CN106660988B - 经取代的双环二氢嘧啶酮及其作为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性的抑制剂的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式1的经取代的双环二氢嘧啶酮，及其作为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性的抑制剂的用途，含有其的药物组合物，及使用其作为药物以治疗和/或预防肺、胃肠及泌尿生殖疾病、皮肤及眼的炎症以及其他自体免疫及过敏性病症、同种异体移植排斥及肿瘤疾病的方法。

Description

经取代的双环二氢嘧啶酮及其作为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶 活性的抑制剂的用途
本发明涉及式1的经取代的双环二氢嘧啶酮
及其作为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性的抑制剂的用途，含有其的药物组合物，及使用其作为药物治疗和/或预防肺、胃肠及泌尿生殖疾病、皮肤及眼的炎症以及其他自体免疫及过敏性病症、同种异体移植排斥及肿瘤疾病的方法。
背景信息
●以下参考文献描述具有单环二氢嘧啶酮核心的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂：GB2392910、WO04024700、WO05082864、WO05082863、DE102006031314、US100010024、WO10115548、WO09080199、DE102007061766、WO06136857、WO06082412、WO12002502。
●以下参考文献描述具有双环四氢吡咯并嘧啶二酮核心的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂：WO07129060、WO08135537、US090093477、WO09013444、WO09060206、WO09060203、WO09060158、US110034433。
●以下参考文献描述具有除上文中所提及的核心结构以外的其他核心结构的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂：WO04020412、WO04020410、WO03053930、WO10078953、WO09135599、DE102009004197、WO11110858、WO11110859、WO09060158、WO09037413、WO04024701、US130065913、WO13018804、WO12002502、US 2014/0171414、WO14009425、WO2014029831、WO2014029832和WO2014029830、WO14122160、WO14135414。
●关于嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的各种抑制剂的综述，参见：P.(FutureMed.Chem.2012，4，651-660)。
发明概述
嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)为29kDa丝氨酸蛋白酶。其表达于骨髓前驱细胞中，高浓度储存于周围血液粒细胞颗粒中且在细胞活化时释放。细胞外基质(ECM)的以下主要成分属于NE底物：弹性蛋白、纤维结合蛋白、层黏连蛋白、胶原蛋白及蛋白聚糖。嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性引起ECM降解、单核细胞及血管平滑肌细胞迁移及趋化性增强且直接影响凝结及纤维蛋白溶解路径的组分(PAI-1及TFPI)。嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性增强与若干器官的慢性炎症及纤维化疾病有关。P.A.Henriksen已对嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂作为抗炎治疗的潜力进行了综述(Current Opinion in Hematology 2014，21，23-28)。因此，嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂具有治疗不同疾病的重要作用，如COPD、特发性肺纤维化及其他纤维化疾病、癌症、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征、支气管扩张症、囊肿性纤维化、α1-抗胰蛋白酶缺乏症及其他疾病。
本发明的问题是制备新的化合物。基于该化合物作为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性抑制剂的有效性，该化合物可具有治疗用途，即用于治疗由嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性增加引起的病理生理过程。
已令人惊奇地发现，从目前发明的适应症的视角来看，本发明的化合物具有以下有利性质。
本发明化合物(包括生理学上可接受的盐)可有效用作嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂且在酶抑制分析法中呈现良好的抑制效能，如依据半最大抑制浓度(IC50)所确定。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)亦可有效用作嗜中性粒细胞丝氨酸蛋白酶(protease)蛋白酶(proteinase)3抑制剂且在酶抑制分析法中呈现良好的抑制效能，如依据半最大抑制浓度(IC50)所确定。针对第二嗜中性粒细胞丝氨酸蛋白酶的此抑制活性对于药理学功效而言可为有益的。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在血浆或全血分析法中呈现良好的抑制效能，如依据半最大有效浓度(EC50)所确定，所述分析法例如如T。Stevens等人(J.Pharm.Exp.Ther.2011，339，313-320)中所述。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在人类嗜中性粒细胞弹性蛋白酶诱导小鼠、大鼠或仓鼠肺损伤模型中呈现良好的活体内效能，如依据例如半最大有效剂量(ED50)所确定，所述模型例如如Tremblay等人(Chest2002，121，582-588)或T。Stevens等人(J.Pharm.Exp.Ther.2011，339，313-320)所述。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在针对代谢稳定性的活体外微粒体分析法中呈现良好的代谢稳定性，所述分析法如E.Kerns及L.Di(Drug-likeproperties：concepts，structure design and methods：from ADME to toxicityoptimization，Elsevier，第1版，2008)第29章及其中参考文献所述。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在针对代谢稳定性的活体外肝细胞分析法中呈现良好的代谢稳定性，所述分析法如E.Kerns及L.Di(Drug-likeproperties：concepts，structure design and methods：from ADME to toxicityoptimization，Elsevier，第1版，2008)第29章及其中参考文献所述。
由于肝内的代谢转化减少，因此预期活体外测试系统中的代谢稳定性的改良可转变成活体内清除率(CL)的降低。根据药物动力学方程式CL/Foral＝剂量/AUC(Foral：口服生物利用度，AUC：曲线下面积)，预期活体内清除率降低可使依剂量校正的药物全身性暴露量(AUC)较高。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在针对渗透性的活体外Caco-2细胞层方法中呈现良好的渗透性，如E.Kerns及L.Di(Drug-like properties：concepts，structure design and methods：from ADME to toxicity optimization，Elsevier，第1版，2008)第26章及其中参考文献所述。对于口服药物而言，预期渗透性改良可转变成肠道中吸收较高分率的药物，从而使得依剂量校正的全身性暴露量(AUC)较高。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在活体外Caco-2或MDCK细胞层方法中呈现良好(即低)的流出比率(efflux ratio，流出方向上的渗透率除以流入方向上的渗透率)，如E.Kerns及L.Di(Drug-like properties：concepts，structure design andmethods：from ADME to toxicity optimization，Elsevier，第1版，2008)第26章及第27章以及其中参考文献所述。对于口服药物而言，预期流出比率的改良(即降低)可转变成肠道中吸收较高分率的药物，从而使得依剂量校正的全身性暴露量(AUC)较高。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在动力学或热力学溶解度方法中呈现良好的水溶性，如E.Kerns及L.Di(Drug-like properties：concepts，15structuredesign and methods：from ADME to toxicity optimization，Elsevier，第1版，2008)第25章及其中参考文献所述。对于口服药物而言，预期水溶性改良可转变成肠道中吸收较高分率的药物，使得依剂量校正的全身性暴露量(AUC)和/或口服生物利用度(Foral)和/或给药后的峰血浆浓度(Cmax)较高。此外，改善的水溶性预期将减少发展中的挑战的风险，例如昂贵的制剂、增加的发展时间，以及高药物负载。
相对较高的依剂量校正的全身性暴露量(AUC)可在若干方面为有利的：(1)若需要某一全身性暴露量(AUC)以达成功效，则药物可以较低量给药。较低剂量具有以下优点：患者的药物负荷较低(亲本药物及其代谢物)，从而潜在降低副作用，及药物产品的生产成本较低。(2)当施用相同剂量时，相对较高的依剂量校正的全身性暴露量(AUC)可引起药物的功效增强或作用持续时间延长。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)呈现良好的代谢稳定性、良好的渗透性、良好的流出比率及良好的水溶性。因此，预期本发明的一些化合物在经口给药之后可呈现良好的药物动力学(PK)特性，特定而言，良好的全身性暴露量(曲线下面积，AUC)，从而产生良好的活体内功效。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)呈现良好的药物动力学(PK)特性。PK特性可于临床前动物物种中测定，例如小鼠、大鼠、仓鼠、犬、豚鼠、小型猪、短尾猴、恒河猴。化合物的PK特性可通过例如以下参数描述：平均保留时间(MRT)、消除半衰期(t1/2)、分布体积(VD)、曲线下面积(AUC)、清除率(CL)及口服后生物利用度(Foral)、给药后的峰血浆浓度(Cmax)、达到Cmax的时间(Tmax)。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在针对CYP同工酶抑制的相应活体外分析法中呈现有利的(即低的)细胞色素P450(CYP)同工酶抑制作用，所述分析法如E.Kerns及L.Di(Drug-like properties：concepts，structure design and methods：fromADME to toxicity optimization，Elsevier，第1版，2008)第32章及其中参考文献中所述。预期对CYP同工酶的抑制作用降低可转变成不良的药物-药物相互作用的风险降低，不良的药物-药物相互作用为一种药物对共同给予的药物的正常代谢或药物动力学性质的干扰。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)呈现有利的性质，即细胞色素P450(CYP)诱导可能性低。CYP诱导可影响多次给药后药物分子的药动学，其可导致不期望的药动学，即共同给药的药物之间的相互作用。CYP诱导可引起诱导化合物(例如自身诱导)的暴露降低，或经诱导的酶代谢的共同给药化合物的暴露降低。CYP诱导也可导致药物代谢增加，造成药理学变化(活性代谢产物)和毒理学后果(毒性代谢产物)。
本发明的一些化合物(包括生理学上可接受的盐)在膜片钳分析法中呈现良好的(即低的)hERG通道抑制作用，所述分析法如E.Kerns及L.Di(Drug-like properties：concepts，structure design and methods：from ADME to toxicity optimization，Elsevier，第1版，2008)第34章及其中所引用的参考文献所述。
发明详述
式1化合物，
其中
R1为苯基，其被CN取代且其被另一个取代基R1.1取代，
R1.1选自-CH2OH，-CH(CH3)OH，-C(CH3)2OH，-SO2-CH2CH3，-SO2-CH3，-SO2-CH2CH2-OCH3，-SO2-CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH2CH2-OH和-SO-CH2CH3，-SO-CH3，
R2为苯基或吡啶基，各环被R2.1取代，
R2.1选自CF3，CHF2，Br和Cl,
R3选自H，CH3，-CO-NH-CH3，-CO-NH-CH2CH3，-CH2CH2-OH，-CH2CH2CH2-OH，和-CH2-氧杂环丁烷，
或其光学和几何异构体、溶剂合物、水合物或盐，优选药学上可接受的盐，
条件是式1化合物不是选自以下的化合物：
所用术语及定义
本文未特别定义的术语应具有由本领域技术人员根据公开内容及上下文而赋予其的含义。然而，除非有相反说明，否则如说明书中所用，下列术语具有所指示的含义且遵循以下规则。
在下文定义的基团(group)、自由基(radical)或部分中，通常在基团之前指出碳原子数目，例如C1-6烷基是指具有1至6个碳原子的烷基。
一般而言，在单基团(如HO、H2N、S(O)、S(O)2、NC(氰基)、HOOC、F3C或其类似基团)中，本领域技术人员可看见自基团本身的自由价至分子的基团连接点。对于包含两个或两个以上亚基的组合基团而言，最后提及的亚基为基团连接点，例如取代基“芳基-C1-3烷基-”是指芳基结合至C1-3烷基-，后者结合至核心或结合至取代基所连接的基团。
在以化学名称及化学式形式描述本发明化合物的情况下，若存在任何不一致，则应以化学式为准。星号在子式中可用于指示连接至如所定义的核心分子的键。
举例而言，术语“3-羧基丙基”表示以下取代基：
其中羧基连接至丙基的第三个碳原子。术语“1-甲基丙基-”、“2,2-二甲基丙基-”或“环丙基甲基-”表示下列基团：
星号在子式中可用于指示连接至所定义的核心分子的键。
下列许多术语可在化学式或基团的定义中重复使用且在各种情况下彼此独立地具有一种上文指定的含义。
如本文所用的术语“取代”是指指定原子上的任一或多个氢经选自所示群组的选项替换，其限制条件为不超过指定原子的正常原子价，且该取代产生稳定化合物。
应了解本文所用的表述“预防(prevention)”、“预防(prophylaxis)”、“预防性治疗(prophylactic treatment)”或“预防性治疗(preventive treatment)”同义且意义为降低发生上述病状的风险，尤其是所述病状风险提高或具有相应病史的患者，例如发生例如糖尿病或肥胖症的代谢障碍或本文提及的其他病症的风险提高的患者。因此，如本文所用，表述“预防疾病”是指在疾病临床发作之前对具有发生该疾病风险的个体进行管理及护理。预防的目的为对抗疾病、病状或病症发展，且包括给予活性化合物以预防或延缓症状或并发症发作及预防或延缓相关疾病、病状或病症发展。该预防性治疗的成功以统计方式、依据具有此病状风险的患者群体内该病状的发生率与无预防性治疗的等量患者群体相比降低来反映。
表述“治疗(treatment)”或“疗法(therapy)”是指已发生一或多种呈显性、急性或慢性形式的所述病状的患者的治疗性治疗，包括症状治疗以缓解特定适应症的症状或病因治疗以逆转或部分逆转病状或尽可能地延缓适应症进展，此视病状及其严重程度而定。因此，如本文所用，表述“疾病治疗”是指对已发生疾病，病状或病症的患者的管理及护理。治疗的目的为对抗该疾病、病状或病症。治疗包括给予活性化合物以消除或控制疾病、病状或病症以及减轻与该疾病、病状或病症相关的症状或并发症。
