CN106543244A - 半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法 - Google Patents

半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106543244A
CN106543244A CN201610979793.5A CN201610979793A CN106543244A CN 106543244 A CN106543244 A CN 106543244A CN 201610979793 A CN201610979793 A CN 201610979793A CN 106543244 A CN106543244 A CN 106543244A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rhodioside
galactose
leu
galactose type
ala
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610979793.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106543244B (zh
Inventor
卢丽丽
齐亭亭
肖敏
徐莉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong University
Original Assignee
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong University filed Critical Shandong University
Priority to CN201610979793.5A priority Critical patent/CN106543244B/zh
Publication of CN106543244A publication Critical patent/CN106543244A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106543244B publication Critical patent/CN106543244B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法，包括如下步骤：(1)采用磷酸缓冲液配制乳糖浓度为0.1M～1M、对羟基苯乙醇浓度为0.05M～0.5M、β‑半乳糖苷酶浓度为0.004mg～4mg/mL的反应体系；(2)将反应体系于30～50℃条件下反应5～30分钟，终止反应，固液分离，取上清液；(3)将上清液，经分离、干燥后，制得半乳糖型红景天苷及其衍生物。该方法底物便宜，反应快速，操作简便，省时省力，生产成本低，应用前景广阔。

Description

半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法
技术领域
本发明涉及半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法，特别涉及一种利用β-半乳糖苷酶合成对羟基苯乙基半乳糖苷及其衍生物的方法，属于糖工程技术领域。
技术背景
红景天苷天然存在于药用植物红景天中，其化学结构是对羟基苯乙基-O-β-D-葡萄糖苷，具有重要的药理学功能，具有神经保护、心血管保护、延缓衰老、抗疲劳、抗氧化、抗肿瘤、抗凝血、抗病毒、抗微波辐射等方面的作用，在中药及护肤品中均有少量添加，应用潜力巨大。目前发现半乳糖苷型的红景天苷即对羟基苯乙基-β-D-半乳糖苷，在神经保护和抗氧化方面更优于红景天苷。
半乳糖型红景天苷可由化学法合成获得，如公开号为CN102241710A(申请号为201110100667.5)的中国专利申请，公开了以2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-溴代半乳糖和对羟基苯乙醇为原料来制备半乳糖型红景天苷的方法，将原料以碳酸银、碘为催化剂，无水硫酸钙为除水剂，分子筛用于吸附小分子溴化氢、水，避光及干燥的惰性气体保护下，溶解于相应的非质子性有机溶剂中，在15～45℃下进行反应，得到中间体乙酰化半乳糖苷；将所得中间体在含有强碱性物质的试剂中进行脱乙酰保护基，溶剂选择为甲醇、乙醇、四氢呋喃或者乙醚，反应时间为2～6h，反应温度为10～40℃；将所得粗品用高效液相法、柱层析法或者溶剂重结晶法纯化得到红景天苷类似物。该方法耗时繁琐，并且涉及到一系列有机溶剂的使用。
相比于化学法，生物酶法能够催化一步反应合成糖苷，底物简单，反应快速，环境友好，但目前所报道的真菌来源的酶合成半乳糖型红景天苷的产率仅有10.9％，且产物单一。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法。
一种半乳糖型红景天苷，对羟基苯乙基-O-β-半乳糖苷，分子式为C14H20O7，化学结构式如下：
一种半乳糖型红景天苷衍生物，对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷，分子式为C20H30O12，化学结构式如下：
一种半乳糖型红景天苷衍生物，对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷，分子式为C20H30O12，化学结构式如下：
上述半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法，包括如下步骤：
(1)采用磷酸缓冲液配制乳糖浓度为0.1M～1M、对羟基苯乙醇浓度为0.05M～0.5M、β-半乳糖苷酶浓度为0.004mg～4mg/mL的反应体系；
