CN106566848A - 一种利用角担菌合成缬草素的方法 - Google Patents

一种利用角担菌合成缬草素的方法 Download PDF

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谭云
方勤敏
王卫
蔡燕
张梦君
赵梦瑞
谈泰猛
任泽文
祝久香
莫俊恺
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Abstract

本发明公开了一种利用角担菌合成缬草素的方法，包括以下步骤：(1)取角担菌菌丝接种于固体培养基上倒置培养，待菌丝萌发后，挑取外围无污染的新鲜菌丝接种至新鲜固体培养基上，继续倒置培养，得到成熟的菌丝，其中，所用角担菌为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌种，其保藏编号为GCMCC No.9817；(2)取步骤(1)所得成熟的菌丝接种于种子培养基中，振荡培养，得到种子液；(3)将步骤(2)所得种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，在发酵培养过程中分批次向发酵培养基中添加香茅醛，然后继续振荡发酵培养，即得含有缬草素的培养液。该方法可有效提高角担菌合成缬草素的产量。

Description

一种利用角担菌合成缬草素的方法
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种利用角担菌合成缬草素的方法。
背景技术
缬草为败酱科，属草本植物，在我国有着悠久的用药历史，是一味作为镇静药物使用的重要中药材。缬草以块状根及根茎部分入药，具有广泛的药理作用。传统中医认为缬草性平味辛，具有解挛止痛、镇静安神的功效。现代医学研究表明，缬草还具有抗氧化、抗肿瘤、抗老年痴呆等药理作用。缬草中含有缬草素、缬草醚醛、缬草烯萜醛、缬草生物碱等多种活性成分，最新研究表明，缬草素是缬草镇静作用的主要成分。
目前，缬草素制备主要依靠从缬草植物中提取、分离得到(例如申请号为200710175441的发明专利《一种缬草提取物及其制备方法和用途》和申请号为201110042230的发明专利《黑水缬草提取物及其制备方法和应用》等)，但野生缬草资源整体较少，且经过多年过度采挖，已经无法满足市场需求。
此外，缬草为多年生草本植物，野生缬草中缬草素含量低，人工栽培生长缓慢，收获期长，极易受到气候、降水等环境影响，且人工仿野生环境栽出的缬草中缬草素的含量较野生植株更低。发明专利《一株角担菌菌株及其在制备缬草素、镇静安眠类中成药中的应用》中成功分离出一株产缬草素的内生真菌，既降低了缬草素的生产成本，满足市场需求，又可以避免因为过度采挖缬草资源引起的生态环境的破坏，因此，利用微生物发酵是生产缬草素的一种新型、环保的方法。但是，现有通过角担菌合成缬草素的方法中缬草素的产量相对降低，有待进一步提高其产量，以适应大规模发酵生产缬草素的需要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种可有效提高缬草素合成产量的利用角担菌合成缬草素的方法。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：
一种利用角担菌合成缬草素的方法，包括以下步骤：
(1)取角担菌菌丝接种于固体培养基上倒置培养，待菌丝萌发后，挑取外围无污染的新鲜菌丝接种至新鲜固体培养基上，继续倒置培养，得到成熟的菌丝，其中，所用角担菌为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌种，其保藏编号为GCMCCNo.9817；
(2)取步骤(1)所得成熟的菌丝接种于种子培养基中，振荡培养，得到种子液；
(3)将步骤(2)所得种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，在发酵培养过程中向发酵培养基中添加香茅醛，然后继续振荡发酵培养，即得含有缬草素的培养液。
本发明将保藏编号为GCMCC No.9817的角担菌进行培养得到成熟的菌丝，然后在种子培养基中培养得到种子液，再将种子液进行发酵培养，并向发酵培养基中添加香茅醛，得到含有缬草素的培养液。保藏编号为GCMCC No.9817的角担菌是缬草外植体所分缬草内生菌，具有产缬草素的能力。香茅醛是化合物deoxyloganin(去氧马钱子甙)的合成前体，而deoxyloganin能够进一步合成环烯醚萜类化合物，因此，香茅醛可以作为环烯醚萜三酯(缬草素属于此类物质)的合成前体。本发明通过在发酵培养基中添加香茅醛作为缬草素合成的诱导物质，有效地促进了缬草素在角担菌中的生物合成，提高了由角担菌合成缬草素的产量，并且该方法操作简单、可控性强、结果稳定、安全环保、无副作用。
