CN106544324B - 人肺炎支原体单克隆抗体及其应用 - Google Patents

人肺炎支原体单克隆抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种人肺炎支原体单克隆抗体及其应用，属于免疫学领域。本发明将人肺炎支原体进行培养、浓缩与纯化，获得高纯度的人肺炎支原体，将其免疫接种小鼠后，将鼠脾脏细胞与鼠骨髓瘤细胞融合，筛选能够稳定分泌人肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株MP‑H8，其保藏编号为CGMCC No.11287，其分泌的单克隆抗体效价高，可达107，特异性好，亲和力强，亲和常数达到3.92×108L/mol，可用于制备人肺炎支原体含量检测试剂盒和抗体检测试剂盒，也可以用于人肺炎支原体的鉴别诊断，具有广泛的应用前景和市场价值。

Description

人肺炎支原体单克隆抗体及其应用
技术领域
本发明涉及免疫学领域与疫苗学领域，具体地，涉及一种抗人肺炎支原体单克隆抗体及产生该抗体的杂交瘤细胞株以及抗体的应用。
背景技术
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae )是一种结构简单、无细胞壁，呈高度多形性的常见病原体，通过呼吸道传播，儿童感染率较高。肺炎支原体感染除引起肺炎外，还可引起肺外感染，如支气管炎、气管炎、咽炎、扁桃体炎等，还可诱发哮喘。肺炎支原体没有细胞壁，故作用于细胞壁的抗菌药物如青霉素类、头孢菌素类不敏感，而儿童处于生长发育期，能够用于治疗儿童肺炎支原体感染的药物选择更少。支原体肺炎的临床症状为发热、咳嗽、畏寒、咽部疼痛、厌食、头痛、肺部罗音等，在发病初期常常被误诊，导致病情加重，甚至发展成致死性肺炎。在感染早期，若能准确地检测出肺炎支原体并将之清除，将会大大降低支原体肺炎的爆发率。因此，肺炎支原体的诊断就显得尤为重要。
目前人肺炎支原体的诊断检测方法很多，分离培养是诊断肺炎支原体的金标准，但是此方法操作复杂，培养耗时长，营养要求高，分离阳性率低，无法快速早期诊断，不适用于临床，所以一直并不作为检验的常规操作。分子生物学诊断方法对实验室条件和操作人员技术要求较高，不适于广泛应用。酶联免疫吸附法(ELISA)具有简单、快速、结果明确、操作简单等优点，已成为临床及检疫诊断领域发展的一个方向。因此，为了提高检测人肺炎支原体的敏感性和特异性，建立一种快速、简易和特异性好的诊断方法是十分必
发明内容
本发明的目的在于提供一种人肺炎支原体的单克隆抗体，用于人肺炎支原体的检测。
本发明的另一目的在于提供上述单克隆抗体的应用。
为了达到上述目的，发明人展开了制备高亲和力抗肺炎支原体抗体的工作。通过对肺炎支原体进行培养，对收获的人肺炎支原体用0.1m2 300KD膜包超滤浓缩，并对浓缩液进行蔗糖密度梯度离心，获得了纯度很高的人肺炎支原体蛋白。Lowry法测人肺炎支原体蛋白含量为2.7mg/ml，稀释蛋白浓度至500μg/ml，用于免疫BALB/c 小鼠，获得了能够稳定分泌人肺炎支原体单抗的杂交瘤细胞株。
本发明提供的一种能够稳定、高效分泌人肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株，其为MP-H8，于2015年10月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，简称CGMCC，邮编 100101)保藏，分类命名为人肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.11287。本发明提供了该人肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株MP-H8在制备人肺炎支原体检测试剂盒中的应用。
进一步，本发明提供了一种人肺炎支原体单克隆抗体，其由保藏编号为CGMCCNo.11287的杂交瘤细胞株分泌获得。
具体地，本发明采用小鼠骨髓瘤细胞SP2/0与小鼠脾细胞融合技术制备抗人肺炎支原体单克隆抗体，步骤如下：
(1)人肺炎支原体培养：用含15％～20％小牛血清的精氨酸支原体肉汤培养基培养人肺炎支原体，收获的人肺炎支原体经 1:1000～1:2000的甲醛37℃灭活120h；
(2)人肺炎支原体纯化：将收获的人肺炎支原体培养液经 300KD 0.1m2膜包超滤浓缩；蔗糖密度梯度离心浓缩液：用20～30％和50～55％的蔗糖30000r/min离心12～16h，对离心获得的人肺炎支原体用0.01mol/L PBS洗涤脱糖；
(3)动物免疫：纯化好的人肺炎支原体反复冻融5～7次后，将蛋白浓度为500μg/mL肺炎支原体与弗氏完全佐剂等体积混合乳化；乳化后于BALB/c小鼠的背部皮下4点免疫注射，0.2mL/只；
