CN106526162A - 一种抗精子抗体检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗精子抗体检测方法，属于测定体内血液特性的方法。本发明的试剂盒内装有检测用的浓缩磷酸缓冲液、生物素化羊抗人精子凝集抗体，生物素化羊抗人精子制动化抗体，生物素化羊抗人精子细胞毒抗体，荧光素标记的链霉亲和素，封片剂等试剂及生物薄片，本发明中生物薄片以纯化的精子作为抗原，在反应区内加待测血清，经孵育、漂洗、甩干后，加入相应的生物素化抗精子抗体，经孵育、漂洗、甩干后，再加入荧光素标记的链霉亲和素，形成荧光素标记的链霉亲和素‑生物素荧光复合物，并产生黄绿色荧光，本发明方法能够同时检测患者血清中抗精子凝集抗体、制动化抗体、细胞毒抗体。

Description

一种抗精子抗体检测方法

技术领域

本发明涉及测量体内血液特性的方法，具体是检测血液中抗精子抗体类型的检测方法。

背景技术

抗精子抗体是一个复杂的病理产物，男女均可罹患，男性的精子、精浆，对女性来说皆属特异性抗原，接触到血液后，男女均可引起免疫反应，产生相应的抗体，阻碍精子与卵子结合，而致不孕，男性及女性患者血中和体液中的抗精子抗体是精子、精浆通过自身免疫或同种免疫而产生的，由于精子抗原的多样性，决定了抗精子抗体的复杂性，其中与不育症病因有关，日常临床应用最广的抗精子凝集抗体、精子制动化抗体和精子毒素抗体等抗精子抗体最引人注目。

1.精子凝集抗体

精子凝集抗体在男性和女性不育患者血清中均可发现，它是由精子自身免疫和同种免疫所产生。男性的阳性率约为10％，女性在67.2％～78.9％之间，在37℃对精子有很强的吸着力，凝集精子的类型有头对头、尾对尾和头尾混合3种。

2.精子制动化抗体

精子制动化抗体具有抗体的特性，原因不明不孕妇女血中的阳性率约为17.6％，而对照群的孕妇和未婚妇女，精子凝集阳性率为45.8％，制动化抗体全为阴性。

3.精子细胞毒抗体

精子细胞毒抗体的特点是直接作用于精子，发挥杀灭精子的作用。在有精子凝集因子的男性患者的血中，精子凝集效价与精子细胞毒指数(STI)大致平行，但凝集价高，STI低的也不少。Manarang，Pangan及Behrman等人曾指出STI与精子凝集效价和精子制动化值(SIV)实际处于一种平行关系，但目前认为它是一种独立的抗体。

发明内容

本发明为了解决提供一种抗精子抗体类别的检测方法，而提供一种准确性高，更加灵敏的抗精子抗体类型的检测方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种抗精子抗体的检测方法，其特征在于采用纯化的精子制成生物薄片作为抗原，包被在载玻片的3个反应区内；在反应区内加待测稀释血清，经孵育、漂洗、甩干后，分别加入生物素化羊抗人精子凝集抗体，生物素化羊抗人精子制动化抗体，生物素化羊抗人精子细胞毒抗体，经孵育、漂洗、甩干后，再加入荧光素标记的链霉亲和素，形成荧光素标记的链霉亲和素-生物素荧光复合物，在每个反应区内产生的黄绿色荧光代表该抗体阳性。

一.盒体

本发明的试剂盒包括盒体(1)与盒盖(2)，其特征在于：盒体(1)一侧长边内形成有插孔(3)的试剂架(4)上，插孔(3)分别容纳生物素化羊抗人精子凝集抗体(5)，生物素化羊抗人精子制动化抗体(6)，生物素化羊抗人精子细胞毒抗体(7)，荧光素标记的链霉亲和素(8)，封片剂(9)，盒底的中间设有一个将盒底分成放置缓冲液试剂(10)与放置生物薄片(11)两部分的纸质挡片(12)，生物载片(11)外面塑料包装(13)。

附图说明

图1是本发明试剂盒的示意图；

图2是本发明生物薄片的示意图。

图中：1.盒体 2.盒盖

3.插孔 4.试剂架

5.生物素化羊抗人精子凝集抗体 6.生物素化羊抗人精子制动化抗体

7.生物素化羊抗人精子细胞毒抗体 8.荧光素标记的链霉亲和素

9.封片剂 10.缓冲液试剂

11.生物薄片 11a.抗人精子凝集抗体反应区

11b.抗人精子制动化抗体反应区 11c.抗人精子细胞毒抗体反应区

12.纸质挡片 13.塑料包装

二.试剂盒配备的物品

在本发明试剂盒的瓶架4上各放置有1瓶生物素化羊抗人精子凝集抗体，生物素化羊抗人精子制动化抗体，生物素化羊抗人精子细胞毒抗体，封片剂，异硫氰酸荧光素偶联链霉亲和素，盒底左部分放置有两瓶50ml浓缩的磷酸盐(含缓冲磷酸盐10.2克)缓冲液，右部分放置有8张带有包装袋的生物薄片。

