CN106573984A - 针对mmp9的特异性抗体 - Google Patents

针对mmp9的特异性抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN106573984A
CN106573984A CN201580043394.1A CN201580043394A CN106573984A CN 106573984 A CN106573984 A CN 106573984A CN 201580043394 A CN201580043394 A CN 201580043394A CN 106573984 A CN106573984 A CN 106573984A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
antibody
amino acid
mmp9
ser
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201580043394.1A
Other languages
English (en)
Inventor
约兰德·赫瓦特奇科·米索顿
劳伦斯·戈芬
奥利维尔·莱格尔
史蒂文·M·邓恩
克莉丝汀·鲍尔
金赛·孟德雷尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kerry Pouso Biotech
Merck Patent GmbH
Original Assignee
Kerry Pouso Biotech
Merck Patent GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kerry Pouso Biotech, Merck Patent GmbH filed Critical Kerry Pouso Biotech
Publication of CN106573984A publication Critical patent/CN106573984A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • C12Y304/24035—Gelatinase B (3.4.24.35), i.e. matrix metalloprotease 9 or MMP9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
    • G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
    • G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
    • G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
    • G01N2333/96486—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • G01N2333/96491—Metalloendopeptidases (3.4.24) with definite EC number
    • G01N2333/96494—Matrix metalloproteases, e. g. 3.4.24.7

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)

Abstract

本发明涉及结合MMP9并包含抗体的重链可变区的至少一个片段和/或轻链可变区的至少一个片段的新蛋白质。特别地，根据本发明的MMP9结合蛋白能够中和MMP9活性并且可用于预防和/或治疗炎症和/或自身免疫性疾病或癌症。特别地，根据本发明的MMP9结合蛋白可用于诊断MMP9相关病症。

