CN106566850B - 井冈霉烯胺的生物制备方法 - Google Patents

井冈霉烯胺的生物制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106566850B
CN106566850B CN201610976350.0A CN201610976350A CN106566850B CN 106566850 B CN106566850 B CN 106566850B CN 201610976350 A CN201610976350 A CN 201610976350A CN 106566850 B CN106566850 B CN 106566850B
Authority
CN
China
Prior art keywords
valienamine
wece
aminotransferase
valienone
gene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610976350.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106566850A (zh
Inventor
冯雁
崔莉
白林泉
邓子新
刘璋敏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jiaotong University
Original Assignee
Shanghai Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Jiaotong University filed Critical Shanghai Jiaotong University
Priority to CN201610976350.0A priority Critical patent/CN106566850B/zh
Publication of CN106566850A publication Critical patent/CN106566850A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106566850B publication Critical patent/CN106566850B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/001—Amines; Imines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C12N15/76—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Actinomyces; for Streptomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1096—Transferases (2.) transferring nitrogenous groups (2.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y206/00—Transferases transferring nitrogenous groups (2.6)
    • C12Y206/01—Transaminases (2.6.1)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种井冈霉烯胺的生物制备方法；包括在体外条件下用氨基转移酶WecE完成井冈霉烯酮
Figure DDA0001147253830000011
向井冈霉烯胺
Figure DDA0001147253830000012
的生物转化，或是将WecE基因整合入可以产生井冈霉烯酮前体化合物的菌株，使整合有WecE基因的菌株直接通过发酵生产井冈霉烯胺。本发明解决了制备井冈霉烯胺的化学合成方法所固有的反应步骤多、收率低、反应条件苛刻及有机试剂污染等缺陷；基于具有氨基转移酶催化的氨基转移反应，建立了方便、高效、立体选择性强的井冈酶烯胺直接生物合成策略，为II型糖尿病临床药物伏格列波糖、阿卡波糖的合成及糖苷酶抑制剂药物开发提供了合成中间体。

Description

井冈霉烯胺的生物制备方法
技术领域
本发明涉及采用酶学、基因工程等生命科学技术手段，具体涉及一种井冈霉烯胺的生物制备方法。
背景技术