作为对上述技术方案的进一步改进：
优选的，所述步骤(3)中，所述在发酵培养过程中向发酵培养基中添加香茅醛的具体过程为：从角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，将香茅醛分批次添加到发酵培养基中。缬草素是该菌株的次生代谢产物，若添加香茅醛的时间过早，菌体生长还未进入稳定生长期，无法利用香茅醛；若添加时间过晚，则菌体对香茅醛的利用率低。综合考虑，优选在角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内加入香茅醛较为合适。
更优选的，所述从角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，将香茅醛分批次添加到发酵培养基中的具体过程为：从角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，分三批，每隔12h向发酵培养基中添加香茅醛0.5-4mg/L，三次添加完成后香茅醛在发酵培养基中的浓度为1.5-12mg/L。为了最大限度地提高缬草素的合成产量，选择进入稳定期后的36h内(即角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内)补加香茅醛，以促进菌株次生代谢。研究发现，进入稳定期的角担菌(发酵72h后)在12h内香茅醛的消耗量为0.5-3.0mg/L，且当发酵液中香茅醛浓度累计超过15.0mg/L时，缬草素停止合成，故选择角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，分三批，每隔12h向发酵培养基中添加香茅醛，每批次补加浓度为0.5-4mg/L，三次添加完后香茅醛在发酵培养基中的浓度为1.5-12mg/L，可以最大限度地提高缬草素的合成产量，并且避免因香茅醛浓度过高而导致缬草素合成停止。
优选的，将所述步骤(3)得到的含有缬草素的培养液用双层无菌纱布在无菌条件下进行初过滤，取出菌丝体，然后在4℃下冷冻离心并收集上清液，上清液经0.45μm的有机微孔滤膜过滤后得缬草素溶液。经初过滤、冷冻离心和有机微孔滤膜过滤后可将培养基与缬草素溶液分离。
优选的，所述步骤(3)中，所述种子液接种于发酵培养基中的接种量为所述发酵培养基体积的2％-10％，当接种量低于2％时，菌种生长较为缓慢，稳定期推迟，不利于缬草素的合成；当接种量高于10％时，又会造成菌种的浪费，综合考虑，选择接种量为发酵培养基体积的2％-10％较为合适；所述继续振荡发酵培养过程的培养温度为20-30℃，培养时间为4-7d，转速为100-180r/min。
优选的，所述步骤(1)中，所述固体培养基的成分包括：去皮土豆100-300g/L，葡萄糖10-40g/L，琼脂15-20g/L，固体培养基的pH为6-7，固体培养基使用前在115-134℃下灭菌15-30min。
优选的，所述步骤(2)中，所述种子培养基的成分包括：去皮土豆100-300g/L，葡萄糖10-40g/L，蛋白胨1-5g/L，硫酸镁1-5g/L，磷酸二氢钾2-10g/L，氯化钠0.5-2g/L，琼脂15-20g/L，种子培养基的pH为6-7，种子培养基使用前在115-134℃下灭菌15-30min。
优选的，所述步骤(3)中，所述发酵培养基的成分包括：去皮土豆100-300g/L，葡萄糖10-40g/L，硫酸镁1-5g/L，磷酸二氢钾2-10g/L，氯化钠0.5-2g/L，琼脂15-20g/L，发酵培养基的pH为6-7，发酵培养基使用前在115-134℃下灭菌15-30min。
优选的，所述步骤(1)中，所述角担菌菌丝在固体培养基上倒置培养的培养温度为20-30℃，培养时间为48-72h；所述继续倒置培养的培养时间为4-6d。
优选的，所述步骤(2)中，所述振荡培养的培养温度为20-30℃，培养时间为48-72h，转速为100-180r/min。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