Description

针对MMP9的特异性抗体
技术领域
本发明涉及特异性结合并中和所述蛋白质的活性的抗体及其片段，以及其作为治疗剂或诊断剂的用途。
背景技术
基质金属蛋白酶(MMP)家族由至少23种结构上相关的、可溶性或膜结合的锌依赖性内肽酶组成，其广泛参与细胞外基质(ECM)的重塑和各种生物活性分子的功能调节。
所有MMP具有原型结构，其包括维持MMP为无活性形式的前结构域和作用于广谱细胞外基质组分的催化结构域。
基质金属肽酶9(MMP9)也称为92kDa IV型胶原酶或明胶酶B(GELB)，是MMP家族酶的成员，其负责降解变性和基底膜胶原(Agrawal et al.,2006J.Exp.Med.203,1007–1019)和通过加工可溶性蛋白质促进炎症，可溶性蛋白质包括蛋白酶抑制剂(Liu et al.,2000,J.Exp.Med.188,475–482.)、趋化因子(Van den Steen et al.,2000,Lancet Neurol.2,747–756)和细胞因子(Nelissen et al.,2003,Brain 126,1371–1381)。MMP9还通过膜结合分子(如生长因子前体和受体、酪氨酸激酶受体(TKR)、细胞粘附分子(Bauvois,2012,Biochim Biophys Acta.1825(1):29-36.))的蛋白水解来控制肿瘤细胞的迁移、侵袭和转移。在疾病中，MMP9由包括白细胞的许多细胞类型分泌，例如嗜中性粒细胞、单核细胞/巨噬细胞和淋巴细胞，以及成纤维细胞、肌成纤维细胞、上皮细胞、平滑肌细胞、内皮细胞、破骨细胞和肿瘤细胞(Vandooren et al.,2013,Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.48(3):222-72)。
MMP9的一般结构域结构包含分泌前导序列、催化潜伏所需的抑制性前体结构域、含有三个纤连蛋白II型重复环的“分裂”催化结构域，其一起形成胶原结合域(CBD)、富含高糖基化脯氨酸的连接体(也称为OG结构域)和血红素结合蛋白样C-末端结构域(PEX)。
基质金属肽酶2(MMP2)，也称为72kDa IV型胶原酶或明胶酶A(GELA)，是属于与MMP9相同家族的酶。MMP2和MMP9表现出高氨基酸序列同一性(在全长蛋白上为45.9％，在催化结构域上为63.2％)，并且共享高度相似的3D结构，特别是在它们的催化结构域中。因此，由于这种高结构和氨基酸序列同源性，鉴定对人MMP2具有选择性的抑制性抗人MMP9抗体是非常困难的(Morgunova et al.,1999,Science,284:1667-1670)。
许多急性炎症和自身免疫性疾病状态、纤维化病症和侵袭性癌症与过量MMP9的存在相关(Hu et al,2007,Nature Reviews Drug Discovery,6,480-498；Ram et al,2006,J.Clin.Immunol.,(26)4:299-307；Ai Zheng,2003,Chinese journal of cancer,22(2):178-84；Baugh et al,1999,Gastroenterology,117:814-822；Santos et al,2013,Biochem Biophys Res Commun.,438(4):760-4)；Herszényi et al,2012,Int.J.Mol.Sci.,13,13240-13263；Lijnen,2001,Thromb Haemost,86:324-33；Rosell etal.,2005,Stroke 36:1415–20；Whatling et al.,2004,Arterioscler Thromb VascBiol.,24:10–11；Yasmin et al.,2005,Arterioscler Thromb Vasc Biol.,25:372-8；Vassiliadis et al.,2011,BMC Dermatol.,11:6)，因此，该酶作为治疗性干预的预期目标已经受到相当大的关注。
强大的临床和实验证据表明，MP9水平升高与癌症发展、转移和缩短的患者存活时间相联，因为它通过消化基底膜和细胞外基质组分在肿瘤细胞侵袭和转移中起关键作用。与人嗜中性粒细胞中的MMP9共价连接的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)(Triebel et al.,1992,FEBS Lett.,314,386–388)保护MMP9免受蛋白水解降解并增加MMP9的酶活性和随后增强肿瘤侵袭和扩散(Yan et al.,2001,J.Biol.Chem.,276,37258–37265)。血清中高浓度的MMP9/NGAL复合物与透明细胞肾细胞癌中较短的无进展生存期和较差的总生存期相关(Perrin et al.,2011,Prog.En Urol.J.Assoc.Fr.Urol.SociétéFr.Urol.,21,851–858)。
特别地，MMP-9的作用与结肠直肠癌(Herszényi et al.,2012,Int J Mol Sci,.13(10):13240-63)、胰腺癌(Gao et al.,2015,Med Oncol.32(1):418)、乳腺癌(Kim etal.,2014,BMC Cancer.14(1):959)、肺癌(Ruiz-Morales et al.,Tumour Biol.36(5):3601-10)、卵巢癌(Naylor et al.,1994,Int J Cancer,58:50-6)、膀胱癌(Szarvas etal.,2011,Nat Rev Urol.,8(5):241-54)和胃癌(Chen et al.,2015,Int J Clin ExpMed.8(1):546-57)相关。
MMP9的作用已经在免疫病理学中特别是在炎症性肠病(IBD)中显示，其中MMP9被报道为在活性发炎的肠粘膜中表达最丰富的MMP，并且其表达与疾病活性良好地相关(Naito和Yoshikawa,2005,26:379-390)。在IBD中，认为MMP9在不充分组织的重塑与促炎细胞因子和趋化因子的激活中起关键作用，从而使得能够募集活化的白细胞(Nuala等人，2014,Inflamm.Bowel 0:1-15)。更具体地，在克罗恩氏病(CD)患者中报道了沿肛管瘘的瘘管上增强的MMP9表达和瘘管活检中增加的MMP9活性，这支持MMP9可能有助于形成代表CD的严重并发症的瘘的假设(Efsen等人，2011,Basic Clin Pharmacol Toxicol.109(3)：208-16)。此外，降低的NGAL/MMP9血清水平也与用英夫利昔单抗治疗的溃疡性结肠炎患者的粘膜愈合相关(de Bruyn等人，2014,Inflamm.Bowel Dis.,20,1198-1207)。
MMP9的作用与多种神经性疾病有关，例如阿尔茨海默氏病(Mroczko et al.,2013,J.Alzheimers Dis.,37(2):273-278)、多发性硬化(Mirshafiey et al.,2014,Sultan Qaboos Univ Med J,,14(1),13-25)、神经炎症或脑缺血(Candelario-Jalil etal.,2009,Neuroscience 158(3):983-94)。在阿尔茨海默氏病中，对决策脑区域中tau寡聚体形成的前聚集影响可能是MMP9的潜在的神经毒性副作用(Wang et al.,2014BioMedRes.Int.,2014,ID 908636:1-8)。已经表明，作为升高的MMP9介导的降解(其降解细胞外空间中的mNGF)的结果，成熟神经生长因子(mNGF)的减少可能部分地支持轻度认知障碍和阿尔茨海默氏病中的认知缺陷的发病机制(Bruno et al.,2009,JNeuropathol.Exp.Neurol.,68(12):1309-1318)。
MMP9的作用与纤维化疾病相关，例如全身性硬化、多灶性纤维硬化、骨髓移植接受者中的硬皮病性移植物抗宿主病、肾源性全身性纤维化以及器官特异性病症，诸如肺、肝和肾纤维化(Piera-Velazquez et al.,2011,Am J Pathol.,179(3):1074-80,Peng et al.,2012,J.Clin.Immunol.,32(6):1409-14)。例如，最近的研究已经表明，MMP特别是MMP9通过肾小管细胞上皮-间质转化和驻留成纤维细胞的激活、内皮-间质转化和周细胞-肌成纤维细胞转分化参与肾纤维化的起始和进展(Zhao et al.,2013,World J Nephrol.,2(3):84-9)。
各种眼部疾病的病理生理学已与MMP9活性相关。一些实例包括：晶状体的纤维化病变学(Nathu et al.,2009,Ex.Eye Res.,88(2):323-330)，与MMP9的上调相关的角膜疾病(Sakimoto et al.,2012,Cornea 31,Suppl 1:S50-6)，在患者视网膜和玻璃体中表现出增加的MMP9水平的糖尿病性视网膜病变(Kowluru et al.,2012,Expert Opin InvestigDrugs,21(6):797-805)和年龄相关性黄斑变性，其中MMP9显示在其发病机理中起作用(Nita et al.,2014,Med Sci Monit,20:1003-16)。
心血管疾病涉及与细胞外基质的重组和MMP9的活化相关的炎症和改变的组织重塑。因此，MMP9被认为与心脏疾病如高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭和冠状动脉疾病的病理生理学有关(Yabluchanskiy et al.,2013,Physiology,28(6):391-403)。
此外，MMP9的作用与多类疾病有关，例如皮肤疾病(Mezentsev et al.,2014,Gene,540(1):1-10)、败血症和急性炎症性休克综合征(Lorento et al.,2014,PLoS One 9(4):e94318；Qui et al.2012,Comb Chem High Throughput Screen.,15(7):555-70)、骨关节炎(Bian et al.,2012,Front Biosci(Elite Ed).4:74-100)、化疗诱导的粘膜炎(Al-Dasooqi et al.,2009,Cancer Chemother Pharmacol.,64:1–9)、口腔疾病(Al-Azri etal.,2013,Oral Diseases,19:347-359)、骨硬化(Teti et al.,1999,J Bone MinerRes.14(12):2107-17)、子宫内膜异位症(Pitsos et al.,2009,Reprod Sci.,16(8):717-26)或查加斯病(Geurts et al.,2012,Pharmacol Ther.,133(3):257-79)。
已经在多种正常细胞和肿瘤细胞(Goldberg et al.,1992,J.Biol.Chem.,267,4583–4591)以及生物流体和组织中鉴定了MMP9的单体形式和二聚体形式，表明两种形式是生理相关的。除了蛋白水解，MMP9通过血红素结合蛋白结构域的二聚化对于MMP9增强的细胞迁移是必要的(Dufour et al.,2010,J.Biol.Chem.,285,35944–35956)，MMP9单体和二聚体在多种癌、肉瘤、腺肉瘤和白血病细胞系中的分泌模式的研究表明，高MMP9，特别是二聚体分泌水平与最具侵袭性的癌细胞系相关(Roomi et al.,2014,Int.J.Oncol.44,986–992)。总之，这些观察结果强调了有效的MMP9中和剂用来有效抑制所有天然形式的MMP9和更特别是MMP9二聚体和NGAL/MMP9复合物以治疗非常有攻击性的转移性癌症的重要性。
历史上，MMP阻断的策略集中在与活化酶的催化位点紧密相互作用的小分子抑制剂的设计。到目前为止，这种方法未能转化为预期的临床益处，部分是由于剂量限制的毒性和严重的副作用，例如肌肉骨骼综合征。因为MMP9催化位点的结构在MMP家族中是高度保守的，所以这种禁忌症可能归因于在治疗剂量下缺乏MMP靶选择性。
抗体或抗体片段可能与比提供更高靶抑制选择性的活性位点定向小分子相当较大部分的MMP9结构相互作用，并且阻断比提供更高靶抑制选择性的活性位点定向小分子相当较大部分的MMP9结构。
现有技术中已经描述了对MMP9有特异性的一些抗体，例如小鼠AB0041和人源化AB0045(WO 2013/130078)以及人539A-M0240-B03(US 2009/0311245)、M0166-F10(US2009/0311245US 2011/0135573)、539A-M0237-D02(US 2009/0297449和US 2011/0135573)、小鼠REGA-3G12(Martens et al.,2007,Biochim.Biophys.Acta 1770,178–186)。已经描述了现有技术中同时与MMP9和MMP2结合的一些抗体。
因此，仍然需要开发对MMP9显示出高亲和力和特异性并对其他MMP如MMP2显示弱或有限的亲和力和/或特异性的新型治疗剂，显示出对非人MMP9直系同源物的改善的交叉反应性，并且具有其他另外的性质，例如降低的人的免疫原性和/或更高的稳定性，这使得它们特别适合于人类的治疗应用。
发明内容
本发明涉及结合至MMP9，特别是接合至人MMP9并且包含本文所述的抗体的重链可变区的至少一个片段和/或轻链可变区的至少一个片段的蛋白质。
本发明的第一方面涉及对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段通过与包含由SEQ ID NO：41组成的区域内的至少一个氨基酸、由SEQ ID NO：42组成的区域内的至少一个氨基酸和由SEQ ID NO：43组成的区域内的至少一个氨基酸的表位相互作用而结合至MMP9，其中所述区域在人MMP9的催化结构域内。
本发明的第二方面提供了对MMP9有特异性的包含重链可变区的分离的抗体或其抗原结合片段，该重链可变区包含：
(i)SEQ ID NO：2的重链CDR1或其变体，其中所述重链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：3的重链CDR2或其变体，其中所述重链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：4的重链CDR3或其变体，其中所述重链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
本发明的更具体方面提供了如上所述的分离的抗体，其还包含选自以下的轻链可变区：
a)轻链可变区，其包含：
(i)SEQ ID NO：21的轻链CDR1或其变体，其中所述轻链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：22的轻链CDR2或其变体，其中所述轻链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：23的轻链CDR3或其变体，其中所述轻链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代，或
b)轻链可变区，其包含：
(i)SEQ ID NO：26的轻链CDR1或其变体，其中所述轻链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：27的轻链CDR2或其变体，其中所述轻链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：28的轻链CDR3或其变体，其中所述轻链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
本发明的第三方面涉及编码如本文所述的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸分子。
本发明的第四方面和第五方面分别涉及包含所述核酸分子的重组表达载体和包含所述重组载体的宿主细胞。
本发明的第六方面涉及用于生产如本文所述的抗体或其片段的方法，包括在足以促进所述抗体或其片段表达的条件下培养宿主细胞，该宿主细胞利用包含编码所述抗体或其片段的核酸序列的表达载体转化。
本发明的第七方面提供了药物组合物，其包含(i)对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，(ii)核酸序列，(iii)载体和/或(iv)如本文所述的宿主细胞中的一种或者多种，以及至少一种药学上可接受的载体。
本发明的第八方面涉及包含如本文所述的一种或多种抗MMP9抗体或其抗原结合片段的成像组合物或诊断组合物。
本发明的第九方面是包含如本文所述的一种或多种抗MMP9抗体或其抗原结合片段的试剂盒。
本发明的第十方面涉及本发明的抗体或其制剂在用于预防和/或治疗MMP9相关病症，例如炎症和/或自身免疫性疾病或癌症或肿瘤或纤维化疾病中的用途。
第十一方面涉及预防和/或治疗MMP9相关病症(例如炎症和/或自身免疫性疾病或癌症或纤维化疾病)的方法，其包括在有需要的个体中施用有效治疗量的所述抗体或其片段或所述药物组合物。
本发明的另一方面涉及本发明的抗MMP-9抗体或其制剂作为药物的用途。
从下面的详细描述中，本发明的其他特征和优点将是显而易见的。
附图说明
图1显示人MMP9蛋白的分子结构域结构的示意图。数字表示未成熟MMP9蛋白氨基酸序列上的氨基酸位置。
图2显示人、食蟹猴(cyno)、大鼠和小鼠MMP9的氨基酸序列的比对。(*)表示具有单个完全保守残基的位置，(:)表示Gonnet PAM 250矩阵中强相似性质(记分>0.5)组之间的保守性，(.)表示Gonnet PAM 250矩阵中弱相似性质(记分≤0.5)组之间的保守性。
图3显示包含根据本发明的抗MMP9抗体的人重链恒定区和人重链可变区的示例性人重链抗体片段的序列比对。重链抗体片段序列用名称前包括*的可变重链区的序列名称标记：*F20-VH，*F20-VH-GL1，*F20-VH-GL1-V1-V9，*F20-VH-GL1-V1-V9-V14，*F20-VH-GL1-V4-V9，*F20-VH-GL1-V4-V9-V14。CDR加下划线。注释与图2中描述的相同。
图4显示包含根据本发明的抗MMP9抗体的人轻链恒定区和人轻链可变区的示例性人轻链抗体片段的序列比对。轻链抗体片段序列用名称之前包括*的可变轻链区的序列名称标记：*B03-VL，*B03-VL-GL1。CDR加下划线。注释与图2中描述的相同。
图5显示包含根据本发明的抗MMP9抗体的人轻链恒定区和人轻链可变区的示例性人轻链抗体片段的序列比对。轻链抗体片段序列用名称前包括*的可变轻链区的序列名称标记：*B08-VL，*B08-VL-GL6。CDR加下划线。注释与图2中描述的注释相同。
图6显示根据本发明的示例性抗MMP9抗体(F20-VH/B03-VLc和F20-VH/B08-VLc变体)对人proMMP9(A,B)和人成熟MMP9(C,D)的中和活性的滴定。F20-VH/B03-VLc变体(A,C)，F20-VH/B08-VLc变体(B,D)。
图7显示了根据本发明的示例性抗MMP9抗体对各种重组人基质金属蛋白酶的催化结构域的中和活性。
图8显示根据本发明的示例性抗MMP9抗体(F20-VH/B08-VLc变体；实线和实心符号)或同种型对照(虚线和空心符号)对嗜中性粒细胞来源的人二聚体MMP9(圆形)、人单体MMP9(三角形)和人NGAL-MMP9复合物(正方形)的中和活性的滴定。
图9显示根据本发明的示例性抗MMP9抗体(F20-VH/B08-VLc变体；实线和实心符号)或抗MMP9比较抗体1(虚线和空心符号)对MMP3-活化的人单体MMP9(三角形)、二聚体MMP9(圆形)和人嗜中性粒细胞来源的NGAL-MMP9复合物(正方形)的中和活性的滴定。
图10显示抗MMP9抗体与重组人MMP9抗原的结合动力学。在BIAcore传感器芯片上滴定MMP3-活化的MMP9(图A和B)和pro-MMP9(图C和D)，其中首先将抗MMP9抗体，F20-VH/B08-VLc变体(图A和C)和比较抗体1(图B和D)固定在传感器芯片上。报告结合动力学的传感图。共振单元(RU)。所有y轴代表响应(RU)；所有x轴代表时间(s)。
图11显示抗MMP9抗体与人MMP9的直接和竞争性结合。使用标准ELISA方案评估不同浓度的生物素化的抗MMP9抗体F20-VH/B08-VLc变体(实心圆)和比较抗体1(空心圆)对pro-MMP9(图A)或MMP3-活化的MMP9(图B)的直接结合能力。以2.5μg/ml包被MMP9抗原。对照是单独的链霉亲和素-HRP(实心三角形)或人IgG4同种型对照加生物素化的抗人IgG第二步Fab抗体(实心方块)。
对于竞争性结合实验(图C)，在用缓冲液(无)或纯化的F20-VH/B08-VLc变体或比较抗体1(均以50μg/mL使用)预孵育后，使用最佳剂量的生物素化的比较抗体1(2.5μg/mL)或F20-VH/B08-VLc变体(50μg/mL)显示包被的MMP3-活化的MMP9。对于图A、B、C，结果表示为对于每个条件一式两份进行的校正吸光度的平均值±SD(A450-A620)。
图12显示抗MMP9抗体(F20-VH/B08-VLc变体)对通过Matrigel包被的小室的癌细胞系侵袭的作用。将MGC803人胃癌细胞用Phorbol 12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)和MMP的广泛化学抑制剂(GM-6001)、抗MMP9抗体(F20-VH/B08-VLc)、同种型对照或培养基单独孵育。使用钙荧光素-AM在16小时后定量侵袭细胞。每个条件重复进行，并且报告荧光单位的平均值和SD。
图13显示了在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中的内窥镜评分。在DSS诱导后第6天，用抗MMP9抗体(F20-VH/B08-VLc变体)或同种型对照抗体处理小鼠。F20-VH/B08-VLc变体的作用显示为黑色条，同种型对照显示为阴影条。对于两组处理的小鼠(对于F20-VH/B08-VLc，n＝5；对于同种型对照，n＝6)，报告内窥镜评分的平均值和SD；使用Graph Pad Prism，使用双向，非配对T检验进行组数据(DSS诱导后第14天的F20-VH/B08-VLc与同种型对照)的统计比较。*p＝0.005。
图14显示用抗MMP9抗体(F20-VH/B08-VLc变体)或同种型对照抗体处理的具有DSS诱导的结肠炎的小鼠的结肠切片的总组织学评分、浸润和上皮损伤评分。(A)总组织学评分，(B)浸润，(C)上皮损伤。对于两组处理的小鼠(对于F20-VH/B08-VLc n＝5；对于同种型对照n＝5)，报告每个标准的个体值、平均值和SD。
图15显示用苏木精-曙红染色的小鼠肠道外植移植物的代表性横截面。(A)第0天-新鲜分离的小肠切除术，具有开放腔和典型的隐窝结构。(B)同种型对照第14天-在同种型对照处理的小鼠(n＝5)中移植后14天肠腔完全闭塞。(C)F20-VH/B08-VLc变体第14天-在在抗MMP9处理的小鼠(n＝5)中移植后14天肠腔部分闭塞。
图16显示用天狼星红染色的小鼠肠道外植移植物的代表性横截面和胶原层厚度的定量。新鲜分离的小肠切除(A和B)。在同种型对照处理的小鼠中移植后第14天(C和D)。在抗MMP9抗体处理的小鼠(F20-VH/B08-VLc变体)中移植后第14天(E和F)。透射光(A、C和E)，偏振光(B、D和F)。(G)来自抗MMP9或同种型对照处理的小鼠的异位肠移植物中胶原层厚度的定量。对于两组处理的小鼠(对于F20-VH/B08-VLc，72个切片；对于同种型对照，64个切片)，报告了来自移植物切片的胶原层厚度的平均值和SD。使用Graph Pad Prism，使用双向非配对T检验进行组数据(F20-VH/B08-VLc与同种型对照)的统计比较。***p<0.0001。
具体实施方式
定义
术语“基质金属蛋白酶9”，缩写为“MMP9”，也称为92kDa IV型胶原酶、92kDa明胶酶或明胶酶B(GELB)，是在人类中由MMP9基因编码的酶，其序列在NCBI登录号ENSG00000100985中公开。人MMP9的形式包含总共707个氨基酸的序列，可以在NCBI登录号NP_004985.2(SEQ ID NO：1)获得。MMP9的一般结构域结构包含分泌前导序列(SEQ ID NO：1的残基1-19)，催化潜伏所需的抑制性前体结构域(SEQ ID NO：1的残基20-106)，“分裂”催化结构域(SEQ ID NO：1上的残基107-441)，其含有一起形成胶原结合结构域(CBD)的三个纤连蛋白II型重复环、富含高糖基化脯氨酸的连接体(也称为OG结构域，SEQ ID NO：1的残基442-520)和血红素结合蛋白样重复C-末端结构域(PEX)(SEQ ID NO：1的残基521-707)(Rowsell et al.,2002,J Mol Biol 319:173–81)(图1)。MMP9被前结构域分泌并维持为无活性的潜伏形式。前结构域的蛋白水解去除激活MMP9的酶活性，然后MMP9可以称为“活性MMP9”。其催化结构域含有明胶结合区，其对明胶提供特异性亲和力。除了明胶之外，MMP9具有多种底物，包括胶原(例如胶原IV和胶原V)、弹性蛋白、半乳凝素3、巢蛋白和ICAM-1(Ramet al,2006,J.Clin.Immunol.26,299-307)，和细胞因子和趋化因子(Opdenakker et al,Trends Immunol.2001:22:527–81)。
本文所用的术语“抗体”指结合抗原的多肽。这包括完整抗体和任何抗原结合片段。术语“抗体”以其最广泛的含义使用，并且包括单克隆抗体、多克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体和其他工程化抗体，只要保留本发明的特征性质，特别是结合靶抗原的能力，更特别是结合与本发明的抗体识别的MMP9的相同表位。抗体及其片段的实例包括可变结构域片段(“Fv”，由抗体单臂的VH和VL结构域组成)、Fab片段(由VH、VL、CH1和CL结构域组成的单价片段)、Fab2片段(二价)、Fab3片段(三价)、Fab'片段(具有铰链区的Fab)、F(ab')2片段(包括通过铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段)、Fd片段(由VH和CH1结构域组成)、rIgG(减少的IgG或半IgG)、双抗体、三抗体、四抗体、迷你抗体、单价抗体、包含多于一种抗体的片段的二价或多价抗体、单链可变片段(ScFv)、双scFv(双特异性)和抗体的衍生物，例如二硫键稳定的Fv片段、包含CDR的肽以及任何上述的表位结合片段(Holligerand Hudson,2005,Nature Biotechnology,23(9):1126-1136)。抗体指包含通过二硫键互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白或其抗原结合片段。每条重链包含重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)。每条轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)。在哺乳动物中，重链可以是分别限定抗体IgA、IgD、IgE、IgG和IgM的类型的α(α)、δ(δ)、ε(ε)、γ(γ)。在哺乳动物中，轻链可以是λ(λ)或κ(κ)。在哺乳动物中，根据抗体类型，重链恒定区包含三个免疫球蛋白结构域CH1、CH2和CH3(对于IgA、IgD、IgG)或四个免疫球蛋白结构域CH1、CH2、CH3和CH4(对于IgE和IgM)。轻链恒定区包含一个免疫球蛋白结构域CL。抗体可以具有IgA、IgG、IgE、IgD和IgM以及其任何亚型的结构。抗体可以来自任何来源，包括特别是灵长类动物(人和非人灵长类动物)和灵长化动物来源。
如本文所用的术语“可变结构域”或“可变区”(轻链(VL)的可变结构域，重链(VH)的可变结构域)是指直接参与抗体与抗原结合的一对轻链和重链结构域的每个。可变轻链和重链结构域具有相同的一般结构，每个结构域包含其序列广泛保守的四个框架(“FR”)区，其通过称为“互补决定区”的三个“高变区”或“CDR”连接，框架区采用β-折叠构象，并且CDR可形成连接β-折叠结构的环。每条链中的CDR通过框架区保持在其三维结构中，并与来自另一条链的CDR一起形成抗原结合位点。当在本文中使用时，术语“抗体的抗原结合部分”是指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。抗体的抗原结合部分包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基。“框架”或“FR”区是除了本文定义的高变区残基之外的那些可变结构域区。因此，抗体的轻链和重链可变结构域从N末端至C末端包含：结构域FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4。CDR和FR区的残基按照Kabat等人的标准定义(Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，MD(1991)，公开号91-3242)。本说明书中使用该编号系统，除非另有说明。Kabat残基命名并不总是直接对应于氨基酸残基的线性编号。实际的线性氨基酸序列可以包含比严格Kabat编号更少或额外的氨基酸，严格Kabat编号对应于基本可变结构域结构的框架或互补决定区(CDR)的结构组分的缩短或插入。可以通过抗体序列中的同源性残基与“标准”Kabat编号序列的比对来确定给定抗体的残基的正确Kabat编号。根据Kabat编号系统，重链可变结构域的CDR位于残基31-35(CDR-H1)、残基50-65(CDR-H2)和残基95-102(CDR-H3)。根据Kabat编号系统，轻链可变结构域的CDR位于残基24-34(CDR-L1)、残基50-56(CDR-L2)和残基89-97(CDR-L3)。
在本申请中，除非另有说明，对于所有人免疫球蛋白重链和轻链可变结构域，编号是根据“Kabat编号系统”(Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)，公开号91-3242)。
在本申请中，除非另有说明，对于所有人免疫球蛋白重链恒定结构域，编号是根据“EU编号系统”(Edelman等人，1969,Proc Natl Acad Sci,63(1)：78-85)。
本文使用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群获得的抗体，即包含该群的单个抗体是相同的，除可能以少量存在的可能的天然存在的突变之外。单克隆抗体针对单个抗原位点是高度特异性的。修饰语“单克隆”表示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。
术语“嵌合抗体”通常是指包含来自一个来源或物种的可变区和来自不同来源或物种的恒定区的至少一部分的抗体，通常通过重组DNA技术制备。嵌合抗体的典型实例包括包含鼠可变区和人恒定区的那些。如本文所定义的，该术语还包括包含第一人抗体的至少一个CDR和第二人抗体的恒定区的至少一部分的抗体。它还包括包含第一人抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3以及第二人抗体的轻链CDR1、CDR2和CDR3的抗体。
术语“人源化抗体”表示来自非人物种的抗体，其具有来自所述非人物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。人源化抗体可任选地进一步包含来源于CDR来源的非人物种的一个或多个框架残基。
术语“人抗体”或“完全人抗体”是指这样的抗体，其中重链和轻链的可变区和恒定区都是人来源的，或与人来源序列基本上相同，但不一定来自相同的抗体。
术语“分离的抗体”是指已经从其天然环境的组分中分离的抗体。例如，如通过本领域的方法测定的，分离的抗体已纯化至大于95％或99％的纯度(参见例如Flatman等人，2007,J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,848：79-87)，包括电泳(例如SDS-PAGE、等电聚焦、毛细管电泳)或色谱(例如离子交换或反相HPLC(高效液相色谱))方法。
术语“多核苷酸”或“核酸分子”是指包含核苷酸的聚合物。核酸分子的实例包括DNA、RNA、锁核酸(LNA)、互补DNA(cDNA)。
“多肽”理解为包括通过正常或修饰的肽键彼此连接的至少两个氨基酸的肽、寡肽、寡聚物或蛋白质，例如在等排肽的情况下。多肽可以由除遗传密码定义的20个氨基酸以外的氨基酸组成。多肽可同样由通过天然方法例如本领域技术人员熟知的翻译后成熟方法或通过化学方法修饰的氨基酸组成。这些修饰充分描述在文献中。这些修饰可以出现在多肽的任何位置：在肽骨架中、在侧链中或甚至在羧基或氨基末端。例如，多肽修饰被理解为包括：乙酰化，酰化，ADP-核糖基化，酰胺化，黄素的共价固定，血红素的共价固定，核苷酸或核苷酸衍生物的共价固定，脂质或脂质衍生物的共价固定，磷脂酰肌醇的共价固定，共价或非共价交联，环化，二硫键形成，脱甲基化，半胱氨酸形成，焦谷氨酸形成，甲酰化，γ-羧化，包括聚乙二醇化的糖基化，GPI锚形成，羟基化，碘化，甲基化，肉豆蔻酰化，氧化，蛋白水解过程，磷酸化，异戊烯化，外消旋化，seneloylation，硫酸化，如精氨酰化或泛素化的氨基酸添加。这些修饰充分描述在文献(Proteins Structure and Molecular Properties(1993)2nd Ed.,T.E.Creighton,New York；Post-translational Covalent Modifications ofProteins(1983)B.C.Johnson,Ed.,Academic Press,New York；Seifter et al.(1990)Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors,Meth.Enzymol.182:626-646and Rattan et al.,(1992)Protein Synthesis:Post-translationalModifications and Aging,Ann NY Acad Sci,663:48-62)中。
“分离的多核苷酸”或“分离的多肽”应理解为从人体分离或通过技术方法产生的如先前定义的多核苷酸或多肽。
术语“变体”可以应用于多核苷酸和/或多肽。例如，本文提及的肽或多肽的变体是指与参考肽序列基本上同源的肽或多肽，但其具有不同于参考序列的氨基酸序列，因为一个或多个氨基酸缺失、插入和/或取代。基本上同源是指与参考肽序列相同的变体氨基酸序列，除了少数氨基酸的缺失、插入和/或取代之外，例如1、2、3、4、5或6个氨基酸。基本上同源是指与参考氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的变体核酸序列。变体核酸序列可以与参考核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同。两条氨基酸序列或两条核酸序列的同一性可以通过目视检查和/或数学计算确定，或者更容易地通过使用用于序列比较的已知计算机程序比如Clustal包1.83版比较序列信息来更容易地确定。变体可以包含具有至少一个保守取代的氨基酸的序列，这意味着给定的氨基酸残基被具有相似的生理化学特性的残基替代。通常，应保守地进行原始多肽中存在的一个或多个氨基酸的取代。保守取代的实例包括一个脂肪族残基对另一个脂肪族残基的取代，例如Ile、Val、Leu或Ala对彼此的取代，或一个极性残基对另一个的取代，例如Lys和Arg；Glu和Asp；或Gln和Asn之间的取代。其他这样的保守取代，例如具有相似疏水性特征的整个区域的取代是公知的(Kyte,et al,1982,J.MoI.Biol.,157:105-131)。例如，“保守氨基酸取代”可以涉及非天然残基对天然氨基酸残基的取代，使得对该位置的氨基酸残基的极性或电荷几乎没有或没有影响。期望的氨基酸取代(无论是保守的还是非保守的)可以由本领域技术人员在需要这样的取代时确定。示例性氨基酸取代示于下表1中。术语“变体”还包括与参考肽序列基本上同源的肽或多肽，但其具有不同于参考序列的氨基酸序列，因为一个或多个氨基酸已被氨基酸类似物化学修饰或取代。该术语还包括糖基化多肽。
表1
术语“表位”包括能够特异性结合抗体或其抗原结合片段的任何抗原决定簇。在某些实施例中，表位决定簇包括分子的化学活性表面基团，例如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且在某些实施例中，可具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。表位是由抗体结合的抗原的区域。一些表位包含抗原的氨基酸序列的不连续区段，其中非连续氨基酸通过抗原的空间构型彼此靠近放置(“构象表位”)，或包含抗原氨基酸序列上的一段连续氨基酸序列(“线性表位”)。
如本文所用，术语抗体与靶抗原的“结合”或“结合”是指所述抗体与所述靶抗原(例如MMP9)或与包含由所述抗体识别的表位的所述靶抗原至少暂时的相互作用或缔合。
当用于抗体时，术语“选择性结合”、“特异性结合”、“特异性”表示抗体优先识别和/或结合靶多肽或表位，即具有比任何其他抗原或表位更高的亲和力，即与靶多肽的结合可以与对其他抗原的非特异性结合相区别。抗体的结合亲和力可以由本领域普通技术人员例如通过Scatchard分析(Scatchard et al.,1949,Ann.N.Y.Acad.1949.51,660-672)容易地确定。
如本文所用，“结合亲和力”通常是指表观缔合常数或“Ka”。Ka是解离常数“Kd”的倒数。结合亲和力可通过多种方法测定，包括平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共振或光谱学(例如使用荧光测定)。用于评价结合亲和力的示例性条件是在TRIS-缓冲液(50mM Tris-HCl，150mM NaCl，5mM CaCl2，pH7.5)中。这些技术可用于测量作为结合蛋白(或靶)浓度的函数的已结合蛋白和游离结合蛋白的浓度。已结合的结合蛋白的浓度([已结合])与游离结合蛋白的浓度([游离])和结合蛋白在靶上的结合位点的浓度相关，其中(N)是通过以下等式计算的每个靶分子的结合位点的数目：[已结合]＝N×([游离])/((1/Ka)+[游离])。可以建立两种抗体之间的亲和力的比较，而不实际确定每种抗体的Ka值，但基于与Ka成比例的亲和力的定量测量(例如通过ELISA或FACS分析)或亲和力的定性测量或亲和力的推断(例如在功能测定或体外或体内测定中)。
术语抗体的“阻断”或“中和”活性是指其抑制其靶活性的能力。应用于结合至MMP9的抗体时，该术语是指抗体通常通过抑制proMMP9的活化和/或通过抑制活化的MMP9对其底物之一如明胶的催化活性来中和MMP9活性的能力，例如如上实例部分所述。抗MMP9抗体的中和活性可以通过无细胞体外测定或体内测定或体外功能测定例如人癌细胞系侵袭测定来测定。在人癌细胞系侵袭小室测定中，癌细胞通过基底膜基质降解并迁移，从而模拟肿瘤细胞内渗在附近血管和外渗并侵入远端组织中的体内过程。
抗体的“效价”可以表示为在给定抗原浓度下产生半数最大效应的抗体/抗原结合片段的浓度。例如，抗体的“效应”可以是其靶活性的抑制或中和。在这种情况下，产生半数最大抑制的抗体浓度称为IC50，其以mol/l或M给出。效价通常受亲和力的影响，直到在给定抗原浓度下达到这样的亲和力，即亲和力的改善不再增强抗原的结合(所谓的效价上限)。用于针对MMP9的抗体，效价可以例如通过测量在抗体存在下明胶底物的MMP9依赖性消化的IC50值来确定。
用于中和抗体的术语“抑制效价”或“中和效价”是所述抗体在抑制特定生物或生物化学功能中的有效性的量度，其表示为生物或生物化学活性的潜在总抑制的百分比，其被归一化为100％。用于结合至MMP9的抗体，100％效价可以例如是抗体介导的对明胶底物的MMP9依赖性消化的总抑制。
本文使用的术语抗体“效应子功能”包括由抗体Fc区与Fc受体或配体的相互作用产生的生化事件。效应子功能包括FcγR介导的效应子功能例如ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)和ADCP(抗体依赖性细胞介导的吞噬作用)，和补体介导的效应子功能，例如CDC(补体依赖性细胞毒性)。可以通过改变，即增强或降低，优选增强抗体对效应分子(例如Fc受体或补体成分)的亲和力来改变抗体的效应子功能。抗体Fc区与Fc受体或配体的结合亲和力可以通过修饰效应分子结合位点而改变。还可能的是，针对效应分子的抗体上的结合位点的改变会改变相互作用的几何形状，而不显著改变总体结合亲和力，使得效应机制无效，如在非生产性结合中。还可以通过修饰不直接参与效应分子结合但以其他方式参与效应子功能的表现的位点来改变效应子功能。通过改变抗体的效应子功能，可以控制免疫应答的各个方面，例如，增强或抑制免疫系统的各种反应，在诊断和治疗中可能具有有益效果。
术语“药学上可接受的”是指由非生物学或其他方面不期望的材料构成的载体。
术语“载体”是指存在于药物制剂中而不是活性剂的任何组分，因此包括稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、填充剂、着色剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、防腐剂等。
如本文所用，“治疗”和“治疗”等通常是指获得期望的药理学和生理学效果。该效果在预防或部分预防疾病、其症状或病症方面可以是预防性的和/或在部分或完全治愈疾病、病症、症状或归因于该疾病的不良作用方面可以是治疗性的。本文所用的术语“治疗”涵盖对哺乳动物特别是人的疾病的任何治疗，包括：(a)预防疾病发生在可能易患疾病但尚未诊断为患病(例如基于家族史的个体)中；(b)抑制疾病，即阻止其发展；或(c)缓解疾病，即，使疾病和/或其症状或病症消退，例如改善或修复损伤。例如，炎性肠病的治疗包括预防、减少或甚至根除疾病或病症的症状，例如部分或完全缓解腹泻、腹痛和痉挛、粪便中的血液、脓肿、溃疡和瘘。
如本文所定义的“MMP9相关疾病”表示至少部分由MMP9的表达和/或活性介导或影响的疾病。MMP9相关疾病的实例包括炎症和自身免疫性疾病、癌症或肿瘤、肺部疾病、纤维化疾病如纤维化肺病、败血病、肌营养不良、变态反应、肾纤维化、硬皮病、扩张型心肌病、查加斯病、心血管疾病、神经精神疾病、糖尿病和眼部疾病。
术语“炎症和自身免疫性疾病”在本文中通常定义为炎症异常，其可以涉及或可以不涉及免疫系统和由个体身体分别对通常存在于体内的物质和组织的异常免疫应答引起的疾病或病症。炎症和自身免疫性疾病的非限制性实例包括：主要包括克罗恩病(CD)(特别是渗透性和限制性克罗恩病)的炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎(UC)、不确定性结肠炎、胶原性结肠炎、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、系统性硬化、多发性肌炎、动脉粥样硬化。
术语“炎性肠病”(IBD)在本文中定义为涉及全部或部分消化道的慢性炎症的疾病。IBD的非限制性实例包括克罗恩病，特别是非渗透性和限制性克罗恩病、渗透性和限制性克罗恩病、以及排斥克罗恩病、溃疡性结肠炎(UC)、不确定性结肠炎、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎和肠纤维化。克罗恩病(CD)被定义为具有可能涉及从口到肛门的GI道的任何部分的多节段性病变的疾病。溃疡性结肠炎是限于结肠的粘膜炎症的疾病。
如本文所定义的术语“癌症”或“肿瘤”是涉及异常细胞生长的疾病，其具有侵入或扩散到身体其他部分的可能性。术语“癌症”是指例如但不限于：造血系统癌、脑癌、乳腺癌、结肠直肠癌、头颈癌、胰脏癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、前列腺癌、肌肉癌、间质癌、食管胃腺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌、胃腺癌、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、肝细胞癌和结肠直肠癌。
术语“肺部疾病”表示例如但不限于哮喘、如特发性肺病的纤维化肺部疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)和鼻炎的疾病。
术语“纤维化疾病”在本文中定义为这样的疾病，其中受影响的组织在炎症或受损组织中和周围存在纤维结缔组织(细胞外基质的组分，例如胶原和纤连蛋白)的过度积累，这可导致永久性瘢痕、器官功能障碍和最终的死亡，如终末期肝病、肾病、特发性肺纤维化(IPF)和心力衰竭中所见。纤维化疾病的非限制性实例包括系统性硬化、多灶性纤维硬化、骨髓移植受体中的硬皮病性移植物抗宿主病、肾源性系统性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、骨髓纤维化和系统红斑狼疮。
术语“眼部病症”或“眼部疾病”在本文中定义为与视网膜色素上皮细胞和光受体的进行性变性相关的眼睛疾病，导致视力丧失或/和与视网膜的血管损伤有关的眼睛疾病。眼部病症的非限制性实例包括晶状体的纤维化病状、角膜疾病、糖尿病性视网膜病变、“干性”或“湿性”年龄相关性黄斑变性、增生性玻璃体视网膜病变、白内障形成、翼状胬肉、圆锥形角膜、年龄相关性黄斑变性和糖尿病视网膜病变。
