CN106692247B - 蒲公英提取物在制备抗癌药物中的应用 - Google Patents

蒲公英提取物在制备抗癌药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及蒲公英提取物在制备抗癌药物中的应用，属于药物制剂领域。本发明提供了一种蒲公英提取物，其通过将蒲公英药材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量为每次8‑12倍量，每次提取1‑2h，浓缩回收乙醇后过AB‑8大孔树脂，先用水洗，然后用30‑90％乙醇洗脱，回收洗脱液，浓缩，冻干制备而成。本发明同时提供了上述蒲公英提取物在制备抗肺癌和乳腺癌药物中的应用。

Description

蒲公英提取物在制备抗癌药物中的应用
技术领域
本发明涉及药物制剂领域，具体涉及蒲公英提取物在制备抗癌药物中的应用。
背景技术
癌症是一种严重威胁人类健康和生命的常见病和多发病，是世界各国医学科学领域中的重要科研课题，目前尚无满意的治疗措施。人类因癌症而引起的死亡居所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病，在我国癌症的死亡率已跃居首位，给社会、家庭和个人带来极大的负担和痛苦。中医治疗肿瘤以“虚”立论，治法强调“扶正祛邪”，增强人体精、津、气、血的周流而“邪正相安”。而中药在癌症治疗过程中有着十分重要的地位。历代医家们在与癌痛斗争中留下许多宝贵经验，如地骨皮，首载于《神农本草经》，言其“味苦寒，主五内邪气，热中消渴，周痹”；元代吴瑞《日用本草》已明确记载“止齿血；治骨槽风”等。现代癌症综合治疗中，中药同样不可或缺。
蒲公英为菊科多年生草本植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.及其多种同属植物的干燥全草，全国大部分地区均有分布。作为我国传统中药，蒲公英具有清热解毒、消痈散结、利尿通淋等功效，临床多用于治疗乳痈、疗疮肿毒、咽痛、目赤、湿热黄疽、热淋涩痛等症。蒲公英含有多种活性成分，如有机酸类、黄酮类、皂苷类、多糖等。
目前关于蒲公英的抗癌作用的相关报道很少。CN201380007584.9公开了一种制备用于治疗或预防癌症的包括蒲公英属根部提取物的药物的改善方法，CN201610317216.X公开了一种抗乳腺癌的中药组合物及其制备方法与应用，所述中药组合物其活性成分由夏枯草与蒲公英组成。现有技术中将蒲公英提取物用于抗癌用途时都存在抗癌作用不明确和效果一般的缺陷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，对蒲公英提取物的制备工艺进行优化，提供一种抗癌效果得到显著提高的蒲公英提取物。
本发明解决该技术问题的技术手段是：
一种蒲公英提取物，所述蒲公英提取物通过以下方法制备而成：将蒲公英药材用50%乙醇回流提取2次，50%乙醇的加入量为每次8-12倍量，每次提取1-2h，浓缩回收乙醇后过AB-8大孔树脂，先用水洗，然后用30-90%乙醇洗脱，回收洗脱液，浓缩，冻干，即得。
所述乙醇洗脱的浓度优选为30%、60%或90%乙醇。
在一个实施方案中，所述蒲公英提取物的制备方法为：将蒲公英药材用50%乙醇回流提取2次，50%乙醇的加入量为每次10倍量，每次提取1.5h，浓缩回收乙醇后过AB-8大孔树脂，先用水洗，然后依次用30%乙醇和60%乙醇洗脱，回收合并各洗脱液，浓缩，冻干，即得。
在另一个实施方案中，所述蒲公英提取物的制备方法为：将蒲公英药材用50%乙醇回流提取2次，50%乙醇的加入量为每次10倍量，每次提取1.5h，浓缩回收乙醇后过AB-8大孔树脂，先用水洗，然后用60%乙醇洗脱，回收各洗脱液，浓缩，冻干，即得。
在一个优选的实施方案中，所述蒲公英提取物的制备方法为：将蒲公英药材用50%乙醇回流提取2次，50%乙醇的加入量为每次10倍量，每次提取1.5h，浓缩回收乙醇后过AB-8大孔树脂，先用水洗，后用30%乙醇洗脱，回收各洗脱液，浓缩，冻干，即得。进一步地，所述提取物中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量为1.3-1.6%，木犀草素的含量为3.8-4.3%，槲皮素的含量为1.6-1.9%、10,15-十八碳二烯酸的含量为2.1-2.3%、9,10,11-三羟基-(12Z)-十八碳烯酸的含量为2.2-2.4%，以及苦树素苷F的含量为3.1-3.4%。
本发明同时提供了上述蒲公英提取物在制备抗癌药物中的用途，所述抗癌药物为抗肺癌药物和为抗乳腺癌药物。