(4)加强免疫；首次免疫后的第14天、28天用人肺炎支原体和弗氏不完全佐剂等体积混合乳化，于BALB/c小鼠的背部皮下4 点免疫注射，0.2mL/只。首次免疫后35天睛框采血，分离血清，ELISA 检测血清中的抗体效价，如果抗体效价不低于1：10000，则进行腹腔冲击，将蛋白浓度为500μg/mL的人肺炎支原体注射到BALB/c小鼠腹腔，0.1mL/只；
(5)取BALB/c小鼠脾脏，将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0 按2:1～5:1的比例混合，于37℃水浴滴加1mLPEG1500；然后缓慢加入10ml～15mL无血清1640培养基终止融合，800～1500r/min离心5min～10min，弃掉上清，加入50mL10％胎牛血清的1640培养基重悬，将细胞悬液加入到96孔细胞培养板，100μL/孔(每孔约有 1*105～5*105个细胞)，次日添加HAT培养液，100μL/孔；
(6)杂交瘤细胞长到孔底面积的10％～20％左右时，ELISA 检测细胞上清的抗体效价，对阳性孔的细胞(ELISA结果大于阴性对照2倍以上)进行2～3次亚克隆。ELISA筛选和人肺炎支原体有明显反应活性的细胞株(ELISA结果大于阴性对照10倍以上)，用于扩大培养建库。将筛选的细胞株扩大到10个175cm2细胞培养瓶，待细胞长到瓶底面积的80％时冻存，冻存密度为1×106～5×106个 /mL，1mL/管，共100管，于液氮中长期保存；
(7)将冻存的细胞复苏，培养到细胞覆盖瓶底的80％左右时摇下细胞，计数5×106～1×107个/mL，腹腔免疫BALB/c小鼠，0.5mL/ 只，制备腹水。
(8)纯化单抗腹水先经滤纸过滤初步去除杂质，再经0.45μm 的微孔滤器过滤，过滤后的腹水经Protein A层析柱进一步纯化，获得高纯度的单克隆抗体，于-20℃保存备用。
更进一步地，本发明提供了上述单克隆抗体在制备检测人肺炎支原体试剂盒中的应用。
本发明提供了上述的单克隆抗体在制备检测人肺炎支原体抗体试剂盒中的应用。
本发明提供了一种用于检测人肺炎支原体或抗体的试剂盒，含有上述单克隆抗体。
对本发明的单克隆抗体，经生物标记或化学标记后获得的单克隆抗体也属于本发明的保护范围。
进一步地，经酶标记的上述单克隆抗体属于本发明的保护范围。
所述的酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。
本发明提供了保藏编号为CGMCC No.11287的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在检测生物样品中人肺炎支原体中的应用。
本发明提供了保藏编号为CGMCC No.11287的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在制备预防人肺炎支原体感染药物中的应用。
含有本发明所述单克隆抗体的预防或治疗人肺炎支原体的药物属于本发明的保护范围。
本发明提供了保藏编号为CGMCC No.11287的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体在肺炎支原体疫苗制备过程的质量检测中的应用。
本发明提供的人肺炎支原体单克隆抗体具有如下有益效果：
1、本发明通过0.1m2 300KD膜包超滤人肺炎支原体收获液，可以有效地去除收获液中残留的牛血清，用完整的人肺炎支原体破碎物免疫小鼠，可以获得高效价的单克隆抗体。本发明的单克隆抗体具有较高的效价即反应性，间接法效价最高可达107。
2、本发明的单克隆抗体与人型支原体、解脲支原体等无交叉反应，具有较好的特异性。
3、本发明杂交瘤细胞MP-H8分泌的单克隆抗体的亲和力强，可广泛应用于人肺炎支原体的定性、定量诊断，以及在疫苗生产的抗原检测以及流行病调查均具有较大的应用前景。
附图说明
图1为培养的支原体经甲醛灭活后的电镜图。
图2为本发明纯化的单克隆抗体SDS-PAGE鉴定结果图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；实施例中所用的试剂为市售商品。
实施例1免疫原制备与动物免疫
(1)用含20％小牛血清的精氨酸支原体肉汤培养基培养人肺炎支原体(菌种购自ATCC，产品编号15531)20L，并对人肺炎支原体收获液经1:2000的甲醛在37℃条件下灭活120h。
(2)人肺炎支原体收获液浓缩：将人肺炎支原体灭活液经300KD 0.1m2膜包超滤浓缩至700ml。
(3)用30％和55％的蔗糖30000r/min离心人肺炎支原体浓缩液 12h，对离心获得的人肺炎支原体用0.01mol/L PBS离心洗涤脱糖。