除非特定说明，否则在整篇本说明书及随附权利要求中，指定化学式或名称应涵盖互变异构体及所有立体、光学及几何异构体(例如对映异构体、非对映异构体、E/Z异构体等)及其外消旋物，以及不同比例的各别对映异构体的混合物、非对映异构体的混合物，或所述异构体及对映异构体存在的任何上述形式的混合物，以及其盐(包括其药学上可接受的盐)及其溶剂合物(例如水合物)，包括游离化合物的溶剂合物或化合物的盐的溶剂合物。
除非特别指示特定异构体，否则本发明意指本发明化合物的所有异构形式(尤其是所有立体异构形式，例如所有手性、对映异构、非对映异构及外消旋形式、所有互变异构及所有几何异构形式)。显然，药理学上更强和/或更有效的异构体优选。
应了解，本发明化合物含有至少一个经不对称取代的碳原子，且因此可以纯对映异构体形式或以两种对映异构体之外消旋或非外消旋混合物形式分离。应了解，一些本发明化合物含有超过一个立体中心，即超过一个经不对称取代的碳或硫原子，且因此可以纯非对映异构体形式或以非对映异构混合物形式(均呈光学活性或外消旋形式)分离。
本发明涵盖所有可能的立体异构体，尤其是本文提及的非对映异构体及对映异构体，例如呈实质上纯形式、呈富集形式(例如实质上不含任何或所有其他非所要对映异构体和/或非对映异构体)和/或具有任何混合比率的立体异构体，包括外消旋形式，以及其盐。
一般而言，实质上纯立体异构体可根据本领域技术人员已知的合成原理获得，例如通过分离相应混合物、通过使用立体化学纯起始物质和/或通过立体选择性合成。本领域中已知制备光学活性形式的方式，例如通过拆分外消旋形式或通过合成(例如自光学活性起始物质开始)和/或通过使用手性试剂。
本发明的对映异构纯化合物或中间体可经由不对称合成来制备，例如通过制备及随后分离适当非对映异构化合物或中间体，所述非对映异构化合物或中间体可通过已知方法(例如色谱分离或结晶)和/或通过使用手性试剂(例如手性起始物质、手性催化剂或手性助剂)分离。
此外，本领域技术人员已知由相应外消旋混合物制备对映异构纯化合物的方式，例如通过在手性固定相上色谱分离相应外消旋混合物；或通过使用适当拆分剂拆分外消旋混合物，例如借助于外消旋化合物与光学活性酸或碱形成非对映异构盐，随后拆分盐及使所要化合物自盐释放；或通过光学活性手性辅助试剂对相应外消旋化合物进行衍生化，随后分离非对映异构体及移除手性辅助基团；或通过动力学拆分外消旋物(例如通过酶促拆分)；通过在适合条件下自对映晶体的晶团进行对映选择性结晶；或通过在光学活性手性助剂存在下自适合溶剂进行(分步)结晶。
术语卤素一般表示氟、氯、溴及碘。
如本文所用，术语“前药”是指(i)药物的非活性形式，其在体内代谢过程将其转化为适用或活性形式之后发挥其作用，或(ii)尽管自身无活性但产生药理活性代谢物的物质(即非活性前驱物)。
术语“前药”或“前药衍生物”是指母体化合物或活性药物的共价连接衍生物、载体或前驱物，其在经历至少一些生物转化后展现其药理作用。所述前药具有代谢可裂解或可以其他方式转化的基团且活体内快速转化以产生母体化合物，例如通过在血液中水解或经由氧化而活化，如在硫醚基团的情况下。最常见前药包括母体化合物的酯及酰胺类似物。前药经调配而达成改良的化学稳定性、改良的患者接受性及顺应性、改良的生物利用度、延长的持续作用时间、改良的器官选择性、改良的调配性(例如提高的水溶性)和/或降低的副作用(例如毒性)的目的。一般而言，前药本身具有弱生物活性或无生物活性且在普通条件下稳定。前药可使用本领域中已知的方法由母体化合物容易地制备，例如以下文献中所述的方法：A Textbook of Drug Design和Development，Krogsgaard-Larsen及H.Bundgaard(编)，Gordon&Breach，1991，尤其第5章：“Design和Applications of Prodrugs”；Designof Prodrugs，H.Bundgaard(编)，Elsevier，1985；Prodrugs：Topical和Ocular DrugDelivery，K.B.Sloan(编)，Marcel Dekker，1998；Methods in Enzymology，K.Widder等人(编)，第42卷，Academic Press，1985，尤其第309-396页；Burger's Medicinal Chemistryand Drug Discovery，第5版，M.Wolff(编)，John Wiley&Sons，1995，尤其第1卷及第172-178页及第949-982页；Pro-Drugs as Novel Delivery Systems，T.Higuchi及V.Stella(编)，Am.Chem.Soc.，1975；Bioreversible Carriers in Drug Design，E.B.Roche(编)，Elsevier，1987，各文献均以全文引用的方式并入本文中。
如本文所用，术语“药学上可接受的前药”是指在正确医学判断的范畴内适于与人类及低等动物的组织接触使用而无不当毒性、刺激、过敏反应及其类似作用、与合理益处/风险比相称且有效用于预定用途以及可能时呈两性离子形式的本发明化合物的前药。
词组“药学上可接受”在本文中用以指在正确医学判断范畴内，适于与人类及动物的组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症且与合理益处/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。
如本文所使用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物为通过制成其酸性盐或碱性盐而经修饰。药学上可接受的盐的实施例包括(但不限于)碱性残基(例如胺)的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基(例如羧酸)的碱金属盐或有机盐；及其类似物。举例而言，所述盐包括来自以下的盐：氨、L-精氨酸、甜菜碱、苯明(benethamine)、苄星青霉素(benzathine)、氢氧化钙、胆碱、地阿诺(deanol)、二乙醇胺(2,2'-亚氨基双(乙醇))、二乙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、2-氨基乙醇、乙二胺、N-乙基-葡糖胺、海卓胺(hydrabamine)、1H-咪唑、赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟基乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟基乙基)-吡咯烷、氢氧化钠、三乙醇胺(2,2',2"-氮基叁(乙醇))、缓血酸胺(trometh胺)、氢氧化锌、乙酸、2.2-二氯-乙酸、己二酸、海藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、2,5-二羟基苯甲酸、4-乙酰氨基-苯甲酸、(+)-樟脑酸、(+)-樟脑-10-磺酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环己胺磺酸、癸酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基-乙磺酸、乙二胺四乙酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龙胆酸、D-葡糖庚酸、D-葡萄糖酸、D-葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代基-戊二酸、甘油磷酸、甘氨酸、乙醇酸、己酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、异丁酸、DL-乳酸、乳糖酸、月桂酸、赖氨酸、顺丁烯二酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、DL-杏仁酸、甲磺酸、半乳糖二酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、辛酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸(恩贝酸(embonic acid))、磷酸、丙酸、(-)-L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸及十一碳烯酸。其他药学上可接受的盐可由来自如铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌等的金属阳离子形成(亦参见Pharmaceutical salts，Berge，S.M.等人，J。Pharm。Sci.，(1977)，66，1-19)。
本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。一般而言，可通过使所述化合物的游离酸或游离碱形式与足量适当碱或酸在水或有机稀释剂(如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈)或其混合物中反应来制备所述盐。
除上述之外的其他酸的盐，例如适用于纯化或分离本发明化合物的盐(例如三氟乙酸盐)，亦构成本发明的一部分。
术语“卤基”(“卤”)添加至“烷基”、“亚烷基”或“环烷基”基团(饱和或不饱和)中是指其中一或多个氢原子经卤素原子替换的此类烷基或环烷基，该卤素原子选自氟、氯或溴，优选选自氟及氯，尤其优选为氟。实例包括：H2FC-、HF2C-、F3C-。
上述限制条件，即式1化合物不是选自上述组的化合物，特别是指：式1化合物不是选自以下的化合物：
这些化合物公开于欧洲专利申请No.13154256.5中。
实施方式
在上述式1化合物的一个实施方式中，
R1为苯基，其被CN取代且其被另一个取代基R1.1取代，
R1.1选自-CH2OH，-SO2-CH2CH3，-SO2-CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH2CH2-OH，-SO-CH2CH3和-SO-CH3，
R2为苯基，其被R2.1取代，
R2.1选自CF3和CHF2,
R3选自H和CH3，
或其药学上可接受的盐，
在上述式1化合物的一个实施方式中，
R1为苯基，其被CN取代且其被另一个取代基R1.1取代，
R1.1为-CH2OH，
或其药学上可接受的盐。
上述式1化合物的一个实施方式选自化合物1.a至1.h
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，式1的构型是式1'
或其药学上可接受的盐。
上述式1’化合物的一个实施方式选自化合物1.a'至1.h'
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R1.1为R1.1.a，和
R1.1.a选自-CH2OH，-CH(CH3)OH，-C(CH3)2OH，-SO2-CH2CH3，-SO2-CH3，-SO2-CH2CH2-OCH3，-SO2-CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH2CH2-OH，-SO-CH2CH3和-SO-CH3
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中R1.1为R1.1.b，和
R1.1.b选自-CH2OH，-CH(CH3)OH，-SO2-CH2CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH3，-SO2-CH3，-SO2-CH2CH2-OCH3，-SO-CH2CH3和-SO-CH3
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中R1.1为R1.1.b，和
R1.1.b选自-CH2OH，-CH(CH3)OH，-SO2-CH2CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH3，-SO2-CH3，-SO2-CH2CH2-OCH3，-SO-CH2CH3和-SO-CH3
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R1.1为R1.1.c，和
R1.1.c选自-CH2OH，-SO2-CH2CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH3，-SO-CH2CH3和-SO-CH3
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R1.1为R1.1.c，和
R1.1.c选自-CH2OH，-SO2-CH2CH2CH2-OH，-SO2-CH2CH3，-SO-CH2CH3和-SO-CH3
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R2为R2.a，和
R2.a为苯基或吡啶基，各环被R2.1取代，
R2.1选自CF3，CHF2，Br和Cl
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R2为R2.b，和
R2.b为苯基，其被R2.1取代，
R2.1选自
CF3和CHF2
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R2为R2.c，和
R2.c为吡啶基，其被R2.1取代，
R2.1选自CF3和CHF2
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R2.1为CF3
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R2.1为CHF2
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R3为R3.a，且
R3.a选自H，CH3，-CO-NH-CH3，-CO-NH-CH2CH3，-CH2CH2-OH，和-CH2CH2CH2-OH和-CH2-氧杂环丁烷
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R3为R3.b，且
R3.b选自H，CH3，CO-NH-CH3，-CO-NH-CH2CH3，和-CH2CH2CH2-OH
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，R3为R3.c，且
R3.c选自H和CH3
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，化合物选自实施例A.1A，A.2，A.3，B.1.2B，B.1.3A，C.1B，C.2A，C5.1，C.5.2，D.1A，D.3B，D.4.1A，D.4.4，D.4.5和D.5A
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，化合物选自实施例A.2，A.3，B.1.2B，B.1.3A，C.1B，C.2A，C5.1，C.5.2，D.1A，D.3B，D.4.1A，D.4.4，D.4.5和D.5A
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，化合物选自实施例A.1A，A.3，B.1.2B，B.1.3A，C.1B，C.2A，C5.1，C.5.2，D.4.1A，D.4.5和D.5A
或其药学上可接受的盐。
在上述式1化合物的一个实施方式中，化合物选自实施例A.3，B.1.2B，B.1.3A，C.1B，C.2A，C5.1，C.5.2，D.4.1A，D.4.5和D.5A
或其药学上可接受的盐。
R1，R1.1，R1.1.a，R1.1.b，R1.1.c，R2，R2.a，R2.b，R2.c，R2.1，R3，R3.a，R3.b和R3.c的每一定义可彼此互相组合。
本发明一个实施方式是将上述式1化合物用作药物。
本发明另一个实施方式是将上述式1化合物用作治疗以下的药物：哮喘和过敏性疾病，胃肠炎症，肾小球肾炎，嗜酸性粒细胞疾病，慢性阻塞性肺病，由病原微生物引起的感染和类风湿性关节炎。
本发明另一个实施方式是将上述式1化合物用作治疗以下的药物：嗜中性粒细胞疾病，囊性纤维化(CF)，非囊性纤维化，特发性肺纤维化，支气管扩张症，ANCA相关的血管炎，肺癌，非囊性纤维化支气管扩张症，肺气肿，慢性支气管炎，急性肺损伤(ALI)，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，肺高压，肺动脉高压(PAH)和α-1-抗胰蛋白酶缺乏(AATD)。
本发明另一个实施方式是将上述式1化合物用作治疗以下的药物：肥胖和相关炎症，胰岛素抵抗，糖尿病，脂肪肝和肝脂肪变性。
本发明另一个实施方式是将上述式1化合物用作治疗以下的药物：外伤性脑损伤，腹主动脉瘤和移植物抗宿主疾病(GvHD)。
本发明的另一实施方式是药物组合物，其包含一或多种上述式1化合物或其药学活性盐。
本发明的另一实施方式是治疗或预防疾病的方法，所述疾病为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂具有治疗益处的疾病，该方法包括将治疗有效量或预防有效量的上述式1化合物给予有此需要的患者。