术语“心血管疾病”在本文中定义为涉及炎症、改变的组织重塑伴随胶原增加和心肌梗塞中纤维化瘢痕积累的心血管系统疾病。心血管疾病的非限制性实例包括高血压、肺动脉高压、肺部或三尖瓣病、主动脉和二尖瓣病、主动脉缩窄、动脉粥样硬化、心肌梗塞、心力衰竭、缺血性心肌病、扩张型心肌病、慢性心律失常、心脏纤维化和冠状动脉疾病。
术语“神经病症”或“神经精神障碍”在本文中定义为以神经元功能障碍和神经元细胞死亡为特征的疾病，其导致不可治愈的并且通常是致命的功能缺陷。神经病症的非限制性实例包括肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默病、多发性硬化、神经炎症、脑缺血和神经性疼痛。
本文使用的术语“个体”是指哺乳动物。例如，本发明考虑的哺乳动物包括人、灵长类动物、驯养动物，如牛、绵羊、猪、马，实验室啮齿动物等。
根据本发明的治疗或方法的术语“效力”可以基于响应于根据本发明的用途或方法的疾病或病症过程中的变化来测量。例如，根据本发明的治疗或方法的功效可以通过其对疾病的体征或症状的影响来测量。当患者经历部分或全部缓解或减少不希望的疾病症状时，实现响应。
本文所用的术语“有效量”是指根据本发明的至少一种抗体或其药物制剂的量，其引起施用所述抗体的个体中疾病的症状的可检测的减少，这些症状可包括例如：a)腹泻、腹痛和痉挛，粪便中的血液，脓肿，溃疡和瘘，在炎性肠病的情况下，或b)便秘或腹泻，粪便中的鲜红色或深红色血液，体重减轻，疲劳，恶心和贫血，在结肠直肠癌的情况下。
MMP9结合蛋白
MMP9结合蛋白的一般特征
在第一方面，本发明提供结合至MMP9，特别是结合至人MMP9或其片段，并且包含如本文所述的抗体的重链可变区的至少一个片段和/或轻链可变区的至少一个片段的蛋白质或其片段。
在本发明的一个实施例中，提供了对MMP9，特别是人MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区的至少一个片段和轻链可变区的至少一个片段，以及任选地恒定区的至少一个片段，如本文所述。
在本发明的一个备选实施例中，提供了对MMP9，特别是人MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于它们与MMP9上的表位结合，如本文所述。
根据本发明的抗体或其片段结合的蛋白质可以是任何物种的MMP9蛋白质。
根据本发明的抗体通常对人MMP9表现出高特异性。然而，取决于不同物种的MMP9同源物之间的序列同一性程度(参见图2)，给定抗体或抗原结合片段可以显示与来自至少一种其他物种例如小鼠、大鼠、狨猴、猴(例如食蟹猴)、狗和/或兔的MMP9的交叉反应性。对于针对人MMP9的抗体，在某些情况下，例如当在特定疾病的动物模型中测试抗体或用于进行毒理学、安全性和剂量研究时，可能需要与其他哺乳动物形式的MMP9的一定水平的交叉反应性。
在具体的实施例中，根据本发明的抗体或其片段优先结合人MMP9。
在另一个实施例中，根据本发明的抗体或其片段显示与人MMP9、食蟹猴MMP9、大鼠MMP9和任选的小鼠MMP9的交叉反应性。
在一些实施例中，根据本发明的抗体及其片段对人MMP9的结合亲和力(例如与Kd值逆相关)高于其对非人MMP9的结合亲和力的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍。
在一个实施例中，根据本发明的抗体或其片段优先结合MMP9，并且任选地另外显示与其他基质金属蛋白酶(MMP)例如MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13、MMP14、MMP16、MMP17、MMP19的弱结合或几乎没有结合(即，可忽略或不可检测的结合)。
在一个具体的实施例中，根据本发明的抗体或其片段优先结合MMP9，并显示出与MMP2的弱结合或几乎没有(即，可忽略的或不可检测的)结合。
对于治疗用途，可能有利的是根据本发明的抗体或其片段不结合MMP2，因此不中和MMP2，从而基本上不影响MMP2活性。事实上，MMP2是正常组织稳态所需的，并且还可以具有针对疾病的保护作用，如通过观察所提示的，根据该观察，在几种疾病模型中MMP2敲除小鼠显示出比野生型小鼠更恶化的表型(Grag et al.,2006,J.Immunol.,177(6):4103-12)。
在一些实施例中，根据本发明的抗体及其片段对MMP9的结合亲和力(例如与平衡解离常数Kd值逆相关)高于它们对MMP2的结合亲和力的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍。
结合亲和力可以通过本领域已知的任何方法测量，包括平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共振或光谱学(例如使用荧光测定)(Jiang et al.BMCPharmacology 2010,10:10)，可以表示为例如结合速率、解离速率、解离常数(Kd)、平衡常数(Keq)或本领域中使用的任何其他术语。
在一些实施例中，根据本发明的抗体及其片段以等于或低于100nM，特别是低于10nM，更特别是低于1nM，或低于0.5nM，或低于0.1nM，或低于0.01nM，或低于0.005nM的解离常数(Kd)特异性结合至人MMP9。
根据本发明的抗体或其片段结合的蛋白质是任何形式的MMP9：包含分泌前导序列(“前原酶”)的未成熟蛋白(在人MMP9的情况下，对应于SEQ ID NO：1的残基1-707)，缺少分泌前导序列(“原酶”)(在人MMP9的情况下，对应于SEQ ID NO：1的残基20-707)的成熟潜在MMP9，“活化酶”(在人MMP9的情况下，对应于SEQ ID NO：1的残基107-707)或MMP9的任何片段。
根据本发明的抗体或其片段可以通过与包含位于蛋白质任何位置例如前结构域、催化结构域特别是在Fn重复序列或OG结构域连接体中的氨基酸的表位相互作用而结合MMP9，识别的氨基酸位于蛋白质内的一个或多个位点。
在一个具体的实施例中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段通过与包含位于MMP9特别是人MMP9的催化结构域中的氨基酸的表位相互作用而结合MMP9。
在一个更具体的实施例中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段通过与包含由SEQ ID NO：41组成的区域内的至少一个氨基酸、由SEQ ID NO：42组成的区域内的至少一个氨基酸以及由SEQ ID NO：43组成的区域内的至少一个氨基酸的表位相互作用而结合MMP9，这些区域位于人MMP9的催化结构域中。
在另一个更具体的实施例中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段通过与包含由SEQ ID NO：41组成的区域内的氨基酸、由SEQ ID NO：42组成的区域内的氨基酸和由SEQ IDNO：43组成的区域内的氨基酸的表位相互作用而结合MMP9，这些区域位于人MMP9的催化结构域中。
在又一个具体的实施例中，根据本发明的抗体或其抗原结合片段通过与包含由SEQ ID NO：41组成的区域的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个氨基酸、由SEQ ID NO：42组成的区域的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个氨基酸和由SEQ ID NO：43组成的区域的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个氨基酸的表位相互作用而结合MMP9，这些区域位于人MMP9的催化结构域中。
因此，在一个实施例中，根据本发明的抗体或其片段不仅结合至MMP9，而且通过抑制前原酶和/或原酶至催化活性酶的加工和/或通过抑制活化的酶的蛋白水解活性而中和或抑制MMP9活性(例如MMP9催化活性)。
在一个具体的实施例中，根据本发明的抗体或其片段不仅结合MMP9，而且通过抑制活化的MMP9酶的蛋白水解活性中和或抑制MMP9活性(例如MMP9催化活性)。
在一个具体的实施例中，根据本发明的抗体对人MMP9显示高特异性和抑制活性，并且可以显示与食蟹猴(Macaca fascicularis)MMP9、大鼠MMP9和/或小鼠MMP9的交叉反应性。
在一个具体的实施例中，根据本发明的抗体或其片段抑制MMP9活性，并且任选地还显示出对其他基质金属蛋白酶(MMP)例如MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13、MMP14、MMP16、MMP17、MMP19的弱抑制活性或几乎没有抑制活性(即，可忽略或不可检测的活性)。
在一个具体的实施例中，根据本发明的抗体或其片段对MMP9显示中和活性，并且对MMP2显示弱的中和活性或几乎没有(即可忽略的或不可检测的)中和活性。
抗体阻断或中和其靶蛋白的活性的能力可以通过其如本文定义的效价来评价，其本身例如通过IC50值反映。通常，抗MMP9抗体的中和活性可以通过无细胞体外测定，或体内测定或体外功能测定例如人癌细胞系侵袭测定来测定。在人癌细胞系侵袭小室测定中，癌细胞通过基底膜基质降解并迁移，从而模拟肿瘤细胞在附近血管内渗和外渗并侵入远端组织中的体内过程。
在一些实施例中，根据本发明的抗体及其片段对人MMP9的抑制或中和效价(例如，与IC50值逆相关)高于它们对非人MMP9的中和效价的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍。
在一些实施例中，根据本发明的抗体及其片段对MMP9的抑制或中和效价，例如与IC50值逆相关，高于其对MMP2的抑制或中和效价的至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍。
在一些实施例中，根据本发明的抗体及其片段具有等于或低于100nM，特别是低于50nM，更特别是低于20nM，低于10nM，低于8nM，低于7nM，低于6nM，低于5nM，低于4nM，低于3nM，低于2nM，低于1nM，低于0.5nM，低于0.3nM，低于0.2nM，或低于0.1nM的IC50；用于抑制MMP9对明胶的催化活性。
抗体阻断或中和其靶蛋白的活性的能力也可以通过其如本文所定义的抑制效力来评价，其本身例如由抑制值的百分比(％)反映。
在一些实施例中，根据本发明的抗体及其片段具有等于或高于50％，特别是等于或高于60％，特别是等于或高于70％，特别是等于或高于80％，特别是等于或高于90％，特别是等于或高于95％，特别是等于100％的功效，用于抑制前原酶和/或原酶的加工和/或抑制活化的MMP9的蛋白水解活性，例如在如实例部分所述的测量MMP9对明胶的催化活性的测定中确定。
在一个具体的实施例中，根据本发明的抗体及其片段具有等于或高于50％，特别是等于或高于60％，特别是等于或高于70％的功效，特别是等于至高于或高于80％，特别是等于或高于90％，特别是等于或高于95％，特别是等于100％的功效，用于抑制活化的MMP9的蛋白水解活性，例如在如实例部分所述的测量MMP9对明胶的催化活性的测定中确定。
应当理解，本文描述的根据本发明的抗体或其片段的任何变体能够结合MMP9并任选地中和MMP9活性。在一个具体的实施例中，相比于所述变体衍生的亲本抗体或片段，这种变体可以显示与MMP9相同或甚至更高的结合亲和力和/或对MMP9相同或甚至更高的效价和/或相同或更高的物种选择性和/或对MMP9相同或更高的选择性，和/或相同或更高的中和功效。
本发明的抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体和进一步改造的抗体，只要保留本发明的特征性质，特别为结合靶抗原的能力，更特别为结合与本发明的抗体所识别的相同的MMP9表位，以及任选地中和MMP9活性的能力。
在本发明的一个具体的实施例中，特异性结合MMP9的根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段是单克隆抗体。
在本发明的另一个具体的实施例中，特异性结合MMP9的根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段是人抗体。
特异性结合MMP9的根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段的特征在于它们的部分与靶蛋白相互作用，特别是通过它们的可变区，其通常包含重链可变区和轻链可变区。
MMP9结合蛋白相对于其重链可变区的特征
在一个实施例中，本发明涉及对MMP9或其抗原结合片段有特异性的包含重链可变区的分离的抗体，该重链可变区包含：
(i)SEQ ID NO：2的重链CDR1或其变体，其中所述重链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：3的重链CDR2或其变体，其中所述重链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：4的重链CDR3或其变体，其中所述重链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在本发明的一个具体的实施例中，所述重链CDR2的位置53和61处的至少一个氨基酸和/或所述重链CDR3的位置100J的一个氨基酸被不同的氨基酸取代，特别是具有以下取代的至少一个：N53Q或N53R、D61E、M100JI。
在本发明的一个具体的实施例中，所述重链CDR2的位置53、61和62处的至少一个氨基酸和/或所述重链CDR3的位置100L处的一个氨基酸被不同的氨基酸取代，特别是具有以下取代中的至少一个：N53Q、N53R、N53K、N53H、D61E、S62T、M100LI或M100LL。
在本发明的另一个具体的实施例中，所述重链CDR2变体具有选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9的氨基酸序列。
在本发明的另一个具体的实施例中，所述重链CDR2变体具有选自SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50和SEQ ID NO：51的氨基酸序列。
在本发明的另一个具体的实施例中，所述重链CDR3变体具有氨基酸序列SEQ IDNO：10。
在本发明的另一个具体的实施例中，所述重链CDR3变体具有氨基酸序列SEQ IDNO：52。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12或其变体的重链可变区，其中SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20和高达25个氨基酸被不同的氨基酸取代，或其变体分别与SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％的同一性。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11或其变体的重链可变区，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20和高达25个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述重链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11或其变体的重链可变区，其中1、2、3、4个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述重链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11或其变体的重链可变区，其中2个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述重链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11的重链可变区，其中2个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述重链可变区是SEQ ID NO：12。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11或其变体的重链可变区，其中3个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述重链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11的重链可变区，其中3个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述重链可变区是SEQ ID NO：48。
在另一个实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的变体，其中重链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸和/或重链可变框架区的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在另一个实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的变体，其中重链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸和/或重链可变框架区的11、12、13、14或15个氨基酸被不同的氨基酸取代。
特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：11的变体，其中重链CDR2的位置53和61处的至少一个氨基酸、重链CDR3的位置100J处和重链可变框架区的位置84和89处被不同的氨基酸取代，特别是具有以下取代中的至少一个：N53Q、N53R、D61E、M100JI、D84A和V89L。
特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：11的变体，其中重链CDR2的位置53、61和62处的至少一个氨基酸、重链CDR3的位置100L处的至少一个氨基酸和重链可变框架区的位置84和89处被不同的氨基酸取代，特别是具有以下取代中的至少一个：N53Q、N53R、N53K、N53H、D61E、S62T、D84A、V89L、M100LL和M100LI。
更特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：11的变体，其中重链可变框架区的位置84和89处的氨基酸、重链CDR2的位置53和61处的至少一个氨基酸和重链CDR3的位置100J处被不同的氨基酸取代，特别是具有D84A和V89L取代以及以下取代中的至少一个：N53Q、N53R、D61E和M100JI。
特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：11的变体，其中重链CDR2的位置53、61和62处的至少一个氨基酸、重链CDR3的位置100L处的至少一个氨基酸以及重链可变框架区的位置30、84和89处被不同的氨基酸取代，特别是具有以下取代中的至少一个：N53Q、N53R、N53K、N53H、D61E、S62T、M100LL、M100LI、N30D、D84A和V89L。
包含在根据本发明的抗体或其片段中的重链可变区的具体实例包括：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：11
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：12
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：13
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：14
(v)氨基酸序列SEQ ID NO：15
(vi)氨基酸序列SEQ ID NO：16。
包含在根据本发明的抗体或其片段中的重链可变区的替代性具体实例包括：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：17
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：18
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：19
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：20。
包含在根据本发明的抗体或其片段中的重链可变区的替代性具体实例包括：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：48
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：53
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：54
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：55
(v)氨基酸序列SEQ ID NO：56。
MMP9结合蛋白相对于其轻链可变区的特征
在一个实施例中，本发明涉及对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含如上所述的重链可变区，并且还包含轻链可变区，该轻链可变区包含：
(i)SEQ ID NO：21的轻链CDR1或其变体，其中所述轻链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：22的轻链CDR2或其变体，其中所述轻链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：23的轻链CDR3或其变体，其中所述轻链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在本发明的一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25或其变体的轻链可变区，其中SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、高达22或高达25个氨基酸被不同的氨基酸取代，或其变体分别与SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％的同一性。
在本发明的一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67或其变体的轻链可变区，其中SEQ ID NO：67的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、高达22或高达25个氨基酸被不同的氨基酸取代，或其变体与SEQ ID NO：67具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％的同一性。
在另一个实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25的变体，其中轻链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸，和/或轻链可变框架区的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在另一个实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的变体，其中轻链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸，和/或轻链可变框架区的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67或其变体的轻链可变区，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20和至多25个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67或其变体的轻链可变区，其中1、2、3、4个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67或其变体的轻链可变区，其中1个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的轻链可变区，其中1个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述轻链可变区是SEQ ID NO：68。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67或其变体的轻链可变区，其中3个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：67的轻链可变区，其中3个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述轻链可变区是SEQ ID NO：57。
在另一个实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25的变体，其中轻链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸，和/或轻链可变框架区的11、12、13、14或15个氨基酸被不同的氨基酸取代。
特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：24的变体，其中至少轻链可变框架区的位置104处的氨基酸被不同的氨基酸取代，特别是至少具有取代V104L。
根据本发明的抗体或其片段中包含的可变区的一个具体实例包括氨基酸序列SEQID NO：25。
特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：67的变体，其中轻链框架区的位置104处的氨基酸被不同的氨基酸取代，特别是至少具有以下取代V104L。
根据本发明的抗体或其片段中包含的可变区的一个具体实例包括氨基酸序列SEQID NO：68。
特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：67的变体，其中轻链框架区的46、71和104处的至少三个氨基酸被不同的氨基酸取代，特别是至少具有以下取代：V46L、V71A和V104L。
根据本发明的抗体或其片段中包含的可变区的一个具体实例包括氨基酸序列SEQID NO：57。
在一个替代实施例中，本发明涉及对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含如上所述的重链可变区，并且还包含轻链可变区，该轻链可变区包含：
(i)SEQ ID NO：26的轻链CDR1或其变体，其中所述轻链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：27的轻链CDR2或其变体，其中所述轻链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：28的轻链CDR3或其变体，其中所述轻链CDR3的、,2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在本发明的一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30或其变体的轻链可变区，其中SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、高达22或高达25个氨基酸被不同的氨基酸取代，或其变体与SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30分别具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％的同一性。
在本发明的一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69或其变体的轻链可变区，其中SEQ ID NO：69的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、高达22或高达25个氨基酸被不同的氨基酸取代，或其变体与SEQ ID NO：69具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％的同一性。
在另一个实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30的变体，其中轻链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸，和/或轻链可变框架区的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在另一个实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：30的变体，其中轻链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸，和/或轻链可变框架区的11、12、13、14或15个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69或其变体的轻链可变区，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20和高达25个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69或其变体的轻链可变区，其中3、4、5、6、7、8个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69或其变体的轻链可变区，其中4个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的轻链可变区，其中4个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述轻链可变区是SEQ ID NO：58。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69或其变体的轻链可变区，其中5个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的轻链可变区，其中5个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述轻链可变区选自SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：61。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：29或其变体的轻链可变区，其中6个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：29的轻链可变区，其中6个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述轻链可变区是SEQ ID NO：30。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69或其变体的轻链可变区，其中6个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的轻链可变区，其中6个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述轻链可变区选自SEQ ID NO：62和SEQ ID NO：70。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69或其变体的轻链可变区，其中7个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述氨基酸包含在所述轻链可变区的框架区内。
在本发明的另一个具体的实施例中，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：69的轻链可变区，其中7个氨基酸被不同的氨基酸取代，其中所述轻链可变区是SEQ ID NO：63。
特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：29的变体，其中轻链可变框架区的位置8、19、47、60、79和81处的至少一个氨基酸被不同的氨基酸取代，特别是具有以下取代中的至少一个：R8A、V19I、L47M、T60N、L79Q和A81E。
根据本发明的抗体或其片段中包含的可变区的一个具体实例包括氨基酸序列SEQID NO：30。
特别地，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其片段包含SEQ ID NO：69的变体，其中轻链可变框架区的位置8、19、47、60、79、81、86处的至少一个氨基酸被不同的氨基酸取代，特别是具有以下取代中的至少一个：R8A、V19I、L47M、T60N、L79Q、A81E和F86Y。
根据本发明的抗体或其片段中包含的可变区的一个具体实例包括氨基酸序列SEQID NO：70。
包含在根据本发明的抗体或其片段中的轻链可变区的具体实例包括：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：24，
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：25，
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：29，
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：30，
(v)氨基酸序列SEQ ID NO：57，
(vi)氨基酸序列SEQ ID NO：58，
(vii)氨基酸序列SEQ ID NO：59，
(viii)氨基酸序列SEQ ID NO：60，
(ix)氨基酸序列SEQ ID NO：61，
(x)氨基酸序列SEQ ID NO：62，
(xi)氨基酸序列SEQ ID NO：63，
(xii)氨基酸序列SEQ ID NO：67，
(xiii)氨基酸序列SEQ ID NO：68，
(xiv)氨基酸序列SEQ ID NO：69，
(xv)氨基酸序列SEQ ID NO：70。
MMP9结合蛋白相对于其恒定区的特征
对应于抗体的恒定区的部分任选地包含在根据本发明的对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段中。
根据所提出的抗体功能，特别是可能需要的效应子功能，抗体的恒定区可存在或不存在于本发明的抗体内。
通常，当存在于本发明的抗体或其抗原结合片段内时，重链恒定区或其部分可以来自任何抗体同种型。例如，重链恒定区或其部分可以选自IgG(例如IgG1，IgG2，IgG3，IgG4)、IgA(例如IgA1，IgA2)、IgD、IgE、IgM(例如IgM1，IgM2)的抗体。特别地，它可以是IgG，更特别是IgG4的恒定区或其部分。
特别地，当抗体分子旨在用于治疗用途并且需要抗体效应子功能时，可以使用人IgG恒定区结构域，特别是IgG1和IgG3同种型的恒定区结构域。或者，当抗体分子旨在用于治疗目的但不需要抗体效应子功能时，可以使用IgG2和IgG4同种型，例如用来简单地阻断MMP9活性。
应当理解，也可以使用这些恒定区结构域的序列变体。例如，重链恒定区或其部分可以是IgG4的工程化变体，例如包含S228P、R409K且缺失末端赖氨酸的IgG4变体，其对应于氨基酸序列SEQ ID NO：40。
当存在于本发明的抗体或其抗原结合片段内时，轻链恒定区或其部分可以来自任何轻链的恒定区。例如，轻链恒定区或其部分可以来自κ或λ轻链。
在本发明的特定方面，对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含(i)至少一条重链，其包含本文所述的可变区和来自IgG抗体的恒定区或其部分的，以及(ii)至少一条轻链，其包含如本文所述的可变区和来自λ(特别是λ2)轻链的恒定区或其部分。
在一个具体的实施例中，根据本领域已知的方法，包含在根据本发明的抗体中的重链和/或轻链的恒定区或其部分具有与其原始氨基酸序列相比已被修饰的氨基酸序列，以增加抗体的化学稳定性，减少它们的聚集，增加它们的产量，特别是在抗体产生细胞(例如HEK293细胞，CHO细胞)中的产量，和/或消除它们交换半分子的能力，该半分子将有效地产生单价抗体。
影响抗体稳定性的抗体恒定区的氨基酸序列中的氨基酸的实例包括人IgG4重链中的S228P氨基酸突变(EU编号)，其稳定抗体的铰链结构域(Angal et al,1993,Molec.Immunol.30:105-108)并避免Fc-Fc相互作用(Rispens et al.,2013,Mol.Immunol.53:35-42)，Lys(K)而不是同种异型位置409(EU编号)的Arg(R)，其增加IgG4中CH3-CH3相互作用的强度(Allberse et al,2002,Immunology 105:9-19)，这些实例通过引用并入本文。此外，为了简化单克隆抗体电荷异质性的监测，可以除去人IgG4重链的C末端赖氨酸。
在另一个实施例中，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含至少一条重链，其包含本文所述的可变区和来自IgG4抗体的恒定区或其部分，其中IgG4恒定区的氨基酸序列包含以下氨基酸修饰：S228P(EU编号)、R409K(EU编号)、末端Lys(K)的缺失，其中所述修饰的恒定区由SEQ ID NO：40表示。
在另一个实施例中，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段包含至少一条轻链，其包含本文所述的可变区和来自IgG4抗体的恒定区或其部分，其中所述恒定区由SEQ ID NO：66表示。
从上文得出，本发明特别提供了对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)重链可变区，其包含：
(i)SEQ ID NO：2的重链CDR1或其变体，其中所述重链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：3的重链CDR2或其变体，其中所述重链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：4的重链CDR3或其变体，其中所述重链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；和
(2)轻链可变区，其包含：
(i)SEQ ID NO：21的轻链CDR1或其变体，其中所述轻链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：22的轻链CDR2或其变体，其中所述轻链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：23的轻链CDR3或其变体，其中所述轻链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在另一个实施例中，本发明提供了对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)重链可变区，其包含：
(i)SEQ ID NO：2的重链CDR1或其变体，其中所述重链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：3的重链CDR2或其变体，其中所述重链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：4的重链CDR3或其变体，其中所述重链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；和
(2)轻链可变区，其包含：
(i)SEQ ID NO：26的轻链CDR1或其变体，其中所述轻链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：27的轻链CDR2或其变体，其中所述轻链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：28的轻链CDR3或其变体，其中所述轻链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在本发明的另一个具体的实施例中，所述重链CDR2变体具有选自SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9的氨基酸序列。
在本发明的另一个具体的实施例中，所述重链CDR2变体具有选自SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50和SEQ ID NO：51的氨基酸序列。
在本发明的另一个具体的实施例中，所述重链CDR3变体具有氨基酸序列SEQ IDNO：10。
在本发明的另一个具体的实施例中，所述重链CDR3变体具有氨基酸序列SEQ IDNO：52。
本发明的抗体具有至少一个抗原结合位点，例如一个或两个抗原结合位点。在某些实施例中，例如对于包含CDR的肽，可变结构域可以仅包含通过短连接肽而不是完整框架区连接的CDR。
在一些实施例中，根据本发明的分离的抗体及其抗原结合片段是糖基化的。通常，诸如N-乙酰葡糖胺、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖、唾液酸等的单糖在抗体上的单个糖基化位点组装成寡糖。
本领域技术人员将理解，本发明的一个方面涉及对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于一些本文描述的特征，而不必包括所有所述特征。
例如，在一个方面提供了对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于本文描述的关于其可变区和/或恒定区的序列的任何特征。
在所述方面的一个具体的实施例中，所述抗体或其片段的特征还在于它们通过与本文所述的MMP9上的表位相互作用而与MMP9结合，特别是与包含由SEQ ID NO：41组成的区域内的至少一个氨基酸、由SEQ ID NO：42组成的区域内的至少一个氨基酸和由SEQ ID NO：43组成的区域内的至少一个氨基酸的表位相互作用，这些区域位于人MMP9的催化结构域中。
在另一方面，提供了对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其特征在于它们通过与本文所述的MMP9上的表位相互作用，特别是与包含由SEQ ID NO：41组成的区域内的至少一个氨基酸、由SEQ ID NO：42组成的区域内的至少一个氨基酸和由SEQ ID NO：43组成的区域内的至少一个氨基酸的表位相互作用，这些区域位于人MMP9的催化结构域中。
在所述可选方面的一个具体的实施例中，所述抗体或其片段的特征还在于本文描述的关于其可变区和/或恒定区的序列的任何特征。
对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段的实例
根据本发明的抗体及其片段的实例包括包含表2所示可变结构域的那些(也参见图3、4、5)。
表2
因此，在具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：11的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：13的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：14的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：15的氨基酸序列
(vi)SEQ ID NO：16的氨基酸序列
(vii)SEQ ID NO：17的氨基酸序列
(viii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(ix)SEQ ID NO：19的氨基酸序列
(x)SEQ ID NO：20的氨基酸序列
(xi)SEQ ID NO：48的氨基酸序列
(xii)SEQ ID NO：53的氨基酸序列
(xiii)SEQ ID NO：54的氨基酸序列
(xiv)SEQ ID NO：55的氨基酸序列
(xv)SEQ ID NO：56的氨基酸序列，和
(2)选自以下的轻链可变区：
(i)SEQ ID NO：24的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：25的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：29的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：30的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：57的氨基酸序列