(4)Lowry法测人肺炎支原体蛋白含量为2.7mg/ml，稀释蛋白浓度至500μg/ml。
(5)将纯化好的人肺炎支原体与弗氏完全佐剂各取1mL混合乳化；乳化后于BALB/c小鼠的背部皮下4点免疫注射，0.2mL/ 只。
(6)加强免疫；首次免疫后的第14天、28天用纯化好的人肺炎支原体和弗氏不完全佐剂各取1mL混合乳化，于BALB/c小鼠的背部皮下4点免注射，0.2mL/只。首次免疫后35天睛框采血，分离血清，ELISA检测血清中的抗体效价，如果抗体效价不低于1：10000，则进行腹腔冲击，将纯化好的人肺炎支原体注射到BALB/c小鼠腹腔，0.1mL/只。
实施例2细胞融合及建株
(1)骨髓瘤细胞的准备：细胞融合前两周复苏培养SP2/0细胞株，融合前3天扩大培养，融合前1天对SP2/0细胞进行换液。
(2)脾细胞制备：处死进行动物免疫的小鼠，按照常规方法制备小鼠脾细胞悬液。
(3)根据计数结果将脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0分别加入适量无血清1640培养液，SP2/0细胞晃动混匀，脾细胞吹打均匀。
(4)将脾细胞与SP2/0细胞按2:1～5:1的比例混合于一支50ml离心管中，混匀。
(5)加无血清1640培养液至50ml，1500rpm离心5min，将上清尽量倒净，可用移液枪将管口液体吸净。
(6)轻击融合管底，使沉淀细胞松散均匀，离心管置于37℃水浴，准备融合。
(7)将37℃保温的1ml PEG1500，用滴管缓慢滴入离心管，边滴边转动离心管，使细胞保存在混匀状态。
(8)静置90s，立即在2～4min内缓慢加入15ml无血清的1640培养基(37℃)，尽可能不搅动细胞。
(9)1500rpm离心5min，弃去上清。
(10)加入含10％胎牛血清的1640培养液，轻轻混匀，将混悬液分别加至96孔细胞培养板中，每孔100μl。
(11)将培养板放到37℃，5％CO2培养箱内培养。
(12)融合第2天，添加HAT培养液，每孔100μl。
(13)每2～3天换一次HAT培养液，连续两周观察杂交瘤是否出现，两周后换用HT培养基，观察融合细胞的生长状况。
(14)杂交瘤细胞的筛选：细胞融合后第七天开始观察杂交瘤细胞生长情况，待细胞覆盖孔底面积1/10以上时吸出上清进行抗体 ELISA检测。阳性孔细胞转入24孔板扩大培养，及时做亚克隆。
杂交瘤细胞计数，用含10％胎牛血清的1640培养基稀释杂交瘤细胞。稀释的杂交瘤细胞加入96孔板培养，每孔100μl。37℃、5％ CO2培养7～10天，待出现肉眼可见的克隆，及时检测抗体活性。在倒置显微镜下观察，标出只有单个克隆生长的孔，取上清做抗体检测。将阳性孔的细胞移至24孔板中扩大培养，然后转移至25cm2或者175cm2细胞瓶扩增。扩增后尽快冻存细胞株，编号，保存于液氮中。
经3次亚克隆得到稳定分泌抗体的细胞系，命名为MP-H8，冻存细胞。将杂交瘤细胞株进行保藏，保藏号CGMCC No.11287，分类命名为：人肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株，保藏时间：2015年10 月12日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (China General Microbiological Culture Collection Center，CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。
实施例3单抗细胞株腹水制备及抗体效价检测
按常规方法将冻存的实施例2获得的杂交瘤细胞MP-H8进行复苏，培养，镜下观察细胞生长状况，175cm2的细胞培养瓶细胞覆盖瓶底70％～80％时即可进行接种；按照常规方法腹腔接种BALB/c雌性小鼠，定期收集腹水。
人肺炎支原体单抗腹水鉴定：采用间接ELISA法检测抗体的效价。抗体效价检测结果：人肺炎支原体1μg/ml包被过夜后检测腹水的抗体效价，抗体效价为107。
表1抗体效价检测结果
Figure BDA0001141615120000081
人肺炎支原体单抗纯化：
将腹水经滤纸过滤初步去除杂质。用0.45μm的微孔滤器过滤腹水，进一步去除杂质。将腹水经Protein A层析柱进一步纯化，获得高纯度的单克隆抗体。将纯化的单克隆抗体经SDS-PAGE鉴定，结果见图2。
实施例4抗体亚类测定
用单克隆抗体亚型鉴定试剂盒测实施例3纯化得到的人肺炎支原体单抗，结果显示实施例3得到的单抗属于IgG1。
实施例5杂交瘤细胞系分泌单抗的稳定性检测
把冻存的杂交瘤细胞株MP-H8复苏，传至20代，分别在第1 代、第5代、第10代、第15代和第20代细胞长到80％时取细胞上清，采用间接ELISA法检测细胞上清抗体的效价。把人肺炎支原体蛋白按1μg/ml包被过夜后检测细胞上清的抗体效价，结果见表2。
