CN106561722B - 裙带菜的抑藻用途及裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法 - Google Patents

裙带菜的抑藻用途及裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明是一种裙带菜的抑藻用途，所抑制的藻类为米氏凯伦藻；用无水甲醇在15℃‑25℃下搅拌浸提裙带菜干粉末，浸提液经过滤和减压蒸干，得蒸干物；向蒸干物中加入蒸馏水，此蒸干物加入蒸馏水，充分振荡，静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，获得裙带菜抑藻上清液作抑藻剂使用。本发明还公开了一种裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法，分离得到具有抑藻活性的组分A11、A21、B41、C11、D11和D41对米氏凯伦藻的生长；经纯度检测，此6个再分组分的纯度达到薄层纯。其抑菌效果好，裙带菜抑藻活性物质的分离纯化工艺简单，可以有效分离得到裙带菜抑藻活性物质。

Description

裙带菜的抑藻用途及裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法
技术领域
本发明涉及一种本发明属于海洋生化工程领域，具体涉及一种裙带菜的抑藻用途，本发明还涉及裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法。
背景技术
裙带菜（Undaria pinnatifida）是一种大型海洋褐藻，在我国分布较为广泛。裙带菜营养丰富，不仅含有大量的维生素、蛋白质、甘露醇和丰富的矿物质，还含有大量的生物活性物质，如岩藻黄素、褐藻酸、褐藻糖胶、留醇类化合物等，同时含有人体必需的高不饱和脂肪酸、有机碘、膳食纤维等成分。已有研究表明，裙带菜具有降血脂、降血压、抗肥胖、抗肿瘤、抗病毒和抗凝血等广泛的生理药理作用。在大型海藻抑制赤潮微藻研究中，裙带菜对赤潮微藻生长的抑制作用的研究很少。目前，仅发现该海藻干粉末的水提物对中肋骨条藻的生长具有较弱的抑制作用，对此赤潮微藻生长的半抑制效应浓度（EC50-120h）高达4.7 g/L，该大型海藻似乎不具有抑制赤潮微藻的应用潜力。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的裙带菜的抑藻用途。
本发明所要解决的另一技术问题是提供了一种裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法。
本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明公开了一种裙带菜的抑藻用途，其所抑制的藻类为米氏凯伦藻。
本发明裙带菜的抑藻用途，其中一种抑藻剂的制法是：先按以下方法制得裙带菜上清液：用无水甲醇在15℃-25℃下搅拌浸提裙带菜干粉末，浸提液经过滤和减压蒸干，制备到蒸干物；向蒸干物中加入蒸馏水，此蒸干物加入蒸馏水，充分振荡，1-4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，获得裙带菜抑藻上清液作抑藻剂使用。
发明人通过研究，发现裙带菜甲醇提取物（如上述抑藻上清液）能强烈地抑制米氏凯伦藻的生长。当浓度为2.0 mg/mL时，抑藻上清液对米氏凯伦藻的生长抑制率为50%（第10d）。
本发明还公开了一种裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法，其特点是，该方法包括以下步骤：
（1）在反应釜中，用无水甲醇在15℃-25℃下搅拌浸提裙带菜干粉末，浸提液经过滤和减压蒸干，制备到蒸干物；向蒸干物中加入蒸馏水，此蒸干物加入蒸馏水，充分振荡，1-4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，获得裙带菜抑藻上清液；
（2）将上清液pH调至11，加入乙酸乙酯萃取；上层减压蒸干，获得组分A；调节下层pH至7，乙酸乙酯萃取，上层减压蒸干，制备到组分B；再将下层pH调节至2，乙酸乙酯萃取，上层和下层分别减压蒸干，获得组分C和组分D；上述4种组分分别溶解于无水甲醇中，制备到4种甲醇溶液；