本发明的另一实施方式是一种药物组合物，其除包含上述式1化合物之外，亦包含选自由以下组成的组的药学活性化合物：β模拟剂、抗胆碱能药物、皮质类固醇、PDE4抑制剂、LTD4拮抗剂、EGFR抑制剂、组织蛋白酶C抑制剂、CRTH2抑制剂、5-LO抑制剂、组胺受体拮抗剂及SYK抑制剂，以及两种或三种活性物质的组合。
制备
本发明化合物及其中间体可使用本领域技术人员已知及有机合成文献中所述的合成方法获得。化合物优选以类似于下文中更充分阐明(详言之，如实验章节中所述)的制备方法的方式获得。在一些情况下，反应步骤执行顺序可改变。亦可使用本领域技术人员已知、但本文中未详细描述的反应方法的变化形式。本领域技术人员研究以下反应式将了解制备本发明化合物的一般方法。起始物质可市购或可通过文献或本文中所述的方法制备，或可以类似或相似方式制备。起始物质或中间体中的任何官能基可使用常规保护基保护。所述保护基可使用本领域技术人员熟知的方法、在反应程序中的适合阶段再次裂解。
本发明化合物VI可使用反应式1中所说明的合成途径获得；RI、RE.1、RE.2具有如上文及下文中所定义的含义。
反应式1
中间体II(步骤A，中间体I→中间体II)可如Vovk等人(Synlett 2006，3，375-378)或PL2004/369318中所述如下制备：在强布朗斯特酸(acid)或路易斯酸(Lewisacid)(例如硫酸、氯化氢、对甲苯磺酸、大孔树脂15(Amberlyst 15)、四氟硼酸、三氟乙酸或三氟化硼)存在下，将脂族或芳族醛I与氨基甲酸酯(例如氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯(乌拉坦(ur乙烷)或氨基甲酸苯甲酯)以无溶剂的熔融物形式或于适合溶剂(例如苯、甲苯、乙腈、乙醚、氯仿、乙酸酐或其混合物)中加热。反应进行1至24小时。优选反应温度分别在室温至160℃或溶剂沸点。优选地，反应在140℃-160℃的温度下、以熔融氨基甲酸乙酯作为反应物且使用催化量的浓硫酸、不使用任何其他溶剂来进行。
氯化反应(步骤B，中间体II→中间体III)可如Vovk等人(Synlett 2006，3，375-378)及Sinitsa等人(J.Org.Chem.USSR 1978，14，1107)中所述如下进行：将中间体II与氯化剂(例如五氯化磷、磷酰氯或氯化硫酰)一起在有机溶剂(例如苯或甲苯)中加热。反应进行1至24小时。优选反应温度在50℃与150℃之间。
或者，中间体III可如Jochims等人(Chem.Ber.1982，115，860-870)中所述如下制备：使用例如溴化剂(例如N-溴琥珀酰亚胺)对脂族异氰酸酯(例如异氰酸苯甲酯)进行α-卤化。异氰酸酯可如US6207665及Charalambides等人(Synth.Commun.2007，37，1037-1044)中所述、由胺类前驱物与光气反应而合成。
中间体V(步骤C，中间体IV→中间体V)可如Chen等人(Synth.Commun.2010，40，2506-2510)及Tietcheu等人(J.Heterocyclic Chem.2002，39，965-973)中所述如下制备：在催化剂(例如三氟甲磺酸镱[Yb(OTf)3]或酸，例如氯化氢或对甲苯磺酸))存在下，任选在溶剂(例如水、乙酸、乙腈、苯、甲苯)中，使环戊烷-1,3-二酮(IV)与脂族或芳族胺反应。反应进行1至24小时。优选反应温度在室温与120℃之间，最优选为室温。
或者，中间体V可如Scott等人(J.Med.Chem.1993，36，1947-1955)中所述如下制备：使1,3-二羰基化合物与胺在适合溶剂(例如其中水共沸移除的苯或甲苯)中、在回流下直接缩合。或者，中间体V可如Mariano等人(J.Org.Chem.1984，49，220-228)中所述、由胺与3-氯-2-环戊烯-1-酮反应而制备，3-氯-2-环戊烯-1-酮可由环戊烷-1,3-二酮制备。
本发明化合物(步骤D，中间体III→本发明化合物VI)可如Vovk等人(Synlett2006，3，375-378)、Vovk等人(Russ.J.Org.Chem.2010，46，709-715)及Kushnir等人(Russ.J.Org.Chem.2011，47，1727-1732)中所述、由中间体III与中间体V在有机溶剂(例如二氯甲烷、氯仿、苯或甲苯)中反应而制备。反应进行1至24小时。优选反应温度在0℃与100℃之间。
本发明化合物VII可经由反应式2中所描绘的合成途径获得；RE.1、RE.2、RE.3具有如上文及下文中所定义的含义。
反应式2
本发明化合物VII(步骤E，本发明化合物VI→本发明化合物VII，RE.3＝烷基或经取代的烷基)可如WO04024700中所述如下制备：在适合碱(例如氢化钠、氢氧化钠、碳酸铯、二异丙氨基锂、双(三甲基硅烷)氨基钾、双(三甲基硅烷)氨基锂、有机锂试剂(例如叔丁基锂)或格林纳试剂(Grignard reagent)(例如氯化异丙基镁))存在下，在有机溶剂(例如四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、1,4-二烷、二氯甲烷或甲苯)中，使本发明化合物VI与烷基化剂(例如硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯)、烷基卤化物(例如碘甲烷)或磺酸烷基酯(例如甲苯磺酸苯甲酯))反应。反应进行1至72小时。优选反应温度在0℃与100℃之间。
本发明化合物XIII可经由反应式3中所描绘的合成途径获得；RIII、RIV、RE.1、RE.2具有如上文及下文中所定义的含义。
反应式3
4-硝基苯基氨基甲酸酯中间体XII(步骤K，本发明化合物VI→中间体XII)可如WO09080199中所述如下制备：在碱(例如三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啉)存在下，任选在催化剂(例如4-二甲基氨基吡啶)存在下，在有机溶剂(例如二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺)中，使本发明化合物VI与氯甲酸4-硝基苯酯反应。反应进行1至24小时。优选反应温度在0℃与50℃之间，最优选为室温。
本发明化合物XIII(步骤L，4-硝基苯基氨基甲酸酯中间体XII→本发明化合物XIII)可如WO09080199中所述由中间体XII与胺RIIINH2或RIIIRIVNH于有机溶剂(例如二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、1,4-二烷、甲苯或N,N-二甲基甲酰胺)中反应制备。反应在1至72小时内发生。优选反应温度在0℃与50℃之间，最优选为室温。
除反应式1中所描绘的合成途径以外，本发明化合物VI亦可使用反应式4中所描绘的合成途径获得，RE.1、RE.2具有如上文及下文中所定义的含义。
反应式4
中间体XV(步骤O，中间体I→中间体XV)可如Best等人(J.Am.Chem.Soc.2012，134，18193-18196)或Yang等人(Org.Synth.2009，86，11-17)所述如下制备：在适合酸(例如甲酸)存在下，在适合溶剂(例如四氢呋喃、乙醇、甲醇)或溶剂(例如四氢呋喃与水)的混合物中，使芳族醛I与适合亚磺酸盐(例如苯亚磺酸钠)及适合氨基甲酸酯(例如氨基甲酸甲酯或氨基甲酸叔丁酯)反应。或者，如Reingruber等人(Adv.Synth.Catal.2009，351，1019-1024)或WO06136305中所述，可使用适合路易斯酸(例如三甲基硅烷基氯)作为酸，且可使用乙腈或甲苯作为溶剂。反应进行1至6天。优选反应温度在0℃与50℃之间，最优选为室温。
中间体XVI(步骤P，中间体XV→中间体XVI)可类似于针对制备本发明化合物VI所述的方法(反应式1，步骤D，中间体III→本发明化合物VI)、由中间体XV与中间体V在适合碱(例如氢化钠或叔丁醇钠)存在下、在适合有机溶剂(例如四氢呋喃或2-甲基四氢呋喃)中反应而制备。反应进行1至24小时。优选反应温度在0℃与50℃之间，最优选为室温。
中间体XVII(步骤Q，中间体XVI→中间体XVII)可由中间体XVI与适合酸(例如氯化氢)在适合溶剂(例如1,4-二烷)中反应而制备。反应进行1至72小时。优选反应温度在0℃与室温之间，最优选为室温。
本发明化合物VI(步骤R，中间体XVII本发明化合物VI)可如等人(Tetrahedron Lett.2011，67，8564-8571)或WO11042145中所述如下制备：在适合碱(例如三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶或碳酸钠)存在下，在适合溶剂(例如乙腈、二氯甲烷或甲苯)中，使中间体XVII与适合试剂(例如光气、三光气或羰基二咪唑)反应。反应进行1至72小时。优选反应温度在0℃与50℃之间，最优选为室温。
本发明化合物XX可通过反应式5所示的合成路线得到；RV，RE.2，RE.3具有上下文给出的定义。
反应式5
中间体XIX(步骤S，化合物XVIII→化合物XIX，RE.3＝H或烷基)可通过将氟中间体XVIII与硫醇RV-SH在适当碱的存在下在有机溶剂中反应，所述碱例如氢化钠，氢氧化钠，碳酸铯，二异丙胺锂、六甲基二硅氮化钾(potassium hexamethyldisilazide)，六甲基二硅氮化锂(lithium hexamethyldisilazide)、有机锂试剂例如叔丁基锂，或格氏试剂例如异丙基氯化镁，所述溶剂例如N,N-二甲基甲酰胺，四氢呋喃，乙腈，1,4-二烷，二氯甲烷或甲苯。反应在1-72小时之内发生。优选的反应温度介于0℃和100℃之间。
本发明的化合物XX可通过使用氧化剂、任选在金属催化剂的存在下在适当溶剂中将硫化物中间体XIX(步骤T，中间体XIX→本发明的化合物XX，RE.3＝H或烷基)氧化而制备，所述氧化剂例如过氧化氢，3-氯-过苯甲酸，过碘酸，过碘酸钠，高锰酸钾，尿素-过氧化氢加合物，所述溶剂为例如二氯甲烷，氯仿，甲醇，乙醇，水或其混合物。反应在1-72小时之内发生。优选的反应温度介于室温和所用溶剂的沸点之间。
带有硫氧基团的本发明的化合物可通过任选在金属催化剂的存在下、在适当溶剂中将相应硫化物氧化而制备，所述氧化使用氧化剂，例如过氧化氢，3-氯-过苯甲酸，过碘酸，过碘酸钠，叔丁基过氧化氢，尿素-过氧化氢加合物，所述催化剂例如甲基三氧代铼，FeCl3，Sc(OTf)3，钛(IV)复合物，所述溶剂例如二氯甲烷，氯仿，甲醇、乙醇，水或其混合物。反应在1-72小时之内发生。优选的反应温度介于室温和所用溶剂的沸点之间。
前言
术语室温表示约20℃的温度。通常，已获得所制备化合物的1H NMR谱和/或质谱。所指定保留时间为在以下条件下测量(TFA：三氟乙酸，DEA：二乙胺，scCO2：超临界二氧化碳)：
起始原料的合成
以下起始原料按照所引用文献来制备：
3-(3-(三氟甲基)苯基氨基)环戊-2-烯酮:Aust.J.Chem.2005，58，870-876。
中间体的合成
中间体A.1
{(2-溴-4-氰基-苯基)-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯
步骤1:
[苯磺酰基-(2-溴-4-氰基-苯基)-甲基]-氨基甲酸叔丁基酯
将甲酸(3.9mL，104mmol)添加至氨基甲酸叔丁酯(1.90g，16.2mmol)，2-溴-4-氰基苯甲醛(CAS#89891-69-0，3.41g，16.2mmol)和苯亚磺酸钠(2.67g，16.2mmol)在THF(7.0mL)和水(60mL)中的混合物中，并将所述混合物在室温搅拌6天。加入水(180mL)和过滤沉淀和用水洗涤。沉淀用叔丁基甲基醚(30mL)处理，并将所述混合物搅拌30min。过滤出沉淀，用叔丁基甲基醚洗涤和干燥。收率：3.35g。ESI质谱：[M+H]+＝451(溴同位素模式)；保留时间HPLC:0.66分钟(X012_S01)。
步骤2：
{(2-溴-4-氰基-苯基)-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯
分小份将氢化钠(60％(分散于矿油中)，360mg，9.00mmol)加入至3-(3-(三氟甲基)苯基氨基)环戊-2-烯酮(2.16g，8.96mmol)和2-甲基四氢呋喃(30mL)的混合物。30分钟后加入[苯磺酰基-(2-溴-4-氰基-苯基)-甲基]-氨基甲酸叔丁基酯(步骤1，3.35g，7.43mmol)，并将所述混合物在室温搅拌2小时。加入水和进行相分离。水相用乙酸乙酯萃取和用水洗涤所合并的有机相，经MgSO4干燥并减压浓缩。残余物用叔丁基甲基醚处理并将所述混合物搅拌15min。过滤出沉淀，用叔丁基甲基醚洗涤和干燥。收率：3.18g。ESI质谱：[M+H]+＝550(溴同位素模式)；保留时间HPLC:0.73分钟(X012_S01)。
中间体A.2
4-{氨基-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-溴-苄腈盐酸盐
将氯化氢在1,4-二烷中的溶液(4M，15.2mL，61mmol)添加至{(2-溴-4-氰基-苯基)-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯(中间体A.1，6.71g，12.2mmol)在1,4-二烷(30mL)的混合物中。将所述混合物在室温搅拌2h且然后冰浴冷却。过滤出沉淀，用冷乙腈和乙醚洗涤和干燥。收率：5.90g。ESI质谱：[M+H]+＝450(溴同位素模式)；保留时间HPLC:1.17分钟(V011_S01)。
中间体A.3
3-溴-4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
将三乙基胺(4.11mL，29.3mmol)添加至4-{氨基-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-溴-苄腈盐酸盐(中间体A.2，28.5g，58.6mmol)和1,1’-羰基二咪唑(11.9g，73.2mmol)在乙腈(290mL)中的混合物中并将所述混合物在室温搅拌过夜。加入水(1.5L)和过滤出沉淀，用水洗涤和干燥。收率：24.5g。ESI质谱：[M+H]+＝476(溴同位素模式)；保留时间HPLC:1.11分钟(V011_S01)。
中间体A.4
3-溴-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
将甲基碘(3.61mL，58.0mmol)添加至3-溴-4-(2,5-二氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基)苄腈(中间体A.3，23.0g，48.3mmol)和碳酸铯(20.5g，62.8mmol)在DMF(230mL)的混合物中并将所述反应混合物在室温搅拌过夜。加入水和乙酸乙酯和进行相分离。有机相用水洗涤，经MgSO4干燥和浓缩。收率：24.0g。ESI质谱：[M+H]+＝490(溴同位素模式)；保留时间HPLC:1.18分钟(V011_S01)。
中间体A.5
5-氰基-2-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苯甲酸甲基酯
3-溴-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈(中间体A.4，11.85g，24.2mmol)，1.1-二(二苯基膦)-二茂铁(1.34g，2.42mmol)，乙酸钯(0.27g，1.21mmol)和乙酸钠(5.95g，72.5mmol)的溶液用5巴一氧化碳在100℃处理40小时。减压下使挥发物挥发后，加入水和乙酸乙酯和进行相分离。将有机相经MgSO4干燥和减压浓缩。残余物经快速硅胶色谱纯化(环己烷/乙酸乙酯1:1)。收率：8.0g。ESI质谱：[M+H]+＝470；保留时间HPLC:1.15分钟(V011_S01)。
中间体A.6
5-氰基-2-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苯甲酸
在室温搅拌5-氰基-2-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苯甲酸甲基酯(中间体A.5，6.70g，14.3mmol)和氢氧化锂(1.03g，42.8mmol)在1,4-二烷(135ml)和水(67.0mL)中的混合物90min。加入水(250mL)和盐酸(1.0M，44mL)且反应混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤，经MgSO4干燥和减压浓缩。收率：6.2g。ESI质谱：[M+H]+＝456；保留时间HPLC:0.63分钟(X012_S01)。
中间体A.7
3-甲酰基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