表2本发明杂交瘤细胞系分泌单抗的稳定性检测结果
Figure BDA0001141615120000091
由表2可知，本发明实施例2获得的杂交瘤细胞株MP-H8传20代后分泌单克隆抗体的能力没有发生明显变化。
实施例6亲和常数测定
将本发明的杂交瘤细胞株分泌的单抗MP-H8纯化后检测其蛋白质含量。采用1:5,1:10,1:20,1:40稀释的不同浓度的人肺炎支原体横向包被酶标板，100μl/孔，4℃包被过夜。第二天洗板后封闭2小时，拍干待用。将纯化后的单抗MP-H8 2倍梯度稀释，纵向加入包被后的酶标板，采用间接ELISA法检测抗原抗体反应的OD值。以各抗原浓度下的曲线平坦段的OD值计为100％，计算50％OD值，考察 50％OD值所对应点的单抗浓度[Ab]t，再根据亲和常数计算公式 K＝(n-1)/2(nAb’-Ab)可以得到本发明单抗的亲和常数为3.92×108 L/mol。
表3亲和常数检测结果
Figure BDA0001141615120000092
实施例7双抗夹心ELISA检测抗肺炎支原体单克隆抗体的特异性
(1)0.05mol/L pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释本发明实施例3的肺炎支原体单抗至包被浓度1μg/mL，加入酶标板100μL/孔，4℃过夜，甩干，用0.01mol/L PBST洗板3次。
(2)用10％小牛血清的PBS(0.01mol/L pH7.4)封闭，200μL/ 孔，37℃2h，甩干。
(3)加入待检样品，肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体各 100μL/孔，并设置阴性对照，37℃孵育1h。
(4)0.01mol/L PBST洗板3次，甩干；将抗肺炎支原体兔多抗 300倍稀释后加入酶标板(100μL/孔)，37℃1h。
(5)0.01mol/L PBST洗板3次，甩干，加入20000倍稀释的商品化的HRP标记的羊抗兔二抗各100μL/孔，37℃1h。
(6)0.01mol/L PBST洗板5次，甩干，TMB底物A液和B液 (各50μL/孔)，37℃10min。
(7)加入2mol/L的硫酸50μL/孔终止反应，于630nm测吸光度。终点稀释法确定ELISA灵敏度：阴性样品为PBST，检测结果以样品值OD630值为阴性值2倍判定为结果阳性。
(8)结果显示本发明人肺炎支原体单抗只能检测肺炎支原体，对人型支原体、解脲支原体无交叉反应。表明本发明单抗可以有效区分上述人肺炎支原体与其他支原体，可用于检测人肺炎支原体，具有较高的特异性。
表4
样品 肺炎支原体 人型支原体 解脲支原体 阴性对照
OD值 1.985 0.046 0.049 0.058
本发明单抗在用于抗原含量检测时，可以作为双抗体夹心 ELISA检测的试剂盒包被抗体，也可用对它进行生物标记或化学标记，作为双抗体夹心ELISA检测试剂盒的夹心酶标抗体；同时，也可以将它和另一物种的多抗配对使用，通过加入夹心抗体的第二酶标抗体的方法制备人肺炎支原体抗原含量检测试剂盒。
本发明的单抗用于制备抗体检测试剂盒时，可以作为包被抗体或者酶标竞争抗体，也可以作为竞争抗体并加入抗鼠酶标二抗的方法进行检测。
由于该单抗良好的活性和特异性，它也具有预防和治疗人肺炎支原体导致的疾病的潜在功能。

Claims (7)

1.一种人肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCC No.11287。
2.权利要求1所述的人肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株在制备人肺炎支原体检测试剂盒中的应用。
3.一种人肺炎支原体单克隆抗体，其特征在于，由保藏编号为CGMCC No.11287的杂交瘤细胞株分泌获得。
4.权利要求3所述的单克隆抗体在制备检测人肺炎支原体试剂盒中的应用。
5.权利要求3所述的单克隆抗体在制备检测人肺炎支原体抗体试剂盒中的应用。
6.一种用于检测人肺炎支原体的试剂盒，其特征在于，含有权利要求3所述的单克隆抗体。
7.一种人肺炎支原体的检测试剂，其特征在于，含有权利要求3所述的单克隆抗体。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102199207A (zh) * 2011-04-28 2011-09-28 黄威权 多种支原体单克隆抗体的制备方法及多联免疫检测试剂

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