(vi)SEQ ID NO：58的氨基酸序列
(vii)SEQ ID NO：59的氨基酸序列
(viii)SEQ ID NO：60的氨基酸序列
(ix)SEQ ID NO：61的氨基酸序列
(x)SEQ ID NO：62的氨基酸序列
(xi)SEQ ID NO：63的氨基酸序列
(xii)SEQ ID NO：67的氨基酸序列
(xiii)SEQ ID NO：68的氨基酸序列
(xiv)SEQ ID NO：69的氨基酸序列
(xv)SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
因此，在具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：11的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：13的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：14的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：15的氨基酸序列
(vi)SEQ ID NO：16的氨基酸序列
(vii)SEQ ID NO：17的氨基酸序列
(viii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(ix)SEQ ID NO：19的氨基酸序列
(x)SEQ ID NO：20的氨基酸序列
(xi)SEQ ID NO：48的氨基酸序列
(xii)SEQ ID NO：53的氨基酸序列
(xiii)SEQ ID NO：54的氨基酸序列
(xiv)EQ ID NO：55的氨基酸序列
(xv)SEQ ID NO：56的氨基酸序列，和
(2)选自以下的轻链可变区：
(i)SEQ ID NO：57的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：58的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：59的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：60的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：61的氨基酸序列
(vi)SEQ ID NO：62的氨基酸序列
(vii)SEQ ID NO：63的氨基酸序列
(viii)SEQ ID NO：67的氨基酸序列
(ix)SEQ ID NO：68的氨基酸序列
(x)SEQ ID NO：69的氨基酸序列
(xi)SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
因此，在具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：17的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：19的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：20的氨基酸序列，和
(2)选自以下的轻链可变区：
(i)SEQ ID NO：68的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
因此，在具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：20的氨基酸序列，和
(2)SEQ ID NO：68的轻链可变区氨基酸序列。
因此，在具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：17的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：19的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：20的氨基酸序列，和
(2)SEQ ID NO：70的轻链可变区氨基酸序列。
因此，在具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：11的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：13的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：14的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：15的氨基酸序列
(vi)SEQ ID NO：16的氨基酸序列
(2)选自以下的轻链可变区：
(i)SEQ ID NO：24的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：25的氨基酸序列。
在另一个具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：17的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：19的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：20的氨基酸序列，和
(2)选自以下的轻链可变区：
(i)SEQ ID NO：24的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：25的氨基酸序列。
更具体地，根据本发明的对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段可以包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：20的氨基酸序列，和
(2)氨基酸序列SEQ ID NO：25的轻链可变区。
在另一个具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：11的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：13的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：14的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：15的氨基酸序列
(vi)SEQ ID NO：16的氨基酸序列，和
(2)选自以下的轻链可变区：
(i)SEQ ID NO：29的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：30的氨基酸序列。
在另一个具体的实施例中，根据本发明的MMP9结合蛋白包括对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：17的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：19的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：20的氨基酸序列，和
(2)选自以下的轻链可变区：
(i)SEQ ID NO：29的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：30的氨基酸序列。
更具体地，根据本发明的对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段可以包含：
(1)选自以下的重链可变区：
(i)SEQ ID NO：17的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：19的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：20的氨基酸序列，和
(2)氨基酸序列SEQ ID NO：30的轻链可变区。
更具体地，根据本发明的对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段可以包含SEQ ID NO：19的重链可变区和SEQ ID NO：70的轻链可变区。
包含辅助分子的缀合物
在本发明的另一方面，根据本发明的分离的抗体或其抗原结合片段任选地与辅助分子缀合，并且在本文中也称为“缀合的抗体”或“缀合的抗体片段”。
辅助分子可以直接或经由合适长度的间隔物与抗体或抗体片段缀合，例如如Kellogg et al.,2011,Bioconjug Chem,22:717–27中所述。
在特别适用于治疗目的的一个实施例中，辅助分子可以是治疗性效应基团，例如细胞毒性剂(例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)、细胞生长抑制剂或免疫调节剂，包括放射性基团(即，包含放射性核苷或放射性同位素的基团)或小分子。
在另一个实施例中，辅助分子包含抗体的抗原结合片段，当与根据本发明的抗体或抗体片段缀合时，其形成双特异性抗体。特别地，所述双特异性抗体可以针对两种不同的MMP或一种MMP的两个不同表位，例如MMP9的两个不同表位。
在一个具体的实施例中，辅助分子可以是例如对治疗疾病有活性的药剂，如用于治疗克罗恩病：抗TNFα抗体的可变区，当缀合至本发明的抗体或抗原结合片段时，其可以形成用于治疗患有中度至重度克罗恩病的个体的双特异性抗TNFα/MMP9抗体。
根据本发明的缀合的抗体和缀合的抗体片段可以将药物在体内靶向至疾病部位(例如炎症或肿瘤部位)，使得缀合的辅助分子可以对疾病部位具有治疗效果。
在特别适用于诊断目的的备选实施例中，辅助分子可以是例如，包括放射性同位素(例如3H、14C、32P、35S、125I)，显色标记物，例如可以用于将底物转化为可检测的有色(例如辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶)或荧光化合物(例如绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白)的酶，光谱标记(例如荧光标记，如荧光素及其衍生物，如FITC、德克萨斯红、花青染料、光敏剂、罗丹明或呈现可见颜色的标记)，包括荧光素的发光标记，亲和标记物的标记组，其可以通过对标记物特异的进一步的化合物开发并允许容易检测和定量，或用于标准ELISA的任何其他标记。
编码本发明的多肽的核酸
根据另一个实施例，提供了编码根据本发明的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸分子。
根据本发明的分离的核酸可以是例如天然DNA或RNA或重组或合成的DNA、RNA或LNA或包含单独或组合的本发明的任何核酸分子的重组核酸分子。在一个具体的实施例中，根据本发明的核酸分子是cDNA。
在一个具体的实施例中，提供了包含以下一种或多种的分离的核酸：
(1)编码SEQ ID NO：2的重链CDR1、SEQ ID NO：3的重链CDR2、SEQ ID NO：4的重链CDR3或其变体的核酸序列，其中所述重链CDR的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；和
(2)(i)编码SEQ ID NO：21的轻链CDR1、SEQ ID NO：22的轻链CDR2、SEQ ID NO：23的轻链CDR3或其变体的核酸，其中所述轻链CDR的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；或
(2)(ii)编码SEQ ID NO：26的轻链CDR1、SEQ ID NO：27的轻链CDR2、SEQ ID NO：28的轻链CDR3或其变体的核酸，其中所述轻链CDR的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
在一个具体的实施例中，提供了包含以下一种或多种的分离的核酸：
(1)编码选自以下的重链可变区的核酸序列：
(i)SEQ ID NO：11的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：12的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：13的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：14的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：15的氨基酸序列
(vi)SEQ ID NO：16的氨基酸序列
(vii)SEQ ID NO：17的氨基酸序列
(viii)SEQ ID NO：18的氨基酸序列
(ix)SEQ ID NO：19的氨基酸序列
(x)SEQ ID NO：20的氨基酸序列
(xi)SEQ ID NO：48的氨基酸序列
(xii)SEQ ID NO：53的氨基酸序列
(xiii)SEQ ID NO：54的氨基酸序列
(xiv)SEQ ID NO：55的氨基酸序列
(xv)SEQ ID NO：56的氨基酸序列
(2)编码选自以下的轻链可变区的核酸序列：
(i)SEQ ID NO：24的氨基酸序列
(ii)SEQ ID NO：25的氨基酸序列
(iii)SEQ ID NO：29的氨基酸序列
(iv)SEQ ID NO：30的氨基酸序列
(v)SEQ ID NO：57的氨基酸序列
(vi)SEQ ID NO：58的氨基酸序列
(vii)SEQ ID NO：59的氨基酸序列
(viii)SEQ ID NO：60的氨基酸序列
(ix)SEQ ID NO：61的氨基酸序列
(x)SEQ ID NO：62的氨基酸序列
(xi)SEQ ID NO：63的氨基酸序列
(xii)SEQ ID NO：67的氨基酸序列
(xiii)SEQ ID NO：68的氨基酸序列
(xiv)SEQ ID NO：69的氨基酸序列
(xv)SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
在一个具体的实施例中，提供了包含以下一种或多种的分离的核酸：
(1)编码选自以下的重链可变区的核酸序列：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：11，
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：12
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：13
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：14
(v)氨基酸序列SEQ ID NO：15
(vi)氨基酸序列SEQ ID NO：16，和
(2)编码选自以下的轻链可变区的核酸序列：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：24
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：25。
在一个备选的具体的实施例中，本发明提供了包含以下一种或多种的分离的核酸：
(1)编码选自以下的重链可变区的核酸序列：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：12
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：17
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：18
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：19
(v)氨基酸序列SEQ ID NO：20，和
(2)编码氨基酸序列SEQ ID NO：25的轻链可变区的核酸序列。
在另一个具体的实施例中，提供了包含以下一种或多种的分离的核酸：
(1)编码选自以下的重链可变区的核酸序列：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：11
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：12
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：13
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：14
(v)氨基酸序列SEQ ID NO：15
(vi)氨基酸序列SEQ ID NO：16，和
(2)编码选自以下的轻链可变区的核酸序列：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：29
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：30。
在一个备选的具体的实施例中，提供了包含以下一种或多种的分离的核酸：
(1)编码选自以下的重链可变区的核酸序列：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：12
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：17
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：18
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：19
(v)氨基酸序列SEQ ID NO：20，和
(2)编码氨基酸序列SEQ ID NO：30的轻链可变区的核酸序列。
在另一个具体的实施例中，提供了包含以下一种或多种的分离的核酸：
(1)包含SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33或其变体的核酸序列，所述变体与所述序列之一具有至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性，和/或
(2)选自以下的核酸序列：
a)包含SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：36或其变体的核酸序列，所述变体与所述序列之一具有至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性，
b)包含SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39或其变体的核酸序列，所述变体与所述序列之一具有至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
用于生产和纯化本发明的多肽的载体和宿主细胞
在一个实施例中，本发明提供了包含本发明的核酸分子的重组表达载体，其中载体任选地包含表达控制序列，其允许在原核或真核宿主细胞中表达所编码的多肽，其可操作地连接到所述核酸分子。
可以使用许多表达系统，包括但不限于染色体、附加体和衍生的病毒。更具体地，使用的重组载体可以来自细菌质粒、转座子、酵母附加体、插入元件、酵母染色体元件、病毒如杆状病毒、如SV40的乳头瘤病毒、痘苗病毒、腺病毒、狐痘病毒、伪狂犬病病毒、逆转录病毒。这些重组载体同样可以是粘粒或噬菌粒衍生物。
核酸序列可以通过本领域技术人员熟知的方法插入重组表达载体中，例如描述于MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL,Sambrook et al.,4th Ed.,Cold SpringHarbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,2001中的那些。
重组载体可以包括允许、控制或调节本发明的多核苷酸的表达和转录以及本发明的多肽的翻译的核苷酸序列，这些序列根据所使用的宿主细胞选择。
因此，例如，合适的分泌信号可以整合到重组载体中，使得由本发明的核酸分子编码的多肽将被导向内质网的腔、膜上的周质空间或细胞外环境。合适的分泌信号的选择可以促进随后的蛋白质纯化。
在另一个实施例中，提供了包含根据本发明的重组载体的宿主细胞。
重组载体在宿主细胞中的引入可以根据本领域技术人员熟知的方法进行，例如描述于BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY,Davis et al.,2nd ed.,McGraw-HillProfessional Publishing,1995和MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL中的那些，例如通过磷酸钙转染、通过DEAE葡聚糖转染、转染、显微注射、通过阳离子脂质的转染、电穿孔、转导或感染。
宿主细胞可以是例如细菌细胞，如大肠杆菌或链霉菌，真菌细胞如曲霉属和酵母如酵母属，昆虫细胞，中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，C127小鼠细胞系，叙利亚仓鼠细胞的BHK细胞系，人胚肾293(HEK 293)细胞。在一个具体的实施例中，宿主细胞是CHO细胞或HEK 293细胞。
宿主细胞可用于例如表达本发明的多肽。在通过标准方法纯化后，本发明的多肽可以以下文所述的方法使用。
例如，当使用分泌重组蛋白的表达系统时，可以首先使用市售的蛋白浓缩过滤器，例如Amicon或Millipore Pellicon超滤单元浓缩培养基。在浓缩步骤之后，浓缩物可以应用于纯化基质，例如凝胶过滤基质。或者，可以使用阴离子交换和/或亲和树脂。基质可以是丙烯酰胺、琼脂糖、葡聚糖、纤维素或通常用于蛋白质纯化的其他类型。或者，可以采用阳离子交换步骤。最后，使用疏水性RP-HPLC介质的一个或多个反相高效液相色谱(RP-HPLC)步骤可用于进一步纯化抗体或其片段。以各种组合的一些或所有前述纯化步骤是公知的，并且可以用于提供基本上均质的重组蛋白。
细菌培养物中产生的重组蛋白可以通过首先破碎宿主细胞、离心、从细胞沉淀中提取(如果是不溶性多肽)或从上清液中提取(如果是可溶性多肽)，然后是一个或多个浓缩、盐析、离子交换、亲和纯化或尺寸排阻色谱步骤。微生物细胞可以通过任何方便的方法破碎，包括冻融循环、超声处理、机械破碎或使用细胞裂解剂。
在另一个实施例中，本发明提供了用于产生能够表达本发明的多肽的细胞的方法，包括用本发明的载体或核酸来对细胞进行基因工程化。
在另一个实施例中，本发明提供了用于产生本发明的抗体或其片段的方法，包括在足以促进所述多肽表达的条件下培养用包含编码所述抗体或其片段的核酸序列的表达载体转化的宿主细胞。然后根据使用的表达系统从培养基或细胞提取物中回收本发明的抗体或其片段。如本领域技术人员已知的，纯化重组蛋白的方法将根据诸如所用宿主细胞的类型和重组蛋白是否如上所述分泌到培养基中等因素而变化。
组合物
本发明提供了作为用于治疗患者，优选哺乳动物患者，最优选患有医学病症，特别是炎症和/或自身免疫性疾病或癌症的人类患者的药物制剂或治疗剂和治疗方法。或者，本发明提供了用于预防医学病症，特别是炎症和/或自身免疫性疾病或癌症的方法。
在一个实施例中，提供了药物组合物，其包含以下的一种或多种：(i)根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，(ii)根据本发明的核酸，(iii)本发明的载体，和/或(iv)本发明的宿主细胞，和至少一种药学上可接受的载体。
本发明的药物组合物可以包含本文所述任何形式的对MMP9有特异性的一种或多种抗体或其抗原结合片段。
本发明的组合物还可包含一种或多种药学上可接受的附加成分，例如明矾、稳定剂、抗微生物剂、缓冲剂、着色剂、调味剂、佐剂等。
本发明的化合物与常规使用的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂可以一起制成药物组合物及其单位剂量的形式，并且这种形式可以以固体形式使用，例如片剂或填充胶囊、冷冻干燥形式或液体，例如溶液、悬浮液、乳液、酏剂或填充有其的胶囊，全部用于口服使用，或用于胃肠外(包括皮下)使用的无菌注射溶液形式。这样的药物组合物及其单位剂型可以包含常规比例的成分，具有或不具有另外的活性化合物或成分，并且这种单位剂型可以含有与待使用的预期日剂量范围相当的任何合适的有效量的活性成分。
本发明的组合物可以是液体制剂，包括但不限于水性或油性悬浮液、溶液、乳液、糖浆和酏剂。适于口服给药的液体形式可包括含有缓冲剂、悬浮剂和分散剂、着色剂，调味剂等的合适的水性或非水性媒介。组合物还可以配制为干燥产品，用于在使用前用水或其他合适的载体重构。这种液体制剂可以含有添加剂，包括但不限于悬浮剂、乳化剂、非水性媒介和防腐剂。悬浮剂包括但不限于山梨醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶和氢化食用脂肪。乳化剂包括但不限于卵磷脂、脱水山梨糖醇单油酸酯和阿拉伯胶。非水性媒介包括但不限于食用油、杏仁油、分馏的椰子油、油性酯、丙二醇和乙醇。防腐剂包括但不限于对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和山梨酸。其他材料以及加工技术等在Remington's The Science and Practice ofPharmacy，第22版，2012，Pharmaceutical Press and the University of the Sciences，Philadelphia College of Pharmacy的第5部分中阐述，其通过引用并入本文。
本发明的固体组合物可以是以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。例如，用于口服给药的片剂和胶囊可以含有常规赋形剂，包括但不限于粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂和润湿剂。粘合剂包括但不限于糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶、淀粉粘液和聚乙烯吡咯烷酮。填充剂包括但不限于乳糖、糖、微晶纤维素、玉米淀粉、磷酸钙和山梨醇。润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、聚乙二醇和二氧化硅。崩解剂包括但不限于马铃薯淀粉和淀粉羟乙酸钠。润湿剂包括但不限于月桂基硫酸钠。片剂可根据本领域熟知的方法包衣。
可注射组合物通常基于可注射的无菌盐水或磷酸盐缓冲盐水或本领域已知的其他可注射载体。
本发明的组合物还可以配制为包含水性或非水性媒介的透皮制剂，包括但不限于霜剂、软膏、洗剂、糊剂、药膏、贴剂或膜。
本发明的组合物还可以配制成用于肠胃外给药，包括但不限于通过注射或连续输注。用于注射的制剂可以是在油性或水性媒介中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制剂，包括但不限于悬浮剂、稳定剂和分散剂。组合物还可以以粉末形式提供，用于用合适的媒介重构，包括但不限于无菌无热原的水。
本发明的组合物还可以配制成长效制剂，其可以通过植入或通过肌内注射施用。组合物可以用合适的聚合物或疏水材料(例如在可接受的油中的乳液)、离子交换树脂或作为微溶衍生物(例如微溶盐)配制。
本发明的化合物还可以以缓释形式或从缓释药物递送系统施用。代表性缓释材料的描述也可以在Remington's Pharmaceutical Sciences中引入的文献中找到。
可注射制剂特别适于施用根据本发明的组合物。
在另一个实施例中，本发明提供了包含如本文所述的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段的成像组合物或诊断组合物。
在另一个实施例中，本发明提供了诊断组合物，其包含如本文所述的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，用于检测个体中的活性MMP9。
在另一个实施例中，本发明提供了诊断组合物，其包含如本文所述的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，用于检测个体中的活性MMP9，其中所述抗体包含SEQ IDNO：19的重链可变区和SEQ ID NO：70的轻链可变区。
在一个实施例中，根据本发明的诊断组合物包含如本文所述的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，其与选自以下的部分缀合：放射性同位素、生物素、抗生物素蛋白、链霉亲和素、发色团、荧光团、化学发光部分、半抗原和酶。
根据本发明的成像组合物或诊断组合物可用于检测与炎症和/或自身免疫性疾病或癌症相关的升高的MMP9水平。
组合
根据本发明，本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段可以单独施用或与用于预防和/或治疗炎症和/或自身免疫性疾病的辅剂组合施用，辅剂例如免疫调节药物，包括生物制剂、小分子和疫苗。
或者，可以施用本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，或与用于治疗癌症的辅剂组合施用，辅剂例如抗癌药物，如细胞毒性药物(Folfox，Xelox，Folfirinox，Folfox6，卡培他滨，多西他赛(Taxotere)，紫杉醇(Taxol)，Nab/紫杉醇，5-氟尿嘧啶(5-FU)，6-巯基嘌呤(6-MP)，卡培他滨(Xeloda)，阿糖胞苷(Ara-C)，氟尿苷，氟达拉滨，吉西他滨(Gemzar)，吉西他滨-顺铂，羟基脲，甲氨蝶呤，培美曲塞(Alimta)，伊沙匹隆(Ixempra)，长春花碱(Velban)，长春新碱(Oncovin)和长春瑞滨(Navelbine)，雌莫司汀(Emcyt)，酪氨酸激酶抑制剂(伊马替尼(Gleevec/Glivec)或吉非替尼(Iressa)或厄洛替尼(Tarceva)，阿法替尼(Giotrif)，阿西替尼(Inlyta)，伯舒替尼(Bosulif)，克唑替尼(Xalkori)，达沙替尼(Sprycel)，拉帕替尼(Tyverb)，尼罗替尼(Tasigna)，帕唑帕尼(Votrient)，索拉非尼(Nexavar)，舒尼替尼(Sutent))，和治疗性抗体如曲妥单抗(Herceptin)，贝伐单抗(Avastin)，西妥昔单抗(Erbitux)，帕尼单抗(Vectibix)，帕妥珠单抗(Perjeta)，伊匹单抗(Yervoy)，纳武单抗(Opdivo)和派姆单抗(Keytruda)或抗CD20抗体利妥昔单抗(Rituxan)。
本发明包括以治疗有效量施用对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段在用于预防和/或治疗MMP9相关疾病的其他治疗方案或辅剂之前、同时或顺序施用于个体，MMP9相关疾病选自下组：炎症和自身免疫性疾病、炎性肠病、癌症或肿瘤、纤维化疾病、心血管疾病、神经系统疾病、眼部疾病或任何其他MMP9相关疾病或病症。与所述辅剂同时施用的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段可以以相同或不同的组合物和相同或不同的施用途径施用。
在一个具体的实施例中，根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段可以与抗TNFα抗体组合施用，用于治疗患有中度至重度克罗恩病的个体。
施用方式
本发明的组合物可以以任何方式施用，包括但不限于口服、肠胃外、舌下、经皮、直肠、经粘膜、局部、经吸入、通过颊或鼻内施用或膀胱内或其组合。
肠胃外给药包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、脑内和关节内。本发明的组合物还可以以植入物的形式施用，其允许组合物的缓慢释放以及缓慢控制的静脉内输注。
在一个具体的实施例中，全身或局部施用根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，通过皮下或静脉内途径施用根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
作为单个或多个剂量给予个体的剂量将根据多种因素而变化，包括药代动力学性质、患者状况和特征(性别、年龄、体重、健康、大小)、症状程度、同时进行的治疗、治疗频率和预期效果。
通常，药学活性抗体的治疗有效量的范围为每kg体重1mg至最多150mg的剂量。如果方案是连续输注，其可以在每kg体重0.250mg至20mg的范围内。
特别地，药学活性抗体的治疗有效量的范围为每kg体重1mg至至多50mg的剂量。如果方案是连续输注，其可以在每kg体重0.250mg至13mg的范围内。
患者
通常，根据本发明的患者是患有MMP9相关疾病，特别是选自下组的MMP9相关疾病的患者：炎症和自身免疫性疾病，癌症或肿瘤，肺部疾病，纤维化肺病，败血病，肌营养不良，过敏，肾纤维化，硬皮病，扩张型心肌病，查加斯病，心血管疾病，神经精神障碍，糖尿病和眼部疾病，或任何其他MMP9相关疾病或病症。
在一个实施例中，根据本发明的患者是患有炎症性和/或自身免疫性疾病的患者，包括例如：包括克罗恩病(CD)的炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎(UC)、不确定性结肠炎、胶原性结肠炎、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、系统性硬化症、多发性肌炎、动脉粥样硬化。
在一个具体的实施例中，根据本发明的患者是患有炎性肠病，更特别是渗透性和限制性克罗恩病和溃疡性结肠炎的患者。
在另一个实施例中，根据本发明的患者是患有肺部疾病，包括哮喘、纤维化肺病如特发性肺病、慢性阻塞性肺病(COPD)或选自败血病、肌营养不良、变态反应、肾纤维化、硬皮病、扩张型心肌病、查加斯病、心血管疾病、神经精神障碍、糖尿病和眼部疾病的患者。
在另一个实施例中，根据本发明的患者是患有癌症或肿瘤的患者，包括例如造血系统癌、脑癌、乳腺癌、结肠直肠癌、头颈癌、胰脏癌、肺癌、卵巢癌、膀胱癌症、肝癌、黑素瘤、前列腺癌、肌肉癌、间质癌、食管胃腺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌、胃腺癌、胰腺癌和肝细胞癌。
在一个具体的实施例中，根据本发明的患者是患有结肠直肠癌或腺癌的患者。
在另一个实施例中，根据本发明的患者是患有选自炎症和自身免疫性疾病、炎性肠病、癌症或肿瘤、纤维化疾病、心血管疾病、神经精神障碍或眼部疾病的疾病的患者。
在另一个实施例中，根据本发明的患者是患有纤维化疾病的患者，纤维化疾病例如全身性硬化、多灶性纤维硬化、骨髓移植受者中的硬皮病性移植物抗宿主病、肾源性系统性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、骨髓纤维化和系统性红斑狼疮。
在另一个实施例中，根据本发明的患者是患有眼部疾病的患者，眼部疾病例如晶状体的纤维化病变、角膜疾病、糖尿病性视网膜病变、“干性”或“湿性”年龄相关性黄斑变性、增殖性玻璃体视网膜病变、白内障形成、翼状胬肉、圆锥形角膜、年龄相关性黄斑变性和糖尿病性视网膜病变。
在另一个实施例中，根据本发明的患者是患有心血管疾病的患者，心血管疾病例如高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭或冠状动脉疾病高血压、肺动脉高压、肺部或三尖瓣病、主动脉和二尖瓣病、主动脉缩窄、动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭、缺血性心肌病、扩张型心肌病、慢性心律失常、心脏纤维化和冠状动脉疾病。
在另一个实施例中，根据本发明的患者是患有神经病症的患者，神经病症例如肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默病、多发性硬化、神经炎症、脑缺血和神经性疼痛的患者。
根据本发明的用途和方法
根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段、核酸、载体、宿主细胞、组合物用于诊断、预防或治疗与MMP9水平升高和/或MMP9活性升高相关的疾病，由其引起或与其伴随的疾病。
在一个实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，其用作药物。
另一个实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，其用于预防和/或治疗选自下组的MMP9相关疾病：炎症和自身免疫性疾病，癌症或肿瘤，肺部疾病，纤维化肺疾病，败血症，肌营养不良，过敏，肾纤维化，硬皮病，扩张型心肌病，查加斯病，心血管疾病，神经精神障碍，糖尿病和眼部疾病或任何其他MMP9相关疾病或病症。
另一个实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，其用于预防和/或治疗选自下组的MMP9相关疾病：炎症和自身免疫性疾病，炎性肠病，癌症或肿瘤，纤维化疾病，心血管疾病，神经精神障碍或眼部疾病。
另一个具体的实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，其用于预防和/或治疗炎症和/或自身免疫性疾病，特别是包括克罗恩病(CD)的炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎(UC)、不确定性结肠炎、胶原性结肠炎、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、系统性硬化、多发性肌炎、动脉粥样硬化。
另一个具体的实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，其用于预防和/或治疗肺部疾病，包括哮喘、纤维化肺病如特发性肺病、慢性阻塞性肺病(COPD)或选自败血症、肌营养不良、变态反应、肾纤维化、硬皮病、扩张型心肌病、查加斯病、心血管疾病、神经精神病、糖尿病和眼部疾病的疾病。
另一个具体的实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，其用于预防和/或治疗癌症或肿瘤，特别是选自以下的癌症：造血系统癌、脑癌、乳腺癌、头颈癌、胰脏癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、前列腺癌、肌肉癌、间质癌、食管腺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌、胃腺癌、胰腺癌、肝细胞癌，更特别是结肠直肠癌或腺癌。
另一个具体的实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，其用于预防和/或治疗纤维化疾病，特别是全身性硬化、多灶性纤维硬化、骨髓移植受者中的硬皮病性移植物抗宿主病、肾源性系统性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、骨髓纤维化和系统性红斑狼疮。
另一个具体的实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，用于预防和/或治疗眼部疾病，特别是晶状体的纤维化病变、角膜疾病、糖尿病性视网膜病变、“干性”或“湿性”年龄相关性黄斑变性、增殖性玻璃体视网膜病变、白内障形成、翼状胬肉、圆锥形角膜、年龄相关性黄斑变性和糖尿病性视网膜病。
另一个具体的实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，其用于预防和/或治疗心血管疾病，特别是高血压、肺动脉高压、肺部或三尖瓣病、主动脉和二尖瓣病、主动脉缩窄、动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭、缺血性心肌病、扩张型心肌病、慢性心律失常、心脏纤维化和冠状动脉疾病。
另一个具体的实施例提供了根据本发明的抗体或其片段，其用于预防和/或治疗神经病症，特别是肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默病、多发性硬化、神经炎症、脑缺血和神经性疼痛的。
在另一个实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗MMP9相关疾病的药物组合物中的用途，所述MMP9相关疾病选自炎症和自身免疫性疾病、癌症或肿瘤、肺部疾病、纤维化肺病、败血症、肌营养不良、变态反应、肾纤维化、硬皮病、扩张型心肌病、查加斯病、心血管疾病、神经精神疾病、糖尿病和眼部疾病或任何其他MMP9相关疾病或病症。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗炎症和自身免疫性疾病、炎性肠病、癌症或肿瘤、纤维化疾病、心血管疾病、神经精神障碍或眼部疾病的药物组合物中的用途。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗个体的炎症和/或自身免疫性疾病的药物组合物中的用途，特别是用于预防或治疗包括克罗恩病(CD)的炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎(UC)、不确定性结肠炎、胶原性结肠炎、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、系统性硬化、多发性肌炎、动脉粥样硬化。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗炎性肠病，特别是渗透性和限制性克罗恩病和溃疡性结肠炎的药物组合物中的用途。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗肺部疾病的药物组合物中的用途，肺部疾病包括哮喘、纤维化肺病如特发性肺病、慢性阻塞性肺病(COPD)或选自败血病、肌营养不良、变态反应、肾纤维化、硬皮病、扩张型心肌病、查加斯病、心血管疾病、神经精神病、糖尿病和眼部疾病的疾病。
在另一个实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗癌症或肿瘤，特别是用于预防和/或处理选自下组的癌症的药物组合物中的用途：造血系统癌、脑癌、乳腺癌、头颈癌、胰脏癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、前列腺癌、肌肉癌、间质癌、食管胃腺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌、胃腺癌、胰腺癌、肝细胞癌，更特别是结肠直肠癌或腺癌。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗结肠直肠癌或腺癌的药物组合物中的用途。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗纤维化疾病，特别是全身性硬化、多灶性纤维硬化、骨髓移植受体中的硬皮病性移植物抗宿主病、肾源性系统性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、骨髓纤维化和系统性红斑狼疮的药物组合物中的用途。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗眼部疾病，特别是晶状体的纤维化病变、角膜疾病、糖尿病性视网膜病变、“干性”或“湿性”年龄相关性黄斑变性、增生性玻璃体视网膜病变、白内障形成、翼状胬肉、圆锥角膜、年龄相关性黄斑变性和糖尿病性视网膜病变的药物组合物中的用途。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗心血管疾病，特别是高血压、肺动脉高压、肺部或三尖瓣病、主动脉和二尖瓣病、主动脉缩窄、动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭、缺血性心肌病、扩张型心肌病、慢性心律失常、心脏纤维化和冠状动脉疾病的药物组合物中的用途。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段在制备用于预防和/或治疗神经病症，特别是肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默病、多发性硬化、神经炎症、脑缺血和神经性疼痛的药物组合物中的用途。