（3）4种甲醇溶液均采用硅胶柱层析进行分离，组分A、组分B、组分C和组分D的洗脱液分别使用石油醚/乙酸乙酯、氯仿/甲醇、石油醚/乙酸乙酯和氯仿/甲醇；经2次硅胶柱层析分离后，组分A获得3个再分组分：A11、A21和A31；组分B获得4个再分组分：B11、B21、B31和B41；组分C获得1个再分组分：C11；组分D获得4个再分组分：D11、D21、D31和D41；
（4）上述12个再分组分重新溶解于无水甲醇中，进行抑藻活性检测；确认其中6个再分组分A11、A21、B41、C11、D11和D41对米氏凯伦藻的生长具有抑藻活性；经纯度检测，此6个再分组分的纯度达到薄层纯。
其中，步骤（2）中：调pH优选采用1-10 mol/L的氢氧化钠或者氢氧化钾或者氢氧化钙；最优选采用4 mol/L的氢氧化钠。步骤（3）中：组分A、组分B、组分C和组分D的洗脱液分别为体积比为1:0.5的石油醚/乙酸乙酯、1:2.5的氯仿/甲醇、1:18的石油醚/乙酸乙酯和4:1的氯仿/甲醇，流速为1.0 mL/min，每管收集10 mL，洗脱2倍柱体积。
与现有技术相比，本发明提供了一种新的裙带菜的抑藻用途，其抑菌效果好。本发明采用活性追踪法，建立裙带菜抑藻活性物质的分离纯化工艺，该工艺简单，可以有效分离得到裙带菜抑藻活性物质，进一步地为裙带菜在赤潮微藻治理中的应用提供基础。
附图说明
图1为为裙带菜甲醇提取物对米氏凯伦藻生长的影响图（浓度为2.0 mg/mL时，裙带菜甲醇提取物的上清液对米氏凯伦藻的生长抑制率为50%（第10d））；
图2为裙带菜甲醇提取物的4个液液萃取分离组分对米氏凯伦藻生长的影响图（浓度为1.25 mg/mL时，裙带菜甲醇提取物的上清液对米氏凯伦藻的生长抑制率超过70%（第10d））；
图3为裙带菜抑藻活性物质的分离纯化工艺路线图；图中：“—”表示抑藻活性较弱，生长抑制率在≤20%；“+”表示抑藻活性较强，生长抑制率在（20%-50%）范围内；“++”表示抑藻活性强，生长抑制率在（>50%）范围内。
具体实施方式
以下参照附图，进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。
实施例1，参照图3，裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法：
裙带菜干品粉碎成0.3 mm粉末，加入无水甲醇，在双层玻璃反应釜中， 15℃搅拌下浸提12h后，获得浸提液；经过滤和减压蒸干，制备到蒸干物。此蒸干物加入适量蒸馏水，充分振荡，4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，保留上清液。
用4 mol/L氢氧化钠将上清液pH调至11，加入乙酸乙酯萃取。上层减压蒸干，获得组分A。调节下层pH至7，乙酸乙酯萃取，上层减压蒸干，制备到组分B。再将下层pH调节至2，乙酸乙酯萃取，上层和下层分别减压蒸干，获得组分C和组分D。上述4种组分分别溶解于无水甲醇中，制备到4种甲醇溶液。
4个组分均采用硅胶（200-300目）柱层析进行分离，组分A、组分B、组分C和组分D的洗脱液分别为石油醚/乙酸乙酯（1:0.5）、氯仿/甲醇（1:2.5）、石油醚/乙酸乙酯（1:18）和氯仿/甲醇（4:1）。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。合并后，组分A获得3个馏分，组分B获得4个馏分，组分C获得1个馏分，组分D获得4个馏分。将这些馏分再次分别加载于硅胶（100-200目）柱层析上，组分A的所有馏分、组分B的所有馏分、组分C的所有馏分和组分D的所有馏分依次以石油醚/乙酸乙酯（1:1）、氯仿/甲醇（1:5）、石油醚/乙酸乙酯（1:9）和氯仿/甲醇（2:1）为洗脱液。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，经硅胶GF254薄层层析检测，合并。组分A获得3个再分组分（A11、A21和A31），组分B获得4个再分组分（B11、B21、B31和B41），组分C获得1个再分组分（C11），组分D获得4个再分组分（D11、D21、D31和D41）。减压蒸干后，称取质量；上述12个再分组分重新溶解于无水甲醇中，进行抑藻活性检测。
取1 mL再分组分溶液加入到99 mL藻液中，对照组为99 mL藻液中加入1 mL无水甲醇。所有培养瓶在光照培养箱内培养，4d后，显微镜下计数藻细胞数量。结果表明，6个再分组分A11、A21、B41、C11、D11和D41对米氏凯伦藻的生长具有一定的抑藻活性。