所述步骤(1)中的β-半乳糖苷酶溶液中的β-半乳糖苷酶为中国专利文献CN1786170A(申请号200510044897.9)中记载氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-半乳糖苷酶；
(2)将步骤(1)制得的反应体系于30～50℃条件下反应5～30分钟，煮沸终止反应，固液分离，取上清液；
(3)将步骤(2)制得的上清液，经分离、干燥后，制得半乳糖型红景天苷及其衍生物。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中的磷酸缓冲液为浓度10～100mM，pH6～8的磷酸钾缓冲溶液；根据本发明进一步优选的，所述步骤(1)中的缓冲液为50mM、pH7.0的磷酸钾缓冲液。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中的反应条件为50℃反应10分钟。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中的煮沸终止反应条件为100℃煮沸5分钟。
根据本发明优选的，所述步骤(3)中的分离为用规格15mmID×100cm的Bio-gel P2色谱柱进行色谱分离，以水为流动相，样品上样量为1～2mL，洗脱流速为0.2～0.3mL/分钟，分别收集84～108min、120～200min的洗脱样品，分别制得半乳糖型红景天苷和半乳糖型红景天苷衍生物I与半乳糖型红景天苷衍生物II的混合物；薄层层析分离半乳糖型红景天苷衍生物I与半乳糖型红景天苷衍生物II的混合物，制得半乳糖型红景天苷衍生物I和半乳糖型红景天苷衍生物II。
进一步优选的，所述色谱分离的样品上样量为1mL，洗脱流速为0.2mL/分钟。
进一步优选的，所述薄层层析分离为制备型薄层层析板分离，型号Silica gel60F254(Merck,Germany)。
进一步优选的，所述薄层层析分离的步骤如下：
薄层层析板点样后在展层剂中展开，雾喷显色剂后，于120℃烘烤5分钟使糖斑点显色。
最优的，所述展层剂由正丁醇、无水乙醇和水按体积比5：3：2混合配制；显色剂是由体积百分比为20％的硫酸溶液配制的质量浓度为0.5％的3,5-二羟基甲苯溶液。
根据本发明优选的，所述步骤(3)中的干燥为冷冻干燥。
有益效果
1、本发明公开了采用酶法合成半乳糖型红景天苷及其衍生物的方法，应用特定的细菌来源的β-半乳糖苷酶以廉价乳糖为糖基供体、对羟基苯乙醇为糖基受体，一步高效合成多种化合物；
2、本发明所述的半乳糖型红景天苷制备方法底物便宜，反应快速，条件温和，产物分离纯化简单，操作简便，比化学法合成省时省力，大大降低了生产成本，应用前景广阔；此外本发明还同时提供了两种新的半乳糖型红景天苷衍生物，在新药筛选方面具有潜在的应用价值；
3、本发明应用细菌来源的阴沟肠杆菌β-半乳糖苷酶催化乳糖和对羟基苯乙醇底物进行半乳糖基化反应，得到的半乳糖型红景天苷产率比现有酶法合成提高了近3倍。
附图说明
图1为半乳糖型红景天苷的质谱图；
图2为半乳糖型红景天苷的氢谱；
图3为半乳糖型红景天苷的碳谱；
图4为半乳糖型红景天苷的氢氢相关图谱；
图5为半乳糖型红景天苷的碳氢直接相关图谱；
图6为半乳糖型红景天苷的碳氢远程相关图谱；
图7为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷的质谱图；
图8为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷的氢谱；
图9为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷的碳谱；
图10为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷的氢氢相关图谱；
图11为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷的碳氢直接相关图谱；
图12为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷的碳氢远程相关图谱；
图13为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷的质谱图；
图14为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷的氢谱；
图15为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷的碳谱；
图16为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷的氢氢相关图谱；
图17为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷的碳氢直接相关图谱；
图18为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷的碳氢远程相关图谱；
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但本发明所保护范围不限于此。
实施例
半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法，包括如下步骤：
(1)采用浓度50mM、pH7.0的磷酸缓冲液分别配制乳糖浓度为1M，对羟基苯乙醇浓度为0.25M、β-半乳糖苷酶浓度为0.4mg/mL的反应体系；
所述步骤(1)中的β-半乳糖苷酶为中国专利文献CN1786170A(申请号200510044897.9)中记载氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-半乳糖苷酶；
(2)将步骤(1)制得的反应体系于50℃条件下反应5分钟，100℃煮沸10分钟终止反应，10000转/分钟离心20分钟，取上清液；高效液相色谱分析，该反应所产生的半乳糖型红景天苷及其衍生物的总产率为50.0％，其中半乳糖型红景天苷占39.4％，两种衍生物占10.6％.
