CN106582580A - 层析柱用耐高压亲和层析介质 - Google Patents

层析柱用耐高压亲和层析介质 Download PDF

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Abstract

本案涉及层析柱用耐高压亲和层析介质，包括介质一和介质二；其中，所述介质一以聚丙烯酸酯微球为内核，在所述聚丙烯酸酯微球表面键合有琼脂糖分子；所述琼脂糖分子中的羟基端连接配基；所述介质二包括有氧化铝和氧化镁。本案通过对亲和层析介质的配方进行设计改进，在常规单一的介质中引入了耐高压粒子，来提高亲和层析介质的机械强度，从而改善了层析介质在高压力下的分离效率和循环使用次数；同时，这种改进方法简单，生产成本低，利于大规模推广应用。

Description

层析柱用耐高压亲和层析介质
技术领域
本发明涉及一种层析介质，具体涉及一种层析柱用耐高压亲和层析介质。
背景技术
目前，在制药领域，如何提高药物的纯度和生物安全性，是重组蛋白、抗体等生物药研发和生产过程中的关键性步骤。我国药企对于层析柱用的分离介质的获得主要依赖进口，因此，国内亟需摆脱对进口分离介质的依赖，降低药物的生产成本。
对蛋白药物纯化分离用的亲和层析介质主要是琼脂糖产品，但这类产品机械强度较低，从而导致其在装填层析柱后，耐受压力较低，限制了其分离效率的提升空间，同时也抑制了琼脂糖的重复使用次数。
发明内容
针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种层析柱用耐高压亲和层析介质。
本发明的技术方案概述如下：
一种层析柱用耐高压亲和层析介质，其包括介质一和介质二；
其中，所述介质一以聚丙烯酸酯微球为内核，在所述聚丙烯酸酯微球表面键合有琼脂糖分子；所述琼脂糖分子中的羟基端连接配基；
所述介质二包括有氧化铝和氧化镁。
优选的是，所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其中，所述介质一和介质二的质量比为100∶4-10。
优选的是，所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其中，所述介质一和介质二的质量比为100∶6-8。
优选的是，所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其中，所述氧化铝和氧化镁的质量比为10∶5-7。
优选的是，所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其中，所述氧化铝和氧化镁的质量比为10∶6。
优选的是，所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其中，所述氧化铝的粒径为30-50nm。
优选的是，所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其中，所述氧化镁的粒径为30-50nm。
本发明的有益效果是：本案通过对亲和层析介质的配方进行设计改进，在常规单一的介质中引入了耐高压粒子，来提高亲和层析介质的机械强度，从而改善了层析介质在高压力下的分离效率和循环使用次数；同时，这种改进方法简单，生产成本低，利于大规模推广应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本案提供一实施例的层析柱用耐高压亲和层析介质，其包括介质一和介质二；
其中，介质一以聚丙烯酸酯微球为内核，在聚丙烯酸酯微球表面键合有琼脂糖分子；琼脂糖分子中的羟基端连接配基；
介质二包括有氧化铝和氧化镁。
其中，介质一和介质二的质量比优选为100∶4-10。
其中，介质一和介质二的质量比优选为100∶6-8。
其中，氧化铝和氧化镁的质量比优选为10∶5-7。
其中，氧化铝和氧化镁的质量比优选为10∶6。
其中，氧化铝的粒径优选为30-50nm。
其中，氧化镁的粒径优选为30-50nm。
聚丙烯酸酯微球是一种常规市售商品，可以购买获得。在现有技术中，以琼脂糖凝胶作为介质载体的层析柱耐压值一般为0.3-0.5MPa，而以表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球作为介质载体的层析柱耐压值一般为10-12MPa，重复使用次数为100次。
配基的种类不受限定，可根据待吸附物质的种类而定。例如当需要制备蛋白A亲和层析介质时，配基就选择ProA；当需要制备蛋白G亲和层析介质时，配基就选择ProG。配基的选择对该介质的机械强度没有实质影响。
实施例1
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2molNaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后，过滤，洗涤干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后过滤除去溶剂，洗涤三次；
3)按介质一和介质二的质量比为100∶4、氧化铝和氧化镁的质量比为10∶5的比例加入氧化铝和氧化镁，在有机溶剂下充分搅拌混匀，滤去溶剂，干燥即得亲和层析介质。
实施例2
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2molNaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后，过滤，洗涤干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后过滤除去溶剂，洗涤三次；
3)按介质一和介质二的质量比为100∶10、氧化铝和氧化镁的质量比为10∶7的比例加入氧化铝和氧化镁，在有机溶剂下充分搅拌混匀，滤去溶剂，干燥即得亲和层析介质。
实施例3
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2molNaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后，过滤，洗涤干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后过滤除去溶剂，洗涤三次；
3)按介质一和介质二的质量比为100∶6、氧化铝和氧化镁的质量比为10∶6的比例加入氧化铝和氧化镁，在有机溶剂下充分搅拌混匀，滤去溶剂，干燥即得亲和层析介质。
实施例4
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2molNaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后，过滤，洗涤干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后过滤除去溶剂，洗涤三次；
3)按介质一和介质二的质量比为100∶8、氧化铝和氧化镁的质量比为10∶6的比例加入氧化铝和氧化镁，在有机溶剂下充分搅拌混匀，滤去溶剂，干燥即得亲和层析介质。
下表列出实施例1-4的测试结果：
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4
层析柱耐压值 19.5MPa 20MPa 21MPa 21MPa
重复使用次数 200次 200次 200次 200次
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (7)

1.一种层析柱用耐高压亲和层析介质，其特征在于，包括介质一和介质二；
其中，所述介质一以聚丙烯酸酯微球为内核，在所述聚丙烯酸酯微球表面键合有琼脂糖分子；所述琼脂糖分子中的羟基端连接配基；
所述介质二包括有氧化铝和氧化镁。
2.根据权利要求1所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述介质一和介质二的质量比为100∶4-10。
3.根据权利要求2所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述介质一和介质二的质量比为100∶6-8。
4.根据权利要求1所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述氧化铝和氧化镁的质量比为10∶5-7。
5.根据权利要求4所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述氧化铝和氧化镁的质量比为10∶6。
6.根据权利要求1所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述氧化铝的粒径为30-50nm。
7.根据权利要求1所述的层析柱用耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述氧化镁的粒径为30-50nm。
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