三、生物薄片的制作

本发明生物薄片11的材质为聚苯乙烯，其尺寸与一般载片相似，其一面涂有聚赖氨酸涂层,载片上排列着3个方形的反应区11a、11b、11c，对应的检测区为抗精子凝集抗体，抗精子制动化抗体，抗精子细胞毒抗体，反应区在有涂层的一面向载片内部凹陷，形成25μl容积的凹槽，每个反应区的凹槽都包被有纯化的精子的生物薄片，载片外部包有一层不透光的包装袋，冰箱内2-8℃保存。

具体实施方式：

实施例1

1.本发明试剂盒检测方法

取生物薄片放置室温后，加入1：100PBS稀释的血清，20～37℃1～2h或4℃过夜，0.01mol/L PBS洗2min 3次；依次分别滴加0.01mol/L PBS1:100稀释的生物素化羊抗人精子凝集抗体，生物素化羊抗人精子制动化抗体，生物素化羊抗人精子细胞毒抗体，20～37℃1～2h，0.01mol/L PBS洗2min 3次；各反应区分别滴加0.01mol/L PBS1:100稀释的异硫氰酸荧光素偶联链霉亲和素，20～37℃1～2h，0.01mol/L PBS洗2min 4次；封片剂封片，荧光显微镜10ⅹ40倍视野下观察；FITC在490～495nm激发，在520～530nm发射荧光，如为阳性呈黄绿色。

2.为了更好地理解本发明，下面通过实验来进一步说明本发明在检测抗精子抗体方面的积极效果：

所选用的病例为2015年1月至2016年1月在我院女性不孕不育症患者168例,年龄20～35岁,平均31.5岁,进行抗精子凝集抗体，抗精子制动化抗体，抗精子细胞毒抗体检测，并进行统计学分析。

2.1精子凝集抗体

精子凝集抗体在男性和女性不育患者血清中均可发现，它是由精子自身免疫和同种免疫所产生，男性的阳性率约为10.0％，女性在67.2％～78.9％之间。

2.2抗精子制动化抗体

不孕妇女血中的抗精子制动抗体阳性率约为17.6％，而对照群的孕妇和未婚妇女，精子凝集阳性率为45.8％，制动化抗体全为阴性。

3.3精子细胞毒抗体

精子细胞毒抗体的特点是直接作用于精子，发挥杀灭精子的作用，在本实验中阳性率为12.5％。

抗精子凝集抗体常见得结合部位为精子头部，抗精子制动抗体常出现在精子的尾部，抗精子细胞毒抗体常结合在头部部位。通过本发明检测可以同时检测到可看抗精子凝集抗体，抗精子制动化抗体，抗精子细胞毒抗体可以作为临床诊断和治疗不孕症的良好指标之一，对不孕症的诊断和治疗有重要的研究及应用价值，从而使不孕患者达到孕育的生理要求，提高妊娠效应，减轻不孕患者夫妇心理和社会压力，对维护社会的安定团结具有重要的意义。

Claims (3)

1.一种抗精子抗体检测方法，其特征在于取生物薄片放置室温后，加入1：100PBS稀释的血清，20～37℃1～2h或4℃过夜，0.01mol/L PBS洗2min 3次；依次分别滴加0.01mol/LPBS1:100稀释的生物素化羊抗人精子凝集抗体，生物素化羊抗人精子制动化抗体，生物素化羊抗人精子细胞毒抗体，20～37℃1～2h，0.01mol/L PBS洗2min 3次；各反应区分别滴加0.01mol/L PBS1:100稀释的异硫氰酸荧光素偶联链霉亲和素，20～37℃1～2h，0.01mol/LPBS洗2min 4次；封片剂封片，荧光显微镜10ⅹ40倍视野下观察；FITC在490～495nm激发，在520～530nm发射荧光，如为阳性呈黄绿色。

2.根据权利要求1所述的一种抗精子抗体检测方法，其特征在于羊抗人精子凝集抗体，羊抗人精子制动化抗体，羊抗人精子细胞毒抗体为生物素化抗体，荧光标记物为异硫氰酸荧光素偶联链霉亲和素。

3.根据权利要求1所述的一种抗精子抗体检测方法，其特征在于生物玻片上有3个反应区，按一定间距形成10×10mm的3个方形反应凹槽,凹槽内包被有纯化的精子，凹槽内容体积为25μl，并分别形成对应的抗人精子凝集抗体，抗人精子制动化抗体，抗人精子细胞毒抗体。