CN106692500A - 一种增强免疫力的组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种增强免疫力的组合物及其制备方法。该组合物是由虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物按一定重量配比制备而成,它可以被制成任何一种常用制剂,优选口服制剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种增强免疫力的组合物及其制备方法,属于保健食品的技术领域。
背景技术
免疫力是机体对“自己”和“非己”抗原的识别及应答,以维持机体的生理平衡。即是以机体免疫器官,其包括胸腺、骨髓、淋巴结、脾脏及其组织内的免疫细胞、免疫分子所构成的免疫系统来防病、抗病,维护人体正常生理功能,从而使人们健康生活和工作。
现代免疫理论认为免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成人体的免疫防御系统,相互依赖,相互制约发挥免疫防御、免疫稳定和免疫监视三大功能:①防御病原体的侵害,包括病毒、细菌、真菌、衣原体、支原体,即抗感染免疫;②监视并清除体内衰老或受到损伤不能修复的细胞;③防止体内细胞的恶性变态及异常增殖。各个组成部分有各自的功能,相互之间又有着普遍的联系,并且与神经、内分泌系统构成网络。免疫正常情况下是消除“非己”,行使免疫防御、免疫稳定、免疫监视功能,达到中医所谓的“阴平阳秘”对于未病学中潜病态、前病态中医采取的是治未病的防治思想。治未病就是预先采取措施防止疾病的发生与发展、传变。“治未病”包括两方面的含义,一方面是未病先防,一方面是已病防变。《素问•四气调神大论》提出“圣人不治已病治未病,不治已乱治未乱”,《素问•八正神明论》云:“上工救其萌芽”,于疾病未发生之时进行治疗,实为一种预防思想。《金匮要略•脏腑经络先后病脉篇》“见肝之病,知肝传脾,当先实脾”即为“治未病”思想即病变的具体体现。李梢认为:“治未病”是对未病态身心两端,内外环境作合乎自然的调养,消除疾病于萌芽、隐匿状态。现代医学主要通过应用保健药品,补充维生素和蛋白质,加强营养等提高机体免疫力。
随着社会经济发展水平的提高和人民健康意识的增强,人们越来越多地认识到增强免疫力的重要性,具有该功能的产品也越来越多地受到了人们的关注。人类对于健康的重新认识,使得“防病胜于治病”的理念深入人心,保健食品以其可以长期安全服用的优点,深得人们的认同。因而,开发具有增强免疫力功能的产品具有广阔的市场前景。
发明内容
本发明目的是提供了一种具有增强免疫力功能的组合物。
本发明的另外一个目的是提供了该组合物的制备方法。
本发明是通过以下技术方案实现的:
本发明是由下述重量份的原料药制成的:
虾青素1-15份、葡萄皮提取物10-50份、玫瑰花提取物25-55份。
优选为:
虾青素4-10份、葡萄皮提取物20-40份、玫瑰花提取物35-45份。
进一步优选为:
虾青素6.7份、葡萄皮提取物33.3份、玫瑰花提取物41.7份。
本发明涉及一种组合物,它是在现有中医理论的基础上,进行科学配伍,发挥药物之间相互协同的作用,从而筛选出能有效增强免疫力的组方。
本发明中各原料药的作用机理如下:
虾青素:又名虾黄质、龙虾壳色素,是一种类胡萝卜素,也是类胡萝卜素合成的最高级别产物,呈深粉红色,化学结构类似于β-胡萝卜素。研究表明,虾青素能显著影响动物的免疫功能,在有抗原存在时,能明显促进脾细胞产生抗体的能力,增强T细胞的作用,刺激体内免疫球蛋白的产生。虾青素还能够部分恢复年老小鼠的体液免疫系统,其中可使小鼠体内的IgM、IgA和IgG分别都增加至10mol/L,表明在抗原入侵初期,它能增强特异性体液免疫反应。另外,虾青素还可以增强小鼠释放白细胞介素-Iα和肿瘤坏死因子α的能力,其作用比β-胡萝卜素和角黄素强得多。由此认为,虾青素有很强的诱导细胞分裂的活性,具有重要的免疫调节作用。
葡萄皮提取物:是一种对人类健康具有显著作用的天然活性物质,其主要成分为多酚类化合物,研究表明,多酚类化合物有着很好的调节免疫作用,可极大地减少肝癌、肝移植术后排斥反应的发生。高路等为深入了解葡萄皮提取物的免疫调节功能,从特异性免疫和非特异性免疫两方面进行了研究,发现不同剂量的葡萄皮提取物均能显著提高免疫抑制模型鼠的巨噬细胞吞噬率、血清半数溶血值、机体抗体形成的细胞数量、淋巴细胞转化率等,证明葡萄皮提取物对免疫功能低下和免疫缺陷能发挥免疫调节作用。
玫瑰花提取物:性质温和、可缓和情绪、补血气,美颜护肤、对肝及胃有调理的作用,并具有消除疲劳、改善体质,改善内分泌失调,解除腰酸背痛,滋润养颜,护肤美容,活血,促进血液循环之功能。
为了使本发明组合物的功效能发挥到最大化,在组合物中还可以加入辅酶Q10、西洋参提取物、枸杞子提取物、山药提取物中的一种或几种。
本发明组合物的制备方法如下:
取所述重量份的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,过筛,混合,不加或者加入适量辅料,按常规工艺制成药剂学上可接受的制剂。
如可以制成常用的片剂(分散片、泡腾片、口腔崩解片、含片、咀嚼片、泡腾片)、胶囊剂(硬胶囊、软胶囊)、颗粒剂、丸剂(滴丸剂)、散剂等固体制剂形式的口服药物,也可以制成糖浆、酒剂、酊剂、口服液等液体制剂形式的口服药物;还可以制成膏剂、凝胶剂、软膏剂、巴布剂、贴膏剂、搽剂、洗剂、涂膜剂等外用制剂形式的外用药物。因此,该药物组合物中除有效成分外,还可以含有药学上可以接受的辅料。
这里所述的辅料,可以根据不同的制剂有所不同,如在片剂、胶囊剂、颗粒剂等固体制剂中常用的稀释剂、崩解剂、赋形剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、填充剂等;在糖浆、口服液等液体制剂形式中常用的表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂、助流剂等;在凝胶剂、软膏剂等外用制剂形式中常用的药用油性基质、水性基质、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、透皮吸收促进剂、表面活性剂等。
