CN106701659A - 一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法 - Google Patents
一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106701659A CN106701659A CN201610938827.6A CN201610938827A CN106701659A CN 106701659 A CN106701659 A CN 106701659A CN 201610938827 A CN201610938827 A CN 201610938827A CN 106701659 A CN106701659 A CN 106701659A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- solution
- culture
- cells
- granular
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000002503 granulosa cell Anatomy 0.000 title abstract 6
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title abstract 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 title abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 134
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000001733 follicular fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 21
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 8
- 210000002394 ovarian follicle Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 230000003325 follicular Effects 0.000 claims description 3
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 7
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 6
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 abstract 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 2
- 238000000059 patterning Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 201000003373 familial cold autoinflammatory syndrome 3 Diseases 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003684 theca cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000032 total current spectroscopy Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
- C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法，其包括以下步骤：收集卵巢，抽吸卵泡液，离心收集细胞；重悬细胞，离心收集细胞，使细胞分散，重复此过程2‑3遍；将细胞放于培养箱中培养；培养24h后细胞换液，吸走溶液、未贴壁细胞和卵母细胞，润洗一次，加入新鲜的溶液继续培养，细胞每培养24h换液一次。本发明的有益之处在于：(1)在颗粒细胞的收集过程中，省去了在体式显微镜下用口吸管捡取卵母细胞的步骤，卵母细胞在培养液中为悬浮生长，培养皿中少量卵母细胞在培养24h后随着换液一起被吸走，贴壁的颗粒细胞即为纯净的颗粒细胞；(2)缩短了体外操作时间，进而提高了颗粒细胞的存活率；(3)获得的颗粒细胞更加纯净。
Description
技术领域
本发明涉及细胞培养方法，具体涉及一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法，属于细胞分离纯化和培养技术领域。
背景技术
卵巢颗粒细胞是卵巢次级卵泡发育至囊状卵泡过程中随着卵泡腔的扩大和卵泡液增多，在卵泡腔内壁由卵泡膜细胞分化而成的一种细胞，因这种细胞胞浆中含颗粒样物质，故称其为颗粒细胞。颗粒细胞与卵母细胞之间存在信号与物质的双向交流，颗粒细胞对卵母细胞的生长发育起着支持和滋养作用。
颗粒细胞是研究雌性生殖细胞生物学及其功能调控的重要模型，而猪与人在遗传上具有高度同源性，猪卵巢颗粒细胞的研究可为人类的不孕不育提供极好的参考资料。通过屠宰场可长期稳定的获得猪卵巢，收集卵巢中的颗粒细胞进行体外试验，可为颗粒细胞的生理功能及细胞活动研究提供材料。现有的文献所报道的猪卵巢颗粒细胞的体外原代培养方法不一，但大都存在耗时、不纯或细胞存活率低等问题。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法，该方法不仅能够高效、快捷的培养出猪卵巢颗粒细胞，而且培养得到的颗粒细胞的纯度和存活率都较高。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