将此6种组分溶液点样于硅胶GF254上，分别在氯仿/甲醇（1:1），环己烷/乙酸乙酯（1:2）和正丁醇/醋酸/水（1:1:0.5）等3种展开剂下展开，发现此6种组分均呈现单一斑点；同时，采用通用型显色剂（10%硫酸溶液和碘）以及专属显色剂（铁氰化钾-三氯化铁溶液或碘化铋钾溶液），发现在此3种显色剂下，此6种组分同样呈现单一斑点，表明纯度达到了薄层纯。
实施例2，参照图3，裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法：
称取裙带菜干粉末500 g，溶解于1000 mL无水甲醇，在双层玻璃反应釜中， 20℃搅拌下浸提12h后，获得浸提液。经过滤和减压蒸干，制备到6.85 g蒸干物。此蒸干物中加入25 mL蒸馏水，充分振荡，4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，保留上清液。此上清液显著抑制了米氏凯伦藻的生长，当浓度为2.0 mg/mL时，它对米氏凯伦藻的生长抑制率为52%（第10d）。
用4 mol/L氢氧化钠将上清液pH调至11，加入乙酸乙酯萃取3次。上层40℃下减压蒸干，获得蒸干物2.28 g（组分A）。调节下层pH至7，乙酸乙酯萃取3次，上层40℃下减压蒸干，制备到蒸干物0.26 g（组分B）。再将下层pH调节至2，乙酸乙酯萃取3次，上层和下层分别在40℃减压蒸干，获得蒸干物0.33 g（组分C）和蒸干物0.59 g（组分D）。上述4种组分分别溶解于无水甲醇中，制备到4种甲醇溶液。此4种组分均对米氏凯伦藻的生长表现出强烈的抑制作用。当浓度为1.25 mg/mL时，它们对米氏凯伦藻的生长抑制率在70%以上（第10d）。
组分A（2.1 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×40 cm）进行分离，以石油醚/乙酸乙酯（1:0.5）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以石油醚/乙酸乙酯（1:1）为展开剂，经展开，组分A出现3个斑点，R f依次为0.245、0.596和0.718。组分B（0.2 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×20 cm）进行分离，以氯仿/甲醇（1:2.5）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。
以氯仿/甲醇（1:5）为展开剂，经展开，组分B出现4个斑点，R f依次为0.474、0.553、0.742和0.801。组分C（0.3 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×20 cm）进行分离，以石油醚/乙酸乙酯（1:18）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以石油醚/乙酸乙酯（1:9）为展开剂，经展开，组分C出现1个斑点，R f为0.306。组分D（0.5 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×20 cm）进行分离，以氯仿/甲醇（4:1）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以氯仿/甲醇（2:1）为展开剂，经展开，组分D出现4个斑点，R f依次为0.206、0.185、0.056和0.865。将这些馏分再次分别加载于硅胶（100-200目）柱层析上，组分A的所有馏分、组分B的所有馏分、组分C的所有馏分和组分D的所有馏分依次以石油醚/乙酸乙酯（1:1）、氯仿/甲醇（1:5）、石油醚/乙酸乙酯（1:9）和氯仿/甲醇（2:1）为洗脱液。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测，合并，减压蒸干。组分A获得3个再分组分，0.010 g A11、0.006 g A21、0.098 g A31。组分B获得4个再分组分，0.021 g B11、0.009 g B21、0.019 g B31和0.013 g B41。组分C获得1个再分组分，0.009 g C11。组分D获得4个再分组分，0.009 g D11、0.212 g D21、0.017 g D31和0.004g D41。