在另一个实施例中，提供了用于预防和/或治疗选自下组的MMP9相关疾病的方法：炎症和自身免疫性疾病、癌症或肿瘤、肺部疾病、纤维化肺病、败血症、肌营养不良、变态反应、肾纤维化、硬皮病、扩张型心肌病、查加斯病、心血管疾病、神经精神障碍、糖尿病和眼部疾病或任何其他MMP9相关疾病或病症，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，提供了用于预防和/或治疗炎症和自身免疫性疾病、炎性肠病、癌症或肿瘤、纤维化疾病、心血管疾病、神经精神障碍或眼部疾病的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，提供了用于预防和/或治疗炎症和/或自身免疫性疾病的方法，特别是用于预防或治疗包括克罗恩病(CD)的炎性肠病(IBD)、溃疡性结肠炎(UC)、不确定性结肠炎、胶原性结肠炎、类风湿性关节炎(RA)、多发性硬化(MS)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、系统性硬化症、多发性肌炎、动脉粥样硬化，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，提供了预防和/或治疗炎性肠病，特别是预防或治疗渗透性和限制性克罗恩病和溃疡性结肠炎的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在另一个具体的实施例中，提供了用于预防和/或治疗肺部疾病的方法，所述肺部疾病包括哮喘、纤维化肺病如特发性肺病、慢性阻塞性肺病(COPD)或选自败血病、肌营养不良、变态反应、肾纤维化、硬皮病、扩张型心肌病、查加斯病、心血管疾病、神经精神障碍、糖尿病和眼部疾病的疾病，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在另一个实施例中，提供了预防和/或治疗癌症或肿瘤，特别是用于预防和/或治疗选自以下的癌症的方法：造血系统癌、脑癌、乳腺癌、结肠直肠癌、头颈癌、胰脏癌、肺癌、肝癌、黑素瘤、前列腺癌、肌肉癌、间充质癌、食管胃腺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌、肺腺癌、胃腺癌、胰腺癌、肝细胞癌、结肠直肠癌和肝细胞癌，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，提供了用于预防和/或治疗结肠直肠癌或腺癌的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，提供了用于预防和/或治疗纤维化疾病，特别是全身性硬化、多灶性纤维硬化、骨髓移植受体中的硬皮病性移植物抗宿主病、肾源性系统性纤维化、肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、骨髓纤维化和系统性红斑狼疮的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，提供了用于预防和/或治疗眼部疾病，特别是晶状体的纤维化病变、角膜疾病、糖尿病性视网膜病变、“干性”或“湿性”年龄相关性黄斑变性、增殖性玻璃体视网膜病变、白内障形成、翼状胬肉、圆锥形角膜、年龄相关性黄斑变性和糖尿病性视网膜病变的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，提供了用于预防和/或治疗心血管疾病，特别是高血压、肺动脉高压、肺部或三尖瓣病、主动脉和二尖瓣病、主动脉缩窄、动脉粥样硬化、心肌梗塞、心力衰竭、缺血性心肌病、扩张型心肌病、慢性心律失常、心脏纤维化和冠状动脉疾病的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个具体的实施例中，提供了用于预防和/或治疗神经病症，特别是肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默病、多发性硬化、神经炎症、脑缺血和神经性疼痛的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段。
在一个备选实施例中，提供了检测生物样品中MMP9的方法，其包括使来自个体的生物样品与本发明的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段接触。
如本文所用，“生物样品”是指从个体特别是来自疑似或患有炎症或自身免疫性疾病和/或癌症或肿瘤或处于发展这种病症的高风险的个体获得的细胞、组织样品或细胞组分(例如细胞膜或细胞组分)。
生物样品的实例包括血液、血清、血浆、脑脊液、滑液、尿、粪便和组织样品，包括从所述组织分离的细胞。组织样品包括福尔马林固定或冷冻的组织切片。
可以使用用于检测和分析MMP9的任何合适的方法，包括本领域已知的诊断测定技术，例如竞争性结合测定、直接或间接夹心测定和在非均相或均相中进行的免疫沉淀测定。
在一个具体的实施例中，本发明提供了用于检测生物样品中MMP9蛋白的存在和/或浓度的离体方法，其包括以下步骤：
(i)提供来自个体的生物样品，
(ii)在足以通过抗原-抗体相互作用使存在于所述生物样品中的MMP9蛋白与所述至少一种抗体或其片段结合的条件下，使所述生物样品与至少一种根据本发明的抗体或其抗原结合片段发生反应；和
(iii)检测与在步骤(ii)中形成的抗原-抗体复合物的水平成比例的信号，
其中所述信号的强度与所述生物样品中MMP9蛋白的浓度相关。
在一个具体的实施例中，本发明提供了用于检测生物样品中活性MMP9蛋白的存在和/或浓度的离体方法，其包括以下步骤：
(i)提供来自个体的生物样品，
(ii)在足以通过抗原-抗体相互作用使存在于所述生物样品中的活性MMP9蛋白与所述至少一种抗体或其片段结合的条件下，使所述生物样品与至少一种本发明的抗体或其抗原结合片段发生反应；和
(iii)检测与步骤(ii)中形成的抗原-抗体复合物的水平成比例的信号，
其中所述信号的强度与生物样品中活性MMP9蛋白的浓度相关。
在一个具体的实施例中，本发明提供了用于检测生物样品中活性MMP9蛋白的存在和/或浓度的离体方法，其中本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO：19的重链可变区和SEQ ID NO：70的轻链可变区。
更具体地，提供了从个体的生物样品预测或诊断与MMP9水平升高相关的炎症和/或自身免疫性疾病或癌症的离体方法，其包括以下步骤：
(a)提供来自个体的生物样品；
(b)使所述生物样品与其中本发明的结合有至少一种抗体或其片段的固体基质接触，其中所述接触在足以通过抗原-抗体相互作用使存在于所述生物流体样品中的MMP9蛋白结合到所述至少一种抗体或其片段；
(c)从所述固体基质的表面除去任何未结合的MMP9蛋白；
(d)检测与结合到所述固体基质的抗原-抗体复合物的水平成比例的信号，
(e)将在步骤(d)中检测的信号水平与在相同条件下用阴性对照检测的信号水平进行比较，
其中在所述个体样品中检测到的信号水平高于在所述阴性对照中检测到的信号水平，这指示与炎症和/或自身免疫性疾病或癌症相关的MMP9水平升高。
试剂盒
本发明的一个方面涉及试剂盒，其包含根据本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段，和/或编码所述抗体或其片段的至少一种核酸，和/或包含所述核酸的至少一种载体，和/或根据本发明的至少一种宿主细胞，以及任选的指导材料。
在一个具体的实施例中，根据本发明的试剂盒包含待偶联或已偶联至固体基质的本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段。
适用于本发明的固体基质的实例包括适于进行本发明的免疫测定或方法的任何固相支持物，例如珠子、微粒、纳米颗粒、管、织物或板、膜、载玻片、由玻璃形成或涂覆有玻璃的孔、聚苯乙烯、聚丙烯、硝化纤维素、石英、陶瓷、葡聚糖或其他材料。例如，固体基质是微量滴定孔的形式，例如96孔微量滴定板。
本发明的抗体或其片段在本发明的试剂盒中的固体基质上的固定可以通过吸附或化学偶联到固相支持物上进行。可以使用本领域已知的用于将蛋白质或肽固定至固体支持物上的任何方法。本发明的抗体或其片段可以通过诸如通过酰胺或酯键的共价键合或吸附的技术与固体基质共价或非共价结合。可以使用结合对例如生物素和抗生物素蛋白或抗体和抗原来结合肽。在肽贴附至固体基质上之后，固体基质可以用封闭溶液(含有封闭蛋白如牛血清白蛋白)孵育，以减少测试样品中抗体对支持物表面的非特异性吸附。根据一个方面，本发明的抗体或其片段可以在本发明的试剂盒的固体基质上直接合成。
根据一个实施例，当试剂盒包含本发明的至少一种抗体或其片段或其组合用于偶联到作为固相支持物的固体基质时，试剂盒还任选地包含偶联试剂和/或固体基质，用于执行免疫测定。
根据另一个实施例，根据本发明的试剂盒还包含至少一种冲洗试剂，用于在检测之前洗涤未结合的材料，以避免背景噪声检测。典型的冲洗试剂包括本领域已知的标准缓冲液。
本文引用的参考文献通过引用整体并入本文。本发明的范围不限于本文描述的具体的实施例，其预期作为本发明的单个方面的单一说明，并且功能上等同的方法和组分在本发明的范围内。实际上，除了本文所示和所述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员来说从前面的描述和附图中是显而易见的。预期这样的修改落入所附权利要求的范围内。
已经描述了本发明，通过说明而非限制的方式给出以下实施例。
实施例
实施例1：本发明的抗MMP9抗体的产生与分离
通过进行以下步骤获得本发明的抗MMP9抗体：
1/噬菌体展示命中发现(Hit Discovery，HD)
使用ScFv文库作为ScFv片段的来源。该文库是天然来源(即，使用未免疫的健康人供体的PBMC构建)、中等大小(约2.5×109个VH/VL组合)并含有源自克隆未选择和非类别转换的IgM谱的VH结构域。使用该文库，首先通过噬菌体展示基于其与人或小鼠MMP9(全长、原形式和活化形式)的结合选择ScFv候选物，将ScFv重建为IgG1，并筛选MMP9活性的功能中和(特别是通过测定IC50、物种选择性、中和形式(proMMP9或MMP9)。
该步骤允许鉴定10种候选抗体，其可以分为两种机制类型：通过干扰潜在的proMMP9的活化阻断MMP9活性的那些(表明前肽结构域是由抗体识别的表位的一部分)和直接干扰活化MMP9的催化活性的那些(表明CAT_fn结构域是由抗体识别的表位的一部分)。
2/通过VL链改组进行亲和力成熟的命中优化(HO)：
将在前一步骤中获得的四个HD候选物通过λ轻链改组进行命中优化以改进它们的效价。基本上，亲本HD克隆VH链针对原始文库的整个VLλ内容物进行置换，产生几个新的克隆特异性文库。
3/先导物优化：
基于它们的作用机制(即，MMP9酶活性的抑制)，选择两种HO候选物(F20-VH/B03-VLc和F20-VH/B08-VLc)，用于先导物优化和表征，特别是通过(i)生殖系框架残基(由Kabat定义)，以使与最接近的人种系的序列偏差最小化，从而潜在地改善生物物理性质并降低免疫原性风险，和(ii)改变CDR内的一些氨基酸或氨基酸基序，这可能导致抗体的化学不稳定性或聚集。该策略允许产生包含上表2中所示的VH/VL区的抗体。
在下列实施例中，将下表3中提及的特异性VH/VL区重建为人IgG4用于进一步表征。为此目的，将编码目的VH和VL链的核酸克隆到pTT载体中(为与原始链的克隆相容性而进行工程化)，用于在HEK293细胞中瞬时共表达IgG4。
表3
实施例2：本发明的一些抗MMP9抗体在人MMP3/MMP9和人MMP9活性测定中的效价和功效
评价了本发明的一些抗体对荧光聚合物底物DQ-明胶的MMP9催化活性的功能中和。
MMP9(和MMP2)的特征活性是明胶降解。明胶基本上是来源自各种胶原的不可逆变性形式，其中几种被认为是MMP9的关键生理底物。与小肽底物不同，通过MMP9的明胶(类似于胶原)的结合和识别是复杂的，并且已知通过活性位点以外的分子的区域介导，包括纤连蛋白和PEX结构域。为了保留这些生理相关的“外部位点”相互作用并且促进潜在的“非经典”变构中和剂类的分离，选择氟淬灭的可溶性明胶聚合物(DQ-明胶)作为基于板的筛选和排名目的的关键底物。底物水解由MMP9的截短片段介导(即，去除前肽结构域)。该测定以两种模式进行。
称为“MMP9测定”的第一模式利用预活化的MMP9(来自在天然切割接合处含有LETD半胱天冬酶8识别基序的工程化MMP9)，其中首先通过定向半胱天冬酶8切割去除前肽结构域。称为“MMP3/MMP9测定”的第二模式设计为在测定中加入去除前肽结构域(即，活化步骤)作为另外的连接过程。这通过将测定混合物中的人MMP3的催化结构域(Calbiochem，444217-5)和全长(潜在形式)proMMP9与DQ-明胶底物(Lubio Science，D12054)和测试抗体组合来实现。被认为是MMP9的生理相关活化剂的MMP3已经显示通过两步顺序机制(Ogataet al,1992,J.Biol.Chem.267(6):3581-4)去除前肽结构域，并经常在患病组织中与MMP9共表达。重要的是，活化的MMP3本身似乎不显著切割DQ-明胶底物。因此，该测定中DQ-明胶水解(荧光发射)取决于MMP3介导的MMP9活化和固有的MMP9催化活性，其提供了表征干扰任一过程的中和剂的潜力。
因此，“MMP3/MMP9测定”用于测定抗MMP9抗体中和proMMP9活化及其下游催化活性的能力。简言之，将等分的重组人proMMP9与测试抗体的各种稀释液预温育1小时。通过加入人MMP3的重组催化结构域以及MMP9特异性荧光底物DQ-明胶开始消化。发射的荧光信号(在485nm激发，在520nm发射)与明胶底物的消化成比例，从而与成熟MMP9酶的催化活性成比例。将荧光信号相对于抗体浓度作图，从非线性回归曲线推导出半数最大抑制效价(IC50值)。
“MMP9测定”用于测定抗MMP9抗体直接中和成熟MMP9的催化活性的能力。简言之，该测定类似于“MMP3/MMP9测定”，但使用催化活性的半胱天冬酶切割的重组MMP9而不是proMMP9，因此不需要添加人MMP3的重组催化结构域。
在两种酶测定中，测试的所有本发明的抗体能够有效地降低DQ-明胶的消化。该结果表明，本发明的所有抗体阻断proMMP9向催化活性酶的活化和/或阻断MMP9的催化活性(表4，图6)。
表4.抗MMP9抗体中和人proMMP9的加工和/或其对明胶的下游催化活性的效价和功效
使用“MMP9测定”与高度纯化的活化MMP9，将本发明的抗体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c与比较抗体1(称为AB0041的抗体，其具有SEQ ID NO:44的重链和SEQ ID NO:45的轻链的氨基酸序列)进行比较。只有本发明的抗体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c以2.6nM的IC50有效地减少DQ-明胶的消化，而比较抗体1是无活性的。该结果表明，本发明的抗体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c是MMP9酶活性的抑制剂，而比较抗体1则不是。
在“MMP3/MMP9测定”中，本发明的抗体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c和比较抗体1分别以9.52nM和0.20nM的IC50有效地降低DQ-明胶的消化。总之，这两个酶测定的结果表明，比较抗体1是MMP9活化的抑制剂，而抗体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c是MMP9催化活性的抑制剂，并可能是MMP9活化的抑制剂。
实施例3：本发明的一些抗MMP9抗体在MMP3/MMP9测定中的物种特异性
使用实施例2中描述的“MMP3/MMP9测定”评价抗MMP9抗体的酶抑制活性的物种特异性。使用的酶是食蟹猴(cyno)、大鼠或小鼠proMMP9。
经测试的本发明的一些抗体能够有效阻断食蟹猴(cyno)、大鼠和小鼠proMMP9的活化和/或下游催化活性(分别为表5、6和7)。
表5.在MMP3/MMP9明胶测定中抗MMP9抗体中和食蟹猴proMMP9的效价和功效
表6.在MMP3/MMP9明胶测定中抗MMP9抗体中和大鼠proMMP9的效价和功效
表7.分别在MMP3/MMP9和MMP9明胶测定中抗MMP9抗体中和小鼠proMMP9或活性MMP9的效价和功效
ND:未测到
实施例4：本发明的一些抗MMP9抗体在人MMP催化活性测定中的MMP选择性
使用MMP抑制剂分析试剂盒(Enzo，BML-AK308)在评价MMP介导的荧光肽底物OmniMMPTM RED(Enzo，BML-P277-9090)切割的测定中评价抗MMP9抗体的选择性。简言之，将各种人MMP(MMP1、MMP2、MMP3、MMP8、MMP9、MMP12、MMP13、MMP14和MMP19)的重组催化结构域的等分试样与固定浓度(100nM)的测试抗体预温育1小时。在试验中包括MMP抑制剂NNGH(Enzo，BML-PI115-9090)和抗MMP2/9(539A-M0237-D02，比较抗体3，其具有重链SEQ ID NO:64和轻链SEQ ID NO:65的氨基酸序列)，抗MMP9(539A-M0240-B03，比较抗体2，其具有重链SEQ ID NO:46和轻链SEQ ID NO:47的氨基酸序列)和同种型对照(抗HEL-IgG1)抗体，作为阳性和阴性对照。然后加入荧光肽底物并测量荧光。发射的荧光信号与肽底物的消化成比例，因此与MMP催化结构域的活性成比例。将不存在抑制剂时的荧光信号标准化为100％活性。相对于该值给出在每种抑制剂存在下获得的信号，并称为剩余活性的百分比。
所测试的本发明的所有抗体能够有效阻断人MMP9的催化活性，而它们对所测试的其它8种人MMP的催化活性没有显著影响(图7)。根据本发明的所有抗体对人MMP7、MMP10、MMP16和MMP17的催化活性也没有显著影响(数据未示出)。
实施例5：根据本发明的抗MMP9抗体在使用嗜中性粒细胞分泌的天然形式的人MMP9的活性测定中的效价
已经描述了几种天然形式的人MMP9(单体MMP9、二聚体MMP9和MMP9-结合中性粒细胞明胶酶B相关脂质运载蛋白NGAL(也称为脂质运载蛋白-2)形式，后者的形式也称为NGAL/MMP9(Rudd et al.,1999,Biochemistry,38,13937–13950))，并显示与疾病状况相关。
本发明的抗MMP9抗体的另外的表征包括中性粒细胞来源的天然形式的MMP9的中和。为此目的，评价了来自本发明的抗体对荧光底物OmniMMPTM RED(来自ENZO)的嗜中性粒细胞来源的MMP9催化活性的功能中和。
在用本发明的F20-VH/B08-VLc抗MMP9抗体变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)进行功能中和测定之前，通过用APMA(对氨基苯基乙酸汞)预处理来进行嗜中性粒细胞来源的MMP9制剂中的proMMP9级分的活化，其使得MMP9催化位点可接近。简言之，将各种APMA活化的嗜中性粒细胞来源的人形式的proMMP9(单体、二聚体和NGAL/MMP9)的等分试样与测试抗体一起温育1小时。在测试中包括同种型对照(抗HEL IgG4)抗体作为阴性对照。然后加入荧光肽底物并测量荧光。发射的荧光信号(在540nm激发，在590nm发射)与肽底物的消化成比例，因此与MMP催化结构域的活性成比例。
如图8所示，本发明的F20-VH/B08-VLc抗体变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)中和多种生理形式的人MMP9的活性：单体MMP9、二聚MMP9和具有100％功效的NGAL/MMP9。
使用实施例2中描述的“MMP3/MMP9测定”将本发明的抗体与比较抗体1进行比较。本发明的F20-VH/B08-VLc抗体变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)以100％功效抑制人嗜中性粒细胞来源的MMP9的酶活性，无论其是单体形式还是二聚体形式或结合NGAL(图9)，而比较抗体1仅对所有形式的嗜中性粒细胞来源的MMP9显示部分抑制(25％功效)(图9)。通过本发明的抗体变体F20-VH/B08-VLc(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)完全中和所有天然活性形式的MMP9应当呈现为在具有高血清水平的单体、二聚体MMP9和/或NGAL/MMP9复合物的患者中具有卓越的功效。
实施例6：本发明的抗MMP9抗体的人MMP9的原形式和活化形式的结合动力学和亲和力
使用标准表面等离子体共振(SPR)测定法表征抗MMP9抗体对重组人MMP9抗原的结合。在第一步中，抗MMP9抗体被固定在BIAcore传感器芯片上的抗人Fc抗体捕获。在第二步中，将pro-MMP9或MMP3活化的MMP9以2倍稀释度从4.7nM滴定至150nM。Sensograms显示F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)和比较抗体1都很好地结合MMP3-活化的MMP9(图10)。比较抗体1也与pro-MMP9结合良好，但用F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)抗体观察到最小信号(图10)。表8报道了本发明的F20-VH/B08-VLc抗体变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)和比较抗体1对重组人pro-MMP9和MMP3活化的MMP9的结合亲和力(KD)。因为在150nM抗体浓度下观察到小于1％的结合，因此F20-VH/B08-VLc抗体变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)抗体对pro-MMP9的KD估计大于15μM。
表8
KD–平衡解离常数，全部从曲线计算
实施例7：本发明的抗MMP9抗体的表位作图
本发明的抗MMP9抗体的进一步表征包括鉴定人MMP9的区域，其对于抗体结合是重要的，由此限定表位。对F20/B08和F20/B03抗体中的每一个的一个成员，即F20-VH-GL1-V1-V9-V14/B03-VL-GL1c和F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c，进行该表征。
用于确定能够特异性结合本发明的抗MMP9抗体的MMP9表位的技术应用化学交联和质谱法(Peter and Tomer,2001,Anal.Chem.,73,4012–4019；Pimenova et al,2008,J.Mass Spectrom.JMS,43,185–195；Herzog et al.,2012,Science 337,1348–1352)。首先，将本发明的抗体和pro-MMP9在溶液中混合，并使用特别设计的氘化交联剂进行化学交联。然后，使用3种不同的蛋白水解酶使MMP9和共价结合的MMP9-抗体复合物进行蛋白水解，以产生覆盖MMP9的整个序列的大量重叠肽。通过高分辨率质谱(nLC-Orbitrap MS)分析来自单独的MMP9和来自交联的MMP9-抗体复合物的肽，并进行比较以便确定免疫复合物的相互作用肽。
该分析显示，人MMP9(SEQ ID NO:1)和本发明的抗体之间的相互作用界面位于3个不连续的MMP9表位内，包括以下MMP9氨基酸序列：
SEQ ID NO:41:150AVTPLTFTRVYSRDADIVIQF170(对应于人MMP9的氨基酸位置150至170)(这里称为区域1)，
SEQ ID NO:42:198IQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFG223(对应于人MMP9的氨基酸位置198至223)(这里称为区域2)，和
SEQ ID NO:43:419MYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIR440(对应于人MMP9的氨基酸位置419至440)(这里称为区域3)。
使用人MMP9的各种重组突变体来确定对比较抗体1与MMP9(小鼠单克隆抗体AB0041，WO 2013/130078)的结合重要的氨基酸。分析鉴定了对比较抗体1与人MMP9的结合重要的残基E111、D113、R162和I198。这些氨基酸中的两个，R162和I198存在于被本发明的抗MMP9抗体识别的表位区域(区域1和区域2)中。然而，区域3限定对本发明的抗MMP9抗体特别重要的新的表位区域。区域3在MMP9的催化结构域内。因为与比较抗体1不同，本发明的抗MMP9抗体能够抑制完全成熟的MMP9的酶活性，而比较抗体1确实结合完全成熟的MMP9，所以可能的是与区域3的结合赋予本发明的抗MMP9抗体中和完全成熟的MMP9的酶活性的能力。
此外，使用结合和竞争测定显示小鼠单克隆抗体REGA-3G12(Martens et al.，同上)结合人MMP9的肽G171至L187。由REGA-3G12抗体结合的MMP9(G171-L187)区域在本发明的抗MMP9抗体识别的3个MMP9区域之外。
实施例8：抗MMP9抗体与原形式和激活形式的人MMP9的直接结合和竞争性结合
使用标准ELISA方案分别评估抗MMP9抗体对人pro-MMP9和MMP3活化的人MMP9的直接结合能力。简言之，在室温将96孔板用(2.5μg/ml)任一形式的MMP9包被16小时。在用封闭缓冲液(2％山羊血清的PBS/吐温)孵育2小时并用洗涤缓冲液(PBS/吐温0.05％v/v)洗涤4次后，将各种浓度的生物素化的抗MMP9抗体(比较抗体1或F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)一式两份加入，温育1小时。然后洗涤孔四次，使用HRP偶联的链霉亲和素和TMB底物显示结合的生物素化抗体。每个副本在450nm和620nm读取吸光度，数据表示为校正的吸光度(A450-A620)。在图11中显示的结果表明，比较抗体1和F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)抗MMP9抗体以剂量依赖性方式强烈结合MMP3活化的MMP9(图11B)。相反，虽然比较抗体1与pro-MMP9以剂量依赖性方式良好结合(图11A)，F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)抗MMP9抗体仅显示在测试的最高浓度(5μg/mL)与pro-MMP9显著结合(图11A)。
为了测试F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)抗体是否将与比较抗体1与MMP9竞争结合，使用相同的ELISA测定，用包被MMP3活化的MMP9，但是在加入生物素化的抗MMP9抗体之前2小时加入纯化的抗体F20-VH/B08-VLc变体或比较抗体1。在用洗涤缓冲液洗涤四次后，加入预定的最佳剂量的生物素化的比较抗体1或F20-VH/B08-VLc并温育1小时。图11C所示的结果表明，添加F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)抗MMP9抗体不阻止比较抗体1与MMP9的结合，而相同浓度的纯化的比较抗体1完全阻止生物素化的比较抗体1与MMP9的进一步结合。
总之，这些结合实验显示，与比较抗体1不同，F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)抗MMP9抗体相对pro-MMP9优先结合活性形式的MMP9，并且其不与比较抗体1竞争结合MMP9。
实施例9：本发明的抗MMP9抗体在癌细胞侵袭测定中的效果
使用基质胶包被的侵袭小室(transwell)评估癌细胞系侵袭。用基底膜提取物(BME x0.5；在Cultrex试剂盒中提供)包被侵袭小室的插入膜(在来自Cultrex的试剂盒–3455-024中提供)，并在37℃温育24小时。同时，将MGC803(人胃癌细胞系-Easy-Bio，中国)在缺乏血清的RPMI培养基(饥饿培养基)(Gibco-52400025)中饥饿培养。然后回收细胞，并以0.5×106个细胞/ml悬浮在饥饿培养基中，该饥饿培养基含有100ng/ml PMA(来自Sigma的佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸盐–P8139)和25μM MMP抑制剂(来自Millipore的GM-6001–CC1000)、10μg/ml抗MMP9抗体(F20-VH/B08-VLc变体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)、10μg/ml抗IgG4抗体(同种型对照)中的任意一种或无上述(培养基)。将100μl经处理的细胞接种到基质胶包被的侵袭小室中，并将500μl含有10％FCS的RPMI培养基加入侵袭小室的下侧。将板在37℃下温育16小时。通过用Calcein-AM温育侵袭小室膜的底侧来定量侵袭细胞，其中Calcein-AM切割成的荧光钙黄绿素与细胞计数成比例。发射的荧光信号(在485nm激发，在520nm发射)反映通过基质胶的细胞侵袭的效率。
结果显示，当与MMP抑制剂GM-6001相比时，抗MMP-9抗体F20-VH/B08-VLc变体(F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)以相似的功效有效地抑制MGC803癌细胞通过基质胶迁移(图12)。当转移细胞通过侵入包括基底膜的周围组织而从它们的起始位点逃逸时，该结果表明本发明的抗MMP9可能是用于转移性癌症的有效的抗迁移和抗侵入性药物。
实施例10：根据本发明的抗MMP9抗体在结肠炎小鼠模型中的活性
葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的炎症性肠病(IBD)的结肠炎小鼠模型是在临床前研究中广泛使用的模型。批准用于治疗溃疡性结肠炎的药物，例如类固醇、甲硝唑、5’-氨基神经酸酯、环孢菌素和抗TNFα免疫疗法已证明在DSS模型中降低疾病严重性的功效，显示该模型是用于将小鼠数据转换成人类疾病的相关模型(Perse et al.,2012,J.Biomed.Biotechnol.,2012:718617)。通过向饮用水中加入DSS导致对结肠粘膜的损害来诱导小鼠结肠炎。急性期DSS结肠炎的临床表现可包括体重减轻和腹泻。急性DSS结肠炎的典型组织学变化与在人IBD中观察到的相似，并且包括粘蛋白消耗、导致上皮细胞消失的上皮变性和坏死。后者伴随着固有层和粘膜下层中的中性粒细胞浸润、隐窝炎、隐窝脓肿以及结肠粘膜和粘膜下层的炎症。
在BALB/c小鼠的DSS诱导的结肠炎模型中评估了本发明的抗MMP9抗体的治疗功效。用饮用水中的4％(w/v)DSS诱导结肠炎5天。在第6、9和12天向每组10只小鼠腹膜内注射30mg/kg F20-VH/B08-VLc(变体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)或同种型对照(IgG4)的剂量，并且在第14天处死动物。
通过在第6、10和14天对下结肠的视频内窥镜检查以盲选方式评价疾病的病程。根据组织中存在的溃疡程度、血管形成和颗粒度以及结肠长度，以0-14的标度对结肠炎进行目视评分，涉及如下：溃疡(0、1、2或3)，血管化掩蔽(0、1、2或3)，粒度(0、1、2或3)，红斑(0、1、2或3)，涉及的长度(0、1：局部化，2：扩散)。给每只小鼠分配对应于在所检查的结肠的整个长度上观察到的损伤的单一内窥镜检查评分。在开始抗体治疗之前，在第6天时内窥镜评分<5的动物不被认为具有足够的疾病严重性，并被排除在进一步分析之外。如图13所示，在第6天，两组具有相似的平均内窥镜评分，而在研究终止第14天，F20-VH/B08-VLc处理的动物在平均内窥镜评分中相比同种型对照抗体治疗组显示出显著改善(p＝0.005)。
在研究终止(第14天)，从每只小鼠切除远端结肠，福尔马林固定并包埋在石蜡中，并切片用于组织学研究。所有切片用苏木精和曙红染色，并对治疗组以盲选方式检查。根据每个参数的1-4的评分等级对组织进行上皮损伤和炎性细胞浸润的评分。组织学评分代表上皮损伤和炎症细胞浸润评分的总和，因此范围为0至8。结果示于图14。
DSS治疗的小鼠发展了以上皮增生和杯状细胞消耗、炎性细胞浸润到粘膜和粘膜下为特征的结肠炎。在一些结肠横切面中也观察到隐窝脓肿以及粘膜侵蚀和溃疡。如图13所示，组织学评分的分析显示，与同种型抗体治疗的对照组相比，用抗MMP9抗体治疗与F20-VH/B08-VLc中的平均结肠炎严重性评分的降低相关。类似地，与同种型抗体治疗的对照组相比，通过抗MMP9抗体治疗，也降低了炎症细胞浸润和上皮损伤的平均得分。
实施例11：本发明的抗MMP9抗体在肠纤维化的异位移植小鼠模型中的活性
严重的粘膜组织损伤是炎症性肠病(IBD)的主要特征。组织损伤是周围细胞修复活性的触发因素。快速伤口闭合对于缩短肠壁的屏障功能受损的时间是重要的，但过度的组织修复促进纤维化，这是克罗恩病(CD)中的常见事件。纤维化在10-40％的患者中导致狭窄形成(Cosnes et al.,2002,Inflamm.Bowel Dis.,8(4):244-50；Freeman,2003,J.Clin.Gastroenerol.,37(3):216-9)，是约80％的狭窄患者中的手术指征(Cosnes etal.,2002，同上)。
小鼠肠道切除术的异位移植导致肠上皮消失并在肠腔的纤维化闭塞中终止，概括了人肠纤维化的组织学和分子特征，例如腔壁增厚、过度的胶原沉积和纤维化介导物的表达。
将供体(绿色荧光蛋白标记的C57BL/6-Tg UBC-GFP小鼠)小肠切除部皮下移植到受体C57BL/6小鼠的颈部。在第5、8和10天对小鼠腹腔内注射30mg/kg本发明的抗MMP9抗体(F20-VH/B08-VLc，变体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c)或同种型对照抗体(IgG4)，每组5只小鼠。移植后14天移出小肠移植物。移植后，将每个移植物分成三个相等的段。将中心段固定在4％福尔马林中，并准备用于组织病理学评估。将两个外部段在液氮中快速冷冻并储存在-70℃直至提取RNA或蛋白质。
组织切片用天狼星红染色以突显胶原(红色染色)。胶原层厚度由对实验类型不知情的独立研究者确定。使用AxioCam MRc5在Zeiss Axiophot显微镜上进行显微评估。用AxioVision Release 4.7.2软件(Zeiss)测量胶原层的厚度。从代表性区域(在每个时间点研究的8个样品)中的8个位置以100倍放大率计算厚度。使用PRISM 6软件进行统计分析。使用非配对t检验进行组间比较。
与对照同种型相比，用F20-VH/B08-VLc的抗MMP9处理显著防止异位肠移植物中上皮结构的损失，如图15所示，并且显著(p<0.0001)降低异位肠移植物中的胶原层厚度，如图16所示。该结果表明本发明的抗MMP9抗体可以有效地治疗纤维化疾病和造瘘性克罗恩病。
实施例12：抗MMP9抗体在带有皮下HCT-116人结肠肿瘤细胞的swiss裸鼠中的效果。
将人结肠癌细胞系HCT-116(1×107个细胞)皮下注射到裸鼠的右胁腹中，并使其在治疗开始前生长至≈100mm3。将本发明的抗MMP9抗体F20-VH/B08-VLc、变体F20-VH-GL1-V4-V9/B08-VL-GL6c或同种型对照抗体IgG4腹膜内注射3周。小鼠在治疗的第一天接受50mg/kg的负载剂量的抗体，然后每周以30mg/kg给药两次。在治疗开始后第21天处死小鼠，收集原发肿瘤和具有转移的器官用于分析。测量原发肿瘤的重量和大小，并对淋巴结、肝、肺和腹膜中的可观察到的转移灶的数量进行计数。
序列表
人MMP9的氨基酸序列(NCBI参考序列:NP_004985.2)
SEQ ID NO:1
重链F20-VH-CDR1的氨基酸序列
SEQ ID NO:2:DYPMH
重链F20-VH-CDR2的氨基酸序列
SEQ ID NO:3:GISSNSGSVGYADSVKG
重链F20-VH-CDR3的氨基酸序列
SEQ ID NO:4:DKIYYGSGSYDFYYYYGMDV
重链F20-VH-CDR2-V1的氨基酸序列
SEQ ID NO:5:GISSQSGSVGYADSVKG
重链F20-VH-CDR2-V4的氨基酸序列
SEQ ID NO:6:GISSRSGSVGYADSVKG
重链F20-VH-CDR2-V9的氨基酸序列
SEQ ID NO:7:GISSNSGSVGYAESVKG
重链F20-VH-CDR2-V1-V9的氨基酸序列
SEQ ID NO:8:GISSQSGSVGYAESVKG
重链F20-VH-CDR2-V4-V9的氨基酸序列
SEQ ID NO:9:GISSRSGSVGYAESVKG
重链F20-VH-CDR3-V14的氨基酸序列
SEQ ID NO:10:DKIYYGSGSYDFYYYYGIDV
重链F20-VH的氨基酸序列
SEQ ID NO:11:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
F20-VH-GL1的氨基酸序列
SEQ ID NO:12:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-GL1-V1的氨基酸序列
SEQ ID NO:13:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSQSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-GL1-V4的氨基酸序列
SEQ ID NO:14:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSRSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-GL1-V9的氨基酸序列
SEQ ID NO:15:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-GL1-V14的氨基酸序列
SEQ ID NO:16:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGIDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-GL1-V1-V9的氨基酸序列
SEQ ID NO:17:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSQSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
重链F20-VH-GL1-V1-V9-V14的氨基酸序列
SEQ ID NO:18:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSQSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGIDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
重链F20-VH-GL1-V4-V9的氨基酸序列
SEQ ID NO:19:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSRSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
重链F20-VH-GL1-V4-V9-V14的氨基酸序列
SEQ ID NO:20:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSRSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGIDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
轻链B03-VL-CDR1的氨基酸序列
SEQ ID NO:21:QGDSLRSYYAS
轻链B03-VL-CDR2的氨基酸序列
SEQ ID NO:22:GKNNRPS
轻链B03-VL-CDR3的氨基酸序列
SEQ ID NO:23:QSRDNIGNHRVVL
轻链B03-VL的氨基酸序列
SEQ ID NO:24:
SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVVVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTVSLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKVTVLG
轻链B03-VL-GL1的氨基酸序列
SEQ ID NO:25:
SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVVVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTVSLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKLTVLG
轻链B08-VL-CDR1的氨基酸序列
SEQ ID NO:26:TGTSNDVGAYNRVS
轻链B08-VL-CDR2的氨基酸序列
SEQ ID NO:27:GVSNRPS
轻链B08-VL-CDR3的氨基酸序列
SEQ ID NO:28:TSYSSSTTSYVV
轻链B08-VL的氨基酸序列
SEQ ID NO:29:
QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSTRFSGSKSGNTASLTISGLLAADEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVLG
轻链B08-VL-GL6的氨基酸序列
SEQ ID NO:30:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLMIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVLG
重链F20-VH-CDR1的核酸序列
SEQ ID NO:31:gactaccccatgcac
重链F20-VH-CDR2的核酸序列
SEQ ID NO:32:ggcatctcctccaactccggctccgtgggctacgccgactccgtgaagggc
重链F20-VH-CDR3的核酸序列
SEQ ID NO:33:
gacaagatctactacggctccggctcctacgacttctactactactacggcatggacgtg
轻链B03-VL-CDR1的核酸序列
SEQ ID NO:34:caaggcgattctctgcgctcatattatgcttct
轻链B03-VL-CDR2的核酸序列
SEQ ID NO:35:ggaaaaaacaaccgaccatct
轻链B03-VL-CDR3的核酸序列
SEQ ID NO:36:caatctcgagacaatatagggaaccatagagttgttctg
轻链B08-VL-CDR1的核酸序列
SEQ ID NO:37:acaggaacgtctaatgatgtgggggcttacaatcgcgtcagt
轻链B08-VL-CDR2的核酸序列
SEQ ID NO:38:ggcgtgtctaacaggcctagc
轻链B08-VL-CDR3的核酸序列
SEQ ID NO:39:acaagctacagtagcagtaccacatcatatgtcgtc
工程化人IgG4重链恒定区的氨基酸序列
SEQ ID NO:40:
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
包含在MMP9表位中的区域1的氨基酸序列
SEQ ID NO:41:AVTPLTFTRVYSRDADIVIQF
包含在MMP9表位中的区域2的氨基酸序列
SEQ ID NO:42:IQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFG
包含在MMP9表位中的区域3的氨基酸序列
SEQ ID NO:43:MYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIR
比较抗体1(已知为AB0041)的重链的氨基酸序列
SEQ ID NO:44:
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLLSYGVHWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGTTNYNSALMSRLSISKDDSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCARYYYGMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
比较抗体1(已知为AB0041)的轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO:45:
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVRNTVAWYQQKTGQSPKLLIYSSSYRNTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYFCQQHYITPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
比较抗体2(已知为539A-M0240-B03)的重链的氨基酸序列
SEQ ID NO:46:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMVWVRQAPGKGLEWVSVIYPSGGPTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEDYYDSSGPGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
比较抗体2(已知为539A-M0240-B03)的轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO:47:
QYELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGSYTLVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
重链F20-VH-GL2的氨基酸序列
SEQ ID NO:48:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-CDR2-V2的氨基酸序列
SEQ ID NO:49:GISSHSGSVGYADSVKG
重链F20-VH-CDR2-V3的氨基酸序列
SEQ ID NO:50:GISSKSGSVGYADSVKG
重链F20-VH-CDR2-V11的氨基酸序列
SEQ ID NO:51:GISSNSGSVGYADTVKG
重链F20-VH-CDR3-V13的氨基酸序列
SEQ ID NO:52:DKIYYGSGSYDFYYYYGLDV
重链F20-VH-GL1-V2的氨基酸序列
SEQ ID NO:53:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSHSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-GL1-V3的氨基酸序列
SEQ ID NO:54:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSKSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-GL1-V11的氨基酸序列
SEQ ID NO:55:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重链F20-VH-GL1-V13的氨基酸序列
SEQ ID NO:56:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGLDVWGQGTTVTVSS
轻链B03-VL-GL2的氨基酸序列
SEQ ID NO:57:
SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKLTVL
轻链B08-VL-GL1的氨基酸序列
SEQ ID NO:58:
QSALTQPRSVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
轻链B08-VL-GL2的氨基酸序列
SEQ ID NO:59:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
轻链B08-VL-GL3的氨基酸序列
SEQ ID NO:60:
QSALTQPRSVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
轻链B08-VL-GL4的氨基酸序列
SEQ ID NO:61:
QSALTQPRSVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLMIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
轻链B08-VL-GL5的氨基酸序列
SEQ ID NO:62:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
轻链B08-VL-GL7的氨基酸序列
SEQ ID NO:63:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLMIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
比较抗体3(已知为539A-M0237-D02)的重链的氨基酸序列
SEQ ID NO:64:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYPMWWVRQAPGKGLEWVSYIVPSGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRAYGDYVGWNGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
比较抗体3(已知为539A-M0237-D02)的轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO:65:
DIQMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSFLAWYQQKPGQAPRLLIYDASYRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRGNWPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
工程化人IgG4轻链恒定区的氨基酸序列
SEQ ID NO:66:
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
轻链B03-VLc的氨基酸序列
SEQ ID NO:67:
SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVVVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTVSLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKVTVL
轻链B03-VL-GL1c的氨基酸序列
SEQ ID NO:68:
SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVVVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTVSLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKLTVL
轻链B08-VLc的氨基酸序列
SEQ ID NO:69:
QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSTRFSGSKSGNTASLTISGLLAADEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
轻链B08-VL-GL6c的氨基酸序列
SEQ ID NO:70:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLMIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
序列表
<110> 克里普索生物科技公司
默克专利有限公司
<120> 对MMP9有特异性的抗体
<130> P1750PC00
<150> EP14180765
<151> 2014-08-13
<160> 70
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 707
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ser Leu Trp Gln Pro Leu Val Leu Val Leu Leu Val Leu Gly Cys
1 5 10 15
Cys Phe Ala Ala Pro Arg Gln Arg Gln Ser Thr Leu Val Leu Phe Pro
20 25 30
Gly Asp Leu Arg Thr Asn Leu Thr Asp Arg Gln Leu Ala Glu Glu Tyr
35 40 45
Leu Tyr Arg Tyr Gly Tyr Thr Arg Val Ala Glu Met Arg Gly Glu Ser
50 55 60
Lys Ser Leu Gly Pro Ala Leu Leu Leu Leu Gln Lys Gln Leu Ser Leu
65 70 75 80
Pro Glu Thr Gly Glu Leu Asp Ser Ala Thr Leu Lys Ala Met Arg Thr
85 90 95
Pro Arg Cys Gly Val Pro Asp Leu Gly Arg Phe Gln Thr Phe Glu Gly
100 105 110
Asp Leu Lys Trp His His His Asn Ile Thr Tyr Trp Ile Gln Asn Tyr
115 120 125
Ser Glu Asp Leu Pro Arg Ala Val Ile Asp Asp Ala Phe Ala Arg Ala
130 135 140
Phe Ala Leu Trp Ser Ala Val Thr Pro Leu Thr Phe Thr Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Arg Asp Ala Asp Ile Val Ile Gln Phe Gly Val Ala Glu His Gly
165 170 175
Asp Gly Tyr Pro Phe Asp Gly Lys Asp Gly Leu Leu Ala His Ala Phe
180 185 190
Pro Pro Gly Pro Gly Ile Gln Gly Asp Ala His Phe Asp Asp Asp Glu
195 200 205
Leu Trp Ser Leu Gly Lys Gly Val Val Val Pro Thr Arg Phe Gly Asn
210 215 220
Ala Asp Gly Ala Ala Cys His Phe Pro Phe Ile Phe Glu Gly Arg Ser
225 230 235 240
Tyr Ser Ala Cys Thr Thr Asp Gly Arg Ser Asp Gly Leu Pro Trp Cys
245 250 255
Ser Thr Thr Ala Asn Tyr Asp Thr Asp Asp Arg Phe Gly Phe Cys Pro
260 265 270
Ser Glu Arg Leu Tyr Thr Gln Asp Gly Asn Ala Asp Gly Lys Pro Cys
275 280 285
Gln Phe Pro Phe Ile Phe Gln Gly Gln Ser Tyr Ser Ala Cys Thr Thr
290 295 300
Asp Gly Arg Ser Asp Gly Tyr Arg Trp Cys Ala Thr Thr Ala Asn Tyr
305 310 315 320
Asp Arg Asp Lys Leu Phe Gly Phe Cys Pro Thr Arg Ala Asp Ser Thr
325 330 335
Val Met Gly Gly Asn Ser Ala Gly Glu Leu Cys Val Phe Pro Phe Thr
340 345 350
Phe Leu Gly Lys Glu Tyr Ser Thr Cys Thr Ser Glu Gly Arg Gly Asp
355 360 365
Gly Arg Leu Trp Cys Ala Thr Thr Ser Asn Phe Asp Ser Asp Lys Lys
370 375 380
Trp Gly Phe Cys Pro Asp Gln Gly Tyr Ser Leu Phe Leu Val Ala Ala
385 390 395 400
His Glu Phe Gly His Ala Leu Gly Leu Asp His Ser Ser Val Pro Glu
405 410 415
Ala Leu Met Tyr Pro Met Tyr Arg Phe Thr Glu Gly Pro Pro Leu His
420 425 430
Lys Asp Asp Val Asn Gly Ile Arg His Leu Tyr Gly Pro Arg Pro Glu
435 440 445
Pro Glu Pro Arg Pro Pro Thr Thr Thr Thr Pro Gln Pro Thr Ala Pro
450 455 460
Pro Thr Val Cys Pro Thr Gly Pro Pro Thr Val His Pro Ser Glu Arg
465 470 475 480
Pro Thr Ala Gly Pro Thr Gly Pro Pro Ser Ala Gly Pro Thr Gly Pro
485 490 495
Pro Thr Ala Gly Pro Ser Thr Ala Thr Thr Val Pro Leu Ser Pro Val
500 505 510
Asp Asp Ala Cys Asn Val Asn Ile Phe Asp Ala Ile Ala Glu Ile Gly
515 520 525
Asn Gln Leu Tyr Leu Phe Lys Asp Gly Lys Tyr Trp Arg Phe Ser Glu
530 535 540
Gly Arg Gly Ser Arg Pro Gln Gly Pro Phe Leu Ile Ala Asp Lys Trp
545 550 555 560
Pro Ala Leu Pro Arg Lys Leu Asp Ser Val Phe Glu Glu Arg Leu Ser
565 570 575
Lys Lys Leu Phe Phe Phe Ser Gly Arg Gln Val Trp Val Tyr Thr Gly
580 585 590
Ala Ser Val Leu Gly Pro Arg Arg Leu Asp Lys Leu Gly Leu Gly Ala
595 600 605
Asp Val Ala Gln Val Thr Gly Ala Leu Arg Ser Gly Arg Gly Lys Met
610 615 620
Leu Leu Phe Ser Gly Arg Arg Leu Trp Arg Phe Asp Val Lys Ala Gln
625 630 635 640
Met Val Asp Pro Arg Ser Ala Ser Glu Val Asp Arg Met Phe Pro Gly
645 650 655
Val Pro Leu Asp Thr His Asp Val Phe Gln Tyr Arg Glu Lys Ala Tyr
660 665 670
Phe Cys Gln Asp Arg Phe Tyr Trp Arg Val Ser Ser Arg Ser Glu Leu
675 680 685
Asn Gln Val Asp Gln Val Gly Tyr Val Thr Tyr Asp Ile Leu Gln Cys
690 695 700
Pro Glu Asp
705
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR1
<400> 2
Asp Tyr Pro Met His
1 5
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2
<400> 3
Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 4
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR3
<400> 4
Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Gly Met Asp Val
20
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2-V1
<400> 5
Gly Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 6
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2-V4
<400> 6
Gly Ile Ser Ser Arg Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2-V9
<400> 7
Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Glu Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2-V1-V9
<400> 8
Gly Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Glu Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2-V4-V9
<400> 9
Gly Ile Ser Ser Arg Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Glu Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 10
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR3-V14
<400> 10
Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Gly Ile Asp Val
20
<210> 11
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 12
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F20-VH-GL1
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 13
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V1
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 14
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V4
<400> 14
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Arg Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 15
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V9
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 16
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V14
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 17
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V1-V9
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
130 135 140
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
145 150 155 160
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
165 170 175
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
195 200 205
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
210 215 220
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
325 330 335
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
450 455
<210> 18
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V1-V9-V14
<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
130 135 140
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
145 150 155 160
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
165 170 175
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
195 200 205
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
210 215 220
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
325 330 335
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
450 455
<210> 19
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V4-V9
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Arg Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
130 135 140
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
145 150 155 160
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
165 170 175
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
195 200 205
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
210 215 220
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
325 330 335
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
450 455
<210> 20
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V4-V9-V14
<400> 20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Arg Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
130 135 140
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
145 150 155 160
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
165 170 175
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
195 200 205
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
210 215 220
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
325 330 335
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
450 455
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-CDR1
<400> 21
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-CDR2
<400> 22
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-CDR3
<400> 23
Gln Ser Arg Asp Asn Ile Gly Asn His Arg Val Val Leu
1 5 10
<210> 24
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL
<400> 24
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Val Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Arg Asp Asn Ile Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 25
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-GL1
<400> 25
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Val Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Arg Asp Asn Ile Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 26
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-CDR1
<400> 26
Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr Asn Arg Val Ser
1 5 10
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-CDR2
<400> 27
Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-CDR3
<400> 28
Thr Ser Tyr Ser Ser Ser Thr Thr Ser Tyr Val Val
1 5 10
<210> 29
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL
<400> 29
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Thr Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Leu Ala Ala Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
Gly
<210> 30
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-GL6
<400> 30
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
Gly
<210> 31
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR1
<400> 31
gactacccca tgcac 15
<210> 32
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2
<400> 32
ggcatctcct ccaactccgg ctccgtgggc tacgccgact ccgtgaaggg c 51
<210> 33
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR3
<400> 33
gacaagatct actacggctc cggctcctac gacttctact actactacgg catggacgtg 60
<210> 34
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-CDR1
<400> 34
caaggcgatt ctctgcgctc atattatgct tct 33
<210> 35
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-CDR2
<400> 35
ggaaaaaaca accgaccatc t 21
<210> 36
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-CDR3
<400> 36
caatctcgag acaatatagg gaaccataga gttgttctg 39
<210> 37
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-CDR1
<400> 37
acaggaacgt ctaatgatgt gggggcttac aatcgcgtca gt 42
<210> 38
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-CDR2
<400> 38
ggcgtgtcta acaggcctag c 21
<210> 39
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-CDR3
<400> 39
acaagctaca gtagcagtac cacatcatat gtcgtc 36
<210> 40
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 工程化人IgG4重链恒定区
<400> 40
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly
325
<210> 41
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含在MMP9表位中的区域1
<400> 41
Ala Val Thr Pro Leu Thr Phe Thr Arg Val Tyr Ser Arg Asp Ala Asp
1 5 10 15
Ile Val Ile Gln Phe
20
<210> 42
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含在MMP9表位中的区域2
<400> 42
Ile Gln Gly Asp Ala His Phe Asp Asp Asp Glu Leu Trp Ser Leu Gly
1 5 10 15
Lys Gly Val Val Val Pro Thr Arg Phe Gly
20 25
<210> 43
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含在MMP9表位中的区域3
<400> 43
Met Tyr Pro Met Tyr Arg Phe Thr Glu Gly Pro Pro Leu His Lys Asp
1 5 10 15
Asp Val Asn Gly Ile Arg
20
<210> 44
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 比较抗体1的重链
<400> 44
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Leu Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asp Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
260 265 270
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
275 280 285
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
305 310 315 320
Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
325 330 335
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu
340 345 350
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
355 360 365
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
370 375 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
385 390 395 400
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn
405 410 415
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
420 425 430
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440
<210> 45
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 比较抗体1的轻链
<400> 45
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Asn Thr
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ser Ser Tyr Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 46
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 比较抗体2的重链
<400> 46
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gln Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Pro Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Pro Gly Ala Phe Asp
100 105 110
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 47
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 比较抗体2的轻链
<400> 47
Gln Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Tyr Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 48
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL2
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2-V2
<400> 49
Gly Ile Ser Ser His Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2-V3
<400> 50
Gly Ile Ser Ser Lys Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 51
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR2-V11
<400> 51
Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 52
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-CDR3-V13
<400> 52
Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Gly Leu Asp Val
20
<210> 53
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V2
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser His Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 54
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V3
<400> 54
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Lys Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 55
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V11
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 56
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链F20-VH-GL1-V13
<400> 56
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Pro Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Ser Asn Ser Gly Ser Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Lys Ile Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asp Phe Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 57
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-GL2
<400> 57
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Arg Asp Asn Ile Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 58
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-GL1
<400> 58
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 59
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-GL2
<400> 59
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 60
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-GL3
<400> 60
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 61
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-GL4
<400> 61
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 62
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-GL5
<400> 62
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 63
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-GL7
<400> 63
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 64
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 比较抗体3的重链
<400> 64
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gln Tyr
20 25 30
Pro Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Val Pro Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Ala Tyr Gly Asp Tyr Val Gly Trp Asn Gly Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 65
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 比较抗体3的轻链
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Phe
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Tyr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Gly Asn Trp Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 66
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 工程化人IgG4轻链恒定区
<400> 66
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 67
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VLc
<400> 67
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Val Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Arg Asp Asn Ile Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 68
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B03-VL-GL1c
<400> 68
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Val Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Arg Asp Asn Ile Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 69
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VLc
<400> 69
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Thr Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Leu Ala Ala Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 70
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链B08-VL-GL6c
<400> 70
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asn Arg Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Thr Ser Tyr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Thr Ser Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110