将戴斯-马丁过碘烷(2.36g；5.57mmol)添加至3-羟基甲基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈(实施例A.1；2.05g；4.644mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中，并将所述混合物在室温搅拌90min。用10％硫代硫酸钠溶液(50mL)和饱和NaHCO3溶液(50mL)的混合物淬灭所述反应混合物和进行相分离。用二氯甲烷萃取水层。所合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥和减压浓缩。残余物经快速硅胶色谱纯化(二氯甲烷/甲醇98:2)。收率：510mg；ESI质谱：[M+H]+＝440；保留时间HPLC:0.63分钟(X012_S02)。
中间体B.1
{(4-氰基-2-氟-苯基)-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯
中间体B.1按照类似中间体A.1所述的方式制备，用3-氟-4-甲酰基-苄腈(CAS#105942-10-7)来替代2-溴-4-氰基苯甲醛作为起始原料。通过反相HPLC纯化粗物质(WatersSunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％甲酸的水中的溶液)。ESI质谱：[M+H]+＝490；保留时间HPLC:1.13分钟(Z018_S04)。
中间体B.2
4-{氨基-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-氟-苄腈盐酸盐
中间体B.2按照类似中间体A.2所述的方式制备，用中间体B.1来替代中间体A.1作为起始原料。ESI质谱：[M+H-NH3]+＝373；保留时间HPLC:0.81分钟(Z018_S04)。
中间体B.3
4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-氟-苄腈
中间体B.3按照类似中间体A.3所述的方式制备，用中间体B.2来替代中间体A.2作为起始原料。ESI质谱：[M+H]+＝416；保留时间HPLC:0.97分钟(Z018_S04)。
中间体B.4
4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-(3-羟基-丙基硫基)-苄腈
在0℃向氢化钠(55％(分散于矿油中)，32mg，0.73mmol)在DMF(0.30mL)中的混合物中加入3-巯基-1-丙醇(55μL，0.64mmol)，并将所述混合物在0℃搅拌25min。加入4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-氟-苄腈(中间体B.3，110mg，0.21mmol)在DMF(0.30mL)中的溶液，并将所述混合物在室温搅拌2.5小时。用水淬灭所述反应混合物，用稀乙酸酸化和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：13mg。ESI质谱：[M+H]+＝488；保留时间HPLC:0.93分钟(Z018_S04)。
以下中间体B.4.1按照类似中间体B.4所述的方式制备，用2-甲氧基-乙烷硫醇来替代3-巯基-1-丙醇作为起始原料。
中间体B.5
3-氟-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
中间体B.5按照类似中间体A.4所述的方式制备，用中间体B.3来替代中间体A.3。将所述反应混合物通过反相HPLC纯化(Agilent ZORBAXTM SB-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。ESI质谱[M+H]+＝430；保留时间HPLC:1.02分钟(Z018_S04)。
中间体B.6
3-(2-羟基-乙基硫基)-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
中间体B.6按照类似中间体B.4所述的方式制备，分别用中间体B.5来替代中间体B.3、用2-巯基乙醇来替代3-巯基-1-丙醇作为起始原料。ESI质谱：[M+H]+＝488；保留时间HPLC:0.97分钟(Z018_S04)。
以下中间体B.6.1和B.6.2按照类似中间体B.6所述的方式制备，分别使用适当的硫醇作为起始原料。
中间体C.1
4-甲酰基-3-甲基硫基-苄腈
将碳酸钾(3.8g；27.2mmol)添加至3-氟-4-甲酰基-苄腈(2.0g；13.4mmol)和硫代甲醇钠(1.175g；16.77mmol)在DMF(10mL)中的混合物中，并将所述混合物在120℃搅拌2小时。将所述反应混合物用冰浴冷却。加入水和过滤出沉淀，用水洗涤和干燥。收率：1.98g。ESI质谱：[M+H]+＝178；保留时间HPLC:0.73分钟(Z011_S03)。
中间体C.2
3-乙基硫基-4-甲酰基-苄腈
中间体C.2按照类似中间体C.1所述的方式制备，用硫代乙醇钠来替代硫代甲醇钠(反应温度50℃)。ESI质谱：[M+H]+＝192；保留时间HPLC:0.81分钟(Z011_S03)。
中间体C.3
{(4-氰基-2-甲基硫基-苯基)-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯
中间体C.3按照类似中间体A.1所述的方式制备，用4-甲酰基-3-甲基硫基-苄腈(中间体C.1)来替代2-溴-4-氰基苯甲醛。ESI质谱：[M+H]+＝518；保留时间HPLC:1.14分钟(Z017_S04)。
中间体C.4
{(4-氰基-2-乙基硫基-苯基)-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯
中间体C.4按照类似中间体A.1所述的方式制备，用3-乙基硫基-4-甲酰基-苄腈(中间体C.2)来替代2-溴-4-氰基苯甲醛。ESI质谱：[M+H]+＝532；保留时间HPLC:1.19分钟(Z018_S04)。
中间体C.5
4-{氨基-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-甲基硫基-苄腈盐酸盐
将氯化氢在1,4-二烷中的溶液(4M，5mL，20mmol)添加至{(4-氰基-2-甲基硫基-苯基)-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯(中间体C.3，4.3g，纯度80％，6.7mmol)在乙腈(10mL)中的混合物中，并将所述混合物在室温搅拌2小时。过滤出沉淀，用冷乙腈洗涤和干燥。收率：4.14g。ESI质谱：[M+H]+＝418；保留时间HPLC:0.90分钟(Z011_S03)。
中间体C.6
4-{氨基-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-乙基硫基-苄腈盐酸盐
中间体C.6按照类似中间体C.5所述的方式制备，用中间体C.4来替代中间体C.3。ESI质谱：[M+H]+＝432；保留时间HPLC:0.94分钟(Z011_S03)。
中间体C.7
4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲基硫基-苄腈
三乙基胺(95μL，0.68mmol)添加至4-{氨基-[5-氧代-2-(3-三氟甲基-苯基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-甲基硫基-苄腈盐酸盐(中间体C.5，570mg，1.13mmol，基于90％纯度)和1,1’-羰基二咪唑(220mg，1.36mmol)在乙腈(3mL)中的混合物中，并将所述混合物在室温搅拌过夜。将所述反应混合物减压浓缩，和用水处理残余物。过滤出沉淀，用水洗涤和干燥。收率：460mg；ESI质谱：[M+H]+＝444；保留时间HPLC:0.98分钟(Z017_S04)。
中间体C.8
4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙基硫基-苄腈
中间体C.8按照类似中间体C.7所述的方式制备，用中间体C.6来替代中间体C.5。ESI质谱：[M+H]+＝458；保留时间HPLC:1.03分钟(Z018_S04)。
中间体C.9
4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲基硫基-苄腈
甲基碘(834μL，13.4mmol)添加至4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲基硫基-苄腈(中间体C.7；1.981g；4.467mmol)和碳酸铯(2.911g，8.935mmol)在DMF(5mL)中的混合物中，并将所述反应混合物在室温搅拌2小时。将所述混合物通过反相HPLC纯化(Stablebond，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：1.145g。ESI质谱：[M+H]+＝458；保留时间HPLC:1.03分钟(Z017_S04)。
中间体C.10
4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙基硫基-苄腈
中间体C.10按照类似中间体C.9所述的方式制备，用中间体C.8来替代中间体C.7。ESI质谱：[M+H]+＝472；保留时间HPLC:1.09分钟(Z018_S04)。
中间体C.11.1和中间体C.11.2
3-甲亚磺酰基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
在室温将3-氯过氧苯甲酸(77％，46mg，0.203mmol)加入4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲基硫基-苄腈(中间体C.9，93mg，0.203mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，并将所述混合物搅拌20min。将所述反应混合物减压浓缩和通过反相HPLC纯化(Sunfire，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)，得到所述两种非对映异构体。
中间体C.11.1:
收率：46mg；ESI质谱[M+H]+＝474；保留时间HPLC:0.94分钟(先洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
中间体C.11.2:
收率：46mg；ESI质谱[M+H]+＝474；保留时间HPLC:0.96分钟(后洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
中间体C.12.1和中间体C.12.2
4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲亚磺酰基-苄腈
在室温将3-氯过氧苯甲酸(77％，51mg，0.226mmol)加入至4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲基硫基-苄腈(中间体C.7，100mg，0.226mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中，并将所述混合物搅拌20min。将所述反应混合物减压浓缩和通过反相HPLC纯化(Sunfire，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)，得到所述两种非对映异构体。
中间体C.12.1:
收率：35mg；ESI质谱[M+H]+＝460；保留时间HPLC:0.90分钟(先洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
中间体C.12.2:
收率：26mg；ESI质谱[M+H]+＝460；保留时间HPLC:0.92分钟(后洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
中间体C.13
4-(4-氰基-2-乙基硫基-苯基)-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-甲酸甲基酰胺
在室温经5小时向4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙基硫基-苄腈(中间体C.8；100mg；纯度90％；0.20mmol)和二异丙基乙基胺(130μL；0.76mmol)在乙腈(1mL)中的混合物中分小份加入4-硝基苯基氯甲酸(160mg；0.79mmol)和4-二甲基氨基吡啶(140mg；1.15mmol)。将甲基胺(1M，于THF中；1mL；1.00mmol)添加至所述含4-硝基苯基氨基甲酸酯中间体的混合物中，和将所述反应在室温搅拌1小时。将所述反应混合物通过反相HPLC纯化(Sunfire，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：58mg。ESI质谱：[M+H]+＝515；保留时间HPLC:1.08分钟(Z018_S04)。
中间体D.1
[苯磺酰基-(4-氰基-2-甲磺酰基-苯基)-甲基]-氨基甲酸叔丁基酯
将甲酸(6.2mL，164mmol)添加至氨基甲酸叔丁酯(3.05g，26.0mmol)，4-甲酰基-3-(甲基磺酰基)苄腈(根据US 2011/34433制备，5.44g，26.0mmol)和苯亚磺酸钠(4.27g，26.0mmol)在THF(10.0mL)和水(25.0mL)中的混合物中并将所述反应混合物在室温搅拌4天。加入水和过滤出沉淀，用水洗涤和乙腈和干燥。收率：5.10g。ESI质谱：[M+H]+＝451；保留时间HPLC:0.59分钟(X012_S01)。
中间体D.2
[苯磺酰基-(4-氰基-2-乙磺酰基-苯基)-甲基]-氨基甲酸叔丁基酯
中间体D.2按照类似中间体D.1所述的方式制备，用3-乙磺酰基-4-甲酰基-苄腈(根据US 2011/34433制备)来替代4-甲酰基-3-(甲基磺酰基)苄腈。ESI质谱：[M+H]+＝465；保留时间HPLC:1.03分钟(Z017_S04)。
中间体D.3
3-(2-三氟甲基-吡啶-4-基氨基)-环戊-2-烯酮
在130℃微波炉中将1.3-环戊烷二酮(3.03g，30.8mmol)和4-氨基-2-三氟甲基吡啶(5.00g，30.8mmol)在乙酸(15.0mL)中的溶液搅拌5小时。将所述反应混合物稀释于甲醇和水中，和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％甲酸的水中的溶液)。收率：4.52g；ESI质谱[M+H]+＝243；保留时间HPLC:0.77分钟(Z018_S04)。
中间体D.3.1–D.3.4按照类似中间体D.3所述的方式制备，分别使用适当的胺作为起始原料。
表1
中间体D.4
{(4-氰基-2-甲磺酰基-苯基)-[5-氧代-2-(2-三氟甲基-吡啶-4-基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯
向3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基氨基)环戊-2-烯酮(中间体D.3，2.60g，10.7mmol)在2-甲基四氢呋喃(40.0mL)中的混合物中分小份加入氢化钠(60％(分散于矿油中)，515mg，12.9mmol)。10分钟后加入[苯磺酰基-(4-氰基-2-甲磺酰基-苯基)-甲基]-氨基甲酸叔丁基酯(中间体D.1，4.83g，10.7mmol)并将所述反应混合物在室温搅拌30min。加入水和乙酸乙酯和进行相分离。有机相用水洗涤和减压浓缩。收率：6.20g；ESI质谱[M+H]+＝551；保留时间HPLC:1.12分钟(Z018_S04)。
中间体D.4.1–D.4.5按照类似中间体D.4所述的方式制备，使用下表所示的起始原料。
表2
中间体D.5
4-{氨基-[5-氧代-2-(2-三氟甲基-吡啶-4-基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-甲磺酰基-苄腈盐酸盐
向{(4-氰基-2-甲磺酰基-苯基)-[5-氧代-2-(2-三氟甲基-吡啶-4-基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯(中间体D.4，5.20g，9.45mmol)在1,4-二烷(100mL)中的溶液中加入氯化氢在1,4-二烷中的溶液(4M，50.0mL，200mmol)，并将所述混合物在室温搅拌过夜。将所述反应混合物稀释于甲基-叔丁基醚中并过滤出沉淀，用甲基-叔丁基醚洗涤和干燥。收率：4.40g。ESI质谱：[M+H]+＝451；保留时间HPLC:0.78分钟(Z018_S04)。
中间体D.5.1–D.5.5按照类似中间体D.5所述的方式制备，使用下表所示的起始原料。
表3
中间体D.6
4-[2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲磺酰基-苄腈