其常用辅料如淀粉、乳糖、蔗糖、糊精、糖粉、微晶纤维素、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙、改良淀粉、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、重质碳酸镁、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲淀粉钠、羟丙基纤维素、聚维酮K30、白陶土、预胶化淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、甜叶菊苷、甜菜碱、阿司帕坦、甘草甜素、糖精钠、冰糖、蜂蜜、蜂蜡、大豆油、麻油、玉米油、花生油、蓖麻油、鱼油、枸橼酸、碳酸氢钠、碳酸钠、卡拉胶、琼脂、明胶、海藻酸钠、甲壳素、黄原胶、瓜耳豆胶、西黄耆胶、阿拉伯胶、槐豆胶、刺梧桐胶、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、聚丙烯酰胺、交联型聚丙烯酸钠、聚乙烯醇、卡波姆、山梨酸、山梨酸钾、羟苯乙酯、苯甲醇、尼泊金、硫柳汞、二甲基亚砜、氮酮、三乙醇胺、氢氧化钠、甘油、丙二醇、BHT、BHA、十二烷基硫酸钠、吐温类、司盘类、焦糖色、番茄红素、赤藓红、柠檬黄、胭脂虫红等。
本发明组合物优先被制成软胶囊,软胶囊的组成为:
包括囊心内容物和囊壳,按重量份计,囊心内容物中有效成分36-120份、助悬剂5-20份、稀释剂180-230份;
囊壳按重量份计,明胶100-300份、增塑剂400-600份、纯化水100-300份、着色剂1-20份。
该软胶囊的制备方法为:
(1)囊壳制备方法:明胶、增塑剂、着色剂、纯化水加热,搅拌均匀,配制成明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物混合均匀,得药粉;将助悬剂、药粉分别依次加入稀释剂中,搅拌均匀,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装,即得软胶囊。
具体来说,软胶囊的制备方法为:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入增塑剂、着色剂,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将助悬剂与1/3稀释剂混合,加热溶解,降温,加入葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,搅拌,加入虾青素及剩余2/3稀释剂,混合均匀,过胶体磨研磨,过滤,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装,即得软胶囊。
制剂中稀释剂是指大豆油、丙二醇、麻油、玉米油、花生油、蓖麻油、鱼油中的一种或几种;助悬剂是指卡波姆、海藻酸钠、甲壳素、蜂蜡、黄原胶、阿拉伯胶中的一种或几种;增塑剂是指甘油、山梨醇、枸橼酸中的一种或几种;着色剂是指焦糖色、番茄红素、赤藓红、柠檬黄、胭脂虫红中的一种。
其中,稀释剂优选鱼油;助悬剂优选蜂蜡;增塑剂优选甘油;着色剂优选胭脂虫红。
本发明涉及的葡萄皮提取物、玫瑰花提取物可以由购买市售品得到或者采取以下制备方法得到:
葡萄皮提取物:取葡萄皮加水或不同浓度的乙醇提取,提取液浓缩干燥得粗提物;或进一步采用水提醇沉法、有机溶剂萃取法、柱层析法、二氧化碳超临界萃取法、水蒸气蒸馏法的一种或几种联合使用进行适当精制后得精提物;上述粗提物或精提物即为葡萄皮提取物;
玫瑰花提取物:取玫瑰花加水或不同浓度的乙醇提取,提取液浓缩干燥得粗提物;或进一步采用水提醇沉法、有机溶剂萃取法、柱层析法、二氧化碳超临界萃取法、水蒸气蒸馏法的一种或几种联合使用进行适当精制后得精提物;上述粗提物或精提物即为玫瑰花提取物。
优选采取以下制备方法得到:
葡萄皮提取物:取葡萄皮加4-20倍量水提取1-4次,每次1-3小时,提取液合并,离心,过滤,滤液减压浓缩,减压干燥,粉碎成细粉,即为葡萄皮提取物;
或者,葡萄皮提取物:取葡萄皮加4-20倍量20-95%乙醇提取1-4次,每次1-3小时,提取液合并,过滤,滤液减压回收乙醇至无醇味,继续浓缩,干燥,粉碎成细粉,即为葡萄皮提取物。
玫瑰花提取物:取玫瑰花加4-20倍量水提取1-4次,每次1-3小时,提取液合并,离心,过滤,滤液减压浓缩,减压干燥,粉碎成细粉,即为玫瑰花提取物;
或者,玫瑰花提取物:取玫瑰花加4-20倍量20-95%乙醇提取1-4次,每次1-3小时,提取液合并,过滤,滤液减压回收乙醇至无醇味,继续浓缩,干燥,粉碎成细粉,即为玫瑰花提取物。
在对上述有效药用成分进行提取时可采用的具体操作和/或使用方法,既可以是以所述的各比例量的药物成分为原料,分别提取其有效药用成分后再混合的方式,也可以采用按所说比例量的各药物原料混合后再共同提取的方式。采用不同的提取手段、设备及提取时所需的理想或最佳的提取温度、溶剂用量、提取时间、提取次数等具体条件,则可根据实际情况通过试验被筛选和找到。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 6.7g |
葡萄皮提取物 | 33.3g |
玫瑰花提取物 | 41.7g |
蜂蜡 | 12g |
鱼油 | 206.3g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 225g |
甘油 | 500g |
胭脂虫红 | 5g |
二氧化钛 | 1.5g |
纯化水 | 500g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、胭脂虫红、二氧化钛,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将蜂蜡与1/3鱼油混合,加热溶解,降温,加入葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,搅拌,加入虾青素及剩余2/3鱼油,混合均匀,过胶体磨研磨,过滤,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装,即得软胶囊。
实施例2
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 10g |