(1)本发明利用保藏编号为GCMCC No.9817的角担菌经菌丝培养、种子培养和发酵培养等步骤生物合成缬草素，该角担菌为缬草外植体所分缬草内生菌，具有产缬草素的能力；通过向发酵培养基中添加缬草素前体物质香茅醛作为诱导物质，有效地促进了缬草素在角担菌中的生物合成。
(2)本发明通过在角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，向发酵培养基中分批次加入香茅醛，不仅提高了缬草素的合成产量，而且提高了香茅醛的利用率。
(3)通过选择从角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，分三批，每隔12h向发酵培养基中添加香茅醛0.5-4mg/L，三次添加完成后香茅醛在发酵培养基中的浓度为1.5-12mg/L，最大限度地提高角担菌生物合成缬草素的产量。
(4)本发明的方法与不添加香茅醛的角担菌合成缬草素的方法相比，缬草素的产量得到显著提高，为大规模发酵生产缬草素提供了新的思路，并且，该方法操作简单、可控性强、结果稳定、安全环保、无副作用。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下文将结合较佳的实施例对本发明作更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体的实施例。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
实施例1：
一种本发明利用角担菌合成缬草素的方法的实施例，该方法包括以下步骤：
(1)角担菌菌种活化：
从冷藏的试管斜面中挑取角担菌菌丝接种于固体培养基的平板上，在26℃下倒置培养56h，待菌丝萌发后，挑取外围无污染的新鲜菌丝接种至新鲜固体培养基的平板上，保持温度继续倒置培养5d，得到成熟的菌丝。该固体培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，固体培养基的pH为6.5，固体培养基使用前在121℃下灭菌20min。其中，所用角担菌为一株能产缬草素的内生真菌，其命名为角担菌(Ceratobasidium sp.AG-A)XCS-6，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏机构地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.9817，保藏日期为2014年10月22日。
(2)角担菌种子培养：
用接种针挑取步骤(1)所得成熟的菌丝，接种于盛有100mL种子培养基的500mL三角瓶中，在温度28℃、转速120r/min下振荡培养56h，制得种子液。该种子培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨2g/L，硫酸镁2g/L，磷酸二氢钾4g/L，氯化钠0.9g/L，琼脂20g/L，种子培养基的pH为6.5，种子培养基使用前在121℃下灭菌20min。
(3)角担菌发酵培养：
将步骤(2)得到的种子液接种于盛有100mL发酵培养基的500mL三角瓶中进行发酵培养，接种量为发酵培养基体积的6％，从角担菌发酵到72h始到108h止的36h内，将诱导物质香茅醛分3次添加入发酵培养基中，每次间隔12h，加入量依次为2.0mg/L、3.0mg/L和3.0mg/L，加完后香茅醛在发酵培养基中的浓度为8mg/L。然后在温度28℃、转速150r/min下，继续振荡发酵培养5d。该发酵培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，硫酸镁2g/L，磷酸二氢钾4g/L，氯化钠0.9g/L，琼脂20g/L，发酵培养基的pH为6.5，发酵培养基使用前在121℃下灭菌20min。
(4)缬草素提取：
振荡发酵培养结束后，用双层无菌纱布在无菌条件下对培养液进行初过滤，取出菌丝体，4℃下冷冻离心，收集上清液，上清液经0.45μm的有机微孔滤膜过滤后即得缬草素溶液。
缬草素产量检测：
将所得缬草素溶液进行高效液相色谱(HPLC)分析检测，色谱条件如下：
色谱柱：phenomenex C18柱(250×4.60mm×10μm)；
流动相：乙腈-水(60∶40)；
流速：0.95mL/min；
检测波长：256nm；
柱温：25℃；
进样量：10μL。
采用上述同样的步骤，只是在步骤(2)中不添加香茅醛，得到对照组。将对照组所得缬草素溶液与本实施例所得缬草素溶液在同样的色谱条件下进行HPLC检测。检测结果显示，对照组缬草素的产量为2.12mg/L，本实施例中缬草素的产量为2.76mg/L。