Claims (25)

1.一种对MMP9有特异性的分离的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其片段通过与包含由SEQ ID NO：41组成的区域内的至少一个氨基酸、由SEQ ID NO：42组成的区域内的至少一个氨基酸和由SEQ ID NO：43组成的区域内的至少一个氨基酸的表位相互作用而结合至MMP9，其中，所述区域在人MMP9的催化结构域内。
2.根据权利要求1所述的分离的抗体或其片段，，包含重链可变区，所述重链可变区包含：
(i)SEQ ID NO：2的重链CDR1或其变体，其中，所述重链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：3的重链CDR2或其变体，其中，所述重链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：4的重链CDR3或其变体，其中，所述重链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
3.根据权利要求2所述的分离的抗体或其片段，其中，所述重链可变区包含SEQ ID NO：11或其变体，其中，重链CDR1、CDR2和/或CDR3中的至少一个的1、2或3个氨基酸，和/或重链可变框架区的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸被不同的氨基酸取代。
4.根据权利要求2-3中任一项所述的分离的抗体或其片段，其中，所述重链可变区包含选自以下的氨基酸序列：
(i)氨基酸序列SEQ ID NO：12
(ii)氨基酸序列SEQ ID NO：13
(iii)氨基酸序列SEQ ID NO：14
(iv)氨基酸序列SEQ ID NO：15
(v)氨基酸序列SEQ ID NO：16
(vi)氨基酸序列SEQ ID NO：17
(vii)氨基酸序列SEQ ID NO：18
(viii)氨基酸序列SEQ ID NO：19
(ix)氨基酸序列SEQ ID NO：20，
(x)氨基酸序列SEQ ID NO：11。
5.根据权利要求2-4中任一项所述的分离的抗体或其片段，还包含选自以下的轻链可变区：
a)轻链可变区，包含：
(i)SEQ ID NO：21的轻链CDR1或其变体，其中，所述轻链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：22的轻链CDR2或其变体，其中，所述轻链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：23的轻链CDR3或其变体，其中，所述轻链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代，或
b)轻链可变区，包含：
(i)SEQ ID NO：26的轻链CDR1或其变体，其中，所述轻链CDR1的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(ii)SEQ ID NO：27的轻链CDR2或其变体，其中，所述轻链CDR2的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(iii)SEQ ID NO：28的轻链CDR3或其变体，其中，所述轻链CDR3的1、2或3个氨基酸被不同的氨基酸取代。
6.根据权利要求5所述的分离的抗体或其片段，其中，所述轻链可变区包含选自以下的氨基酸序列：
(1)SEQ ID NO：24或其变体，其中，轻链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸，和/或轻链可变框架区的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸被不同的氨基酸取代，和
(2)SEQ ID NO：29或其变体，其中，轻链CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个的1、2或3个氨基酸，和/或所述轻链可变框架区的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸被不同的氨基酸取代。
7.根据权利要求5-6中任一项所述的分离的抗体或其片段，其中，所述轻链可变区包含选自以下的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：67的氨基酸序列，
(ii)SEQ ID NO：68的氨基酸序列，
(iii)SEQ ID NO：69的氨基酸序列，
(iv)SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的抗体或其片段，其抑制MMP9的催化活性。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的分离的抗体，其是人单克隆抗体。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的分离的抗体，其中，所述抗体包含SEQ ID NO：19的重链可变区和SEQ ID NO：70的轻链可变区。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体或其片段，其用作药物。
12.一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1-10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
13.根据权利要求12所述的分离的核酸，包含以下的一种或多种：
(1)包含SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32和SEQ ID NO：33或其变体的核酸序列，所述变体具有与所述序列之一至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性，和/或
(2)选自以下的核酸序列：
a)包含SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35和SEQ ID NO：36或其变体的核酸序列，所述变体具有与所述序列之一至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性，
b)包含SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39或其变体的核酸序列，所述变体具有与所述序列之一至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。
14.一种重组表达载体，包含根据权利要求12-13中任一项所述的核酸分子。
15.一种宿主细胞，包含根据权利要求14所述的重组载体。
16.一种生产根据权利要求1-10中任一项所述的抗体或其片段的方法，包括：在足以促进所述抗体或其片段表达的条件下，培养由表达载体转化的宿主细胞，所述表达载体包含编码所述抗体或其片段的核酸序列。
17.一种药物组合物，包含以下的一种或多种：(i)根据权利要求1-10中任一项所述的对MMP9有特异性的抗体或其抗原结合片段，(ii)根据权利要求12-13中任一项所述的核酸，(iii)根据权利要求14所述的载体，和/或(iv)根据权利要求15所述的宿主细胞，和至少一种药学上可接受的载体。
18.权利要求1-10中任一项所述的抗体或其片段在预防和/或治疗MMP9相关疾病中的用途。
19.根据权利要求18所述的用途，其中，所述MMP9相关疾病选自下组：炎症和自身免疫性疾病、炎性肠病、癌症或肿瘤、纤维化疾病、心血管疾病、神经病症、眼部疾病或任何其他MMP9相关疾病或病症。
20.一种用于检测生物样品中MMP9蛋白的存在和/或浓度的离体方法，包括以下步骤：
(i)提供来自个体的生物样品，
(ii)在足以通过抗原-抗体相互作用使所述生物样品中存在的MMP9蛋白与所述至少一种抗体或其片段结合的条件下，使所述生物样品与权利要求1-10中任一项所述的至少一种抗体或其抗原结合片段反应；和
(iii)检测与在步骤(ii)中形成的抗原-抗体复合物的水平成比例的信号，
其中，所述信号的强度与所述生物样品中MMP9蛋白的浓度相关。
21.根据权利要求20所述的离体方法，其用于检测生物样品中活性MMP9蛋白的存在和/或浓度。
22.根据权利要求21所述的离体方法，其中，至少一种抗体或其抗原结合片段包含SEQID NO：19的重链可变区和SEQ ID NO：70的轻链可变区。
23.一种用于预防和/或治疗有需要的个体中MMP9相关疾病的方法，包括向所述个体施用根据权利要求1-10中任一项所述的抗体或根据权利要求17所述的药物组合物。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述MMP9相关疾病选自炎症和自身免疫性疾病、炎性肠病、癌症或肿瘤、纤维化疾病、心血管疾病、神经病症或眼部疾病。
25.根据权利要求23所述的方法，其中，抗体包含SEQ ID NO：19的重链可变区和SEQ IDNO：70的轻链可变区。
CN201580043394.1A 2014-08-13 2015-08-13 针对mmp9的特异性抗体 Pending CN106573984A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14180765.1 2014-08-13
EP14180765.1A EP2985296A1 (en) 2014-08-13 2014-08-13 Antibodies specific for MMP9
PCT/EP2015/068645 WO2016023979A1 (en) 2014-08-13 2015-08-13 Antibodies specific for mmp9