葡萄皮提取物 | 20g |
玫瑰花提取物 | 45g |
蜂蜡 | 20g |
鱼油 | 230g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 300g |
甘油 | 400g |
胭脂虫红 | 18g |
二氧化钛 | 2g |
纯化水 | 100g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、胭脂虫红、二氧化钛,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将蜂蜡与1/3鱼油混合,加热溶解,降温,加入葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,搅拌,加入虾青素及剩余2/3鱼油,混合均匀,过胶体磨研磨,过滤,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装即得软胶囊。
实施例3
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 4g |
葡萄皮提取物 | 40g |
玫瑰花提取物 | 35g |
蜂蜡 | 5g |
鱼油 | 180g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 100g |
甘油 | 600g |
胭脂虫红 | 1g |
二氧化钛 | 1g |
纯化水 | 300g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、胭脂虫红、二氧化钛,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将蜂蜡与1/3鱼油混合,加热溶解,降温,加入葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,搅拌,加入虾青素及剩余2/3鱼油,混合均匀,过胶体磨研磨,过滤,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装即得软胶囊。
实施例4
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 15g |
葡萄皮提取物 | 10g |
玫瑰花提取物 | 55g |
蜂蜡 | 15g |
鱼油 | 225g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 250g |
甘油 | 400g |
胭脂虫红 | 15g |
纯化水 | 250g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、胭脂虫红,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将蜂蜡与1/3鱼油混合,加热溶解,降温,加入葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,搅拌,加入虾青素及剩余2/3鱼油,混合均匀,过胶体磨研磨,过滤,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装即得软胶囊。
实施例5
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 1g |
葡萄皮提取物 | 50g |
玫瑰花提取物 | 25g |
蜂蜡 | 10g |
鱼油 | 200g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 250g |
甘油 | 550g |
胭脂虫红 | 10g |
纯化水 | 250g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、胭脂虫红,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物混合均匀,得药粉;将鱼油加热,加入蜂蜡熔融;降温,加入药粉,搅拌均匀,过胶体磨研磨,过筛,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装即得软胶囊。
实施例6
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 7g |
葡萄皮提取物 | 30g |
玫瑰花提取物 | 40g |
卡波姆 | 10g |
黄原胶 | 5g |
大豆油 | 210g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 280g |
甘油 | 350g |
山梨醇 | 100g |
番茄红素 | 20g |
纯化水 | 280g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、山梨醇、番茄红素,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物混合均匀,得药粉;将大豆油加热,加入卡波姆、黄原胶熔融;降温,加入药粉,搅拌均匀,过胶体磨研磨,过筛,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装即得软胶囊。
实施例7
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 6g |
葡萄皮提取物 | 35g |
玫瑰花提取物 | 42g |
卡波姆 | 10g |
海藻酸钠 | 10g |
花生油 | 150g |
丙二醇 | 50g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 150g |
甘油 | 280g |
枸橼酸 | 130 |
赤藓红 | 12g |
纯化水 | 220g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、枸橼酸、赤藓红,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物混合均匀,得药粉;将花生油、丙二醇加热,加入卡波姆、海藻酸钠熔融;降温,加入药粉,搅拌均匀,过胶体磨研磨,过筛,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装即得软胶囊。