实施例2：
一种本发明利用角担菌合成缬草素的方法的实施例，该方法包括以下步骤：
(1)角担菌菌种活化：
从冷藏的试管斜面中挑取角担菌菌丝接种于固体培养基的平板上，在28℃下倒置培养60h，待菌丝萌发后，挑取外围无污染的新鲜菌丝接种至新鲜固体培养基的平板上，保持温度继续倒置培养5d，得到成熟的菌丝。该固体培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂18g/L，固体培养基的pH为6.2，固体培养基使用前在121℃下灭菌25min。其中，所用角担菌为一株能产缬草素的内生真菌，其命名为角担菌(Ceratobasidium sp.AG-A)XCS-6，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏机构地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.9817，保藏日期为2014年10月22日。
(2)角担菌种子培养：
用接种针挑取步骤(1)所得成熟的菌丝，接种于盛有150mL种子培养基的500mL三角瓶中，在温度28℃、转速120r/min下振荡培养50h，制得种子液。该种子培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨4g/L，硫酸镁4g/L，磷酸二氢钾6g/L，氯化钠0.5g/L，琼脂18g/L，种子培养基的pH为6.2，种子培养基使用前在121℃下灭菌25min。
(3)角担菌发酵培养：
将步骤(2)得到的种子液接种于盛有150mL发酵培养基的500mL三角瓶中进行发酵培养，接种量为发酵培养基体积的5％，从角担菌发酵到72h始到108h止的36h内，将诱导物质香茅醛分3次添加入发酵培养基中，每次间隔12h，加入量依次为2.0mg/L、3.0mg/L和4.0mg/L，加完后香茅醛在发酵培养基中的浓度为9mg/L。然后在温度28℃、转速150r/min下，继续振荡发酵培养6d。该发酵培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，硫酸镁4g/L，磷酸二氢钾6g/L，氯化钠0.5g/L，琼脂18g/L，发酵培养基的pH为6.2，发酵培养基使用前在121℃下灭菌25min。
(4)缬草素提取：
振荡发酵培养结束后，用双层无菌纱布在无菌条件下对培养液进行初过滤，取出菌丝体，4℃下冷冻离心，收集上清液，上清液经0.45μm的有机微孔滤膜过滤后即得缬草素溶液。
缬草素产量检测：
将所得缬草素溶液进行HPLC检测，色谱条件与实施例1中相同。采用上述同样的步骤，只是在步骤(2)中不添加香茅醛，得到对照组。将对照组所得缬草素溶液与本实施例所得缬草素溶液在同样的色谱条件下进行HPLC检测。检测结果显示，对照组缬草素的产量为2.11mg/L，本实施例中缬草素的产量为2.84mg/L。
实施例3：
一种本发明利用角担菌合成缬草素的方法的实施例，该方法包括以下步骤：
(1)角担菌菌种活化：
从冷藏的试管斜面中挑取角担菌菌丝接种于固体培养基的平板上，在27℃下倒置培养64h，待菌丝萌发后，挑取外围无污染的新鲜菌丝接种至新鲜固体培养基的平板上，保持温度继续倒置培养4d，得到成熟的菌丝。该固体培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂16g/L，固体培养基的pH为6.8，固体培养基使用前在121℃下灭菌30min。其中，所用角担菌为一株能产缬草素的内生真菌，其命名为角担菌(Ceratobasidium sp.AG-A)XCS-6，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏机构地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.9817，保藏日期为2014年10月22日。
(2)角担菌种子培养：
用接种针挑取步骤(1)所得成熟的菌丝，接种于盛有120mL种子培养基的500mL三角瓶中，在温度27℃、转速140r/min下振荡培养56h，制得种子液。该种子培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨5g/L，硫酸镁3g/L，磷酸二氢钾7g/L，氯化钠0.6g/L，琼脂16g/L，种子培养基的pH为6.8，种子培养基使用前在121℃下灭菌30min。