上述12个再分组分重新溶解于无水甲醇中，进行抑藻活性检测。取1 mL再分组分溶液加入到99 mL藻液中，对照组为99 mL藻液中加入1 mL无水甲醇，待测的再分组分终浓度为100 μg/mL。所有培养瓶在光照培养箱内培养，4d后，显微镜下计数藻细胞数量。结果表明，6个再分组分A11、A21、B41、C11、D11和D41对米氏凯伦藻的生长具有一定的抑藻活性。将此6种组分溶液点样于硅胶GF254上，分别在氯仿/甲醇（1:1），环己烷/乙酸乙酯（1:2）和正丁醇/醋酸/水（1:1:0.5）等3种展开剂下展开，发现此6种组分均呈现单一斑点；同时，采用通用型显色剂（10%硫酸溶液和碘）以及专属显色剂（铁氰化钾-三氯化铁溶液或碘化铋钾溶液），发现在此3种显色剂下，此6种组分同样呈现单一斑点，表明纯度达到了薄层纯。
实施例3，参照图3，裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法：
称取裙带菜干粉末1000 g，溶解于2500 mL无水甲醇，在双层玻璃反应釜中，室温25℃、搅拌下浸提12h后，获得浸提液。经过滤和减压蒸干，制备到15.0 g蒸干物。此蒸干物中加入50 mL蒸馏水，充分振荡，4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，保留上清液。此上清液明显地抑制了米氏凯伦藻的生长。当浓度为2.0 mg/mL时，它对米氏凯伦藻的生长抑制率为57%（第10d）。
用4 mol/L氢氧化钠将上清液pH调至11，加入乙酸乙酯萃取5次。上层40℃下减压蒸干，获得蒸干物4.55 g（组分A）。调节下层pH至7，乙酸乙酯萃取5次，上层40℃下减压蒸干，制备到蒸干物0.52 g（组分B）。再将下层pH调节至2，乙酸乙酯萃取5次，上层和下层分别在40℃减压蒸干，获得蒸干物0.65 g（组分C）和蒸干物1.26 g（组分D）。上述4种组分分别溶解于无水甲醇中，制备到4种甲醇溶液。此4种组分均对米氏凯伦藻的生长表现出强烈的抑制作用。当浓度为1.25 mg/mL时，它们对米氏凯伦藻的生长抑制率在70%以上（第10d）。
组分A（4.0 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（5.0×50 cm）进行分离，以石油醚/乙酸乙酯（1:0.5）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以石油醚/乙酸乙酯（1:1）为展开剂，经展开，组分A出现3个斑点，R f依次为0.266、0.611和0.732。组分B（0.5 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×40 cm）进行分离，以氯仿/甲醇（1:2.5）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以氯仿/甲醇（1:5）为展开剂，经展开，组分B出现4个斑点，R f依次为0.490、0.569、0.762和0.819。组分C（0.5 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×40 cm）进行分离，以石油醚/乙酸乙酯（1:18）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以石油醚/乙酸乙酯（1:9）为展开剂，经展开，组分C出现1个斑点，R f为0.319。组分D（1.0 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×60 cm）进行分离，以氯仿/甲醇（4:1）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以氯仿/甲醇（2:1）为展开剂，经展开，组分D出现4个斑点，R f依次为0.210、0.192、0.063和0.878。将这些馏分再次分别加载于硅胶（100-200目）柱层析上，组分A的所有馏分、组分B的所有馏分、组分C的所有馏分和组分D的所有馏分依次以石油醚/乙酸乙酯（1:1）、氯仿/甲醇（1:5）、石油醚/乙酸乙酯（1:9）和氯仿/甲醇（2:1）为洗脱液。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测，合并，减压蒸干。