实施例8
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 12g |
葡萄皮提取物 | 45g |
玫瑰花提取物 | 30g |
蜂蜡 | 10g |
甲壳素 | 5g |
阿拉伯胶 | 5g |
蓖麻油 | 100g |
麻油 | 90g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 280g |
甘油 | 470g |
柠檬黄 | 8g |
纯化水 | 270g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、柠檬黄,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物混合均匀,得药粉;将蓖麻油、麻油加热,加入蜂蜡、甲壳素、阿拉伯胶熔融;降温,加入药粉,搅拌均匀,过胶体磨研磨,过筛,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装即得软胶囊。
实施例9
囊心内容物处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
虾青素 | 8g |
葡萄皮提取物 | 35g |
玫瑰花提取物 | 42g |
蜂蜡 | 12g |
玉米油 | 210g |
囊壳处方
原料名称 | 投料量(1000粒) |
明胶 | 230g |
甘油 | 500g |
焦糖色 | 6g |
纯化水 | 250g |
制备方法如下:
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入甘油、焦糖色,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将蜂蜡与1/3玉米油混合,加热溶解,降温,加入葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,搅拌,加入虾青素及剩余2/3玉米油,混合均匀,过胶体磨研磨,过滤,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装即得软胶囊。
实施例10
虾青素 7g、葡萄皮提取物 30g、玫瑰花提取物45g
取处方量的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,过筛,加入适量预胶化淀粉、阿司帕坦,混匀,加入适量微粉硅胶,混匀,制粒,干燥,包装,即得颗粒剂。
实施例11
虾青素 12g、葡萄皮提取物 30g、玫瑰花提取物 35g
取处方量的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,过筛,加入适量甘露醇、阿司帕坦,混匀,制粒,干燥,压片,即得咀嚼片。
实施例12
虾青素 5g、葡萄皮提取物 45g、玫瑰花提取物 30g
取处方量的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,过筛,加入适量乳糖,混匀,制粒,干燥,装胶囊,即得胶囊剂。
实施例13
虾青素 6g、葡萄皮提取物 15g、玫瑰花提取物 50g
取处方量的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,过筛,加入适量辅料,常规方法制成丸剂。
实施例14
虾青素 15g、葡萄皮提取物45g、玫瑰花提取物 25g
取处方量的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,过筛,加入适量辅料,常规方法制成袋装茶剂。
实施例15
虾青素 4g、葡萄皮提取物 35g、玫瑰花提取物 50g
取处方量的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,过筛,加入适量辅料,常规方法制成口服液体制剂。
以上实施例1-15中涉及的葡萄皮提取物、玫瑰花提取物可以采取以下任一制备方法得到:
葡萄皮提取物:取葡萄皮加水或不同浓度的乙醇提取,提取液浓缩干燥得粗提物;或进一步采用水提醇沉法、有机溶剂萃取法、柱层析法、二氧化碳超临界萃取法、水蒸气蒸馏法的一种或几种联合使用进行适当精制后得精提物;上述粗提物或精提物即为葡萄皮提取物;
优选为:取葡萄皮加4-20倍量水提取1-4次,每次1-3小时,提取液合并,离心,过滤,滤液减压浓缩,干燥,粉碎成细粉,即为葡萄皮提取物;
或者:取葡萄皮加4-20倍量20-95%乙醇提取1-4次,每次1-3小时,提取液合并,过滤,滤液减压回收乙醇至无醇味,继续浓缩,干燥,粉碎成细粉,即为葡萄皮提取物。
玫瑰花提取物:取玫瑰花加水或不同浓度的乙醇提取,提取液浓缩干燥得粗提物;或进一步采用水提醇沉法、有机溶剂萃取法、柱层析法、二氧化碳超临界萃取法、水蒸气蒸馏法的一种或几种联合使用进行适当精制后得精提物;上述粗提物或精提物即为玫瑰花提取物;
优选为:取玫瑰花加4-20倍量水提取1-4次,每次1-3小时,提取液合并,离心,过滤,滤液减压浓缩,干燥,粉碎成细粉,即为玫瑰花提取物;
或者:取玫瑰花加4-20倍量20-95%乙醇提取1-4次,每次1-3小时,提取液合并,过滤,滤液减压回收乙醇至无醇味,继续浓缩,干燥,粉碎成细粉,即为玫瑰花提取物。
以上实施例1-15中涉及的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物可以通过购买市售品得到。
根据上述内容,在不脱离本发明基本技术思想前提下,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,显然还可以作出其他多种形式的修改、替换和变更。
通过以下实验进一步阐述本发明所述组合物的有益效果:
增强免疫力功能试验
1、材料和方法
(1)样品:按照实施例1-3制备的样品。
(2)实验动物:18-22g昆明种健康清洁级小鼠192只,共分为四批进行实验,每批随机分为4组,每组12只。