Step1：在本地屠宰场收集初情期小母猪卵巢，将卵巢置于装有37℃的溶液I的保温容器中，两小时内送至实验室；
Step2：使用注射器在离卵泡基部0.5mm处向卵泡进针，抽吸卵泡液，将卵泡液转至无菌离心管中，500×g、5min离心收集细胞；
Step3：用溶液II重悬细胞，离心收集细胞，并用移液器反复吹吸以使细胞分散，重复此过程2-3遍，最后用溶液III重悬细胞；
Step4：通过台盼蓝染色和血球计数板检测活细胞数目，调整颗粒细胞浓度，然后将颗粒细胞置于细胞培养板内，放于37℃、饱和湿度、5％CO2的培养箱中培养；
Step5：培养24h后细胞换液，吸走溶液III、未贴壁细胞和卵母细胞，并用溶液I润洗一次，加入新鲜的溶液III继续培养，细胞每培养24h换液一次，相差倒置显微镜下观察细胞汇合率达到40-50％时可进行相应的原代细胞处理或继续培养。
前述的方法，其特征在于，前述溶液I为：1×PBS溶液；前述溶液II为：含1×抗生素的DMEM/F12培养液；前述溶液III为：细胞完全生长培养液。
前述的方法，其特征在于，前述细胞完全生长培养液由DMEM/F12培养液、FBS和抗生素组成，其制备方法为：
将DMEM/F12培养液与FBS按照9:1的体积比混合，然后添加适量的1×抗生素，混合均匀。
前述的方法，其特征在于，在Step4中，将颗粒细胞置于细胞培养板内的具体操作为：
将颗粒细胞置于6孔培养板内，培养板内溶液III的终量为2ml/孔，细胞的浓度为1.65×106个活细胞/孔；或者，将颗粒细胞置于24孔培养板内，培养板内溶液III的终量为0.5ml/孔，细胞的浓度为0.38×106个活细胞/孔。
本发明的有益之处在于：
(1)在颗粒细胞的收集过程中，省去了在体式显微镜下用口吸管捡取卵母细胞的步骤，卵母细胞在培养液中为悬浮生长，培养皿中少量卵母细胞在培养24h后随着换液一起被吸走，贴壁的颗粒细胞即为纯净的颗粒细胞；
(2)由于省去了捡卵的步骤，所以缩短了体外操作时间，提高了颗粒细胞的分离效率，进而提高了颗粒细胞的存活率；
(3)由于贴壁的颗粒细胞即为纯净的颗粒细胞，所以与传统的切割法获得的颗粒细胞相比，更加纯净，避免了卵巢体细胞的污染；
(4)本发明的培养方法，能够帮助初次进行细胞培养的研究人员顺利的建立稳定的猪颗粒细胞体外原代培养体系。
附图说明
图1是培养6h的原代猪颗粒细胞；
图2是培养24h的原代猪颗粒细胞；
图3是培养48h的原代猪颗粒细胞；
图4是培养72h的原代猪颗粒细胞。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
一、配制溶液
溶液I：1×PBS溶液。
溶液II：含1×抗生素的DMEM/F12培养液。
溶液III：细胞完全生长培养液。
细胞完全生长培养液(溶液III)的配制方法：将DMEM/F12培养液与FBS按照9:1的体积比混合，然后添加1×抗生素，混合均匀即得。
二、收集卵巢
在本地屠宰场收集初情期小母猪卵巢，将卵巢置于装有37℃的、无菌的溶液I的保温容器中，两小时内送至实验室。
三、抽取卵泡液
使用20ml、18g针头的注射器在离卵泡基部0.5mm处向卵泡进针，抽吸卵泡液，将卵泡液转至50ml无菌离心管中。
四、收集颗粒细胞
将卵泡液500×g、5min离心，去掉上清液，收集细胞。
用50ml溶液II重悬细胞，离心收集细胞，并用移液器反复吹吸以使细胞分散，重复此过程2-3遍，最后用溶液III重悬细胞。
五、台盼蓝计数
将100μl细胞悬液与100μl台盼蓝等体积混匀于1.5ml离心管中，在盖好盖玻片的血球计数板上方凹槽内加入10μl上述混合液，于10×10倍显微镜下观察，死细胞染为蓝色，活细胞不染色，计数四个大方格的细胞总数，再除以4，再乘以稀释倍数，最后再乘以104，即为细胞悬液中所含有的细胞数。
若细胞位于计数板的线上，则只计算上线与右线的细胞数，或者只计算下线与左线的细胞数。
六、培养颗粒细胞
将颗粒细胞置于24孔(或者6孔)细胞培养板内，培养板内溶液III的终量为0.5ml/孔(或者2ml/孔)，细胞的浓度为0.38×106个活细胞/孔(或者1.65×106个活细胞/孔)，放于37℃、饱和湿度、5％CO2的培养箱中培养。
七、换液、培养
培养24h后，颗粒细胞换液，吸走溶液III、未贴壁细胞和卵母细胞，并用溶液I润洗一次，加入新鲜的溶液III继续培养，细胞每培养24h换液一次。
分别于培养6h、24h、48h、72h在相差倒置显微镜下观察细胞生长状态，当颗粒细胞汇合率达到40-50％时，即可进行相应的原代细胞处理或继续培养。
图1是培养6h的原代猪颗粒细胞。此时颗粒细胞已经贴壁，细胞呈现球形或椭圆形，贴壁细胞折光性好。
图2是培养24h的原代猪颗粒细胞。此时部分颗粒细胞已经变成梭形，颗粒细胞汇合率达到40-50％。
图3是培养48h的原代猪颗粒细胞。此时大部分颗粒细胞已经呈梭形。
图4是培养72h的原代猪颗粒细胞。此时颗粒细胞几乎占据培养皿全部的细胞生长表面，细胞的汇合率达到90％，细胞呈长梭形。
由此可见，培养24h后，颗粒细胞汇合率达到40-50％，此时即可进行相应的原代细胞处理或继续培养。
采用本发明的方法培养颗粒细胞时，在颗粒细胞的收集过程中，我们省去了在体式显微镜下用口吸管捡取卵母细胞的步骤，而是让卵母细胞在培养液中悬浮生长，采用此种方法后，培养皿中少量卵母细胞在培养24h后随着换液一起被吸走，所以贴壁的颗粒细胞即为纯净的颗粒细胞。
由于省去了在体式显微镜下用口吸管捡取卵母细胞的步骤，所以本发明的方法缩短了体外操作时间，提高了颗粒细胞的分离效率，进而提高了颗粒细胞的存活率。
此外，由于贴壁的颗粒细胞即为纯净的颗粒细胞，所以与传统的切割法获得的颗粒细胞相比，采用本发明的方法获得的颗粒细胞更加纯净，有效避免了卵巢体细胞的污染。