上述高效液相色谱分析所用设备及条件如下：
安捷伦(Agilent)1200型高压液相色谱仪；安捷伦G1314B紫外检测器；Agilent TCC18分析柱(4.6×250mm)；流动相为甲醇/水(10：90，v/v)；流速为1.0mL/min，柱温25℃；结果分析软件为Agilent Chemstation B.04.01版。反应液按1：1(v/v)的比例加水稀释，煮沸离心后上清用0.22μm的滤膜过滤后，进样分析。
(3)将步骤(2)制得的上清液，用规格15mm ID×100cm的Bio-gel P2色谱柱进行色谱分离，以水为流动相，样品上样量为1mL，洗脱流速为0.2mL/分钟，收集洗脱样品，薄层层析检测，合并迁移距离相同的糖苷产物；然后干燥，制得半乳糖型红景天苷；同时合并两种半乳糖型红景天苷衍生物的洗脱液，浓缩后再进一步通过制备薄层层析分离。样品在制备薄层层析板(PLC Silica gel 60F254,Merck)点样展层，展层结束后，在层析板上每隔10cm取1cm宽的条形小板显色，判定目标糖类在层析板上的位置。然后刮取层析板未显色区域含目标糖苷的硅胶粉末，将其重新溶解于水中，离心取上清，冷冻干燥后分别获得两种迁移率不同的粉末即两种半乳糖型红景天苷衍生物，标记为半乳糖型红景天苷衍生物I和半乳糖型红景天苷衍生物II。
所述薄层层析分离的步骤如下：
薄层层析板点样后在展层剂中展开，雾喷显色剂后，于120℃烘烤5分钟使糖斑点显色；
上述展层剂由正丁醇、无水乙醇和水按体积比5：3：2混合配制；显色剂是由体积百分比为20％的硫酸溶液配制的质量浓度为0.5％的3,5-二羟基甲苯溶液。
(4)半乳糖型红景天苷的结构鉴定
取上述制得的半乳糖型红景天苷的粉末加水稀释后进行质谱分析，目标产物的特征分子离子峰[M+Na]+为m/z 323.2274，[M+K]+为m/z 339.0907，[M+NH4]+为m/z 318.1261(如图1所示)，判断产物分子量约为300，与预期产物分子量一致。
将5mg上述制得的半乳糖型红景天苷溶于氘代水中，进行核磁解析，综合氢谱(如图2所示)、碳谱(如图3所示)、氢氢相关谱(COSY)(如图4所示)、碳氢直接相关谱(HSQC)(如图5所示)、碳氢远程相关谱(HMBC)(如图6所示)，确定各位置碳氢的化学位移和偶合常数，鉴定新合成的产物结构为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖苷。1H NMR图谱上化学位移4.21ppm可观测到半乳糖异头质子的特征双峰信号，偶合常数为7.9Hz，推断半乳糖基通过β-键与对羟基苯乙基分子相连，在HMBC图中可以观测到对羟基苯乙基的C-8(δ70.79)与半乳糖异头质子H-1′(δ4.21)存在耦合信号，证实了β-半乳糖苷键的存在。
(5)半乳糖型红景天苷衍生物I的结构鉴定
取上述制得的半乳糖型红景天苷衍生物I的粉末加水稀释后进行质谱分析，目标产物的特征分子离子峰[M+Na]+为m/z 485.14(如图7所示)，判断产物分子量约为462，与预期产物分子量一致。
将5mg上述制得的半乳糖型红景天苷的衍生物溶于氘代水中，进行核磁解析，综合氢谱(如图8所示)、碳谱(如图9所示)、氢氢相关谱(COSY)(如图10所示)、碳氢直接相关谱(HSQC)(如图11所示)、碳氢远程相关谱(HMBC)(如图12所示)，确定各位置碳氢的化学位移和偶合常数，鉴定新合成的产物结构为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷。1HNMR图谱上化学位移4.25ppm、4.28ppm可分别观测到两个半乳糖异头质子的特征双峰信号，偶合常数分别为7.8Hz、7.9Hz，推断半乳糖形成的糖苷键为β-型，在HMBC图中可以观测到半乳糖型红景天苷半乳糖基的C′-6(δ68.70)与非还原端半乳糖基异头质子H-1″(δ4.28)存在耦合信号，证实了β-1,6半乳糖苷键的存在。
(6)半乳糖型红景天苷衍生物II的结构鉴定
取上述制得的半乳糖型红景天苷衍生物II的粉末加水稀释后进行质谱分析，目标产物的特征分子离子峰[M+Na]+为m/z 485.14(如图13所示)，判断产物分子量约为462，与预期产物分子量一致。
将5mg上述制得的半乳糖型红景天苷衍生物II溶于氘代水中，进行核磁解析，综合氢谱(如图14所示)、碳谱(如图15所示)、氢氢相关谱(COSY)(如图16所示)、碳氢直接相关谱(HSQC)(如图17所示)、碳氢远程相关谱(HMBC)(如图18所示)，确定各位置碳氢的化学位移和偶合常数，鉴定新合成的产物结构为对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷。1HNMR图谱上化学位移4.42ppm、4.29ppm可观测到两个半乳糖异头质子的特征双峰信号，偶合常数分别为7.7Hz、8.0Hz，推断半乳糖形成的糖苷键为β-型，在HMBC图中可以观测到半乳糖型红景天苷半乳糖基的C′-3(δ82.22)与非还原端半乳糖基异头质子H-1″(δ4.42)存在偶合信号，证实了β-1,3半乳糖苷键的存在。