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106573984A true CN106573984A (zh) 2017-04-19

Family

ID=51301193

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580043394.1A Pending CN106573984A (zh) 2014-08-13 2015-08-13 针对mmp9的特异性抗体

Country Status (13)

Country Link
US (1) US10364296B2 (zh)
EP (2) EP2985296A1 (zh)
JP (1) JP6856523B2 (zh)
KR (1) KR20170041222A (zh)
CN (1) CN106573984A (zh)
AU (1) AU2015303183B2 (zh)
BR (1) BR112017002703A2 (zh)
CA (1) CA2956986A1 (zh)
ES (1) ES2784271T3 (zh)
MX (1) MX2017001959A (zh)
PL (1) PL3180362T3 (zh)
RU (1) RU2714043C2 (zh)
WO (1) WO2016023979A1 (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108277214A (zh) * 2018-02-23 2018-07-13 广东医科大学 一种应激磷酸化抗原多肽、抗体、制备方法以及应用
CN110799841A (zh) * 2017-06-30 2020-02-14 国立研究开发法人医药基盘·健康·营养研究所 用于检测大肠癌的生物标志物
CN110885375A (zh) * 2019-12-20 2020-03-17 南京融捷康生物科技有限公司 特异性针对MMP9蛋白ZnMc结构域的单域抗体及产品与应用
CN110997001A (zh) * 2017-06-02 2020-04-10 默克专利股份有限公司 Mmp13结合免疫球蛋白
CN111479575A (zh) * 2017-12-13 2020-07-31 北卡罗莱纳州立大学 包含化疗剂和检查点抑制剂的组合物及使用方法
CN117264069A (zh) * 2023-11-23 2023-12-22 再少年(北京)生物科技有限公司 一种促进皮肤组织再生的工程化外泌体的制备方法及其应用
CN117964771A (zh) * 2024-04-02 2024-05-03 智泽童康(广州)生物科技有限公司 一种特异性结合mmp7的抗体及其应用

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3440113A1 (en) 2016-04-08 2019-02-13 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
WO2018109222A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Universite de Bordeaux Mmp9 inhibitors and uses thereof in the prevention or treatment of a depigmenting disorder
CN111051339A (zh) * 2017-07-18 2020-04-21 第一三共株式会社 活性mmp-9-结合肽
US20230074615A1 (en) * 2019-05-21 2023-03-09 The Regents Of The University Of California Mmp-9 antibodies and methods of use thereof
WO2023278491A1 (en) * 2021-06-28 2023-01-05 Releviate, Llc Mmp-9 antibodies and uses thereof
CN117327186B (zh) * 2023-07-12 2024-03-12 北京达成生物科技有限公司 结合mmp3蛋白的双特异性抗体及其用途

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002066057A2 (en) * 2001-02-23 2002-08-29 Biophage Inc. Methods and compositions for preventing and treating neutrophil-mediated diseases
WO2009111450A2 (en) * 2008-03-03 2009-09-11 Dyax Corp. Metalloproteinase 9 binding proteins
WO2010045388A2 (en) * 2008-10-14 2010-04-22 Dyax Corp. Use of mmp-9 and mmp-12 binding proteins for the treatment and prevention of systemic sclerosis
WO2011028883A2 (en) * 2009-09-03 2011-03-10 Dyax Corp. Metalloproteinase 9 and metalloproteinase 2 binding proteins
WO2012027721A2 (en) * 2010-08-27 2012-03-01 Gilead Biologics, Inc Antibodies to matrix metalloproteinase 9
WO2013130905A1 (en) * 2012-02-29 2013-09-06 Gilead Biologics, Inc. Antibodies to matrix metalloproteinase 9

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0516069D0 (en) 2005-08-04 2005-09-14 Imp College Innovations Ltd Pharmaceutical and use thereof
JP5513130B2 (ja) * 2007-02-23 2014-06-04 イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド 金属タンパク質の活性を阻害するために有用な抗体および該抗体を含有する医薬組成物
JP2011517320A (ja) 2008-03-03 2011-06-02 ダイアックス コーポレーション メタロプロテアーゼ９結合タンパク質およびメタロプロテアーゼ２結合タンパク質
BR112014021477A2 (pt) 2012-02-29 2018-06-12 Gilead Sciences Inc anticorpos para metaloproteinase de matriz 9

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002066057A2 (en) * 2001-02-23 2002-08-29 Biophage Inc. Methods and compositions for preventing and treating neutrophil-mediated diseases
WO2009111450A2 (en) * 2008-03-03 2009-09-11 Dyax Corp. Metalloproteinase 9 binding proteins
WO2010045388A2 (en) * 2008-10-14 2010-04-22 Dyax Corp. Use of mmp-9 and mmp-12 binding proteins for the treatment and prevention of systemic sclerosis
WO2011028883A2 (en) * 2009-09-03 2011-03-10 Dyax Corp. Metalloproteinase 9 and metalloproteinase 2 binding proteins
WO2012027721A2 (en) * 2010-08-27 2012-03-01 Gilead Biologics, Inc Antibodies to matrix metalloproteinase 9
WO2013130905A1 (en) * 2012-02-29 2013-09-06 Gilead Biologics, Inc. Antibodies to matrix metalloproteinase 9

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ERIK MARTENS ET AL.: "A monoclonal antibody inhibits gelatinase B/MMP-9 by selective binding to part of the catalytic domain and not to the fibronectin or zinc binding domains", 《BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA》 *
王小侠等: "M M P-9 在胃癌中的表达及临床意义", 《苏州大学学报( 医学版)》 *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110997001A (zh) * 2017-06-02 2020-04-10 默克专利股份有限公司 Mmp13结合免疫球蛋白
CN110799841A (zh) * 2017-06-30 2020-02-14 国立研究开发法人医药基盘·健康·营养研究所 用于检测大肠癌的生物标志物
CN110799841B (zh) * 2017-06-30 2024-02-02 国立研究开发法人医药基盘·健康·营养研究所 用于检测大肠癌的生物标志物
CN111479575A (zh) * 2017-12-13 2020-07-31 北卡罗莱纳州立大学 包含化疗剂和检查点抑制剂的组合物及使用方法
CN111479575B (zh) * 2017-12-13 2024-03-22 北卡罗莱纳州立大学 包含化疗剂和检查点抑制剂的组合物及使用方法
CN108277214A (zh) * 2018-02-23 2018-07-13 广东医科大学 一种应激磷酸化抗原多肽、抗体、制备方法以及应用
CN108277214B (zh) * 2018-02-23 2021-07-06 广东医科大学 一种应激磷酸化抗原多肽、抗体、制备方法以及应用
CN110885375A (zh) * 2019-12-20 2020-03-17 南京融捷康生物科技有限公司 特异性针对MMP9蛋白ZnMc结构域的单域抗体及产品与应用
CN110885375B (zh) * 2019-12-20 2021-07-02 南京融捷康生物科技有限公司 特异性针对mmp-9蛋白锌离子结合结构域的单域抗体及产品与应用
CN117264069A (zh) * 2023-11-23 2023-12-22 再少年(北京)生物科技有限公司 一种促进皮肤组织再生的工程化外泌体的制备方法及其应用
CN117264069B (zh) * 2023-11-23 2024-01-26 再少年(北京)生物科技有限公司 一种促进皮肤组织再生的工程化外泌体的制备方法及其应用
CN117964771A (zh) * 2024-04-02 2024-05-03 智泽童康(广州)生物科技有限公司 一种特异性结合mmp7的抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
RU2017107773A (ru) 2018-09-13
EP3180362A1 (en) 2017-06-21
KR20170041222A (ko) 2017-04-14
CA2956986A1 (en) 2016-02-18
MX2017001959A (es) 2017-05-04
RU2017107773A3 (zh) 2018-09-13
EP3180362B1 (en) 2020-02-05
PL3180362T3 (pl) 2020-06-15
US10364296B2 (en) 2019-07-30
BR112017002703A2 (pt) 2018-02-27
WO2016023979A1 (en) 2016-02-18
JP2017532005A (ja) 2017-11-02
EP2985296A1 (en) 2016-02-17
AU2015303183A1 (en) 2017-02-16
AU2015303183B2 (en) 2021-01-28
JP6856523B2 (ja) 2021-04-07
ES2784271T3 (es) 2020-09-23
US20170233495A1 (en) 2017-08-17
RU2714043C2 (ru) 2020-02-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106573984A (zh) 针对mmp9的特异性抗体
CN103298833B (zh) β淀粉样蛋白结合蛋白
US10934350B2 (en) Humanized or affinity-matured anti ang-2 antibody and uses thereof
US9808507B2 (en) Anti-c-Met/anti-Ang2 bispecific antibody
JP2019504064A (ja) 抗プロ／潜在型ミオスタチン抗体およびその使用方法
BR112019019111A2 (pt) anticorpo de b7-h3, seu fragmento de ligação ao antígeno e seu uso médico
EP2863948A2 (en) Anti-jagged 1/jagged 2 cross-reactive antibodies, activatable anti-jagged antibodies and methods of use thereof
KR102196450B1 (ko) Tie2와 결합을 유도하는 항 Ang2 항체를 포함하는 항암제
CN104744591A (zh) β淀粉样蛋白结合蛋白
CN106661106A (zh) 抗il‑15的抗体
CN107771183A (zh) 抗‑人‑her3抗体及其用途
BR112019012648A2 (pt) anticorpo anti-pcsk9 e uso do mesmo
WO2016023972A1 (en) Antibodies specific for mmp9
TW202204416A (zh) 抗Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２抗體以及其用途
KR102106160B1 (ko) 항 Ang2 항체
KR102312922B1 (ko) Tie2와 결합을 유도하는 항 Ang2 항체
KR102118691B1 (ko) 항 Ang2 항체를 포함하는 혈관누수 차단제
US20170183401A1 (en) Hypoglycemic agent containing anti-ang2 antibody
KR102195957B1 (ko) Tie2와 결합을 유도하는 항 Ang2 항체
AU2022254784A1 (en) Dpep-1 binding agents and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination