粗提液离心，得到的离心液进行大孔树脂吸附处理，依次采用去离子水、质量分数为60%-70%的乙醇水溶液洗脱，再用质量分数为85%乙醇的洗脱，收集质量分数为60%-75%的乙醇洗脱液，减压浓缩至0.5a重量份的椴树花提取物A。
进一步的，还包括步骤三：将步骤二中的质量分数为85%的乙醇洗脱液减压浓缩至0.5a重量份，与步骤二最终得到的0.5a重量份的椴树花提取物A混合后进行柱层析，依次用去离子水、质量分数为70%的乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥后得到椴树花提取物B。
a重量份中的a可以为任意数值。
其中，所述步骤一中所述极性溶剂是饱和石灰水与乙醇的混合溶液，其中乙醇在混合溶液中的质量分数为30-60%。
其中，所述步骤一种超声提取采用的是循环双频超声提取，超声频率为20KHz及49KHz，超声频率为600-800W，时间为30-50min，温度为50-60℃。
其中，所述步骤三中，柱层析的填料为粒度为20-40目大小的聚酰胺树脂。
其中，所述步骤二中的大孔树脂为弱极性大孔吸附树脂。
一种椴树花提取物A，上述步骤一、步骤二的制备方法制备得到。
一种椴树花提取物A的应用，将所述椴树花提取物A添加到卷烟中，所述椴树花提取物A的添加量为烟丝重量的0.01-0.5%。
一种椴树花提取物B，由上述步骤步骤一、步骤二、 步骤三所述的制备方法制备得到。
一种含有椴树花提取物B的应用，将所述椴树花提取物B添加到化妆品或护肤品中，具有保湿和抗衰老的作用，所述椴树花提取物B的添加重量百分比为0.01-0.2%。
本发明的有益效果在于：本发明公开一种椴树花提取物的制备方法，通过步骤一和步骤二提取得到提取物A，其能够应用到香烟中，其能有效提高卷烟吸食品质，具有增加清甜香，提高烟气量、降低刺激性及改善口感作用。
再经过步骤三进一步可以得到椴树花提取物B，具有抑制弹性蛋白酶及皮肤保湿作用，故该椴树花提取物B可制成具有提高皮肤弹性、减少皱纹以及滋润保湿等功能的化妆品。
本发明的步骤一中极性溶剂为含有饱和石灰水的乙醇溶液，加上循环双频超声提取，能更高效的提高活性成分提取率，提取温度相对较低，能保护椴树花活性成分的稳定性。经过步骤二中的大孔树脂吸附后，有效除去色素、淀粉，保留椴树花活性提取成分。步骤三中进一步的聚酰胺树脂纯化，能有效提高椴树花的活性成分纯度，降低杂质含量。
整个制备过程相对简单，设备易于实现工业化生产。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
本发明采用的是新鲜椴树花作为原料，相对干燥后的椴树花，新鲜椴树花完全保留了有效成分，使其能够充分发挥出功效，因此本发明采用新鲜椴树花为原料进行研究，实际应用也可以选择干燥后的椴树花为原料。以下的乙醇浓度都为质量分数。
实施例1
称取 100g的椴树花粉碎，加入1kg饱和石灰水与60%的乙醇的混合溶液进行循环双频超声2次，超声频率为20KHz及49KHz，超声频率为800W，时间为30min，温度为60℃；合并滤液，减压浓缩得到100g椴树花粗提液；粗提液经过离心后进行AB-8树脂吸附，依次采用去离子水、60%乙醇水溶液洗脱，85%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩至50g，得椴树花提取物A；将85%乙醇洗脱液减压浓缩至50g重量份，与50g椴树花提取物A混合后进行粒度为20目的聚酰胺树脂纯化，依次用去离子水、70%乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥后得到15.2g椴树花提取物B。
实施例2
称取 100g的椴树花粉碎，加入1.5kg饱和石灰水与50%的乙醇的混合溶液进行循环双频超声1次，超声频率为20KHz及49KHz，超声频率为600W，时间为48min，温度为55℃；合并滤液，减压浓缩得到100g椴树花粗提液；粗体液经过离心后进行XAD-2树脂吸附，依次采用去离子水、70%乙醇水溶液洗脱，85%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩至50g，得椴树花活提取物A；将85%乙醇洗脱液减压浓缩至50g重量份，与50g椴树花提取物A混合后进行粒度为30目的聚酰胺树脂纯化，依次用去离子水、70%乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥后得到13g椴树花提取物B。
实施例3
称取 100g的椴树花粉碎，加入1.2kg饱和石灰水与35%乙醇的混合溶液进行循环双频超声1次，超声频率为20KHz及49KHz，超声频率为700W，时间为40min，温度为50min；合并滤液，减压浓缩得到100g椴树花粗提液；粗体液经过离心后进行ADS-7树脂吸附，依次采用去离子水、60%乙醇水溶液洗脱，85%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩至50g，得椴树花提取物A；将85%乙醇洗脱液减压浓缩至50g重量份，与50g椴树花活性部位A3混合后进行粒度为40目的聚酰胺树脂纯化，依次用去离子水、70%乙醇水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥后得到16.3g椴树花提取物B。