上述质谱分析所用仪器为岛津LCMS-IT-TOF质谱仪(日本)；核磁分析所用仪器为Agilent DD2 600MHz核磁共振波谱仪(美国)。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东大学
<120> 半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1029
<212> PRT
<213> Enterobacter cloacae
<400> 1
Met Pro Asn Thr Leu Ser Leu Thr Leu Ser Ala Ile Leu Ala Arg Arg
1 5 10 15
Asp Trp Glu Asn Pro Gly Val Thr Gln Trp Asn Arg Leu Glu Ala His
20 25 30
Ala Pro Leu His Ser Trp Arg Leu Glu Gln Pro Ala Leu Asp Asp Ala
35 40 45
Ala Ser Ala Ser Arg Arg Ser Leu Asn Gly Val Trp Arg Phe Asn Tyr
50 55 60
Phe Pro Ala Pro Glu Gln Ile Pro Glu Ala Trp Val Thr Glu Asp Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Val Pro Met Pro Val Pro Ser Asn Trp Gln Met Gln Gly
85 90 95
Phe Asp Thr Pro Ile Tyr Thr Asn Val Thr Tyr Pro Ile Pro Val Asn
100 105 110
Pro Pro Phe Val Pro Gln Glu Asn Pro Thr Gly Cys Tyr Ser Leu Thr
115 120 125
Phe Asp Val Asp Asp Ala Trp Leu Gln Ser Gly Gln Thr Arg Ile Ile
130 135 140
Phe Asp Gly Val Asn Ser Ala Phe His Leu Trp Cys Asn Gly Arg Trp
145 150 155 160
Met Gly Tyr Ser Gln Asp Ser Arg Leu Pro Ala Glu Phe Asn Leu Ser
165 170 175
Thr Val Leu Arg Pro Gly Glu Asn Arg Leu Ala Val Met Val Leu Arg
180 185 190
Trp Cys Asp Gly Ser Tyr Leu Glu Asp Gln Asp Met Trp Arg Met Ser
195 200 205
Gly Ile Phe Arg Asp Val Thr Leu Leu His Lys Pro Glu Thr Gln Ile
210 215 220
Ala Asp Tyr Arg Val Val Thr Asp Leu Asn Ala Glu Leu Asp Arg Ala
225 230 235 240
Val Leu Lys Ala Asp Val Ala Leu Ala Gly Ala Gly Phe Ala Asp Cys
245 250 255
Glu Val Val Phe Thr Leu Trp Arg Lys Gly Glu Lys Cys Ala Ser Val
260 265 270
Ser Arg Arg Pro Gly Ser Ala Val Val Asp Glu Arg Gly Ser Trp Asp
275 280 285
Glu Arg Leu Thr Val Ala Ile Pro Ile Asp Arg Pro Ala Leu Trp Ser
290 295 300
Ala Glu Thr Pro Glu Leu Tyr Arg Leu Thr Met Ala Leu Leu Gly Pro
305 310 315 320
Gln Gly Glu Val Leu Glu Val Glu Ala Cys Asp Val Gly Phe Arg Arg
325 330 335
Val Asp Ile Ser Asn Gly Leu Leu Lys Leu Asn Gly Lys Pro Leu Leu
340 345 350
Ile Arg Gly Val Asn Arg Leu Glu His His Pro Glu Asn Gly Gln Val
355 360 365
Met Asp Glu Ala Thr Met Arg Arg Asp Ile Glu Ile Met Lys Gln His