组分A获得3个再分组分，0.025 g A11、0.018 g A21、0.216 g A31。组分B获得4个再分组分，0.057g B11、0.021 g B21、0.049 g B31和0.039 g B41。组分C获得1个再分组分，0.021 g C11。组分D获得4个再分组分，0.019 g D11、0.459 g D21、0.042 g D31和0.010 g D41。上述12个再分组分重新溶解于无水甲醇中，进行抑藻活性检测。取1 mL再分组分溶液加入到99 mL藻液中，对照组为99 mL藻液中加入1 mL无水甲醇，待测的再分组分终浓度为100 μg/mL。所有培养瓶在光照培养箱内培养，4d后，显微镜下计数藻细胞数量。结果表明，6个再分组分A11、A21、B41、C11、D11和D41对米氏凯伦藻的生长具有一定的抑藻活性。将此6种组分溶液点样于硅胶GF254上，分别在氯仿/甲醇（1:1），环己烷/乙酸乙酯（1:2）和正丁醇/醋酸/水（1:1:0.5）等3种展开剂下展开，发现此6种组分均呈现单一斑点；同时，采用通用型显色剂（10%硫酸溶液和碘）以及专属显色剂（铁氰化钾-三氯化铁溶液或碘化铋钾溶液），发现在此3种显色剂下，此6种组分同样呈现单一斑点，表明纯度达到了薄层纯。
实施例4，参照图3，裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法：
称取裙带菜干粉末2000 g，溶解于5000 mL无水甲醇，在双层玻璃反应釜中，室温（20℃）、搅拌下浸提12h后，获得浸提液。经过滤和减压蒸干，制备到35.0 g蒸干物。此蒸干物中加入100 mL蒸馏水，充分振荡，4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，保留上清液。此上清液明显地抑制了米氏凯伦藻的生长。当浓度为2.0 mg/mL时，它对米氏凯伦藻的生长抑制率为50%（第10d），参照图1。
用4 mol/L氢氧化钠将上清液pH调至11，加入乙酸乙酯萃取6~8次。上层40℃下减压蒸干，获得蒸干物9.60 g（组分A）。调节下层pH至7，乙酸乙酯萃取6~8次，上层40℃下减压蒸干，制备到蒸干物1.20 g（组分B）。再将下层pH调节至2，乙酸乙酯萃取6~8次，上层和下层分别在40℃减压蒸干，获得蒸干物1.50 g（组分C）和蒸干物2.70 g（组分D）。上述4种组分分别溶解于无水甲醇中，制备到4种甲醇溶液。此4种组分均对米氏凯伦藻的生长表现出强烈的抑制作用。当浓度为1.25 mg/mL时，它们对米氏凯伦藻的生长抑制率超过70%（第10d），参照图2。
组分A（9.0 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（5.0×50 cm）进行分离，以石油醚/乙酸乙酯（1:0.5）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以石油醚/乙酸乙酯（1:1）为展开剂，经展开，组分A出现3个斑点，R f依次为0.250、0.600和0.725。组分B（1.0 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×40 cm）进行分离，以氯仿/甲醇（1:2.5）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以氯仿/甲醇（1:5）为展开剂，经展开，组分B出现4个斑点，R f依次为0.480、0.560、0.750和0.810。组分C（1.0 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×40 cm）进行分离，以石油醚/乙酸乙酯（1:18）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以石油醚/乙酸乙酯（1:9）为展开剂，经展开，组分C出现1个斑点，R f为0.310。组分D（2.5 g）采用硅胶（200-300目）柱层析（3.0×60 cm）进行分离，以氯仿/甲醇（4:1）为洗脱液，流速1.0 mL/min，每个馏分10 mL。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测。以氯仿/甲醇（2:1）为展开剂，经展开，组分D出现4个斑点，R f依次为0.207、0.190、0.060和0.870。