CN106610380A - 一种快速检测黄嘌呤的方法 - Google Patents

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张敏
赵甜甜
胡坪
王月荣
章弘扬
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Abstract

本发明涉及一种快速检测样品中黄嘌呤浓度的方法，采用柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液反应得到纳米金分散液，再加入硫酸氢钠溶液，此溶液为检测试剂；然后将不同浓度的黄嘌呤标准溶液或样品溶液分别与检测试剂混合，混合液反应完全，滴加适量到纸基芯片上，待芯片完全干燥后，拍照并用图像处理软件对图片进行处理，获得相关颜色强度值，建立标准溶液的颜色强度值和黄嘌呤浓度之间的标准曲线。在检测实际样品时，将样品溶液的颜色强度值带入标准曲线，经计算即可得到样品中黄嘌呤的浓度。本发明的方法和过程简单，不需要大型昂贵的仪器，不需要专业的操作人员，可以批量地同时检测多个样品，极大地缩短了检测时间，方法灵敏度和选择性高，结果稳定性和重复性好，成本低。

Description

一种快速检测黄嘌呤的方法
【技术领域】
本发明涉及黄嘌呤检测技术领域，具体地说，是一种快速检测黄嘌呤的方法。
【背景技术】
黄嘌呤是由鸟嘌呤经鸟嘌呤脱氨酶和次黄嘌呤经黄嘌呤氧化酶作用形成的，它最终经黄嘌呤氧化酶氧化成尿酸。黄嘌呤和尿酸在人体中的浓度高低，可以作为多种临床疾病的生物标志物，如周期性窒息，脑缺血，特别是高尿酸血症和痛风性关节炎。因此检测体内黄嘌呤的含量有助于诊断及确定相关疾病。
传统检测黄嘌呤的方法主要是高效液相色谱法，毛细管柱气相色谱法，毛细管电泳法，荧光质谱法以及电化学等方法，然而这些方法均有很多局限性，如操作较复杂，样品准备以及检测所需时间较长，需要昂贵的仪器，需专业人员操作等。
【发明内容】
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种快速检测黄嘌呤的方法；
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种快速检测黄嘌呤的方法，其具体步骤为：
(1)柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液充分混合反应，获得由柠檬酸根包被金纳米颗粒，用超纯水稀释后，加入硫酸氢钠溶液，此溶液做检测溶液；
柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液的体积比为3∶1～5∶1，优选为3.88∶1。
金纳米颗粒的粒径为10～15纳米，优选为13纳米。金纳米会强烈的吸附含有胺基的物质，而黄嘌呤含有四个胺基，提供了多个吸附位点。
所述的检测溶液，其中硫酸氢钠的最终浓度为0～2mmol/L。
所述的检测溶液，其中金纳米颗粒的浓度为0～10nmol/L。
(2)将不同浓度的黄嘌呤标准溶液和样品溶液分别与检测溶液混合，充分反应；
所述的黄嘌呤标准溶液的浓度范围为0～2.00ppm。
所述的充分反应，其反应时间至少为2min。如果低于2min时，若样品中含有的黄嘌呤浓度较低，金纳米与黄嘌呤之间的吸附不够完全，则颜色变化不明显。
所述的样品溶液可以是含黄嘌呤及其它水溶性杂质样品的水溶液，也可以是经处理除去蛋白的血清、尿样等生物样品。
(3)将反应后混合液滴在纸基芯片上，干燥后用手机拍照并用软件分析照片的RGB颜色强度，便可以精确的计算溶液中的黄嘌呤的浓度，进而求得样品中黄嘌呤的含量，含量是指质量体积浓度。
计算溶液中黄嘌呤的含量具体为：取颜色强度中的蓝色色值和红色色值，并以它们的比值为纵坐标，以不同浓度的黄嘌呤为横坐标建立标准曲线，将样品溶液的色值比值带入标准曲线，计算可得样品溶液中黄嘌呤的含量。
与现有技术相比，本发明的积极效果是：
本发明创造性地建立了一种以纸基芯片为平台，利用金纳米检测黄嘌呤的方法，与已有技术相比，本发明的方法简单，不需要专业人员操作，避免了昂贵复杂仪器的使用，又可以批量地同时检测多个样品，极大地缩短了检测时间，使得该方法易于在偏远欠发达地区应用，对于相关疾病的及早诊断具有重要意义。
【附图说明】
图1a是金纳米分散时的TEM图；
图1b是黄嘌呤诱导金纳米聚集后的TEM图；
图2a是金纳米聚集前后的照片；
图2b是金纳米聚集前后的紫外吸收光谱图；
图3是本发明所提供的方法在纸基芯片上检测黄嘌呤的图片；
图4是纸基芯片检测区域照片蓝色色值与红色色值的比值与黄嘌呤浓度之间的线性关系。
【具体实施方式】
以下提供本发明一种快速检测黄嘌呤的方法的具体实施方式。
实施例1
黄嘌呤的检测：
(1)取氯金酸的水溶液(1mmol/L)50ml，在搅拌状态下煮沸，加入5ml柠檬酸三钠溶液(38.8mmol/L)。之后溶液继续煮沸10min，搅拌15min。将溶液在室温下冷却，得到呈酒红色的直径为13nm的纳米金分散液，金纳米颗粒的直径为13nm。
(2)取25ml步骤(1)中制得的纳米金分散液，加入24.55ml去离子水，加入0.45ml硫酸氢钠(0.1mol/L)溶液，振荡混合均匀，此溶液做为检测试剂。
(3)取两份样品，一份不含黄嘌呤，另一份黄嘌呤浓度为0.5ppm，将两份溶液分别加入到上述检测溶液中，室温下反应2min，两份溶液的性质表征如图1a，1b，2a，2b所示。
实施例2
黄嘌呤的检测：
(1)取氯金酸的水溶液(1mmol/L)25ml，在搅拌状态下煮沸，加入2.5ml柠檬酸三钠溶液(38.8mmol/L)。之后溶液继续煮沸10min，搅拌15min。将溶液在室温下冷却，得到呈酒红色的直径为13nm的纳米金分散液，金纳米颗粒的直径为13nm。
(2)取10ml步骤(1)中制得的纳米金分散液，加入9.82ml去离子水，加入0.18ml硫酸氢钠(0.1mol/L)溶液，振荡混合均匀，此溶液做为检测试剂。
(3)准备浓度分别为0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0ppm的黄嘌呤标准样品溶液和处理后的血清样品S1和S2,将其与上述检测溶液混合，室温下反应两分钟。取反应后的溶液5μL，滴在纸基芯片上，干燥后拍照，照片如图3所示，照片用ImageJ软件处理，获取蓝色色值和红色色值，建立色值的比值与黄嘌呤浓度之间的标准曲线，如图4所示。将所测样品的色值比值带入，可得到样品S1和S2的黄嘌呤值分别为0.36ppm和0.60ppm。
本发明涉及一种快速检测样品中黄嘌呤浓度的方法，采用柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液反应得到纳米金分散液，再加入硫酸氢钠溶液，此溶液为检测试剂；然后将不同浓度的黄嘌呤标准溶液或样品溶液分别与检测试剂混合，混合液反应完全，滴加适量到纸基芯片上，待芯片完全干燥后，拍照并用图像处理软件对图片进行处理，获得相关颜色强度值，建立标准溶液的颜色强度值和黄嘌呤浓度之间的标准曲线，将样品溶液的颜色强度值带入标准曲线，计算得到样品中黄嘌呤的浓度。本发明的方法和过程简单，不需要大型昂贵的仪器，不需要专业的操作人员，可以批量地同时检测多个样品，极大地缩短了检测时间，方法灵敏度和选择性高，结果稳定性和重复性好，成本低。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，其具体步骤为：
(1)柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液充分混合反应，获得由柠檬酸根包被的金纳米颗粒，用超纯水稀释后，加入硫酸氢钠溶液，此溶液做检测溶液；
(2)将不同浓度的黄嘌呤标准溶液和样品溶液分别与检测溶液混合，充分反应；
(3)将反应后混合液滴在纸基芯片上，干燥后用手机拍照并用软件分析照片的RGB颜色强度，便可以精确计算溶液中黄嘌呤的浓度，进而求得样品中黄嘌呤的含量，此含量指质量体积浓度。
2.如权利要求1所述的一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，柠檬酸三钠溶液与氯金酸溶液的体积比为3∶1～5∶1，优选为3.88∶1。
3.如权利要求1所述的一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，金纳米颗粒的粒径为10～15纳米，优选为13纳米。
4.如权利要求1所述的一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的检测溶液，其中硫酸氢钠的最终浓度为0～2mmol/L。
5.如权利要求1所述的一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的检测溶液，其中金纳米颗粒的浓度为0～10nmol/L。
6.如权利要求1所述的一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的黄嘌呤标准溶液的浓度范围为0～2.00ppm。
7.如权利要求1所述的一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的样品溶液可以是含黄嘌呤及其它水溶性杂质样品的水溶液，也可以是经处理除去蛋白的血清、尿样等生物样品。
8.如权利要求1所述的一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的充分反应，其反应时间至少为2min。
9.如权利要求1所述的一种快速检测黄嘌呤的方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，计算溶液中黄嘌呤的含量具体步骤为：取颜色强度中的蓝色色值和红色色值，并以它们的比值为纵坐标，以黄嘌呤的浓度为横坐标建立标准曲线，将样品溶液的色值比值带入标准曲线，计算可得样品溶液中黄嘌呤的含量。
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