370 375 380
Asn Phe Asn Ala Val Arg Cys Ser His Tyr Pro Asn His Pro Leu Trp
385 390 395 400
Tyr Arg Leu Cys Asp Arg Tyr Gly Leu Tyr Val Val Asp Glu Ala Asn
405 410 415
Ile Glu Thr His Gly Met Val Pro Met Ser Arg Leu Ala Asp Asp Pro
420 425 430
Arg Trp Leu Pro Ala Met Ser Glu Arg Val Thr Arg Met Val Gln Arg
435 440 445
Asp Arg Asn His Pro Ser Ile Ile Ile Trp Ser Leu Gly Asn Glu Ser
450 455 460
Gly His Gly Ala Asn His Asp Ala Leu Tyr Arg Trp Leu Lys Thr Thr
465 470 475 480
Asp Pro Thr Arg Pro Val Gln Tyr Glu Gly Gly Gly Ala Asn Thr Ala
485 490 495
Ala Thr Asp Ile Val Cys Pro Met Tyr Ala Arg Val Asp Trp Asp Gln
500 505 510
Pro Phe Pro Ala Val Pro Lys Trp Ser Ile Lys Lys Trp Ile Gly Met
515 520 525
Pro Asp Glu Thr Arg Pro Leu Ile Leu Cys Glu Tyr Ala His Ala Met
530 535 540
Gly Asn Ser Phe Gly Gly Phe Ala Lys Tyr Trp Gln Ala Phe Arg Ser
545 550 555 560
His Pro Arg Leu Gln Gly Gly Phe Val Trp Asp Trp Val Asp Gln Ala
565 570 575
Leu Thr Lys Lys Asp Glu Lys Gly Asn Ala Phe Trp Ala Tyr Gly Gly
580 585 590
Asp Phe Gly Asp Thr Pro Asn Asp Arg Gln Phe Cys Leu Asn Gly Leu
595 600 605
Val Phe Pro Asp Arg Thr Pro His Pro Ala Leu Tyr Glu Ala Gln Arg
610 615 620
Ala Gln Gln Phe Phe Thr Phe Thr Leu Val Ser Thr Ser Pro Leu Met
625 630 635 640
Ile Glu Val Gln Ser Gly Tyr Leu Phe Arg Pro Thr Asp Asn Glu Val
645 650 655
Leu Ser Trp Thr Val Ala Arg Asp Gly Lys Val Leu Ala Ser Gly Glu
660 665 670
Val Thr Leu Ala Ile Ala Pro Glu Gly Val Gln Arg Leu Glu Ile Ala
675 680 685
Leu Pro Glu Leu Lys Ala Gly Pro Gly Glu Ile Trp Leu Asn Val Glu
690 695 700
Val Arg Gln Pro Arg Ala Thr Pro Trp Ser Pro Ala Gly His Arg Cys
705 710 715 720
Ala Trp Glu Gln Trp Pro Leu Pro Ala Pro Leu Phe Ile Ala Pro Pro
725 730 735
Ala Ser Thr Gly Glu Pro Pro Val Leu Thr Gln Asn Asp Arg Ile Leu
740 745 750
Glu Val Thr His Arg Gln Gln Arg Trp Gln Phe Asp Arg Ala Ser Gly
755 760 765
Tyr Leu Thr Gln Trp Trp Arg Asn Gly Val Glu Thr Leu Leu Ser Pro
770 775 780
Val Thr Asp Asn Val Ser Arg Ala Pro Leu Asp Asn Asp Ile Gly Val
785 790 795 800
Ser Glu Ala Thr Arg Ile Asp Pro Asn Ala Trp Val Glu Arg Trp Lys
805 810 815