实验一批进行脏器/体重比值测定、迟发型变态反应实验、半数溶血值(HC50)的测定和抗体生成细胞数的测定;
实验二批进行碳廓清实验;
实验三批进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;
实验四批进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定。
(3)剂量:
受试物以无菌水配制,每日一次经口给予,连续灌胃33天后测各项指标。小鼠灌胃体积为0.1mL/10g鼠重。
同时设一空白对照组(0g/kgBW),用无菌水替代受试物,每日灌胃体积与各受试物组相同。
(4)实验方法:
A.脏器体重比值的测定
小鼠称重后颈椎脱臼处死,取脾脏和胸腺,去尽筋膜,用滤纸吸干脏器表面血污,称重,计算脾脏体重比值和胸腺体重比值。
B.迟发型变态反应(DTH)实验(足跖增厚法)
取羊血,生理盐水洗涤3次,每只鼠经腹腔注射2%(v/v,用生理盐水配制)压积SRBC(2000r/min,10min)0.2mL,致敏后4d,测量左后足跖部厚度,同一部位测量三次,取平均值。然后在测量部位皮下注射20%(v/v,用生理盐水配制)压积SRBC
20μL,于注射后24h测量左后足跖部厚度,以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值,可判定该项实验结果阳性。
C.ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中,用镊子轻轻将脾磨碎,制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤,制成细胞悬液。用Hank’s液洗3次,每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中,镜检计数,调整细胞浓度为3×106个/mL。再将脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1mL,在其中一孔加75μLConA液(相当于7.5μg/mL),另一孔作为对照,置5%CO2,37℃CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7mL,加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1mL酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解。然后将此液体移入比色杯中,在755分光光度计上比色测定,波长570nm。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增值能力。受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值,可判定该项实验结果阳性。
D.抗体生成细胞数的测定(Jerne改良玻片法)
取羊血,生理盐水洗涤3次,每只鼠经腹腔注射2%(v/v,用生理盐水配制)压积SRBC 0.2mL。将SRBC免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死,取出脾脏,轻轻磨碎脾脏,制成细胞悬液。离心(1000r/min)10min,用Hank’s液洗2遍,最后将细胞悬液在8mL Hank’s液中。将琼脂糖加热溶解后,与等量双倍Hank’s液混合,分装小试管,每管0.5mL,再向管内加10%(v/v,用SA液配制)压积SRBC 50μL、脾细胞悬液8μL,迅速混匀后,倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上,做平行片,待琼脂凝固后,将玻片水平扣放在片架上,放入二氧化碳培养箱中37℃温育1h,然后用SA缓冲液稀释的补体(1∶8)加入到玻片架凹槽内,继续温育1.5h后,计数溶血空斑数。用空斑数/全脾细胞来表示。受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数,可判定该项实验结果阳性。
E.半数溶血值(HC50)的测定
取羊血,生理盐水洗涤3次,每只鼠经腹腔注射2%(v/v,用生理盐水配制)压积SRBC 0.2mL进行免疫。5天后,摘除眼球取血于离心管内,放置约1h,将凝固血与管壁剥离,使血清充分析出,2000r/min离心10min,收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为300倍,取1mL置试管内,依次加入10%(v/v,用SA缓冲液配制)压积SRBC 0.5mL,补体1mL(用SA缓冲液按1∶8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温15min后,冰浴终止反应。2000r/min离心10min,取上清1mL,加都氏试剂至3mL。同时取10%(v/v,用SA缓冲液配制)的压积SRBC
0.25mL,加都氏试剂至4mL于另一试管中,充分混匀,放置10min后,于540nm处以对照管作空白,分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示,按下式计算:样品半数溶血值=样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数受试样品组的HC50显著高于对照组的HC50,可判定该项实验结果阳性。
F.小鼠碳廓清实验
按体重从小鼠尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁(0.05mL/10g)。待墨汁注入,立即计时。注入墨汁后2、10min,分别从内眦静脉丛取血20μL,并将其加到2mL 0.1%Na2CO3溶液中。用755分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD),以Na2CO3溶液作空白对照。将小鼠处死,取肝脏和脾脏称重。以碳廓清指数(a)表示小鼠碳廓清的能力,按下式计算a:
k=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1) a=体重÷(肝重+脾重)×k1/3