将这些馏分再次分别加载于硅胶（100-200目）柱层析上，组分A的所有馏分、组分B的所有馏分、组分C的所有馏分和组分D的所有馏分依次以石油醚/乙酸乙酯（1:1）、氯仿/甲醇（1:5）、石油醚/乙酸乙酯（1:9）和氯仿/甲醇（2:1）为洗脱液。洗脱2倍柱体积后，所得馏分减压浓缩，进行硅胶GF254薄层层析检测，合并，减压蒸干。组分A获得3个再分组分，0.059 g A11、0.047 g A21、0.432 g A31。组分B获得4个再分组分，0.131g B11、0.045 g B21、0.106 g B31和0.084 g B41。组分C获得1个再分组分，0.045 g C11。组分D获得4个再分组分，0.045 g D11、1.106 g D21、0.096 g D31和0.025 g D41。上述12个再分组分重新溶解于无水甲醇中，进行抑藻活性检测。
取1 mL再分组分溶液加入到99 mL藻液中，对照组为99 mL藻液中加入1 mL无水甲醇，待测的再分组分终浓度为100 μg/mL。所有培养瓶在光照培养箱内培养，4d后，显微镜下计数藻细胞数量。结果表明，6个再分组分A11、A21、B41、C11、D11和D41对米氏凯伦藻的生长具有一定的抑藻活性。将此6种组分溶液点样于硅胶GF254上，分别在氯仿/甲醇（1:1），环己烷/乙酸乙酯（1:2）和正丁醇/醋酸/水（1:1:0.5）等3种展开剂下展开，发现此6种组分均呈现单一斑点；同时，采用通用型显色剂（10%硫酸溶液和碘）以及专属显色剂（铁氰化钾-三氯化铁溶液或碘化铋钾溶液），发现在此3种显色剂下，此6种组分同样呈现单一斑点，表明纯度达到了薄层纯。

Claims (4)

1.一种裙带菜的抑藻用途，其特征在于：所抑制的藻类为米氏凯伦藻；裙带菜按以下方法制得裙带菜上清液作抑藻剂：用无水甲醇在15℃-25℃下搅拌浸提裙带菜干粉末，浸提液经过滤和减压蒸干，制备到蒸干物；向蒸干物中加入蒸馏水，此蒸干物加入蒸馏水，充分振荡，1-4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，获得裙带菜抑藻上清液。
2.一种裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
（1）在反应釜中，用无水甲醇在15℃-25℃下搅拌浸提裙带菜干粉末，浸提液经过滤和减压蒸干，制备到蒸干物；向蒸干物中加入蒸馏水，此蒸干物加入蒸馏水，充分振荡，1-4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，获得裙带菜抑藻上清液；
（2）将上清液pH调至11，加入乙酸乙酯萃取；上层减压蒸干，获得组分A；
调节下层pH至7，乙酸乙酯萃取，上层减压蒸干，制备到组分B；再将下层pH调节至2，乙酸乙酯萃取，上层和下层分别减压蒸干，获得组分C和组分D；上述4种组分分别溶解于无水甲醇中，制备到4种甲醇溶液；
（3）4种甲醇溶液均采用硅胶柱层析进行分离，组分A、组分B、组分C和组分D的洗脱液分别使用石油醚/乙酸乙酯、氯仿/甲醇、石油醚/乙酸乙酯和氯仿/甲醇；经2次硅胶柱层析分离后，组分A获得3个再分组分：A11、A21和A31；组分B获得4个再分组分：B11、B21、B31和B41；组分C获得1个再分组分：C11；组分D获得4个再分组分：D11、D21、D31和D41；
（4）上述12个再分组分重新溶解于无水甲醇中，进行抑藻活性检测；确认其中6个再分组分A11、A21、B41、C11、D11和D41对米氏凯伦藻的生长具有抑藻活性；经纯度检测，此6个再分组分的纯度达到薄层纯。
3.根据权利要求2所述的一种裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法，其特征在于，步骤（3）中：组分A、组分B、组分C和组分D的洗脱液分别为体积比为1:0.5的石油醚/乙酸乙酯、1:2.5的氯仿/甲醇、1:18的石油醚/乙酸乙酯和4:1的氯仿/甲醇，流速为1.0 mL/min，每管收集10 mL，洗脱2倍柱体积。
4.根据权利要求2所述的一种裙带菜抑藻活性物质的分离纯化方法，其特征在于，步骤（2）中：调pH采用1-10 mol/L的氢氧化钠或者氢氧化钾或者氢氧化钙。
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