Ala Ala Gly Met Tyr Asp Leu Thr Ser Arg Met Leu His Cys Glu Ala
820 825 830
Glu Gln His Ala Arg Glu Val Val Val Thr Thr Leu Asn Val Leu Glu
835 840 845
His Arg Gly Arg Ala Leu Phe Leu Ser Arg Lys Ile Trp Arg Leu Asp
850 855 860
Glu Gln Gly Val Leu His Gly Asp Ile Gln Val Asp Ile Ala Ser Asp
865 870 875 880
Ile Pro Lys Pro Ala Arg Ile Gly Leu Ser Val His Leu Ala Glu Thr
885 890 895
Pro Glu Lys Val Asp Trp Leu Gly Leu Gly Pro His Glu Asn Tyr Pro
900 905 910
Asp Arg Lys Leu Ala Ala Gln Gln Gly Arg Trp Thr Leu Pro Leu Ala
915 920 925
Asp Met His Thr Pro Tyr Ile Phe Pro Thr Glu Asn Gly Leu Arg Cys
930 935 940
Asp Thr Arg Lys Leu Val Leu Gly Ala His Gln Leu Asn Gly Ala Phe
945 950 955 960
His Phe Ser Val Gly Arg Tyr Ser Gln Gln Gln Leu Arg Glu Thr Thr
965 970 975
His His His Leu Leu Arg Glu Glu Pro Gly Gly Trp Leu Asn Leu Asp
980 985 990
Ala Phe His Met Gly Val Gly Gly Asp Asp Ser Trp Ser Pro Ser Val
995 1000 1005
Ser Pro Glu Phe Ile Leu Gln Thr Arg Gln Leu Arg Tyr Thr Phe
1010 1015 1020
Ser Trp Gln Gln Asn Pro
1025

Claims (10)

1.一种半乳糖型红景天苷，其特征在于，命名为：对羟基苯乙基-O-β-半乳糖苷，分子式为C14H20O7，化学结构式如下：
2.一种半乳糖型红景天苷衍生物，其特征在于，命名为：对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,6-β-半乳糖苷，分子式为C20H30O12，化学结构式如下：
3.一种半乳糖型红景天苷衍生物，其特征在于，命名为：对羟基苯乙基-O-β-半乳糖基-1,3-β-半乳糖苷，分子式为C20H30O12，化学结构式如下：
4.权利要求1～3所述半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法，包括如下步骤：
(1)采用磷酸缓冲液配制乳糖浓度为0.1M～1M、对羟基苯乙醇浓度为0.05M～0.5M、β-半乳糖苷酶浓度为0.004mg～4mg/mL的反应体系；
所述步骤(1)中的β-半乳糖苷酶溶液中的β-半乳糖苷酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-半乳糖苷酶；
(2)将步骤(1)制得的反应体系于30～50℃条件下反应5～30分钟，煮沸终止反应，固液分离，取上清液；
(3)将步骤(2)制得的上清液，经分离、干燥后，制得半乳糖型红景天苷及其衍生物。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的磷酸缓冲液为浓度10～100mM，pH6～8的磷酸钾缓冲溶液；
根据本发明进一步优选的，所述步骤(1)中的缓冲液为50mM、pH7.0的磷酸钾缓冲液。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的反应条件为50℃反应10分钟；
优选的，所述步骤(2)中的煮沸终止反应条件为100℃煮沸5分钟。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的分离为用规格15mm ID×100cm的Bio-gel P2色谱柱进行色谱分离，以水为流动相，样品上样量为1～2mL，洗脱流速为0.2～0.3mL/分钟，分别收集84～108min、120～200min的洗脱样品，分别制得半乳糖型红景天苷和半乳糖型红景天苷衍生物I与半乳糖型红景天苷衍生物II的混合物；薄层层析分离半乳糖型红景天苷衍生物I与半乳糖型红景天苷衍生物II的混合物，制得半乳糖型红景天苷衍生物I和半乳糖型红景天苷衍生物II。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述色谱分离的样品上样量为1mL，洗脱流速为0.2mL/分钟；