(3)角担菌发酵培养：
将步骤(2)得到的种子液接种于盛有120mL发酵培养基的500mL三角瓶中进行发酵培养，接种量为发酵培养基体积的8％，从角担菌发酵到72h始到108h止的36h内，将诱导物质香茅醛分3次添加入发酵培养基中，每次间隔12h，加入量依次为3.0mg/L、3.0mg/L和3.0mg/L，加完后香茅醛在发酵培养基中的浓度为9mg/L。然后在温度27℃、转速140r/min下，继续振荡发酵培养4d。该发酵培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖20g/L，硫酸镁3g/L，磷酸二氢钾7g/L，氯化钠0.6g/L，琼脂16g/L，发酵培养基的pH为6.8，发酵培养基使用前在121℃下灭菌30min。
(4)缬草素提取：
振荡发酵培养结束后，用双层无菌纱布在无菌条件下对培养液进行初过滤，取出菌丝体，4℃下冷冻离心，收集上清液，上清液经0.45μm的有机微孔滤膜过滤后即得缬草素溶液。
缬草素产量检测：
将所得缬草素溶液进行HPLC检测，色谱条件与实施例1中相同。采用上述同样的步骤，只是在步骤(2)中不添加香茅醛，得到对照组。将对照组所得缬草素溶液与本实施例所得缬草素溶液在同样的色谱条件下进行HPLC检测。检测结果显示，对照组缬草素的产量为2.21mg/L，本实施例中缬草素的产量为2.93mg/L。
实施例4：
一种本发明利用角担菌合成缬草素的方法的实施例，该方法包括以下步骤：
(1)角担菌菌种活化：
从冷藏的试管斜面中挑取角担菌菌丝接种于固体培养基的平板上，在25℃下倒置培养68h，待菌丝萌发后，挑取外围无污染的新鲜菌丝接种至新鲜固体培养基的平板上，保持温度继续倒置培养4d，得到成熟的菌丝。该固体培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖18g/L，琼脂20g/L，固体培养基的pH为6.4，固体培养基使用前在121℃下灭菌20min。其中，所用角担菌为一株能产缬草素的内生真菌，其命名为角担菌(Ceratobasidium sp.AG-A)XCS-6，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏机构地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.9817，保藏日期为2014年10月22日。
(2)角担菌种子培养：
用接种针挑取步骤(1)所得成熟的菌丝，接种于盛有100mL种子培养基的500mL三角瓶中，在温度25℃、转速160r/min下振荡培养54h，制得种子液。该种子培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖18g/L，蛋白胨3g/L，硫酸镁2g/L，磷酸二氢钾8g/L，氯化钠1.2g/L，琼脂20g/L，种子培养基的pH为6.4，种子培养基使用前在121℃下灭菌20min。
(3)角担菌发酵培养：
将步骤(2)得到的种子液接种于盛有100mL发酵培养基的500mL三角瓶中进行发酵培养，接种量为发酵培养基体积的4％，从角担菌发酵到72h始到108h止的36h内，将诱导物质香茅醛分3次添加入发酵培养基中，每次间隔12h，加入量依次为1.0mg/L、2.0mg/L和3.0mg/L，加完后香茅醛在发酵培养基中的浓度为6mg/L。然后在温度25℃、转速150r/min下，继续振荡发酵培养4d。该发酵培养基的成分包括：去皮土豆200g/L，葡萄糖18g/L，硫酸镁2g/L，磷酸二氢钾8g/L，氯化钠1.2g/L，琼脂20g/L，发酵培养基的pH为6.4，发酵培养基使用前在121℃下灭菌20min。
(4)缬草素提取：
振荡发酵培养结束后，用双层无菌纱布在无菌条件下对培养液进行初过滤，取出菌丝体，4℃下冷冻离心，收集上清液，上清液经0.45μm的有机微孔滤膜过滤后即得缬草素溶液。
缬草素产量检测：
将所得缬草素溶液进行HPLC检测，色谱条件与实施例1中相同。采用上述同样的步骤，只是在步骤(2)中不添加香茅醛，得到对照组。将对照组所得缬草素溶液与本实施例所得缬草素溶液在同样的色谱条件下进行HPLC检测。检测结果显示，对照组缬草素的产量为2.07mg/L，本实施例中缬草素的产量为2.75mg/L。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种利用角担菌合成缬草素的方法，包括以下步骤：