向4-{氨基-[5-氧代-2-(2-三氟甲基-吡啶-4-基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-甲磺酰基-苄腈盐酸盐(中间体D.5，4.78g，9.81mmol)在乙腈(100mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(1.99g，12.3mmol)和三乙基胺(0.34mL，2.45mmol)，并将所述混合物在室温搅拌1小时。将所述反应混合物减压浓缩。残余物用水处理，过滤出沉淀，用水洗涤和干燥。收率：3.73g。ESI质谱：[M+H]+＝477；保留时间HPLC:0.90分钟(Z018_S04)。
中间体D.6A和中间体D.6B:外消旋中间体D.6的对映异构体
外消旋中间体D.6的对映异构体(300mg，0.63mmol)通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IC，20x 250mm，5μm，20％MeOH+20mM氨，于超临界CO2中，40℃，120巴反压)。
中间体D.6A:
收率：92mg；ESI质谱[M+H]+＝477；保留时间:2.67分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MeOH_NH3)。
中间体D.6B:
收率：96mg；ESI质谱[M+H]+＝477；保留时间:3.03分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MeOH_NH3)。
中间体D.7
3-(3-(二氟甲基)苯基氨基)环戊-2-烯酮
在室温搅拌环戊烷-1,3-二酮(2.00g，20.4mmol)，3-(二氟甲基)苯胺(2.92g，20.4mmol)和三氟甲磺酸镱(III)(63mg，0.10mmol)的混合物2小时。加入甲醇和水，过滤并干燥所得沉淀。收率：2.75g；ESI质谱：[M+H]+＝224；保留时间HPLC:0.82分钟(V012_S01)。
中间体D.8
{(4-氰基-2-乙磺酰基-苯基)-[2-(3-二氟甲基-苯基氨基)-5-氧代-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯
向3-(3-(二氟甲基)苯基氨基)环戊-2-烯酮(中间体D.7；936mg，4.20mmol)在2-甲基四氢呋喃(10mL)中的混合物中分小份加入氢化钠(60％(分散于矿油中)，155mg，3.88mmol)。30分钟后加入[苯磺酰基-(4-氰基-2-乙磺酰基-苯基)-甲基]-氨基甲酸叔丁基酯(中间体D.2，1.50g，3.23mmol)，并将所述混合物在室温搅拌过夜。加入乙酸乙酯和水和进行相分离。有机相用水洗涤，经MgSO4干燥和减压浓缩。收率：2.35g。ESI质谱：[M+H]+＝546；保留时间HPLC:1.14分钟(Z017_S04)。
中间体D.9
4-{氨基-[2-(3-二氟甲基-苯基氨基)-5-氧代-环戊-1-烯基]-甲基}-3-乙磺酰基-苄腈盐酸盐
将氯化氢在1,4-二烷中的溶液(4M，3.0mL，12.0mmol)添加至{(4-氰基-2-乙磺酰基-苯基)-[2-(3-二氟甲基-苯基氨基)-5-氧代-环戊-1-烯基]-甲基}-氨基甲酸叔丁基酯(中间体D.8，2.35g，纯度75％，3.23mmol)在乙腈(6mL)的溶液中，并将所述混合物在室温搅拌2h且然后冰浴冷却。过滤出沉淀，用冷乙腈和干燥洗涤。收率：1.52g。ESI质谱：[M+H]+＝446；保留时间HPLC:0.86分钟(Z017_S04)。
中间体E.1
(4-溴-2-甲基磺酰基)苯基)亚甲基二氨基甲酸二乙基酯
在配有充满氯化钙的干燥管和氮气入口的三颈圆底烧瓶中，在145℃将4-溴-2-甲磺酰基-苯甲醛(4.50g，17.10mmol)和氨基甲酸乙基酯(3.35g，37.63mmol)加热5小时。烧瓶用氮气流吹扫，缓慢逐滴加入浓硫酸(约200μL，约3mmol)。7小时后，将固体反应混合物冷却至室温，粉碎，用水完全混合和干燥。残余物经快速硅胶色谱纯化(梯度为二氯甲烷至二氯甲烷/甲醇95:5)。收率：5.05g；ESI质谱：[M+H]+＝423(溴同位素模式)；保留时间HPLC:0.77分钟(Z011_S03)。
中间体E.2
4-(4-溴-2-甲磺酰基-苯基)-1-(3-三氟甲基-苯基)-3,4,6,7-四氢-1H-环戊二烯并嘧啶-2,5-二酮
步骤1:
4-溴-1-(氯(异氰酸酯基)甲基)-2-(甲基磺酰基)苯
将五氯化磷(5.47g，26.2mmol)添加至(4-溴-2-甲基磺酰基)苯基)亚甲基二氨基甲酸二乙基酯(中间体E.1，5.05g，11.9mmol)在甲苯(30mL)中的混悬液中，并将所述混合物回流加热3小时。减压下蒸发甲苯，然后将所述混合物减压下蒸馏纯化(约160℃，0.1毫巴)。收率：945mg。
步骤2:
4-(4-溴-2-甲磺酰基-苯基)-1-(3-三氟甲基-苯基)-3,4,6,7-四氢-1H-环戊二烯并嘧啶-2,5-二酮
将3-(3-(三氟甲基)苯基氨基)环戊-2-烯酮(234mg，0.97mmol)添加至4-溴-1-(氯(异氰酸酯基)甲基)-2-(甲基磺酰基)苯(步骤1，945mg，2.91mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中。将所述混合物回流加热过夜且然后减压浓缩。残余物经反相HPLC(AgilentZORBAXTM SB-C18，梯度为乙腈在含0.1％甲酸的水中的溶液)纯化。收率：110mg；ESI质谱：[M+H]+＝529(溴同位素模式)；保留时间HPLC:1.21分钟(Z017_S04)。
中间体E.3
4-(2,5-二氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基)-3-(甲基磺酰基)苄腈
在氩气氛下，将4-(4-溴-2-(甲基磺酰基)苯基)-1-(3-(三氟甲基)苯基)-3,4,6,7-四氢-1H-环戊二烯并嘧啶-2,5-二酮(中间体E.2，110mg，0.21mmol)，氰化锌(32mg，0.27mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(24mg，21μmol)在DMF(2mL)中的混合物于110℃加热过夜，且然后冷却至室温。加入水并将所述混合物过滤。通过快速硅胶色谱纯化沉淀(梯度为环己烷/乙酸乙酯8:2至3:7)。收率：40mg；ESI质谱：[M+H]+＝476；保留时间HPLC:0.94分钟(Z017_S04)。
中间体E.3A和中间体E.3B:中间体E.3的对映异构体
4-(2,5-二氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基)-3-(甲基磺酰基)苄腈(中间体E.3，1.82g，3.83mmol)外消旋体的对映异构体通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IB，20x 250mm，5μm，15％MeOH+0.2％二乙基胺，于超临界CO2中，40℃，120巴反压)。
中间体E.3A:
产率620mg；ESI质谱[M+H]+＝476；保留时间:2.52分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MeOH_DEA)。
中间体E.3B:
产率554mg；ESI质谱[M+H]+＝476；保留时间:2.78分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MeOH_DEA)。
中间体E.4
乙酸2-[4-(4-氰基-2-甲磺酰基-苯基)-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-基]-乙基酯
向4-(2,5-二氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基)-3-(甲基磺酰基)苄腈(中间体E.3，300mg，0.57mmol)和碳酸铯(463mg，1.42mmol)在DMF(5.0mL)中的混合物中加入2-溴乙酸乙酯(0.20mL，1.82mmol)，并将所述混合物在50℃搅拌3天。将所述反应混合物稀释于乙腈和水中和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：104mg；ESI质谱[M+H]+＝562；保留时间HPLC:1.03分钟(Z018_S04)。
实施例的合成
实施例A.1
3-羟基甲基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
向5-氰基-2-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苯甲酸(中间体A.6；700mg；1.537mmol)在THF(10.5ml)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(274mg；1.691mmol)。将所述反应混合物在室温搅拌2h和冷却至5℃。滴加硼氢化钠(87mg；2.31mmol)在水(1.4mL)中的溶液，保持温度介于5℃和10℃之间。将所述反应混合物搅拌45min和用1M HCl水溶液淬灭。加入乙酸乙酯和水和进行相分离。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥和减压浓缩。残余物经快速硅胶色谱纯化(二氯甲烷/甲醇95:5→75:25)。收率：390mg；ESI质谱：[M+H]+＝442；保留时间HPLC:0.61分钟(X012_S02)。
实施例A.1A和A.1B:实施例A.1的对映异构体
实施例A.1(1220mg)的对映异构体通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IC，20x 250mm，5μm，30％MeOH+20mM氨，于超临界CO2中，流速10mL/min；150巴反压)。
实施例A.1A:
产率330mg；ESI质谱[M+H]+＝442；保留时间:2.93分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IC_40_MEOH_NH3)。
实施例A.1B:
产率314mg；ESI质谱[M+H]+＝442；保留时间:4.54分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IC_40_MEOH_NH3)。
实施例A.2
3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
在0℃向5-氰基-2-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苯甲酸甲基酯(中间体A.5；400mg；0.852mmol)在THF(5ml)中的溶液中滴加甲基氯化镁在THF(3M，625μL；1.875mmol)中的溶液。将所述反应混合物在室温搅拌过夜和用1M HCl淬灭。加入乙酸乙酯和水和进行相分离。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥和减压浓缩。残余物经反相HPLC纯化(Waters XbridgeTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：90mg；ESI质谱[M+H]+＝470；保留时间HPLC:0.69分钟(X012_S02)。
实施例A.3
3-(1-羟基-乙基)-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
在5℃将甲基氯化镁在THF(3M，0.239mL；0.717mmol)中的溶液加入至3-甲酰基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈(中间体A.7，300mg；0.683mmol)在乙醚(3mL)和THF(2.5mL)中的溶液中。将所述反应混合物在0℃搅拌15min并在室温搅拌1小时。加入水和1M HCl水溶液直到pH为酸性。加入乙酸乙酯和进行相分离。将有机层经MgSO4干燥和减压浓缩。残余物经快速硅胶色谱纯化(第一步洗脱:二氯甲烷/甲醇98:2，第二步洗脱:环己烷/乙酸乙酯2:8)。收率：112mg；ESI质谱：[M+H]+＝456；保留时间HPLC:0.62分钟(X012_S02)。
实施例B.1
4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-(3-羟基-丙烷-1-磺酰基)-苄腈
向4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-(3-羟基-丙基硫基)-苄腈(中间体B.4，13mg，0.027mmol)在二氯甲烷(2.0mL)中的溶液中加入3-氯过氧苯甲酸(40mg，0.18mmol)，并将所述混合物在室温搅拌20min。将所述反应混合物减压浓缩和通过反相HPLC纯化(Agilent ZORBAXTM SB-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：5mg。ESI质谱：[M+H]+＝520；保留时间HPLC:0.93分钟(Z018_S04)。
以下实施例B.1.1–B.1.4是以类似于实施例B.1所述的方式制备的，使用下表所示的起始原料。
表4
实施例B.1.2A和实施例B.1.2B：实施例B.1.2的对映异构体
实施例B.1.2(142mg)的对映异构体通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IB，10x 250mm，5μm，20％MeOH+20mM NH3，于超临界CO2中，流速10mL/min，120巴反压，40℃)。
实施例B.1.2A:
产率65mg；ESI质谱[M+H]+＝520；保留时间:2.15分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MEOH_NH3)。
实施例B.1.2B:
产率63mg；ESI质谱[M+H]+＝520；保留时间:2.77分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MEOH_NH3)。
结合至嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的实施例B.1.2B的X射线结构，揭示了星号所标记碳处的以下结构和构型：
实施例B.1.3A和实施例B.1.3B:实施例B.1.3的对映异构体
实施例B.1.3的对映异构体(120mg)通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IB，20x 250mm，5μm，15％MeOH+20mM NH3，于超临界CO2中，流速60mL/min，150巴反压，40℃)。
实施例B.1.3A:
产率60mg；ESI质谱[M+H]+＝534；保留时间:2.03分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MEOH_NH3)。
实施例B.1.3B:
产率54mg；ESI质谱[M+H]+＝534；保留时间:2.27分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MEOH_NH3)。
实施例C.1A和实施例C.1B:中间体C.11.1的对映异构体
中间体C.11.1的对映异构体(先洗脱的非对映异构体，490mg，1.035mmol)通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IB，10x 250mm，5μm，20％MeOH+20mM NH3，于超临界CO2中，流速10mL/min，120巴反压)。
实施例C.1A:
产率167mg；ESI质谱[M+H]+＝474；保留时间:2.83分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MEOH_NH3)。
实施例C.1B:
产率170mg；ESI质谱[M+H]+＝474；保留时间:3.25分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MEOH_NH3)。
结合至嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的实施例C.1B的X射线结构，揭示了星号所标记碳处的以下结构和构型：
实施例C.1B
实施例C.2A和实施例C.2B:中间体C.11.2的对映异构体
中间体C.11.2的对映异构体(后洗脱的非对映异构体，317mg，0.670mmol)通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IA，20％MeOH+20mM NH3，于超临界CO2中，流速60mL/min，150巴反压)。
实施例C.2A
产率126mg；ESI质谱[M+H]+＝474；保留时间:1.58分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IA_20_MEOH_NH3)。