进一步优选的，所述薄层层析分离为制备型薄层层析板分离，型号Silica gel 60F254。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述薄层层析分离的步骤如下：
薄层层析板点样后在展层剂中展开，雾喷显色剂后，于120℃烘烤5分钟使糖斑点显色；
最优的，所述展层剂由正丁醇、无水乙醇和水按体积比5：3：2混合配制；显色剂是由体积百分比为20％的硫酸溶液配制的质量浓度为0.5％的3,5-二羟基甲苯溶液。
10.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的干燥为冷冻干燥。
CN201610979793.5A 2016-11-08 2016-11-08 半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法 Expired - Fee Related CN106543244B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610979793.5A CN106543244B (zh) 2016-11-08 2016-11-08 半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610979793.5A CN106543244B (zh) 2016-11-08 2016-11-08 半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106543244A true CN106543244A (zh) 2017-03-29
CN106543244B CN106543244B (zh) 2019-07-26

Family

ID=58394717

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610979793.5A Expired - Fee Related CN106543244B (zh) 2016-11-08 2016-11-08 半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106543244B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107857783A (zh) * 2017-11-17 2018-03-30 枣庄学院 红景天苷类似物4,4‑二‑(4‑羟苯基)戊基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷及其合成方法
CN115947771A (zh) * 2022-07-12 2023-04-11 华中科技大学 一种酪醇衍生物及其制备方法与应用
WO2023083226A1 (zh) 2021-11-10 2023-05-19 山东恒鲁生物科技有限公司 一种α-红景天苷及其制备方法与应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1475492A (zh) * 2003-07-17 2004-02-18 中国人民解放军第二军医大学 红景天苷衍生物及其制备方法和用途
CN1786170A (zh) * 2005-10-11 2006-06-14 山东大学 一种高效转糖基β－半乳糖苷酶基因
CN102241708A (zh) * 2011-05-10 2011-11-16 山东大学 一种半乳糖苷化合物及其制备方法
CN102241710A (zh) * 2011-04-21 2011-11-16 南通大学 红景天苷类似物及其制备方法和用途
CN102676478A (zh) * 2012-04-20 2012-09-19 华东理工大学 一种新β-葡萄糖苷酶及其基因和在糖苷合成中的应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1475492A (zh) * 2003-07-17 2004-02-18 中国人民解放军第二军医大学 红景天苷衍生物及其制备方法和用途
CN1786170A (zh) * 2005-10-11 2006-06-14 山东大学 一种高效转糖基β－半乳糖苷酶基因
CN102241710A (zh) * 2011-04-21 2011-11-16 南通大学 红景天苷类似物及其制备方法和用途
CN102241708A (zh) * 2011-05-10 2011-11-16 山东大学 一种半乳糖苷化合物及其制备方法