井冈霉烯胺(valienamine)属于氨基环醇类化合物，是假氨基糖类水解酶抑制剂的核心结构，井冈霉烯胺及其衍生物不仅可以参与治疗与糖苷酶相关的疾病，如糖尿病等，还可作为癌症、艾滋病及相关综合症的治疗(Kajimoto T,Node M.Inhibitors againstglycosidases as medicines.Current Topics in Medicinal Chemistry,2009,9(1):13-33.)。含有井冈霉烯胺结构的抗II型糖尿病药物伏格列波糖(贝欣)是典型的糖苷酶抑制剂类降糖药物(Kataoka Y,Yasuda S,Miyamoto Y,Sase K,Kosuge M,Kimura K,YoshimasaY,Miyazaki S.Effects of voglibose and nateglinide on glycemic status andcoronary atherosclerosis in early-stage diabetic patients.CirculationJournal,2012,76(3):712-720.)，具有降血糖性能好、副作用小的优点，作为国家基本药物在临床上广为使用。井冈霉烯胺是伏格列波糖合成的重要前体，建立有效的井冈霉烯胺合成途径，能有效增加抗糖尿病药物的市场供应，降低伏格列波糖的生产成本，减轻长期用药病人的负担，提高糖尿病人的生活质量，对井冈霉烯胺的合成途径的研究得到学术界的高度关注。目前国内外报道的井冈霉烯胺的生产方法主要有化学法合成法(Chang YK,Lo HJ,Yan TH.A flexible strategy based on a C2-symmetric pool of chiral substrates:Concise synthesis of(+)-valienamine,key intermediate of(+)-pancratistatin,andconduramines A-1and E.Organic Letters,2009,11(19):4278-4281.)、化学裂解(Cumpstey I，Ramstadius C，Borbas KE，Alonzi DS，Butters TD.Synthesis andα-glucosidase II inhibitory activity of valienamine pseudodisaccharidesrelevant to N-glycan biosynthesis.Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2011,21:5219–5223.)或微生物降解井冈霉素合成法(Kameda Y,Horri S,YaminoT.Microbial degradation of validamycin A by Flavobacteriumsaccharophilum.Enzymatic cleavage of C-N linkage in validoxylamine A.theJournal of Antibiotics,1984,37(8):859-867.Zhang JF,Zheng YG,ShenYC.Preparation of 3-ketovalidoxylamine A C-N lyase substrate:N-p-nitrophenyl-3-ketovalidamine by Stenotrophomonas maltrophilia CCTCC M 204024.AppliedMicrobiology and Biotechnology,2007,73(6):1275-1281.)。井冈霉烯胺化学合成法由15个反应步骤组成，涉及8个反应类型，存在工艺复杂、条件苛刻、步骤繁琐、监控点多、收率低等缺点。现在常用的生产方法是应用微生物发酵技术先制备井冈霉素，然后采用微生物转化法断裂井冈霉素的C-N键制备井冈霉烯胺。由于该工艺需要经过井冈霉素的发酵合成和产物分离，以及以井冈霉素为主要碳源的微生物二次发酵制备井冈霉烯胺等过程，导致生产过程繁杂，生产效率亟待提高。
最新利用氨基转移酶对井冈霉烯酮的催化研究发现，天然的氨基转移酶在进化关系和催化功能具有相似性，其催化产物普遍为β-井冈霉烯胺。其结构上的R-氨基构型与本发明中的井冈霉烯胺的S-氨基构型相反，生物活性和应用范围也不相同。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型井冈霉烯胺的生物制备方法，建立高效、可控的生产工艺，提高其生产效率。具体而言，本发明采用结构上与井冈霉烯胺仅有一个基团差异的井冈霉烯酮为底物，由于井冈霉烯酮与井冈霉烯胺在化学结构上只有一个官能团的差别，可以作为井冈霉烯胺的直接前体，通过转氨反应生成井冈霉烯胺；并且，本发明提供的氨基转移酶WecE与其所在家族的其他氨基转移酶不同，催化井冈霉烯酮生成的产物立体构型为专一的S-氨基，即立体构型单一的井冈霉烯胺产物(e.e.值>99.9％)。就方法而言，本发明提供的采用氨基转移酶WecE催化井冈霉烯酮生成井冈霉烯胺的生物制备方法明确可控，使复杂的化学反应和交错微生物代谢过程缩减为简单的生物转化途径，从根本上克服了化学反应步骤多、收率低、有机溶剂污染并缩减了两步微生物发酵过程繁琐的操作及复杂的调控步骤。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
第一方面，本发明涉及一种井冈霉烯胺的制备方法，
以井冈霉烯酮
Figure BDA0001147253810000021