受试样品组的碳廓清指数显著高于对照组的碳廓清指数,可判定该项实验结果阳性。
G.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)
小鼠腹腔注射20%(v/v,用生理盐水配制)鸡红细胞(2000r/min,10min)悬液1mL,间隔30min,颈椎脱臼处死,将其仰位固定于鼠板上,经腹腔注入生理盐水2mL,转动鼠板1min。取腹腔巨噬细胞洗液1mL,分别滴于2片载玻片上,放入垫有湿纱布的搪瓷盒内,移置37℃孵箱温育30min。孵毕,于生理盐水中漂洗,以除去未贴片细胞。晾干,以1∶1丙酮甲醇溶液固定,Gicmsa-磷酸缓冲液染色,再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数,每片计数100个巨噬细胞,按下式计算吞噬率和吞噬指数:
吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
得出的吞噬百分率再按下式进行数据转换,X=Sin-1 ,式中P为吞噬百分率,用小数表示。所得数据为计量资料,受试样品组的吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组的吞噬百分率和吞噬指数,可判定该项实验结果阳性。
H.NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)
实验前24h将靶细胞YAC-1进行传代培养,应用前以Hank’s液洗3次,用含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL。受试小鼠颈椎脱臼处死,无菌取脾,制成脾细胞悬液,用Hank’s液洗2次,每次离心10min(1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起,加入0.5mL灭菌水20秒,裂解红细胞后再加入0.5mL 2倍Hank’s液及8mLHank’s液,1000r/min,10min离心,用1mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬,镜检计数,用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。使效靶比为50∶1。取靶细胞和效应细胞各100μL,加入U形96孔培养板中;靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL,靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μL;上述各项均设三个平行孔,37℃、5%CO2培养箱中培养4h,将96孔板以1500r/min离心5min,每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中,加入LDH基质液100μL,反应3-10min,然后每孔加入1mol/L的HCl溶液30μL终止反应,在酶标仪490nm处测光密度值(OD),计算NK细胞活性:
NK细胞活性(%)=(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100
得出的NK细胞活性按下式进行数据转换,X=Sin-1 ,式中P为NK细胞活性,用小数表示。所得数据为计量资料,受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性,可判定该项实验结果阳性。
(5)数据处理
用SPSS软件进行数据处理。采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值<F0.05,结论:各组均数间差异无显著性,F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改用秩和检验进行统计。
(6)结果判定依据
《保健食品检验与评价技术规范)》(2003版)规定:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性,可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一实验的两个剂量组结果阳性,可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一实验的两个剂量组结果阳性,可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验结果均为阳性,或任一实验的两个剂量组结果阳性,可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上剂量组结果阳性,可判定NK细胞活性结果阳性。
2、结果
(1)本发明组合物对小鼠体重的影响
通过称重可知,小鼠的初始体重在四批实验动物各样品组与空白对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05)。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
经口给予小鼠本发明组合物33天后,小鼠的体重在各样品组与空白对照组间比较,差异均无显著性(P>0.05)。即本发明组合物对小鼠体重无不良影响。
(2)本发明组合物对小鼠脏器/体重比值的影响
表1 本发明组合物对小鼠脾脏/体重比值的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 脾脏/体重比值(mg/g) | P值 |
空白对照组 | 12 | 5.5±0.8 | —— |
样品组1 | 12 | 5.4±1.0 | 0.771 |
样品组2 | 12 | 5.2±0.7 | 0.546 |
样品组3 | 12 | 5.6±1.1 | 0.819 |
由表1可见,经口给予小鼠本发明组合物后,各样品组脾脏/体重比值与空白对照组比较,差异均无显著性(P>0.05)。即本发明组合物对小鼠的脾脏/体重比值无特别影响。
表2 本发明组合物对小鼠胸腺/体重比值的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 胸腺/体重比值(mg/g) | P值 |