CN102676478A (zh) * 2012-04-20 2012-09-19 华东理工大学 一种新β-葡萄糖苷酶及其基因和在糖苷合成中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ELENA POTOCKÁ，等: "Enzymatic synthesis of tyrosol glycosides", 《JOURNAL OF MOLECULAR CATALYSIS B: ENZYMATIC》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107857783A (zh) * 2017-11-17 2018-03-30 枣庄学院 红景天苷类似物4,4‑二‑(4‑羟苯基)戊基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷及其合成方法
WO2023083226A1 (zh) 2021-11-10 2023-05-19 山东恒鲁生物科技有限公司 一种α-红景天苷及其制备方法与应用
CN115947771A (zh) * 2022-07-12 2023-04-11 华中科技大学 一种酪醇衍生物及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN106543244B (zh) 2019-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105648021B (zh) 人参稀有皂苷c-k、f1及四种异构体人参皂苷元的制备方法
Wang et al. Gardenia herbal active constituents: applicable separation procedures
CN106543244A (zh) 半乳糖型红景天苷及其衍生物的制备方法
CN106543243A (zh) 一种红景天苷衍生物及其制备方法
Aakermann et al. A comparison of the carotenoids of strains of Oscillatoria and Spirulina (Cyanobacteria)
Kagan et al. Sugar Analysis of Flavonoid Glycosides.
CN105566434B (zh) 一种高效制备环黄芪醇的方法
Kurz et al. Ustilipids, acylated β-D-mannopyranosyl D-erythritols from Ustilago maydis and Geotrichum candidum
CN100453550C (zh) 人参皂苷Rb2的制备工艺
KR100293968B1 (ko) 20(에스)-진세노사이드알에이취투의제조방법
CN105315318A (zh) 一种α‐L‐鼠李糖苷酶在制备5-氟-2’-脱氧脲苷衍生物中的应用
CN103304606B (zh) 咖啡酸糖苷衍生物及其制备方法
KR20080028266A (ko) 펙티네스 또는 비스코자임을 이용하여 인삼 사포닌으로부터장내 진세노사이드 대사물질인 화합물 케이, 화합물와이, 진세노사이드 에프 1 및 화합물 피지-2를 제조하는방법
CN106636286A (zh) 去糖化的海参次级皂苷及其制备方法
Zolfaghari et al. Vavilosides A1/A2–B1/B2, new furostane glycosides from the bulbs of Allium vavilovii with cytotoxic activity
CN105601693B (zh) 人参皂苷f1的制备及其抗肿瘤作用
CN115403648B (zh) 从金花茶中提取的齐墩果烷型三萜皂苷及其制备方法和应用
KR100424438B1 (ko) 효소적 방법에 의한 진세노사이드 알디의 제조방법
CN101792785A (zh) 一种全酶法制备磷酸寡糖的方法
Sun et al. Substoichiometric FeCl3 activation of propargyl glycosides for the synthesis of disaccharides and glycoconjugates
CN110156859A (zh) 芥子酸类化合物及其制备方法和用途
CN105294786B (zh) 克林霉素亚砜的合成方法
CN101152624B (zh) 一种醇羟基亲水色谱固定相及其制备方法
KR101802979B1 (ko) 생물전환에 의한 진세노사이드 f1의 생산방법
CN111875569B (zh) 一种利用天然低共熔溶剂催化转化丹酚酸b的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20190726