为底物，在氨基转移酶WecE的催化作用下，接受氨基供体经辅因子传递来的氨基，生成井冈霉烯胺
Figure BDA0001147253810000031
其反应路线如下：
Figure BDA0001147253810000032
优选的，所述氨基转移酶WecE具有Gene ID：948296的基因序列和PDB：4ZAH，4PIW的蛋白空间结构。
优选的，具体包括如下操作：
将井冈霉烯酮、氨基供体、氨基转移酶WecE和辅因子在pH为7.0～7.5的PBS缓冲液中，在25～37℃下进行反应，生物转化得到井冈霉烯胺。
优选的，所述井冈霉烯酮、氨基供体、氨基转移酶WecE和辅因子的催化体系为：1mg/ml的氨基转移酶WecE在0.3mM辅因子的存在下，可催化5mM井冈霉烯酮和10-15mM氨基供体之间的转氨反应。
优选的，所述氨基供体为氨基转移酶WecE接受的氨基酸；所述辅因子为磷酸吡哆醛(PLP)。
优选的，所述氨基酸为L-谷氨酰胺、L-谷氨酸盐、L-丙氨酸或L-丝氨酸。
优选的，所述氨基转移酶WecE包括天然氨基转移酶WecE及在其序列和结构基础上经蛋白质工程技术手段进行改造获得的催化活力提升的突变体。
第二方面，本发明还涉及一种井冈霉烯胺的制备方法，将氨基转移酶WecE基因导入可产生井冈霉烯酮底物(也称，井冈霉烯酮前体化合物)的菌株，采用获得的基因工程菌通过发酵产生井冈霉烯胺。
优选的，所述将氨基转移酶WecE基因导入可产生井冈霉烯酮底物的菌株的方法为采用整合型质粒通过链霉菌接合转移操作，将氨基转移酶WecE基因整合入宿主染色体上。
优选的，所述可产生井冈霉烯酮底物的菌株包括在井冈霉素天然产生菌株的基础上采用基因工程手段获得的突变菌株。
优选的，所述可产生井冈霉烯酮底物的菌株为吸链霉菌井冈变种5008或吸水链霉菌柠檬亚种。吸链霉菌井冈变种5008和吸水链霉菌柠檬亚种分别见《应用与环境生物学报》2000年03期“吸水链霉菌井冈变种JG5008转化系统的初建”以及《中国微生物菌种总目录》。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、创新采用了能够催化井冈霉烯酮生成单一S-构型氨基的氨基转移酶WecE，使其在体外和微生物宿主内催化生成井冈霉烯胺。
2、解决了制备井冈霉烯胺的化学合成方法所存在的工艺复杂、收率低、反应条件苛刻、有机试剂污染以及无法量产的缺陷；
3、缩减了现有两步微生物发酵过程繁琐的操作及复杂的调控步骤，大幅提高了生产效率。
4、基于氨基转移酶催化的氨基转移反应，建立了方便、高效、立体选择性强的井冈酶烯胺直接生物合成策略，为II型糖尿病临床药物伏格列波糖、阿卡波糖的合成及糖苷酶抑制剂药物开发提供了合成中间体。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为本发明实施例1的催化产物以邻苯二甲醛(OPA)衍生化HPLC结果；
图2为本发明实施例1催化产物以邻苯二甲醛(OPA)衍生化HPLC-MS结果；
图3为本发明实施例1反应产物经Dowex1×2阴离子交换树脂纯化获得井冈霉烯的NMR氢谱；
图4为本发明实施例2的基因工程菌发酵液对OPA-HPLC的检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1、以WecE酶由井冈霉烯酮生物转化制备井冈霉烯胺
以5mM井冈霉烯酮为底物，10mM谷氨酰胺为氨基供体，0.3mM磷酸吡哆醛(PLP)为辅因子，以1mg/mL WecE氨基转移酶为生物催化剂，在pH 7.4的20mM PBS缓冲液中，于37℃水浴反应3小时。
采用2％邻苯二甲醛(OPA)室温条件下对反应产物进行柱前衍生化，衍生化产物经Eclipse XDB-C18(5μm，4.6×150mm)色谱柱分离，0～8min乙腈-水(22:78体积比)；8～12min 100％乙腈；12～17min乙腈：水(22:78体积比)梯度洗脱；激发波长240nm、发射波长450nm时检测荧光吸收。OPA衍生化HPLC结果如图1所示，邻苯二甲醛与WecE催化产物反应生成具有氨基的单一产物，其e.e.值>99.9％；实验条件下保留时间为5.1min，即为图1中保留时间5.138min的峰。
采用OPA衍生化HPLC方法与Aglient TOF MS 6230联用，以正离子模式检测OPA衍生化后的反应产物分子量，实验结果如图2所示，证明衍生化后的反应产物特征荷质比m/z为352.1209和374.0919，与井冈霉烯胺OPA衍生化产物理论分子量[M+H+]、[M+Na+]相符。
将反应产物经阴离子交换树脂Dowex 1×2分离纯化后溶于D2O，经400MHz核磁共振检测，获得1H NMR特征图谱(图3)。与底物井冈霉烯酮和产物的1H NMR对比分析，可以观测到由羰基向氨基转化引起屏蔽效应增加导致的整个H谱的化学位移向高场移动，其化学位移及耦合常数与标准品图谱比对，证明经WecE的催化催化井冈霉烯酮生成的氨基产物为立体构型为专一的S-氨基，其催化产物为e.e.值>99.9％的井冈霉烯胺。
实施例2、由WecE构建基因工程菌，发酵生产井冈霉烯胺