空白对照组 | 12 | 2.3±1.5 | —— |
样品组1 | 12 | 2.5±0.8 | 0.779 |
样品组2 | 12 | 2.6±1.0 | 0.652 |
样品组3 | 12 | 2.4±0.9 | 0.804 |
由表2可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各剂量组胸腺/体重比值与空白对照组比较,差异均无显著性(P>0.05)。即本发明组合物对小鼠的胸腺/体重比值无特别影响。
(3)本发明组合物对小鼠细胞免疫功能的影响
表3 本发明组合物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 足跖肿胀度(mm) | P值 |
空白对照组 | 12 | 0.51±0.17 | —— |
样品组1 | 12 | 0.89±0.12* | 0.022 |
样品组2 | 12 | 0.92±0.09* | 0.018 |
样品组3 | 12 | 0.90±0.15* | 0.020 |
*与空白对照组比较,P<0.05
由表3可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各样品组与空白对照组比较,小鼠的足跖肿胀度有显著性差异(P<0.05)。即本发明组合物能显著提高小鼠足跖肿胀度。
表4 本发明组合物对小鼠淋巴细胞转化实验的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 淋巴细胞增殖能力(OD差值) | P值 |
空白对照组 | 12 | 0.22±0.24 | —— |
样品组1 | 12 | 0.51±0.12* | 0.022 |
样品组2 | 12 | 0.46±0.15* | 0.030 |
样品组3 | 12 | 0.44±0.09* | 0.035 |
*与空白对照组比较,P<0.05
由表4可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各样品组与空白对照组比较,小鼠的淋巴细胞增殖能力有显著性差异(P<0.05)。即本发明组合物能显著提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力。
(4)本发明组合物对体液免疫的影响
表5 本发明组合物对小鼠抗体生成细胞数的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 溶血空斑数(×103/全脾) | P值 |
空白对照组 | 12 | 120±55 | —— |
样品组1 | 12 | 195±42* | 0.036 |
样品组2 | 12 | 208±40* | 0.027 |
样品组3 | 12 | 201±38* | 0.032 |
*与空白对照组比较,P<0.05
由表5可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各样品组与空白对照组比较,小鼠抗体生成细胞数有显著性差异(P<0.05)。即本发明组合物能显著提高小鼠抗体生成细胞数。
表6 本发明组合物对小鼠半数溶血值(HC50)的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 样品半数溶血值 | P值 |
空白对照组 | 12 | 158±37 | —— |
样品组1 | 12 | 225±28* | 0.019 |
样品组2 | 12 | 217±32* | 0.028 |
样品组3 | 12 | 220±41* | 0.024 |
*与空白对照组比较,P<0.05
由表6可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各样品组与空白对照组比较,小鼠的半数溶血值有显著性差异(P<0.05)。即本发明组合物能显著提高小鼠半数溶血值。
(5)本发明组合物对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
表7 本发明组合物对小鼠碳廓清能力的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 吞噬指数(a) | P值 |
空白对照组 | 12 | 4.24±0.45 | —— |
样品组1 | 12 | 6.37±0.19* | 0.014 |
样品组2 | 12 | 6.22±0.47* | 0.021 |
样品组3 | 12 | 6.34±0.28* | 0.018 |
*与空白对照组比较,P<0.05
由表7可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各样品组与空白对照组比较,小鼠的碳廓清能力有显著性差异(P<0.05)。即本发明组合物能显著提高小鼠的碳廓清能力。
表8 本发明组合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 吞噬率(%) | 吞噬率平方根反正弦转换值 | P值 |
空白对照组 | 12 | 22±18 | 0.40±0.15 | —— |
样品组1 | 12 | 40±10* | 0.78±0.12 | 0.035 |
样品组2 | 12 | 42±11* | 0.80±0.14 | 0.030 |
样品组3 | 12 | 38±15* | 0.69±0.17 | 0.042 |
*与空白对照组比较,P<0.05
由表8可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各样品组与空白对照组比较,吞噬率有显著性差异(P<0.05)。即本发明组合物能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率。
表9 本发明组合物对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | 吞噬指数 | P值 |
空白对照组 | 12 | 0.29±0.18 | —— |
样品组1 | 12 | 0.72±0.12* | 0.028 |
样品组2 | 12 | 0.68±0.17* | 0.035 |
样品组3 | 12 | 0.62±0.15* | 0.039 |
*与空白对照组比较,P<0.05
由表9可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各样品组与空白对照组比较,吞噬指数有显著性差异(P<0.05)。即本发明组合物能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数。
(6)本发明组合物对小鼠NK细胞活性的影响
表10 本发明组合物对小鼠NK细胞活性的影响(±S)
组别 | 动物数(只) | NK细胞活性(%) | NK细胞活性平方根反正弦转换值 | P值 |
空白对照组 | 12 | 22.4±8.1 | 0.42±0.12 | —— |
样品组1 | 12 | 45.5±6.3* | 0.85±0.12 | 0.026 |
样品组2 | 12 | 40.7±7.7* | 0.76±0.18 | 0.033 |
样品组3 | 12 | 39.8±6.5* | 0.73±0.15 | 0.038 |
*与空白对照组比较,P<0.05
由表10可见,经口给予小鼠本发明组合物33天后,各样品组与空白对照组比较,小鼠NK细胞活性有显著性差异(P<0.05)。即本发明组合物能显著提高小鼠NK细胞活性。
本发明实施例4-15均按照上述方法进行了相似的试验,结果与上述结果相同。
3、结论
经口给予小鼠本发明组合物33天后,与空白对照组比较,本发明组合物能显著提高小鼠足跖肿胀度(P<0.05)、提高ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力(P<0.05)、提高小鼠抗体生成细胞数(P<0.05)、提高小鼠半数溶血值(P<0.05)、提高小鼠的碳廓清能力(P<0.05)、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率(P<0.05)、提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数(P<0.05)、提高小鼠NK细胞活性(P<0.05),且本发明组合物对小鼠体重增长无不良影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)对增强免疫力保健食品的评判标准可知,本发明组合物具有增强免疫力的功能。
Claims (11)
1.一种具有增强免疫力功能的组合物,其特征在于,按重量份计,制成该组合物的有效成分为:虾青素1-15份、葡萄皮提取物10-50份、玫瑰花提取物25-55份。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,按重量份计,制成该组合物的有效成分为:虾青素4-10份、葡萄皮提取物20-40份、玫瑰花提取物35-45份。
3.权利要求1或2所述组合物的制备方法,其特征在于,它是这样制备的:
取所述重量份的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,过筛,混合,不加或者加入适量辅料,按常规工艺制成药剂学上接受的制剂。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述的制剂是指片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液体制剂;其中,片剂是指普通片、分散片、泡腾片、咀嚼片、含片;胶囊剂是指软胶囊、硬胶囊。
5.一种具有增强免疫力功能的组合物的软胶囊,其特征在于,按重量份计,囊心内容物中有效成分36-120份、助悬剂5-20份、稀释剂180-230份。
6.根据权利要求5所述软胶囊的制备方法,其特征在于,
(1)囊壳制备方法:明胶、增塑剂、附加剂、纯化水加热,搅拌均匀,配制成明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物混合均匀,得药粉;将助悬剂、药粉分别依次加入稀释剂中,搅拌均匀,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装,即得软胶囊。
7.根据权利要求6所述软胶囊的制备方法,其特征在于,
(1)囊壳制备方法:将纯化水加热至70-80℃,再加入增塑剂、附加剂,搅拌均匀,加入明胶,继续搅拌,抽真空脱尽气泡,过滤,保温,得明胶溶液,待用;
(2)囊心制备方法:将助悬剂与1/3稀释剂混合,加热溶解,降温,加入葡萄皮提取物、玫瑰花提取物,搅拌,加入虾青素及剩余2/3稀释剂,混合均匀,过胶体磨研磨,过滤,抽真空脱尽气泡,得药液,待用;
(3)将配好的药液和明胶溶液置于制丸机中,压丸,定型,洗丸,干燥,选丸,包装,即得软胶囊。
8.根据权利要求5或6或7所述软胶囊的制备方法,其特征在于,稀释剂是指大豆油、丙二醇、麻油、玉米油、花生油、蓖麻油、鱼油中的一种或几种;助悬剂是指卡波姆、海藻酸钠、甲壳素、蜂蜡、黄原胶、阿拉伯胶中的一种或几种;增塑剂是指甘油、山梨醇、枸橼酸中的一种或几种;附加剂是指焦糖色、番茄红素、赤藓红、柠檬黄、胭脂虫红、二氧化钛中的一种或两种。
9.根据权利要求1或2所述的组合物,其特征在于,所述的葡萄皮提取物、玫瑰花提取物是这样制备得到的:
葡萄皮提取物:取葡萄皮加水或不同浓度的乙醇提取,提取液浓缩干燥得粗提物;或进一步采用水提醇沉法、有机溶剂萃取法、柱层析法、二氧化碳超临界萃取法、水蒸气蒸馏法的一种或几种联合使用进行适当精制后得精提物;上述粗提物或精提物即为葡萄皮提取物;
玫瑰花提取物:取玫瑰花加水或不同浓度的乙醇提取,提取液浓缩干燥得粗提物;或进一步采用水提醇沉法、有机溶剂萃取法、柱层析法、二氧化碳超临界萃取法、水蒸气蒸馏法的一种或几种联合使用进行适当精制后得精提物;上述粗提物或精提物即为玫瑰花提取物。
10.根据权利要求1或2所述的组合物,其特征在于,所述的虾青素、葡萄皮提取物、玫瑰花提取物是通过购买市售品得到。
11.权利要求1或2所述组合物用于制备具有增强免疫力功能的保健食品中的应用。
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