实施例C.2B
产率126mg；ESI质谱[M+H]+＝474；保留时间:2.33分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IA_20_MEOH_NH3)。
结合至嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的实施例C.2A的X射线结构，揭示了星号所标记碳处的以下结构和构型：
实施例C.2A
因此，实施例C.1B和实施例C.2A在标记星号的碳处具有相同构型，硫原子构型不同。因此，实施例C.1B和实施例C.2A为非对映异构体。
实施例C.3
4-(4-氰基-2-甲亚磺酰基-苯基)-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-甲酸乙基酰胺
在室温向4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲亚磺酰基-苄腈(中间体C.12.2，后洗脱的非对映异构体，26mg；0.057mmol)，二异丙基乙基胺(38μL；0.23mmol)和4-二甲基氨基吡啶(8mg；0.06mmol)在乙腈(3mL)中的混合物中加入4-硝基苯基氯甲酸(12.6mg；0.062mmol)，并将所述反应混合物搅拌5小时。将乙基胺(2M，于THF中；114μL；0.228mmol)添加至含有氨基甲酸4-硝基苯基酯中间体的反应混合物中，并将所述混合物在室温搅拌1小时。将所述反应混合物通过反相HPLC纯化(Sunfire，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：4mg。ESI质谱：[M+H]+＝531；保留时间HPLC:1.02分钟(Z018_S04)。
实施例C.4.1和实施例C.4.2
4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙亚磺酰基-苄腈
在室温将3-氯过氧苯甲酸(77％，45mg，0.201mmol)加入至4-[2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙基硫基-苄腈(中间体C.8，106mg，0.210mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，和将所述混合物搅拌20min。将所述反应混合物减压浓缩和通过反相HPLC纯化(Sunfire，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)，得到所述两种非对映异构体。
实施例C.4.1:
收率：15mg；ESI质谱[M+H]+＝474；保留时间HPLC:0.91分钟(先洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
实施例C.4.2:
收率：32mg；ESI质谱[M+H]+＝474；保留时间HPLC:0.93分钟(后洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
实施例C.5.1和实施例C.5.2
3-乙亚磺酰基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
在室温将3-氯过氧苯甲酸(77％，24mg，0.107mmol)加入至4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙基硫基-苄腈(中间体C.10，53mg，0.112mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中，并将所述混合物搅拌20min。将所述反应混合物减压浓缩，且残余物经反相HPLC纯化(Sunfire，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)，得到所述两种非对映异构体。
实施例C.5.1:
收率：26mg；ESI质谱[M+H]+＝488；保留时间HPLC:0.96分钟(先洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
实施例C.5.2:
收率：17mg；ESI质谱[M+H]+＝488；保留时间HPLC:0.97分钟(后洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
实施例C.6.1和实施例C.6.2
4-(4-氰基-2-乙亚磺酰基-苯基)-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-甲酸甲基酰胺
在室温将3-氯过氧苯甲酸(77％，24mg，0.107mmol)加入至4-(4-氰基-2-乙基硫基-苯基)-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-甲酸甲基酰胺(中间体C.13，58mg，0.113mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中，并将所述混合物搅拌20min。将所述反应混合物减压浓缩，且残余物经反相HPLC纯化(Sunfire，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)，得到所述两种非对映异构体。
实施例C.6.1:
收率：7mg；ESI质谱[M+H]+＝531；保留时间HPLC:0.98分钟(先洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
实施例C.6.2:
收率：15mg；ESI质谱[M+H]+＝531；保留时间HPLC:1.00分钟(后洗脱的非对映异构体)(Z018_S04)。
实施例D.1A
(对映异构体1)
3-甲磺酰基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
向4-[2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲磺酰基-苄腈(中间体D.6A,先洗脱的对映异构体，92mg，0.19mmol)和碳酸铯(126mg，0.39mmol)在DMF(3.0mL)中的混合物中加入甲基碘在甲基-叔丁基醚中的溶液(c＝2mol/L，116μL，0.23mmol)，并将所述混合物在室温搅拌5小时。添加冰至反应混合物，将所述混合物用三氟乙酸酸化和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：54mg；ESI质谱[M+H]+＝491；保留时间HPLC:0.98分钟(Z018_S04)。由于起始原料是对映异构体纯的，推定实施例D.1A是对映异构体纯的且与起始原料具有相同构型。
实施例D.1B
(对映异构体2)
3-甲磺酰基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
实施例D.1B以类似于例如D.1A所述的方式制备，用中间体D.6B(后洗脱的对映异构体)来替代中间体D.6A(先洗脱的对映异构体)作为起始原料。ESI质谱[M+H]+＝491；保留时间HPLC:0.98分钟(Z018_S04)。实施例D.1B是实施例D.1A的对映异构体。由于起始原料是对映异构体纯的，推定实施例D.1B是对映异构体纯的且与起始原料具有相同构型。
实施例D.2
4-[2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙磺酰基-苄腈
向4-{氨基-[5-氧代-2-(2-三氟甲基-吡啶-4-基氨基)-环戊-1-烯基]-甲基}-3-乙磺酰基-苄腈盐酸盐(中间体D.5.1，706mg，1.41mmol)和三乙基胺(50μL，0.36mmol)在乙腈(3.0mL)中的溶液中加入1,1’-羰基二咪唑(260mg，1.60mmol)，并将所述混合物在室温搅拌15min。将所述反应混合物减压浓缩和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％甲酸的水中的溶液)。收率：562mg；ESI质谱[M+H]+＝491；保留时间HPLC:0.94分钟(Z018_S04)。
实施例D.2.1–D.2.4是以类似于实施例D.2所述的方式制备的，分别使用下表中给出的起始原料。
表5
实施例D.3
3-乙磺酰基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
将甲基碘在甲基-叔丁基醚(c＝2mol/L，97μL，0.19mmol)中的溶液添加至4-[2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙磺酰基-苄腈(实施例D.2，80mg，0.16mmol)和碳酸铯(97mg，0.30mmol)在DMF(1.0mL)中的混合物中，并将所述混合物在室温搅拌过夜。将所述反应混合物用乙酸酸化和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：63mg。ESI质谱：[M+H]+＝505；保留时间HPLC:1.02分钟(Z018_S04)。
实施例D.3A和实施例D.3B：实施例D.3的对映异构体
外消旋体3-乙磺酰基-4-[3-甲基-2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈(实施例D.3，104mg，0.206mmol)的对映异构体通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IC，10x 250mm，5μm，30％MeOH+20mM NH3，于超临界CO2中，40℃，120巴反压)。
实施例D.3A:
产率45mg；ESI质谱[M+H]+＝505；保留时间:1.94分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IC_30_MeOH_NH3)。
实施例D.3B:
产率47mg；ESI质谱[M+H]+＝505；保留时间:2.36分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IC_30_MeOH_NH3)。
实施例D.3.1–D.3.4是以类似于实施例D.3所述的方式制备的，分别使用下表所示的起始原料。
表6
实施例D.4
4-(4-氰基-2-乙磺酰基-苯基)-2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-甲酸甲基酰胺
在室温搅拌4-[2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙磺酰基-苄腈(实施例D.2，80mg，0.16mmol)，4-硝基苯基氯甲酸(100mg，0.50mmol)，4-二甲基氨基吡啶(70mg，0.57mmol)和二异丙基乙基胺(0.12mL，0.71mmol)在乙腈(1.0mL)中的混合物过夜。将甲基胺(c＝2mol/L，1.0mL；2.00mmol)添加至所述含氨基甲酸4-硝基苯基酯中间体的混合物中，并将所述混合物在室温搅拌2小时。将所述反应混合物用乙酸酸化和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：43mg。ESI质谱：[M+H]+＝548；保留时间HPLC:0.99分钟(Z018_S04)。
实施例D.4.1–D.4.10是以类似于实施例D.4所述的方式制备的，分别使用下表所示的起始原料。
表7
*由于起始原料中间体D.6.A是对映异构体纯的，推定实施例D.4.10是对映异构体纯的且与起始原料具有相同构型。
实施例D.4.1A和实施例D.4.1B:实施例D.4.1的对映异构体
外消旋体4-(4-氰基-2-乙磺酰基-苯基)-2,5-二氧代-1-(2-三氟甲基-吡啶-4-基)-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-甲酸乙基酰胺(实施例D.4.1，127mg，0.226mmol)的对映异构体通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel ChiralpakIA，10x 250mm，5μm，25％MeOH，于超临界CO2中，40℃，120巴反压)。
实施例D.4.1A:
产率56mg；ESI质谱[M+H]+＝562；保留时间:1.51分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IA_25_MeOH_NH3)。
实施例D.4.1B:
产率54mg；ESI质谱[M+H]+＝562；保留时间:2.59分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IC_25_MeOH_NH3)。
实施例D.5
4-[1-(3-二氟甲基-苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙磺酰基-苄腈
将三乙基胺(238μL，1.699mmol)添加至4-{氨基-[2-(3-二氟甲基-苯基氨基)-5-氧代-环戊-1-烯基]-甲基}-3-乙磺酰基-苄腈盐酸盐(中间体D.9，1.516g，纯度90％，2.831mmol)和1,1’-羰基二咪唑(551mg，3.40mmol)在乙腈(10mL)中的混合物中，并将所述混合物在室温搅拌过夜。将所述混合物减压浓缩，残余物用水处理。过滤沉淀和干燥。收率：1.24g。ESI质谱：[M+H]+＝472；保留时间HPLC:0.92分钟(Z017_S04)。
实施例D.5A和实施例D.5B:实施例D.5的对映异构体
外消旋体4-[1-(3-二氟甲基-苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙磺酰基-苄腈(实施例D.5，490mg，1.04mmol)的对映异构体通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Lux C1，20x 250mm，5μm，MeOH，21mL/min流速)。
实施例D.5A:
产率262mg；ESI质谱[M+H]+＝472；保留时间:2.95分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MeOH_NH3)。
实施例D.5B:
产率223mg；ESI质谱[M+H]+＝472；保留时间:3.66分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IB_20_MeOH_NH3)。
实施例D.6
4-[1-(3-二氟甲基-苯基)-3-甲基-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙磺酰基-苄腈
甲基碘(20μL，0.32mmol)添加至4-[1-(3-二氟甲基-苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙磺酰基-苄腈(实施例D.5，50mg，0.106mmol)和碳酸铯(69mg，0.212mmol)在DMF(1mL)中的混合物中，并将所述混合物在室温搅拌过夜。将所述反应混合物通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：36mg；ESI质谱[M+H]+＝486；保留时间HPLC:0.79分钟(005_CA01)。
实施例D.7
4-(4-氰基-2-乙磺酰基-苯基)-1-(3-二氟甲基-苯基)-2,5-二氧代-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-甲酸甲基酰胺
将4-硝基苯基氯甲酸(23mg；0.12mmol)添加至4-[1-(3-二氟甲基-苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-乙磺酰基-苄腈(实施例D.5；50mg；0.106mmol)，DIPEA(72μL；0.42mmol)和4-二甲基氨基吡啶(14mg；0.12mmol)在乙腈(1mL)中的混合物中，并将所述混合物在室温搅拌2小时。加入4-硝基苯基氯甲酸(23mg；0.12mmol)和将所述反应搅拌1小时。将甲基胺(2M，于THF中，159μL；0.318mmol)添加至所述含氨基甲酸4-硝基苯基酯中间体的混合物中，将混合物在室温搅拌1小时。将所述反应混合物通过反相HPLC纯化(Stablebond，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：32mg；ESI质谱[M+H]+＝529；保留时间HPLC 0.98分钟(Z017_S04)。
实施例E.1
4-[3-(2-羟基-乙基)-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲磺酰基-苄腈