井冈霉烯酮是井冈霉素生物合成途径中的一个中间产物，吸水链霉菌井冈变种5008或吸水链霉菌柠檬亚种等井冈霉素的生产菌株在代谢网络上具备生物合成井冈霉烯酮的能力。本实施例选择吸水链霉菌S5008作为宿主，采用PCR-Target方法敲除了其代谢途径中识别井冈霉烯酮的磷酸激酶ValC，阻断了井冈霉烯酮下游的代谢途径，构建了井冈霉烯酮生产菌株；并将氨基转移酶基因WecE克隆到井冈霉素生物合成基因valA的启动子PvalA的下游，并通过整合型载体pPM927按链霉菌接合转移操作方法将WecE基因整合入井冈霉烯酮产生菌的染色体上，实现了氨基转移酶基因WecE在井冈霉烯酮产生菌种中的表达。基因工程菌阳性克隆经发酵培养5天，按实施例1所述以OPA柱前衍生化HPLC条件检测发酵液，通过和未转入氨基转移酶的空白菌株发酵液成分进行比对，在保留时间5.138min处检测到井冈霉烯胺特征峰，与WecE体外催化井冈霉烯酮生成的立体构型为专一的S-氨基的井冈霉烯胺产物(e.e.值>99.9％)一致。发酵液OPA衍生化HPLC实验结果如图4所示。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (8)

1.一种井冈霉烯胺的制备方法，其特征在于，
以井冈霉烯酮
Figure FDA0002758418750000011
为底物，在氨基转移酶WecE的催化作用下，接受氨基供体经辅因子传递来的氨基，生成井冈霉烯胺
Figure FDA0002758418750000012
所述氨基转移酶WecE的Gene ID为948296，其高级结构为PDB：4ZAH，4PIW。
2.如权利要求1所述的井冈霉烯胺的制备方法，其特征在于，将所述井冈霉烯酮、氨基转移酶WecE、氨基供体和辅因子在pH为7.0～7.5的缓冲液中，在25～37℃下进行反应，得到所述井冈霉烯胺。
3.如权利要求1所述的井冈霉烯胺的制备方法，其特征在于，所述氨基供体为氨基转移酶WecE接受的氨基酸；所述辅因子为磷酸吡哆醛。
4.如权利要求3所述的井冈霉烯胺的制备方法，其特征在于，所述氨基酸为L-谷氨酰胺、L-谷氨酸盐、L-丙氨酸或L-丝氨酸。
5.一种井冈霉烯胺的制备方法，其特征在于，将氨基转移酶WecE基因导入可产生井冈霉烯酮底物的菌株，采用获得的基因工程菌通过发酵产生井冈霉烯胺；所述氨基转移酶WecE的Gene ID为948296，其高级结构为PDB：4ZAH，4PIW。
6.如权利要求5所述的井冈霉烯胺的制备方法，其特征在于，所述导入的方法为采用整合型质粒通过链霉菌接合转移操作，将氨基转移酶WecE基因整合入宿主染色体上。
7.如权利要求5所述的井冈霉烯胺的制备方法，其特征在于，所述可产生井冈霉烯酮底物的菌株包括在井冈霉素天然产生菌株的基础上采用基因工程手段获得的突变菌株。
8.如权利要求5所述的井冈霉烯胺的制备方法，其特征在于，所述可产生井冈霉烯酮底物的菌株为吸链霉菌井冈变种5008或吸水链霉菌柠檬亚种。
CN201610976350.0A 2016-11-07 2016-11-07 井冈霉烯胺的生物制备方法 Active CN106566850B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610976350.0A CN106566850B (zh) 2016-11-07 2016-11-07 井冈霉烯胺的生物制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610976350.0A CN106566850B (zh) 2016-11-07 2016-11-07 井冈霉烯胺的生物制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106566850A CN106566850A (zh) 2017-04-19
CN106566850B true CN106566850B (zh) 2020-12-29

Family

ID=58540276

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610976350.0A Active CN106566850B (zh) 2016-11-07 2016-11-07 井冈霉烯胺的生物制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106566850B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114908130B (zh) * 2022-05-30 2024-02-06 上海凡秦医药科技有限公司 一种酶法制备胺基糖中间体井冈霉烯胺的方法及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101440357A (zh) * 2008-12-04 2009-05-27 上海交通大学 积累井冈霉亚基胺a的基因工程菌株及其构建方法