因此，本发明的培养方法能够帮助初次进行细胞培养的研究人员顺利的建立稳定的猪颗粒细胞体外原代培养体系。
综上所述，本发明的培养方法不仅能够高效、快捷的培养出猪卵巢颗粒细胞，而且培养得到的颗粒细胞的纯度和存活率都较高，可建立稳定的猪颗粒细胞体外原代培养体系，为猪颗粒细胞的营养生理、代谢及其机制研究提供基础和高效快捷的手段，意义重大。
需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
Claims (4)
1.一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
Step1：在本地屠宰场收集初情期小母猪卵巢，将卵巢置于装有37℃的溶液I的保温容器中，两小时内送至实验室；
Step2：使用注射器在离卵泡基部0.5mm处向卵泡进针，抽吸卵泡液，将卵泡液转至无菌离心管中，500×g、5min离心收集细胞；
Step3：用溶液II重悬细胞，离心收集细胞，并用移液器反复吹吸以使细胞分散，重复此过程2-3遍，最后用溶液III重悬细胞；
Step4：通过台盼蓝染色和血球计数板检测活细胞数目，调整颗粒细胞浓度，然后将颗粒细胞置于细胞培养板内，放于37℃、饱和湿度、5％CO2的培养箱中培养；
Step5：培养24h后细胞换液，吸走溶液III、未贴壁细胞和卵母细胞，并用溶液I润洗一次，加入新鲜的溶液III继续培养，细胞每培养24h换液一次，相差倒置显微镜下观察细胞汇合率达到40-50％时可进行相应的原代细胞处理或继续培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶液I为：1×PBS溶液；所述溶液II为：含1×抗生素的DMEM/F12培养液；所述溶液III为：细胞完全生长培养液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细胞完全生长培养液由DMEM/F12培养液、FBS和抗生素组成，其制备方法为：
将DMEM/F12培养液与FBS按照9:1的体积比混合，然后添加适量的1×抗生素，混合均匀。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在Step4中，将颗粒细胞置于细胞培养板内的具体操作为：
将颗粒细胞置于6孔培养板内，培养板内溶液III的终量为2ml/孔，细胞的浓度为1.65×106个活细胞/孔；或者，将颗粒细胞置于24孔培养板内，培养板内溶液III的终量为0.5ml/孔，细胞的浓度为0.38×106个活细胞/孔。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610938827.6A CN106701659A (zh) | 2016-10-31 | 2016-10-31 | 一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610938827.6A CN106701659A (zh) | 2016-10-31 | 2016-10-31 | 一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106701659A true CN106701659A (zh) | 2017-05-24 |
Family
ID=58940700
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610938827.6A Pending CN106701659A (zh) | 2016-10-31 | 2016-10-31 | 一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106701659A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112852712A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-05-28 | 大理大学 | 一种猪卵巢gv期卵泡内颗粒细胞分离、原代培养和传代培养方法 |
| CN113999811A (zh) * | 2022-01-04 | 2022-02-01 | 北京市农林科学院 | 一种建立卵泡囊肿的颗粒细胞体外模型的方法 |
| CN114032207A (zh) * | 2021-08-02 | 2022-02-11 | 四川农业大学 | 一种猪卵巢颗粒细胞的分离及培养方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993000441A1 (en) * | 1991-06-24 | 1993-01-07 | Pacific Biomedical Research, Inc. | Hormone-secreting cells maintained in long-term culture |
| CN1628857A (zh) * | 2004-09-06 | 2005-06-22 | 刘玉来 | 卵泡颗粒细胞抗衰老技术 |
| CN1800371A (zh) * | 2005-12-19 | 2006-07-12 | 浙江大学 | 一种人体未成熟卵体外成熟培养方法 |
| CN103881968A (zh) * | 2014-04-11 | 2014-06-25 | 四川农业大学 | 一种鹅卵巢卵泡原代颗粒细胞的分离培养方法 |
| CN104531612A (zh) * | 2015-01-14 | 2015-04-22 | 付蕾 | 卵母细胞培养液及其培养方法 |
-
2016
- 2016-10-31 CN CN201610938827.6A patent/CN106701659A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993000441A1 (en) * | 1991-06-24 | 1993-01-07 | Pacific Biomedical Research, Inc. | Hormone-secreting cells maintained in long-term culture |
| CN1628857A (zh) * | 2004-09-06 | 2005-06-22 | 刘玉来 | 卵泡颗粒细胞抗衰老技术 |
| CN1800371A (zh) * | 2005-12-19 | 2006-07-12 | 浙江大学 | 一种人体未成熟卵体外成熟培养方法 |
| CN103881968A (zh) * | 2014-04-11 | 2014-06-25 | 四川农业大学 | 一种鹅卵巢卵泡原代颗粒细胞的分离培养方法 |
| CN104531612A (zh) * | 2015-01-14 | 2015-04-22 | 付蕾 | 卵母细胞培养液及其培养方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| HUET, C等: "Extracellular matrix regulates ovine granulosa cell survival, proliferation and steroidogenesis: relationships between cell shape and function" * |
| 朱丽等: "猪卵巢颗粒细胞分离培养及鉴定" * |
| 杨永梅;陈娟;陈洋;姜怀志;: "小鼠卵巢颗粒细胞的优化培养" * |
| 高萍等: "母猪卵巢颗粒细胞的分离培养及鉴定" * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112852712A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-05-28 | 大理大学 | 一种猪卵巢gv期卵泡内颗粒细胞分离、原代培养和传代培养方法 |
| CN114032207A (zh) * | 2021-08-02 | 2022-02-11 | 四川农业大学 | 一种猪卵巢颗粒细胞的分离及培养方法 |
| CN113999811A (zh) * | 2022-01-04 | 2022-02-01 | 北京市农林科学院 | 一种建立卵泡囊肿的颗粒细胞体外模型的方法 |
| CN113999811B (zh) * | 2022-01-04 | 2022-04-05 | 北京市农林科学院 | 一种建立卵泡囊肿的颗粒细胞体外模型的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103380769B (zh) | 用于分离培养干细胞的脂肪组织的长时间保存液 | |
| CN106701659A (zh) | 一种猪卵巢颗粒细胞原代培养的方法 | |
| CN1807599A (zh) | 安全连续封闭式细胞培养、病毒生产/灭活的方法 | |
| CN104611292A (zh) | 一种脂肪间充质干细胞大规模培养方法 | |
| CN108315297A (zh) | 一种从脂肪组织中分离、纯化脂肪干细胞的方法 | |
| CN105087474A (zh) | 一种乳牙牙髓干细胞的培养方法 | |
| CN104560868B (zh) | 一种脂肪干细胞的原代分离培养方法 | |
| CN105316279A (zh) | 一种高效分离纯化乳腺上皮细胞的方法 | |
| CN105907721A (zh) | 一种稳定表达Cas9蛋白的猪肠道上皮细胞系 | |
| CN101372682B (zh) | 褐点石斑鱼鳍细胞系的构建方法 | |
| CN105039248A (zh) | 树鼩骨髓间充质干细胞培养系统 | |
| CN107354130B (zh) | 一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法 | |
| CN108504628A (zh) | 人脐带间充质干细胞的培养方法 | |
| CN202945247U (zh) | 具有单培养、共培养及群培养优势的人胚胎培养皿 | |
| CN103396985A (zh) | 诱导人脐带间充质干细胞分化为肝细胞的方法与应用 | |
| CN105441386A (zh) | 一种猪极小胚胎样干细胞培养与鉴定方法 | |
| CN104419659A (zh) | 脂肪干细胞及其干细胞分泌物的培养与量产方法 | |
| CN102876562A (zh) | 一种用于海洋微藻培养和增殖行为研究的微流控芯片系统 | |
| CN105420187B (zh) | 一种用于分步培养hUC-MSC的试剂盒及采用所述试剂盒获得的hUC-MSC | |
| CN106754690A (zh) | 一种快速收获中期细胞的染色体培养基及应用 | |
| CN102796701A (zh) | 体外3d无支架悬浮培养扩增人脐带间充质干细胞的方法 | |
| CN104789529A (zh) | 促进小鼠骨髓造血干细胞体外克隆形成及分化能力的方法 | |
| CN104195100A (zh) | 一种乳腺上皮细胞的体外培养方法 | |
| CN204918618U (zh) | 一种悬浮细胞培养瓶 | |
| JP2005218368A (ja) | 細胞培養装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170524 |