将乙酸2-[4-(4-氰基-2-甲磺酰基-苯基)-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-1,2,4,5,6,7-六氢-环戊二烯并嘧啶-3-基]-乙基酯(中间体E.4，40mg，0.071mmol)与三氟乙酸(2.0mL，26mmol)在60℃搅拌过夜，并将所述混合物减压浓缩。残余物用乙腈和水搅拌2小时(→三氟乙酸酯的水解)，且然后通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：17mg；ESI质谱[M+H]+＝520；保留时间HPLC:0.96分钟(Z018_S04)。
实施例E.2
(对映异构体)
4-[3-(3-羟基-丙基)-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-3-甲磺酰基-苄腈
向4-(2,5-二氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基)-3-(甲基磺酰基)苄腈(中间体E.3A，先洗脱的对映异构体，150mg，0.32mmol)和碳酸铯(206mg，0.63mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物中加入3-溴-1-丙醇(55μL，0.63mmol)，并将所述混合物在50℃搅拌过夜。将所述反应混合物用冰水处理，用三氟乙酸酸化和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：40mg；ESI质谱[M+H]+＝534；保留时间HPLC:0.97分钟(Z018_S04)。由于起始原料是对映异构体纯的，推定实施例E.2是对映异构体纯的且与起始原料具有相同构型。
实施例E.3
3-甲磺酰基-4-[3-氧杂环丁-3-基甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈
向4-(2,5-二氧代-1-(3-(三氟甲基)苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基)-3-(甲基磺酰基)苄腈(中间体E.3，150mg，0.32mmol)和碳酸铯(206mg，0.63mmol)在DMF(2.0mL)中的混合物中加入3-溴甲基-氧杂环丁烷(95mg，0.63mmol)，并将所述混合物在50℃搅拌过夜。将所述反应混合物用冰水处理，用三氟乙酸酸化和通过反相HPLC纯化(Waters SunFireTM-C18，梯度为乙腈在含0.1％TFA的水中的溶液)。收率：55mg；ESI质谱[M+H]+＝546；保留时间HPLC:1.01分钟(Z018_S04)。
实施例E.3A和实施例E.3B:实施例E.3的对映异构体
外消旋体3-甲磺酰基-4-[3-氧杂环丁-3-基甲基-2,5-二氧代-1-(3-三氟甲基-苯基)-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊二烯并嘧啶-4-基]-苄腈(实施例E.3，55mg，0.065mmol)的对映异构体通过制备型超临界流体色谱的手性柱分离(Daicel Chiralpak IC，10x 250mm，5μm，30％MeOH+20mM NH3，于超临界CO2中，40℃，120巴反压)。
实施例E.3A:
产率11mg；ESI质谱[M+H]+＝546；保留时间:4.12分钟(先洗脱的对映异构体)(I_IC_30_MeOH_NH3)。
实施例E.3B:
产率11mg；ESI质谱[M+H]+＝546；保留时间:4.66分钟(后洗脱的对映异构体)(I_IC_30_MeOH_NH3)。
药理数据
自下文更详细的实施例将可了解本发明的其他特征及优点，所述实施例举例说明本发明的原理。
人类嗜中性粒细胞弹性蛋白酶分析法
材料：人类嗜中性粒细胞弹性蛋白酶购自Calbiochem(目录号：324681)且弹性蛋白酶底物MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC购自Bachem(目录号：I-1270)。所有其他材料为市购最高等级材料。
使用下列缓冲液：化合物缓冲液：100mM Tris、500mM NaCl，调节至pH 7.5；分析缓冲液：100mM Tris、500mM NaCl，调节至pH 7.5，含有0.01％BSA。
分析条件：测试化合物相继于DMSO及化合物缓冲液(最终5％DMSO)中预稀释。将5μL所述化合物稀释液与10μl嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(9ng/ml于分析缓冲液中)混合于黑色384孔OptiPlate(Perkin Elmer，目录号6007270)中且在室温下培育15分钟。随后添加含10μL底物溶液的分析缓冲液(250μM最终浓度)且培养板在室温下培育60分钟。使酶灭活之后，在380nm激发波长及460nm发射波长下测量荧光强度。
各板含有具有高值对照物(DMSO+酶+底物)的孔及具有低值对照物(DMSO+灭活酶+底物)的孔。使用具有可变斜率的S形浓度反应曲线估算IC50值。低值平均值视为0％，高值平均值视为100％。所选化合物在嗜中性粒细胞弹性蛋白酶分析法中的IC50值列于表8中。
表8
测定人类血浆中的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制活性的分析法
将经柠檬酸盐处理的人类健康供体血液与酵母聚糖悬浮液混合且在室温下培育。此引起刺激嗜中性粒细胞且使嗜中性粒细胞弹性蛋白酶释放至血浆中。将所刺激的血液离心以产生嗜中性粒细胞弹性蛋白酶富集的血浆。
制备酵母聚糖工作溶液：
酵母聚糖(100mg)与生理盐水(0.9％，10mL)混合且在4℃储存至多一周(注意：酵母聚糖不溶于生理盐水中且作为悬浮液使用)。
全血刺激：
·将单一45ml血液样品置于含有柠檬酸盐(3.13％，5mL)的50ml管中且将该管轻缓颠倒4次。
·取得血液样品后立即添加酵母聚糖工作溶液(5mL)。
·添加酵母聚糖工作溶液后，将管加盖，轻缓混合且在22℃、以20rpm在振荡器上培育15分钟。
·培育时间之后，获取10ml等分样品。
·15ml管在Jouan离心机中、在4℃以800g离心15分钟。
·收集血浆且产生1-5ml等分样品。
·血浆在-80℃储存。
各种浓度的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂与血浆一起培育。随后，使用荧光底物MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC(Bachem目录号I-1270，底物浓度：250μM，pH 7.5，25mMTRIS缓冲液，250mM NaCl)，以如关于人类嗜中性粒细胞分析法中所述的类似方式测量酶活性。产生剂量反应曲线以计算抑制剂的EC50。通过计算在减去背景荧光后，测试化合物存在下的荧光相较于媒剂对照物荧光的百分比来进行数据分析：嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂将产生在100％对照(无抑制)与0％对照(完全抑制)之间的值。
上述人类血浆分析法中所选化合物的EC50值列于表9中。
表9
通过人类肝微粒体测定代谢稳定性的分析法
在37℃通过所混合的人类肝微粒体分析测试化合物的代谢性降解。每个时间点100μl的最终培育体积含有TRIS缓冲液pH 7.6(0.1M)、氯化镁(5mM)、微粒体蛋白质(1mg/mL)及最终浓度为1μM的测试化合物。在37℃短期预培育之后，通过添加β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯还原形式(NADPH，1mM)来起始反应，且通过在不同时间点之后将等分样品转移至乙腈中来终止反应。另外，监测不含NADPH的培育物中的NADPH无关性降解，在最后时间点终止。NADPH无关性培育之后的剩余测试化合物[％]为通过参数c(对照)(代谢稳定性)反映。所淬灭的培育物通过离心(10'000g，5分钟)集结。通过LC-MS/MS分析等分样品上清液中的母体化合物量。
依据浓度-时间概况的半对数图的斜率确定半衰期(t1/2(体外))。通过考虑培育物中蛋白质的量来计算固有清除率(CL_INTRINSIC)：
CL_INTRINSIC[μl/min/mg蛋白质]＝(ln2/(半衰期[min]×蛋白质含量[mg/ml]))×1'000。
上述代谢稳定性分析法中所选化合物的半衰期(t1/2(体外))值列于表10中。
表10
通过人类肝细胞测定代谢稳定性的分析法
在人类肝细胞悬浮液中分析测试化合物的代谢性降解。人类肝细胞(通常低温保存)在含有5％物种血清的适当缓冲系统(例如杜贝科氏改良的伊格尔氏培养基(Dulbecco's modified eagle medium)+3.5μg升糖素/500mL、2.5mg胰岛素/500mL及3.75mg氢化可的松(hydrocortison)/500mL)中培育。在恒温箱(37℃，10％CO2)中预培育(通常)30分钟之后，将5μL测试化合物溶液(80μM；于DMSO中的2mM储备溶液用培养基以1:25稀释)添加至395μL肝细胞悬浮液中(细胞密度范围为0.25-5×106个细胞/毫升，通常为1×106个细胞/毫升；测试化合物最终浓度为1μM，最终DMSO浓度0.05％)。细胞培育6小时(恒温箱，轨道振荡器)且在0、0.5、1、2、4及6小时时取样(25μL)。样品转移至乙腈中且通过离心(5分钟)集结。上清液转移至新的96孔深孔板中，在氮气下蒸发且再悬浮。通过LC-MS/MS分析母体化合物的衰减。
固有清除率CL_INTRINSIC计算如下：
CL_INTRINSIC＝剂量/AUC＝(C0/CD)/(AUD+clast/k)×1'000/60
(C0：培育初始浓度[μM]，CD：活细胞的细胞密度[106个细胞/毫升]，AUD：资料下面积[μM×h]，clast：最后数据点的浓度[μM]，k：母体化合物衰减的回归线斜率[h-1])
通过使用肝脏模型(充分搅拌模型)，所计算的活体外肝脏固有清除率可依比例放大为活体内肝脏固有清除率且用于预测活体内肝脏血液清除率(CL)：
CL_INTRINSIC_INVIVO[ml/min/kg]＝(CL_INTRINSIC[微升/分钟/106个细胞]×肝细胞密度[106个细胞/克肝脏]×肝脏系数[克/千克体重])/1'000
CL[ml/min/kg]＝CL_INTRINSIC_INVIVO[ml/min/kg]×肝血液流量[ml/min/kg]/(CL_INTRINSIC_INVIVO[ml/min/kg]+肝血液流量[ml/min/kg])
Qh[％]＝CL[ml/min/kg]/肝血液流量[ml/min/kg])
(人类肝细胞密度：120×106个细胞/克肝脏；人类肝脏系数：25.7克/千克体重；人类血液流量：21ml/(min×kg))
基于此分析，实施例C.2A显示预计体内肝中血液清除率为人类肝血流的3％。
测定药物跨越人类CACO-2细胞转运的分析法
此分析法提供有关以下的信息：化合物通过细胞膜的潜力、口服吸收程度，以及吸收和/或流出转运蛋白是否主动转运化合物。对于测量跨越极化、汇合的人类癌症结肠癌细胞2(Caco-2)的渗透性，使用在可渗透性过滤载体上生长的细胞单层作为活体外吸收模型。
在顶端至基底(AB)(吸收)及基底至顶端(BA)(分泌)转运方向上测量(pH7.2，37℃)化合物跨越Caco-2单层的表观渗透系数(PE)。AB渗透性(PEAB)表示药物自肠吸收至血液中且BA渗透性(PEBA)表示药物经由被动渗透性以及主动转运机制自血液分泌回至肠中，所述机制由表达于Caco-2细胞上的流出及吸收转运蛋白介导。所述化合物为通过将其AB渗透性与具有已知活体外渗透性及人类口服吸收率的参考化合物的AB渗透性进行比较来指定可渗透性/吸收类别。两种转运方向上的渗透性相同或相似表明被动性渗透(其他主动转运机制的向量透过点)。PEBA高于PEAB表明涉及顶端流出转运蛋白(如P-gp)和/或底侧吸收转运蛋白；PEAB渗透性高于PEBA表明涉及顶端吸收转运蛋白(如PepT1)和/或底侧流出转运蛋白(如MRP3)。主动转运为浓度依赖性可饱和转运。
Caco-2细胞(1-2×105个细胞/平方厘米面积)接种于过滤器插入物(CostarTranswell聚碳酸酯或PET过滤器，0.4μm孔尺寸)上并培养(DMEM)10至25天。
将化合物溶于适当溶剂(如DMSO，1-20mM储备溶液)中。储备溶液用HTP-4缓冲液(128.13mM NaCl，5.36mM KCl，1mM MgSO4，1.8mM CaCl2，4.17mM NaHCO3，1.19mM Na2HPO4×7H2O，0.41mM NaH2PO4×H2O，15mM HEPES，20mM葡萄糖，pH 7.2)稀释以制备转运溶液(通常为10μM化合物，最终DMSO≤0.5％)。转运溶液(TL)分别施加至顶端或底侧供体一侧以便测量A-B或B-A渗透性(重复过滤3次)。接收侧含有补充有2％BSA的HTP-4缓冲液。在实验开始及结束时自供体及以至多2小时的不同时间间隔自接收侧收集样品，以便通过LC-MS/MS或闪烁计数测量浓度。样品接收体积用新鲜接收溶液替换。
所选化合物在上述Caco-2药物转运分析法中的表观透过系数(PEAB及PEBA)列于表11中。
表11
实施例 PEAB[cm/s] PEBA[cm/s]
A.1A 0.000053 0.000098
A.2 0.000092 0.000080
A.3 0.000067 0.000087
B.1.2B 0.000012 0.000120
B.1.3A 0.0000099 0.000130
C.1B 0.0000037 0.000041
C.2A 0.000013 0.000073
C.5.1 0.0000071 0.000057
C.5.2 0.000016 0.000082
D.1A 0.000019 0.000081
D.3B 0.000021 0.000085
D.4.1A 0.0000036 0.000061
D.4.4 0.0000031 0.000060
D.4.5 0.0000073 0.000067
D.5A 0.0000075 0.000078
测定水溶性的分析法(“高通量方法”)
通过比较溶于水性缓冲液(含有2.5％DMSO)中的量与溶于乙腈/水(1/1)溶液中的量来确定化合物的水溶性。自10mM DMSO储备溶液开始，分别用乙腈/水(1/1)及McIlvaine缓冲液pH 6.8稀释等分样品。振荡24小时之后，过滤溶液或悬浮液且通过LC-UV分析。比较溶于缓冲液中的量与溶于乙腈/水(1/1)溶液中的量。在2.5％的DMSO浓度下，测量0.001至0.125mg/mL的溶解度。若超过90％化合物溶于缓冲液中，则值用“>”标记。
上述溶解性分析法中所选化合物的水溶性列于表12中。
表12
实施例 水溶性[mg/mL]
A.1A 0.058
A.3 0.065
B.1.2B 0.073
B.1.3A 0.093
C.1B 0.061
C.2A 0.058
C.5.1 0.086
C.5.2 0.069
D.4.1A 0.081
D.4.5 0.078
D.5A 0.067
确定水溶性的分析法(“摇瓶法”)
在孔板中通过向每孔加入含有已知量的固体药物物质(通常范围为0.5-5.0mg)的适当体积的所选水性基质(通常范围为0.25-1.5ml)制备饱和溶液。振摇所述孔或搅拌预定的时间段(通常范围为2-24小时)且然后使用适当的滤膜过滤(通常为PTFE滤器，孔径为0.45μm)。丢弃最初几滴滤液以防止过滤吸收。所溶解的药物物质通过紫外光谱或配有紫外检测的HPLC来测定。此外，水性饱和溶液的pH使用玻璃电极pH计测定。在该溶解性测试中，表12中的实施例表明在pH 6.8(McIlvaine缓冲液)具有大于0.01mg/mL的溶解性。
测定细胞色素P450 2C9抑制的分析法
在37℃通过人类肝微粒体分析测试化合物对细胞色素P450 2C9同工酶催化的双氯芬酸(diclofenac)羟基化的抑制作用。所有分析法均在96孔板中用机器人系统进行。最终培育体积含有TRIS缓冲液(0.1M)、MgCl2(5mM)、人类肝微粒体(0.1mg/mL)、双氯芬酸(10μM)及五种不同浓度的测试化合物或无化合物(高对照)，一式两份(例如最高浓度10-50μM，随后连续1:4稀释)。短期预培育之后，通过辅因子(NADPH，1mM)起始反应且通过将培育物冷却至8℃且随后通过添加一体积乙腈来中止反应。淬灭培育物之后，添加内标物溶液，一般为所形成代谢物的稳定同位素。通过LC-MS/MS测定分析物(＝所形成代谢物)及内标物峰面积。将所述培育物中分析物与内标物的所得峰面积比结果与不含测试化合物的对照物活性进行比较。在进行每次分析法时，测定阳性对照抑制剂(磺胺苯吡唑(sulfaphenazole))的IC50。根据下列方程式，通过最小平方回归法计算实验性IC50值：
％对照物活性＝(100％对照物活性/(1+(I/IC50)×S))-B
(I＝抑制剂浓度，S＝斜率因子，B＝背景活性)
若在测试化合物的最低浓度下，反应抑制已>50％，则指定IC50“<最低测试浓度”(一般<0.4μM)。若在测试化合物的最高浓度下，反应抑制仍<50％，则指定IC50“>最高测试浓度”(一般>50μM)。实施例A.1A，实施例B.1.2B和实施例C.2A显示该分析中IC50值大于50μM。
测定细胞色素P450 2C19抑制的分析法
在37℃通过人类肝微粒体分析测试化合物对细胞色素P450 2C19同工酶催化的美芬妥英(Mephenytoin)羟基化的抑制作用。所有分析法均在96孔板中用机器人系统进行。最终培育体积含有TRIS缓冲液(0.1M)、MgCl2(5mM)、人类肝微粒体(0.5mg/mL)、(S)-美芬妥英(70μM)及五种不同浓度的测试化合物或无化合物(高对照)，一式两份(例如最高浓度10-50μM，随后连续1:4稀释)。短期预培育之后，通过辅因子(NADPH，1mM)起始反应且通过将培育物冷却至8℃且随后添加一体积乙腈来中止反应。淬灭培育物之后，添加内标物溶液，一般为所形成代谢物的稳定同位素。通过LC-MS/MS测定分析物(＝所形成代谢物)及内标物峰面积。将所述培育物中分析物与内标物的所得峰面积比与不含测试化合物的对照物活性进行比较。在进行每次分析法时，测定阳性对照抑制剂(反苯环丙胺(tranylcypromine))的IC50。根据下列方程式，通过最小平方回归法计算实验性IC50值：
％对照物活性＝(100％对照物活性/(1+(I/IC50)×S))-B
(I＝抑制剂浓度，S＝斜率因子，B＝背景活性)
若在测试化合物的最低浓度下，反应抑制已>50％，则指定IC50“<最低测试浓度”(一般<0.4μM)。若在测试化合物的最高浓度下，反应抑制仍<50％，则指定IC50“>最高测试浓度”(一般>50μM)。实施例A.1A，实施例B.1.2B和实施例C.2A显示该分析中IC50值大于50μM。
测定细胞色素P450 2C8抑制的分析法
在37℃通过人类肝微粒体分析测试化合物对细胞色素P450 2C8同工酶催化的阿莫地喹(Amodiaquine)脱乙基化的抑制作用。所有分析法均在96孔板中用机器人系统进行。最终培育体积含有TRIS缓冲液(0.1M)、MgCl2(5mM)、人类肝微粒体(0.05mg/mL)、阿莫地喹(1μM)及五种不同浓度的测试化合物或无化合物(高对照)，一式两份(例如最高浓度10-50μM，随后连续1:4稀释)。短期预培育之后，通过辅因子(NADPH，1mM)起始反应且通过将培育物冷却至8℃且随后添加一体积乙腈来中止反应。淬灭培育物之后，添加内标物溶液，一般为所形成代谢物的稳定同位素。通过LC-MS/MS测定分析物(＝所形成代谢物)及内标物峰面积。将所述培育物中分析物与内标物的所得峰面积比与不含测试化合物的对照物活性进行比较。在进行每次分析法时，测定阳性对照抑制剂(孟鲁司特(Montelukast))的IC50。根据下列方程式，通过最小平方回归法计算实验性IC50值：
％对照物活性＝(100％对照物活性/(1+(I/IC50)×S))-B
(I＝抑制剂浓度，S＝斜率因子，B＝背景活性)
若在测试化合物的最低浓度下，反应抑制已>50％，则指定IC50“<最低测试浓度”(一般<0.4μM)。若在测试化合物的最高浓度下，反应抑制仍<50％，则指定IC50“>最高测试浓度”(一般>50μM)。实施例A.1A，实施例B.1.2B和实施例C.2A显示该分析中IC50值大于50μM。
测定细胞色素P450诱导的分析法
为了评价代谢酶CYP3A4的诱导，将冷藏保存的细胞以1.0x105的密度接种于96孔板中的每孔。平衡细胞72小时，然后暴露于10μM测试微粒48小时，每24小时更新测试微粒。将已知的原型CYP3A4诱导剂利福平用作阳性对照，浓度为25μM。在48小时的暴露之后，移除含有测试微粒的基质，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞，然后分离mRNA。
计算：
诱导倍数＝(酶mRNA化合物)/(酶mRNA溶剂对照)
诱导剂效力＝(化合物倍数)/(利福平倍数)*100
确定hERG抑制的测定
hERG(人类Ether-a-go-go相关基因)钾通道的抑制，按Rast，G.，&Guth，B.D.，Journal of Pharmacological and Toxicological Methods(2014)，http://dx.doi.org/10.1016/j.vascn.2014.08.001所述测定。
该膜片钳中所选化合物的hERG抑制作用列于表13中。
表13
组合
通式1化合物可单独或与本发明的式1的其他活性物质组合使用。通式1化合物亦可任选与其他药理学活性物质组合。所述物质包括β2肾上腺素受体激动剂(短效及长效)、抗胆碱能药物(短效及长效)、抗炎性类固醇(口服及局部皮质类固醇)、色甘酸盐、甲基黄嘌呤、解离的糖皮质激素模拟物、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、PDE7抑制剂、LTD4拮抗剂、EGFR抑制剂、多巴胺(Dop胺)激动剂、PAF拮抗剂、脂氧素A4衍生物、FPRL1调节剂、LTB4受体(BLT1、BLT2)拮抗剂、组胺H1受体拮抗剂、组胺H4受体拮抗剂、双重组胺H1/H3受体拮抗剂、PI3激酶抑制剂、非受体酪氨酸激酶(例如LYN、LCK、SYK、ZAP-70、FYN、BTK或ITK)抑制剂、MAP激酶(例如p38、ERK1、ERK2、JNK1、JNK2、JNK3或SAP)抑制剂、NF-κB信号传导路径抑制剂(例如IKK2激酶抑制剂、iNOS抑制剂、MRP4抑制剂)、白三烯生物合成抑制剂(例如5-脂肪加氧酶(5-LO)抑制剂、cPLA2抑制剂、白三烯A4水解酶抑制剂或FLAP抑制剂)、MMP9抑制剂、MMP12抑制剂、非类固醇抗炎剂(NSAID)、组织蛋白酶C(Cathepsin C)(或DPPI/二肽基氨基肽酶I)抑制剂、CRTH2拮抗剂、DP1受体调节剂、血栓素受体拮抗剂、CCR3拮抗剂、CCR4拮抗剂、CCR1拮抗剂、CCR5拮抗剂、CCR6拮抗剂、CCR7拮抗剂、CCR8拮抗剂、CCR9拮抗剂、CCR30拮抗剂、CXCR3拮抗剂、CXCR4拮抗剂、CXCR2拮抗剂、CXCR1拮抗剂、CXCR5拮抗剂、CXCR6拮抗剂、CX3CR3拮抗剂、神经激肽(NK1、NK2)拮抗剂、神经鞘胺醇1-磷酸酯受体调节剂、神经鞘胺醇1-磷酸酯裂解酶抑制剂、腺苷酸受体调节剂(例如A2a激动剂)、嘌呤受体调节剂(例如P2X7抑制剂)、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)活化剂、血管舒缓激肽(BK1、BK2)拮抗剂、TACE抑制剂、PPARγ调节剂、Rho激酶抑制剂、白介素1-β转化酶(ICE)抑制剂、Toll样受体(TLR)调节剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、VLA-4拮抗剂、ICAM-1抑制剂、SHIP激动剂、GABAa受体拮抗剂、ENaC抑制剂、前列腺蛋白酶抑制剂、黑皮质素受体(MC1R、MC2R、MC3R、MC4R、MC5R)调节剂、CGRP拮抗剂、内皮素拮抗剂、TNFα拮抗剂、抗TNF抗体、抗GM-CSF抗体、抗CD46抗体、抗IL-1抗体、抗IL-2抗体、抗IL-4抗体、抗IL-5抗体、抗IL-13抗体、抗IL-4/IL-13抗体、抗TSLP抗体、抗OX40抗体、黏液调节剂、免疫治疗剂、针对气管肿胀的化合物、针对咳嗽的化合物、VEGF抑制剂，以及两种或三种活性物质的组合。
优选为β模拟剂、抗胆碱能药物、皮质类固醇、PDE4抑制剂、LTD4拮抗剂、EGFR抑制剂、组织蛋白酶C抑制剂、CRTH2抑制剂、5-LO抑制剂、组胺受体拮抗剂及SYK抑制剂，尤其为组织蛋白酶C抑制剂，以及两种或三种活性物质的组合，即：
●β模拟剂与皮质类固醇、PDE4抑制剂、CRTH2抑制剂或LTD4拮抗剂，
●抗胆碱能药物与β模拟剂、皮质类固醇、PDE4抑制剂、CRTH2抑制剂或LTD4拮抗剂，
●皮质类固醇与PDE4抑制剂、CRTH2抑制剂或LTD4拮抗剂
●PDE4抑制剂与CRTH2抑制剂或LTD4拮抗剂
●CRTH2抑制剂与LTD4拮抗剂。
药物组合物
用给药上式化合物的适当制剂，本领域一般技术人员将是清楚的，且包括例如片剂、丸剂、胶囊、栓剂、锭剂(lozenges、troches)、溶液、糖浆、酏剂、囊剂(sachets)、注射剂、吸入剂和粉剂等。
适当的片剂可例如通过以下获得：将一种或多种式I化合物与已知的赋形剂混合，所述赋形剂例如为惰性的稀释剂、载剂、崩解剂、佐剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂。所述片剂也可由若干层组成。
适应症
本发明化合物及其药学上可接受的盐具有药学活性，特定而言用作嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂，且因此可用于治疗：
1.呼吸道：气道阻塞性疾病，包括：哮喘，包括间歇性和持续性的、各种严重度的支气管哮喘，过敏性哮喘，内源性哮喘，外源性哮喘，运动诱发的哮喘，药物诱发的哮喘(包括阿司匹林和NSAID诱发的哮喘)和粉尘诱发的哮喘，和其他气道高反应性原因导致的哮喘；慢性阻塞性肺疾病(COPD)；支气管炎，包括感染性和嗜酸细胞性支气管炎；肺气肿；α1-抗胰蛋白酶缺乏症，支气管扩张；囊性纤维化；结节病；农民肺及相关疾病；过敏性肺炎；肺纤维化，包括隐原性纤维化肺泡炎、特发性间质性肺炎、抗肿瘤治疗引起的纤维化，以及慢性感染，包括肺结核和曲霉病及其它真菌感染；肺移植的并发症；肺脉管系统的血管炎和血栓性疾病，以及肺动脉高压；镇咳活性，包括治疗与气道炎症和分泌症状相关的慢性咳嗽，以及医源性咳嗽；急性和慢性鼻炎，包括药物性鼻炎和血管收缩鼻炎；常年性和季节性过敏性鼻炎，包括神经性鼻炎(花粉症)；鼻息肉病，急性病毒感染，包括普通感冒和由呼吸道合胞病毒、流行性感冒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒引起的感染；
2.皮肤：牛皮癣，特应性皮炎，接触性皮炎或其它湿疹性皮肤病，以及迟发型超敏反应；植物性和光照性皮炎；脂溢性皮炎，疱疹样皮炎，扁平苔癣，萎缩性硬化性苔藓，坏疽性脓皮，皮肤结节病，盘状红斑狼疮，天疱疮，类天疱疮，大疱性表皮松解，荨麻疹，血管性水肿，血管炎，中毒性红斑，皮肤嗜酸粒细胞增多，斑秃，男性型脱发，Sweet综合征，Weber-Christian综合征，多形性红斑，蜂窝组织炎，包括传染性和非传染性蜂窝组织炎，脂膜炎，皮肤淋巴瘤，非黑素瘤皮肤癌和其它发育不良性损伤；药物诱发的疾病，包括固定性药疹；
3.眼：睑炎；结膜炎，包括常年性和春季过敏性结膜炎；虹膜炎；前和后葡萄膜炎；脉络膜炎；影响视网膜的自身免疫病、退行性或炎性疾病；眼炎，包括交感性眼炎；结节病；感染，包括病毒、真菌和细菌感染；
4.泌尿生殖系统：肾炎，包括间质性和肾小球性肾炎；肾病综合征；膀胱炎，包括急性和慢性(间质性)膀胱炎和Hunner氏溃疡；急性和慢性尿道炎，前列腺炎，附睾炎，卵巢炎和输卵管炎；外阴-阴道炎；Peyronie氏病；勃起功能障碍(男性和女性)；
5.同种异体移植物排斥：例如肾、心脏、肝、肺、骨髓、皮肤或角膜移植后或在输血后的急性和慢性排斥；或慢性移植物抗宿主病；
6.其它自身免疫性和过敏性疾病，包括类风湿性关节炎，肠易激综合征，全身性红斑狼疮，多发性硬化症，桥本甲状腺炎，格雷夫斯病，Addison氏病，糖尿病，特发性血小板减少性紫癜，嗜酸性筋膜炎，高IgE综合征，抗磷脂综合征和Sazary综合征；
7.肿瘤：治疗一般癌症，包括前列腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、肠癌和结肠癌、胃癌、皮肤癌和脑肿瘤，以及影响骨髓(包括白血病)和淋巴增生系统的恶性肿瘤，例如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；包括转移性疾病和肿瘤复发及瘤外综合征的预防和治疗；和，
8.感染性疾病：病毒性疾病，例如生殖器疣、寻常疣、跖疣、乙型肝炎、丙型肝炎、单纯疱疹病毒、传染性软疣、天花、人类免疫缺陷病毒(HIV)、人乳头状瘤病毒(HPV)、巨细胞病毒(CMV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、鼻病毒、腺病毒、冠状病毒、流感、副流感；细菌性疾病，如结核病和鸟分枝杆菌、麻风病；其他感染性疾病，如真菌性疾病，衣原体、念珠菌、曲霉、隐球菌性脑膜炎、卡氏肺孢子虫、隐孢子虫病、组织胞浆菌病、弓形体病、锥虫感染和利什曼病；和
9.其他疾病：外伤性脑损伤，腹主动脉瘤。
本发明涉及通式1化合物，其可用于预防和/或治疗疾病和/或病症，所述疾病和/或病症中嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂的活性能够带来治疗益处，包括但不限于可用于治疗和/或预防哮喘和过敏性疾病，胃肠炎症，肾小球肾炎，嗜酸性粒细胞疾病，慢性阻塞性肺病，由病原微生物引起的感染，类风湿性关节炎，嗜中性粒细胞疾病，囊性纤维化(CF)，非囊性纤维化，特发性肺纤维化，支气管扩张症，ANCA相关的血管炎，肺癌，非囊性纤维化支气管扩张症，肺气肿，慢性支气管炎，急性肺损伤(ALI)，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，肺高压，肺动脉高压(PAH)，α-1-抗胰蛋白酶缺乏(AATD.)，肥胖和相关炎症，例如慢性脂肪组织炎症，脂肪炎症，高脂饮食诱导的炎症，胰岛素抵抗，糖尿病，脂肪肝和肝脂肪变性。
生物活性和医学适应症之间的相关性描述于文献中，例如“Henriksen，P.A.Current Opinion in Hematology(2014)，21(1)，23-28”。
因此，本发明涉及化合物通式1化合物，其用作药物。
在本发明的另一个方面中，本发明涉及治疗或预防上述疾病和病症的方法，该方法包括向人类给予治疗有效量的式1化合物。
对于上述疾病和症状的治疗，本发明化合物的治疗有效剂量范围通常是每次给药约0.01mg至约100mg/kg体重；优选每次给药约0.1mg至约20mg/kg体重。例如对于给药一位70kg的人而言，本发明化合物的剂量范围为每次给药约0.7mg至约7000mg，优选每次给药约7.0mg至约1400mg。为了确定优化的给药水平和模式，可能需要一定程度的途径剂量优化。活性成分每天可给予1-6次。
当然，实际的药学有效量或治疗剂量取决于本领域技术人员已知的因素，例如患者的年龄和体重、给药途径和疾病严重程度。在任何情况下，活性成分将以允许药学活性成分根据患者特定条件递送的剂量和方式来给予。
缩写清单

Claims (16)

1.式1化合物
其中
R1为
R2为
R3为H；
或
R1为
R2为
R3为甲基；
或
R1为
R2为
R3为甲基；
或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其为式1.a：
或其药学上可接受的盐。
3.权利要求1的化合物，其为式1.b：
或其药学上可接受的盐。
4.权利要求1的化合物，其为式1.d：
或其药学上可接受的盐。
5.权利要求1至4中任一项的化合物，其中式1的构型是式1'
或其药学上可接受的盐。
6.权利要求5的化合物，其为式1.a'：
或其药学上可接受的盐。
7.权利要求5的化合物，其为式1.b'：
或其药学上可接受的盐。
8.权利要求5的化合物，其为式1.d'：
或其药学上可接受的盐。
9.权利要求1至8中任一项的式1化合物，其用作药物。
10.如权利要求1至8中任一项的式1化合物，其用作用于治疗以下的药物：哮喘和过敏性疾病、胃肠炎症、肾小球肾炎、嗜酸性粒细胞疾病、慢性阻塞性肺病、由病原微生物引起的感染和类风湿性关节炎。
11.如权利要求1至8中任一项的式1化合物，其用作用于治疗以下的药物：嗜中性粒细胞疾病，囊性纤维化(CF)，非囊性纤维化，特发性肺纤维化，支气管扩张症，ANCA相关的血管炎，肺癌，非囊性纤维化支气管扩张症，肺气肿，慢性支气管炎，急性肺损伤(ALI)，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，肺高压，肺动脉高压(PAH)和α-1-抗胰蛋白酶缺乏(AATD)。
12.如权利要求1至8中任一项的式1化合物，其用作用于治疗以下的药物：肥胖和相关炎症，胰岛素抵抗，糖尿病，脂肪肝和肝脂肪变性。
13.如权利要求1至8中任一项的式1化合物，其用作用于治疗以下的药物：外伤性脑损伤，腹主动脉瘤和移植物抗宿主疾病(GvHD)。
14.药物组合物，其包含一或多种如权利要求1至8中任一项的式1化合物或其药学活性盐。
15.治疗有效量或预防有效量的如权利要求1至8中任一项的式1化合物用于制备用于治疗或预防有此需要患者的疾病的药物中的用途，所述疾病为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂具有治疗益处的疾病。
16.一种药物组合物，其包含如权利要求1至8中任一项的式1化合物以及选自由以下组成的组的药学活性化合物：β模拟剂、抗胆碱能药物、皮质类固醇、PDE4抑制剂、LTD4拮抗剂、EGFR抑制剂、组织蛋白酶C抑制剂、CRTH2抑制剂、5-LO抑制剂、组胺受体拮抗剂及SYK抑制剂，以及两种或三种活性物质的组合。
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