实施例4：下述对上述具体实施例的制备方法制备得到的椴树花提取物A的卷烟加香加料测试。
椴树花提取物A的挥发性成分分析
对本发明的方法生产的椴树花提取物A进行了检测，通过气相色谱-质谱对制备的椴树花椴树花提取物A的挥发性和半挥发性成分进行检测，其结果见表1。
表1椴树花提取物A的化学成分
序号 化学名 时间/min 相对质量分数/%
1 甲酸乙酯 2.459 0.019
2 异丁醛 2.788 0.1
3 乙酸 3.189 0.106
4 3-甲基呋喃 3.29 0.029
5 乙酸乙酯 3.435 0.069
6 异戊醛 4.116 0.187
7 2-甲基丁醛 4.305 0.414
8 戊醛 5.087 0.017
9 2-乙基呋喃 5.16 0.057
10 2,5-二甲基呋喃 5.333 0.007
11 乙醛二乙醇缩醛 6.01 0.005
12 己醛 8.695 0.043
13 2-乙酰基呋喃 8.7 0.045
14 叶醇 11.787 0.015
15 苯甲醛 18.428 0.045
16 2,3-辛二酮 19.645 0.013
17 甲基庚烯酮 19.959 0.026
18 β-月桂烯 20.075 0.051
19 2-戊基呋喃 20.172 0.294
20 己酸乙酯 20.694 0.006
21 2-戊烯基呋喃 20.901 0.029
22 α-松油烯 21.954 0.008
23 对孟烯 22.597 0.015
24 柠檬烯 22.843 0.105
25 顺式罗勒烯 23.408 0.029
26 苯甲醇 23.935 0.008
27 1,2-壬二烯 23.993 0.111
28 β-罗勒烯 24.167 0.053
29 苯乙醛 24.273 0.103
30 γ-松油烯 25.007 0.01
31 苯乙酮 25.992 0.013
32 芳樟醇氧化物 26.137 0.124
33 α-异松油烯 27.181 0.032
34 芳樟醇 28.094 0.225
35 壬醛 28.258 0.064
36 苯乙醇 29.543 0.07
37 2-癸酮 34.61 0.049
38 α-松油醇 34.837 0.063
39 藏花醛 35.464 0.106
40 癸醛 35.513 0.021
41 1-对孟烯-9-醛 36.662 0.075
42 4-亚甲基-3,5,5-三甲基-2-环己烯酮 36.923 0.079
43 苯乙酸乙酯 38.551 0.017
44 壬酸 40.575 0.049
45 壬酸乙酯 41.671 0.049
46 对乙烯基愈创木酚 43.574 0.08
47 癸酸 46.97 0.021
48 2-癸烯醛 47.791 0.027
49 β-突厥烯酮 47.941 0.021
50 癸酸乙酯 48.226 0.02
51 2-羟基-4-甲氧基苯乙酮 51.955 0.196
52 α-姜黄烯 53.771 0.055
53 α-慕罗烯 54.766 0.012
54 α-香柠檬烯 54.882 0.027
55 β-金合欢烯 55.046 0.012
56 δ-杜松烯 55.882 0.063
57 二氢猕猴桃内酯 56.611 0.153
58 十二酸 57.742 0.202
59 十二酸乙酯 58.601 0.121
60 甲氧基丁香酚 59.495 0.057
61 α-柏木脑 59.645 0.066
62 二苄醚 61.292 0.063
63 β-姜黄酮 61.688 0.036
64 十四酸 64.76 0.068
65 十四酸乙酯 65.455 0.46
66 六氢法尼酮 67.02 2.82
67 十五酸乙酯 68.291 0.15
68 十六酸甲酯 69.18 1.677
69 十六酸 70.484 7.784
70 十六酸乙酯 70.938 8.151
71 十七酸乙酯 73.372 0.153
72 亚油酸甲酯 73.507 0.416
73 油酸甲酯 73.614 0.122
74 亚麻酸甲酯 73.691 0.161
75 植醇 73.952 1.09
76 十八酸甲酯 74.145 0.063
77 亚油酸乙酯 75.043 1.782
78 油酸乙酯 75.135 0.905
79 亚麻酸乙酯 75.232 1.145
80 亚油酸 75.377 1.515
81 十八酸乙酯 75.652 0.461
共鉴定出81种挥发性成分，其中含有丰富的单萜烯类及脂肪酸酯，这些成分有助于改善卷烟口感。同时β-突厥烯酮、二氢猕猴桃内酯、六氢法尼酮等均为烟草中重要的致香成分。
实施例5：将实施例1-3制备得到的椴树花提取物A在卷烟加香加料测试
将上述实施方式1-3中制得的椴树花提取物A均用50%丙二醇溶液稀释至100倍，然后喷洒在同一种中档空白（未加香加料）烤烟烟丝表面。各椴树花活性部位均设定4种添加量进行试验（添加量为烟丝的0.01%、0.05%、0.1%、0.5%）。后续处理按常规的卷烟工艺进行，即在喷施椴树花活性部位的稀释液后，将烤烟烟丝贮存4小时，再经过切丝、烘丝、加香、贮丝、卷接和包装工序制成卷烟成品。由8人组成的评吸小组分别对上述样品进行评吸对比，得到的总体感官试验结果如下表所示。其中，将空白样品的内在品质均设定为0，相对于空白样品内在品质有所改进（清甜香增加，烟气量提高、刺激性降低及口感变好），则相应得正分，分值越高，改进越好；相对于空白样品内在品质有所降低（如清甜香降低，烟气量减少、刺激性增加及口感变差），则相应得负分，负分越低，改进越差。每项满分为正负6分。
表2卷烟评吸结果
Figure DEST_PATH_IMAGE001
从上述表格可知，相对于空白样品的卷烟，在烟叶上增加的椴树花提取物A的卷烟香气均能增加其清甜香，刺激性有所降低，烟气量提高，口感变好。具体用量需根据不同烤烟的实际情况进行确定。
下述对上述具体实施例的制备方法制备得到的椴树花提取物B的抑制弹性蛋白酶和保湿性能的效果进行测试。
实施例6：将实施例1-3制得的椴树花提取物B的弹性蛋白酶抑制活性的检测。
分别将实施例1、2、3制备得到的椴树花提取物B溶于二甲亚砜，配制成质量百分比0.01%、0.1%、1%的溶液，用于测定弹性蛋白酶抑制活性。测定步骤为：在96孔板中加入10uL样品溶液和130uL含有1.015mM反应底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M Tris-Cl缓冲溶液（pH8.0），在25℃下温育5min，加入15uL弹性蛋白酶溶液（0.5U/ml），继续在25℃下温育30min，然后用酶标仪测定410nm 波长的吸光度A410。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液同样测定吸光度。
弹性蛋白酶活性抑制率计算公式为：
抑制率（%）=（A0-（A410-B））/A0×100%。
其中A0是参比溶液的吸光度，A410是样品溶液的吸光度，B 是样品水溶液稀释3 倍后的吸光度。
最终测得椴树花提取物的弹性蛋白酶抑制率如表3所示。
表3 椴树花活性部位的弹性蛋白酶抑制率
Figure DEST_PATH_IMAGE003
从表3中可以看出，从椴树花中获得的椴树花提取物B均能实现对弹性蛋白酶活性的抑制，其中实施例1制得的椴树花提取物B对弹性蛋白酶活性的抑制作用最强，表明其可以应用于延缓衰老的化妆品中，具有延缓衰老的作用。
实施例7：皮肤保湿功效的检测
选取10名健康的受试者，平均年龄31岁。采用德国CK公司的皮肤水分测试仪Corneometer825对涂抹不同浓度的椴树花活性部位B的受试者进行角质层含水量测定。
环境条件：测试期间环境的温度和湿度恒定，温度为（25±2）℃，相对湿度为40%～60%。涂抹部位：距手臂胳膊肘关节4、8cm处，受测面积（3×3CM2）；时长60min。读数用任意单位(Arbitrary Unit, A. U.)来表示。样品用20%乙醇稀释成不同浓度，20%乙醇水溶液做空白对照。结果如下表4。
表4保湿能力测试结果
Figure DEST_PATH_IMAGE005
从表4中可以看出，从椴树花中获得的椴树花提取物B均能实现对较为优越的皮肤保湿能力，其中用量达到0.1%以上时，保湿能力显著提升。表明椴树花活性部位B可以应用于保湿化妆品中，具有保湿功能。
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种椴树花提取物的应用，其特征在于：将所述椴树花提取物添加到卷烟中，所述椴树花提取物的添加量为烟丝重量的0.01-0.5%；
所述椴树花提取物的提取方法包括以下步骤：
步骤一：将1重量份的椴树花粉碎，加入极性溶剂进行超声提取1-2次，每次加入极性溶剂为10-16重量份，将滤液减压浓缩得到1重量份椴树花粗提液；所述极性溶剂是饱和石灰水与乙醇的混合溶液，其中乙醇在混合溶液中的质量分数为30-60%；
步骤二：将步骤一得到的1重量份椴树花粗提液离心，得到的离心液进行大孔树脂吸附处理，依次采用去离子水、质量分数为60%-70%的乙醇水溶液洗脱，再用质量分数为85%乙醇的洗脱，收集质量分数为60%-75%的乙醇洗脱液，减压浓缩至0.5重量份的椴树花提取物。
2.根据权利要求1所述的一种椴树花提取物的应用，其特征在于：所述步骤一中超声提取采用的是循环双频超声提取，超声频率为20KHz及49KHz，超声频率为600-800W，时间为30-50min，温度为50-60℃。
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