(1)取角担菌菌丝接种于固体培养基上倒置培养，待菌丝萌发后，挑取外围无污染的新鲜菌丝接种至新鲜固体培养基上，继续倒置培养，得到成熟的菌丝，其中，所用角担菌为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌种，其保藏编号为GCMCCNo.9817；
(2)取步骤(1)所得成熟的菌丝接种于种子培养基中，振荡培养，得到种子液；
(3)将步骤(2)所得种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，在发酵培养过程中向发酵培养基中添加香茅醛，然后继续振荡发酵培养，即得含有缬草素的培养液。
2.根据权利要求1所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述在发酵培养过程中向发酵培养基中添加香茅醛的具体过程为：从角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，将香茅醛分批次添加到发酵培养基中。
3.根据权利要求2所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于，所述从角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，将香茅醛分批次添加到发酵培养基中的具体过程为：从角担菌发酵72h开始到发酵108h时间段内，分三批，每隔12h向发酵培养基中添加香茅醛0.5-4mg/L，三次添加完成后香茅醛在发酵培养基中的浓度为1.5-12mg/L。
4.根据权利要求1所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于：将所述步骤(3)得到的含有缬草素的培养液用双层无菌纱布在无菌条件下进行初过滤，取出菌丝体，然后在4℃下冷冻离心并收集上清液，上清液经0.45μm的有机微孔滤膜过滤后得缬草素溶液。
5.根据权利要求1所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述种子液接种于发酵培养基中的接种量为所述发酵培养基体积的2％-10％；所述继续振荡发酵培养过程的培养温度为20-30℃，培养时间为4-7d，转速为100-180r/min。
6.根据权利要求1所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述固体培养基的成分包括：去皮土豆100-300g/L，葡萄糖10-40g/L，琼脂15-20g/L，固体培养基的pH为6-7，固体培养基使用前在115-134℃下灭菌15-30min。
7.根据权利要求1所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述种子培养基的成分包括：去皮土豆100-300g/L，葡萄糖10-40g/L，蛋白胨1-5g/L，硫酸镁1-5g/L，磷酸二氢钾2-10g/L，氯化钠0.5-2g/L，琼脂15-20g/L，种子培养基的pH为6-7，种子培养基使用前在115-134℃下灭菌15-30min。
8.根据权利要求1所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述发酵培养基的成分包括：去皮土豆100-300g/L，葡萄糖10-40g/L，硫酸镁1-5g/L，磷酸二氢钾2-10g/L，氯化钠0.5-2g/L，琼脂15-20g/L，发酵培养基的pH为6-7，发酵培养基使用前在115-134℃下灭菌15-30min。
9.根据权利要求1所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述角担菌菌丝在固体培养基上倒置培养的培养温度为20-30℃，培养时间为48-72h；所述继续倒置培养的培养时间为4-6d。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的利用角担菌合成缬草素的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述振荡培养的培养温度为20-30℃，培养时间为48-72h，转速为100-180r/min。
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