本发明的有益效果：现有技术中将蒲公英用于抗癌用途时，通常是采用水提取物，其效果不明确，作用一般，本发明通过在乳腺癌和肺癌细胞上比较了蒲公英的水提取物和50%乙醇提取物的抗癌效果，发现50%乙醇提取物的效果要优于水提取物，进一步的，本发明接着对50%乙醇提取物用大孔树脂进行了分段，意外的发现30%和60%乙醇洗脱部位效果更好，其中以30%乙醇洗脱部位效果最好。
附图说明
图1显示蒲公英30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇和总醇（30%+60%）洗脱提取物对H1299细胞的作用。
图2显示蒲公英30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇和总醇（30%+60%）洗脱提取物对PC-9细胞的作用。
图3显示蒲公英30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇和总醇（30%+60%）洗脱提取物对MDA-MB-231细胞的作用。
图4显示蒲公英30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇和总醇（30%+60%）洗脱提取物对Hs578t细胞的作用。
图5显示蒲公英30%乙醇洗脱提取物的HPLC图谱，图中峰1为香荚兰酸、峰2为单咖啡酰酒石酸、峰3为对羟基苯甲酸、峰4为七叶内酯、峰5为咖啡酸、峰6为橙皮苷、峰7为丁香酸、峰8为对香豆酸、峰9为木犀草素-7-O-β-D-芸香糖苷、峰10为异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、峰11为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、峰12为绿原酸、峰13为阿魏酸、峰14为木犀草素、峰15为槲皮素、峰16为10,15-十八碳二烯酸、峰17为9,10,11-三羟基-(12Z)-十八碳烯酸、峰18为9,10,11-三羟基-9,11-十八碳二烯酸、峰19为9-羟基-10,12,15-十八碳三烯酸、峰20为苦树素苷F。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例或份数按重量计。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1 蒲公英50%乙醇提取物的制备
将蒲公英药材用50%乙醇回流提取2次，50%乙醇的加入量为每次10倍量，每次提取1.5h，过滤合并滤液，将滤液浓缩回收乙醇后，冻干，即得。
对比例1 蒲公英水提取物和90%醇提物的制备
将蒲公英药材加水10倍量浸泡过夜，煎煮3次，每次1.5h，过滤合并滤液，减压浓缩，冻干，即得蒲公英水提取物。
将蒲公英药材以10倍量90%乙醇回流提取二次，每次1.5h，过滤合并滤液，减压浓缩，冻干，即得蒲公英90%乙醇提取物。
试验例一蒲公英50%乙醇提取物、90%乙醇提取物和蒲公英水提取物的肿瘤细胞试 验
将实施例1制备的蒲公英50%乙醇提取物、对比例1制备的90%乙醇提取物和蒲公英水提取物分别在肺癌H1299，PC-9，H1650，H520，A549，H460细胞，乳腺癌MDA-MB-231和Hs578t细胞进行试验，具体是将上述细胞系铺于96孔板中，将上述提取物以不同终浓度加入各肿瘤细胞系中，采用MTT法测定细胞活性以及不同提取物的抑制活性，对数据进行拟合计算IC50，其IC50结果如表1所示：
表1 蒲公英50%乙醇提取物、90%乙醇提取物和蒲公英水提取物在各类细胞的IC50值
Figure 928463DEST_PATH_IMAGE002
结果显示，蒲公英50%乙醇提取物的效果要显著优于蒲公英其他提取物。为了进一步了解蒲公英50%乙醇提取物的抗癌活性，本发明又进一步进行了如下尝试：
实施例2 蒲公英30%乙醇洗脱提取物的制备
将实施例1制备的蒲公英50%乙醇提取物过AB-8大孔树脂，先用水洗去除杂质，然后用30%乙醇洗脱，回收30%乙醇的洗脱液，减压浓缩，冻干，即得。
实施例3 蒲公英60%乙醇洗脱提取物的制备
将实施例1制备的蒲公英50%乙醇提取物过AB-8大孔树脂，先用水洗去除杂质，然后用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇的洗脱液，减压浓缩，冻干，即得。
实施例4蒲公英90%乙醇洗脱提取物的制备
将实施例1制备的蒲公英50%乙醇提取物过AB-8大孔树脂，先用水洗去除杂质，然后用90%乙醇洗脱，收集90%乙醇的洗脱液，减压浓缩，冻干，即得。
实施例5 蒲公英30%和60%乙醇洗脱提取物的制备（总醇洗脱物）
将实施例1制备的蒲公英50%乙醇提取物过AB-8大孔树脂，先用水洗去除杂质，然后依次用30%和60%乙醇洗脱，收集合并30%和60%乙醇的脱液，减压浓缩，冻干，即得。
试验例二蒲公英30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇和总醇（30%+60%）洗脱提取物的肿瘤 细胞试验
将实施例2-5制备的蒲公英30%乙醇洗脱提取物、蒲公英60%乙醇洗脱提取物、蒲公英90%乙醇洗脱提取物和蒲公英30%和60%乙醇洗脱提取物分别在肺癌H1299和PC-9细胞，乳腺癌MDA-MB-231和Hs578t细胞进行比较，其结果如图1-图4所示。
结果显示，蒲公英30%乙醇洗脱提取物和蒲公英60%乙醇洗脱提取物要优于蒲公英90%乙醇洗脱提取物和蒲公英总醇（30%和60%乙醇）洗脱提取物，而蒲公英30%乙醇洗脱提取物要优于蒲公英60%乙醇洗脱提取物，效果最好。
试验例三蒲公英30%乙醇、60%乙醇、90%乙醇和总醇（30%+60%）洗脱提取物的抗肿 瘤效果
选择纯系小鼠（裸鼠）150只，随机分为15组，每组10只，分别为三组对照组（生理盐水20ml/kg），H1299实施例2-5组（分别使用实施例2-5的浓度为250μg/ml的提取物2.5mg/kg）, PC-9实施例2-5组（分别使用实施例2-5的浓度为250μg/ml的提取物2.5mg/ kg）,MDA-MB-231实施例2-5组（分别使用实施例2-5的浓度为250μg/ml的提取物2.5mg/kg），分别于小鼠右侧腋窝皮下接种肿瘤，在接种肿瘤第4天后开始给药，以腹腔注射方式给药，每天一次，连用6次，称取瘤重，按照常规观察方法测定生命延长率和瘤重抑制率，结果如表2所示。
表2 实施例2-5的蒲公英提取物的抗肿瘤效果
Figure 111183DEST_PATH_IMAGE004
结果显示，本发明实施例2的蒲公英30%乙醇洗脱提取物和实施例3的蒲公英60%乙醇洗脱提取物的抗肿瘤效果要优于实施例4的蒲公英90%乙醇洗脱提取物和实施例5的蒲公英总醇（30%和60%乙醇）洗脱提取物，其中实施例2的蒲公英30%乙醇洗脱提取物的抗肿瘤效果最好。
鉴于蒲公英30%乙醇洗脱提取物的优越活性，本发明HPLC技术对其成分进行分析并对其中主要成分进行了定量，HPLC图谱参见附图5，结果表明，蒲公英30%乙醇洗脱提取物中活性成分的重量百分比含量为：木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量为1.3-1.6%，木犀草素的含量为3.8-4.3%，槲皮素的含量为1.6-1.9%、10,15-十八碳二烯酸的含量为2.1-2.3%、9,10,11-三羟基-(12Z)-十八碳烯酸的含量为2.2-2.4%，以及苦树素苷F的含量为3.1-3.4%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims (3)

1.一种抗肺癌和抗乳腺癌的蒲公英提取物的制备方法，其特征在于，将蒲公英药材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量为每次10倍量，每次提取1.5h，浓缩回收乙醇后过AB-8大孔树脂，先用水洗，后用30％乙醇洗脱，回收30％乙醇的洗脱液，浓缩，冻干，即得；其中，所述提取物中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量为1.3-1.6％，木犀草素的含量为3.8-4.3％，槲皮素的含量为1.6-1.9％、10，15-十八碳二烯酸的含量为2.1-2.3％、9，10，11-三羟基-(12Z)-十八碳烯酸的含量为2.2-2.4％，以及苦树素苷F的含量为3.1-3.4％。
2.一种抗肺癌和抗乳腺癌的蒲公英提取物的制备方法，其特征在于，将蒲公英药材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量为每次10倍量，每次提取1.5h，浓缩回收乙醇后过AB-8大孔树脂，先用水洗，然后用60％乙醇洗脱，回收60％乙醇的洗脱液，浓缩，冻干，即得。
3.一种抗肺癌和抗乳腺癌的蒲公英提取物的制备方法，其特征在于，将蒲公英药材用50％乙醇回流提取2次，50％乙醇的加入量为每次10倍量，每次提取1.5h，浓缩回收乙醇后过AB-8大孔树脂，先用水洗，然后依次用30％乙醇和60％乙醇洗脱，回收合并30％乙醇和60％乙醇的洗脱液，浓缩，冻干，即得。
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