CN104313069A (zh) * 2014-10-22 2015-01-28 上海交通大学 β-井冈霉烯胺的生物制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101440357A (zh) * 2008-12-04 2009-05-27 上海交通大学 积累井冈霉亚基胺a的基因工程菌株及其构建方法
CN104313069A (zh) * 2014-10-22 2015-01-28 上海交通大学 β-井冈霉烯胺的生物制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Characterization and Investigation of Substrate Specificity of the Sugar Aminotransferase WecE from E. coli K12;Hwang B Y等;《Cell Chemical Biology》;20040801;第11卷(第7期);第915-925页 *
De Novo Biosynthesis of β-Valienamine in Engineered Streptomyces hygroscopicus 5008;Li Cui等;《Acs Synthetic Biology》;20151005;第5卷(第1期);第1-12页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106566850A (zh) 2017-04-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1806408B1 (en) Process for producing amino acid derivatives from hydroxyimino acids
US20160326556A1 (en) Recombinant strain producing l-amino acids, constructing method therefor and method for producing l-amino acids
EP4086343A1 (en) Use of biological enzyme for preparing orlistat intermediate, and preparation method
CN112625985B (zh) 一种高产β-丙氨酸的基因工程菌及共培养制备D-泛酸
CN112143764B (zh) 一种生物酶催化制备布瓦西坦中间体化合物的方法
CN104152478A (zh) 一种生物转化联产d-精氨酸和胍基丁胺的方法
CN109593802B (zh) 一种(r)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷或其盐的制备方法
CN109609582A (zh) 一种微生物催化去消旋化制备l-草铵膦的方法
CN111548383A (zh) 一种β-烟酰胺单核苷酸的工艺制备方法
CN110724675A (zh) 转氨酶催化剂和酶法合成(r)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶的方法
US11939615B2 (en) Production method of enzymatic reaction using adenosine instead of ATP
CN106566850B (zh) 井冈霉烯胺的生物制备方法
WO2005073388A1 (ja) 光学活性１−置換—２—メチルピロリジンおよびその中間体の製造法
CN114891707B (zh) 重组菌株及其全细胞催化生产胆红素的方法
CN113549661B (zh) 生物催化合成L-4-Cl-犬尿氨酸或L-4-Br-犬尿氨酸的方法及应用
CN106497843B (zh) 恶臭假单胞菌zjph1412及其制备(s)-3-羟基金刚烷甘氨酸的应用
CN115368439A (zh) 一组fk228衍生物及其制备方法与应用
CN111808893B (zh) 一种氨基醇类药物中间体的生物制备新方法
CN109370970B (zh) 一种重组大肠杆菌及其构建方法与应用
KR101801908B1 (ko) 알부틴의 제조방법
Ak et al. Production, purification and characterization of chitosanase from Penicillium spinulosum
CN110272925B (zh) 一种苏沃雷生关键中间体的酶法制备方法
CN114634955B (zh) 一种生物酶催化制备l-叔亮氨酸的方法及其应用
CN104313069B (zh) β‑井冈霉烯胺的生物制备方法
CN117363667B (zh) 亚胺还原酶在制备达泊西汀中间体和/或达泊西汀中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant