CN106525809A - 一种鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法 - Google Patents

一种鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及医药分析技术领域，具体是一种鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，包括以下步骤：待测溶液pH的预调节；一维动态表面增强拉曼光谱图的采集；pH依赖‑二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制；根据二维相关谱图对待测样品中是否添加茶碱、可可碱、咖啡因中一种或多种化学药品进行鉴定。本发明的pH预调节步骤，保证pH自发变化发生在物质最敏感的范围，得到更具特征性的动态变化拉曼图谱，特异性强，灵敏度高，操作步骤简单，检测时间短，能够对止咳平喘中药中是否添加茶碱或咖啡因或可可碱进行准确鉴别。

Description

一种鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的 一种或多种化学药品的方法
技术领域
本发明涉及医药分析技术领域，具体地说，是一种鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法。
背景技术
近年来，一些药厂为了加快中药疗效，谋求高额利益，在止咳平喘中药中添加了西药茶碱、可可碱、咖啡因中的一种或同时添加多种甲基嘌呤类的药物。这些药具有强心、利尿、扩张冠状动脉、松弛支气管平滑肌和兴奋中枢神经系统等作用，可以快速起效，使止咳平喘中药疗效加快。但是这类药物血药浓度安全范围较窄，过量或长期服用，发生重度中毒可能产生室性心动过速、精神失常、惊厥、癫痫发作、昏迷，甚至呼吸和心脏骤停等中毒反应。患者在不知情的情况下，长期或过量服用这些中药，就有可能发生中毒反应，甚至有生命危险。因此，鉴定止咳平喘中药中是否添加了这类药物，是药监部门的一项重要工作。
目前，检测止咳平喘中药中是否添加了茶碱、可可碱、咖啡因等药物的主要方法有HPLC-MS，GC-MS等等，这些方法检测结果准确，但是缺点在于仪器昂贵，样品前处理复杂，检测时间过长，无法满足药监部门现场快速检查的要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鉴定止咳平喘中药中是否添加茶碱、可可碱、咖啡因中一种或多种化学药品的方法。
为了实现上述目的，本发明的第一方面，提供一种鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，包括以下步骤：
步骤一(S1)：待测溶液pH的预调节
在待测止咳平喘中药中加入提取溶剂，超声提取，离心后取上清液作为待测溶液。采用酸或碱溶液，调节待测溶液的pH值在2.5～3.5范围内。另分别配制茶碱、咖啡因、可可碱标准品水溶液，调节pH至2.5～3.5范围内。提取溶剂可以为超纯水，乙醇或者乙醇和水体积比1:1混合溶剂，超声提取时间为10～30min。
步骤二(S2)：一维动态表面增强拉曼光谱图的采集
将预调节pH后的待测溶液、茶碱标准品溶液、咖啡因标准品溶液、可可碱标准品溶液分别与等体积的表面增强试剂混合，取一定体积混合液滴于硅片上。采用拉曼光谱仪，选取一定激光强度、积分时间以及光谱采集时间间隔，对硅片上液滴的边缘处进行连续的拉曼光谱采集，直到液滴由湿态挥发至干态，得到一系列一维动态表面增强拉曼光谱图。一定体积为1μL～3μL，激光强度为60mW～200mW，光谱采集的积分时间为1s～10s，光谱采集时间间隔为0～5s。表面增强试剂为纳米银溶胶。
步骤三(S3)：pH依赖-二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制
并对步骤二所得图谱进行预处理，预处理包括选取300～1800cm-1光谱范围，在选取范围内对光谱进行airPLS法基线校正，WhittakerSmooth法平滑。对预处理后的图谱再分别选取530～820cm-1和1200～1400cm-1两个范围进行二维相关计算并绘制二维相关谱图。二维相关图谱包括二维相关同步谱、二维相关异步谱(以下也简称同步谱、异步谱)。
步骤四(S4)：根据二维相关谱图对待测样品中是否添加茶碱、可可碱、咖啡因中一种或多种化学药品进行鉴定。
对比步骤三所得待测样品和茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱，若待测样品的同步谱中出现与茶碱标准品或咖啡因标准品或可可碱标准品同步谱中相同的交叉峰；且同时待测样品的异步谱中出现与茶碱标准品或咖啡因标准品或可可碱标准品的异步谱中相同的交叉峰，则判断待测样品中添加了茶碱或可可碱或咖啡因。同理，若待测样品同步谱和异步谱中分别同时存在茶碱、咖啡因、可可碱标准品中两种或三种标准品的交叉峰，则判断存在茶碱、咖啡因、可可碱中两种或三种化学药品。若待测样品二维相关图谱中不存在茶碱、咖啡因、可可碱中任何一种标准品的交叉峰，则判断没有添加茶碱、咖啡因和可可碱。
所述的相同交叉峰的判断标准为：待测样品与标准品的交叉峰的横坐标和纵坐标正负相差均在3个波数之内，且待测样品与标准品的交叉峰正负符号相同。
茶碱标准品的交叉峰坐标和峰的正负符号为：
同步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0(1324,1293)>0
异步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0(1324,1293)<0；
咖啡因标准品的交叉峰坐标和峰的正负符号为：
同步谱交叉峰：(640,556)>0，(648,640)>0，(694,648)>0，(1327,1308)>0，(1362,1308)>0，(1359,1327)>0
异步谱交叉峰：(640,556)>0，(648,640)<0，(694,648)>0，(1327,1308)<0，(1362,1308)<0，(1359,1327)>0；
可可碱标准品的交叉峰坐标和峰的正负符号为：
同步谱交叉峰：(639,617)>0，(1319,1311)>0，(1359,1311)>0，(1359,1319)>0
异步谱交叉峰：(639,617)>0，(1319,1311)<0，(1359,1311)<0，(1359,1319)>0。
优选的，步骤一中酸或碱溶液可以为0.1～1mol/L的氢氧化钠溶液、0.1～1mol/L盐酸溶液或0.5～5mol/L柠檬酸钠溶液。
优选的，步骤二中拉曼的激光强度为100mW～150mW，保证得到足够的光谱强度的同时，又避免激光强度过强，溶剂被加热后挥发过快，不能得到足够数量的光谱用于二维相关分析。在本发明的一个更优选实施例中，拉曼的激光强度为100mW。
优选的，步骤二中取1μL纳米银胶与待测样品的混合液滴于硅片上。
优选的，步骤二中光谱采集的积分时间为2s～5s，在本发明的一个更优选实施例中，光谱采集的积分时间为5s。
优选的，步骤二中光谱采集时间间隔为0s，可以在光谱采集过程获得更多的图谱用于二维相关分析。
本发明的技术方案的优点和积极效果如下：
1、pH预调节步骤，得到更具特征性的动态变化拉曼图谱
本发明的技术方案中，在对待测溶液进行拉曼检测之前，对溶液pH进行了预调节。由于本发明利用的是溶剂挥发，使检测微环境pH自发发生变化，这种变化比较小，因此相比现有技术，pH预调节步骤，保证pH自发变化发生在物质最敏感的范围。得到更具特征性的动态变化拉曼图谱。
2、特异性强，能够对止咳平喘中药中是否添加茶碱或咖啡因或可可碱进行准确鉴别。
不同物质即使是结构类似物其表面增强拉曼光谱的变化对于pH变化的响应不同。因此，利用本发明技术方案得到的动态变化表面拉曼光谱以及二维相关图谱具有特异性强的特点，对于物质鉴别，尤其是茶碱、咖啡因、可可碱这种结构类似物鉴别具有一定优势。与传统拉曼检测方法相比结果更准确，能够为药监部门的工作人员提供科学的依据和指导。
3、灵敏度高。
本发明技术方案在液滴边缘进行拉曼检测，根据咖啡环效应，在动态挥发时，待测物以及表面增强剂中的银纳米粒子会在液滴边缘浓集，因此在液滴边缘进行检测，即使采用常规表面增强试剂，也能达到较大的增强效应。能够对含量较低的样品进行检测，满足药品监管的要求。
4、操作步骤简单，检测时间短。
本发明技术方案样品前处理简单，检测步骤简单，检测快速。可以满足现场快速检测的要求。
附图说明
图1为实施例一中对待测中药中是否掺杂了茶碱或咖啡因或可可碱的鉴定方法的流程图；
图2为实施例一中的茶碱标准品一维动态表面增强拉曼光谱图；
图3为实施例一中的咖啡因标准品一维动态表面增强拉曼光谱图；
图4为实施例一中的可可碱标准品一维动态表面增强拉曼光谱图；
图5为实施例一中的1号待测样品一维动态表面增强拉曼光谱图；
图6为茶碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图7为咖啡因标准品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图8为可可碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图9为实施例一1号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图10为实施例一2号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图11为实施例一3号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图12为实施例二中的1号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图13为实施例二中的2号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图14为实施例二中的3号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)。
图15为对比例一中茶碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图16为对比例一中咖啡因标准品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图17为对比例一中可可碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)；
图18为对比例一中待测样品的两个波数范围二维相关同步谱(a)，异步谱(b)。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1
本实施例1采用的拉曼光谱仪是BWS415-785H型便携式拉曼光谱仪(美国必达泰克公司)，激发波长785nm。采用的表面增强试剂为纳米银溶胶，制备方法是：取AgNO3 45mg加二次去离子水250mL溶解，加热至微沸。将1％的柠檬酸三钠水溶液5mL逐滴加入，并剧烈搅拌，持续加热60min。得到灰绿色胶体，冷却至室温，备用。
图1为本实施例对待测中药中是否掺杂了茶碱、咖啡因、或可可碱的鉴定方法的流程图，具体包括以下四步：
步骤一(S1)：待测溶液pH的预调节
在待测止咳平喘中药中加入纯化水作为提取溶剂，超声提取30min，离心后取上清液作为待测溶液。采用0.1、1mol/L的氢氧化钠溶液以及0.1、1mol/L盐酸溶液，调节待测溶液的pH值在2.5～3.0范围内。另分别配制茶碱、咖啡因、可可碱标准品水溶液，同样调节pH至2.5～3.0范围内。
步骤二(S2)：一维动态表面增强拉曼光谱图的采集
将预调节pH后的待测溶液、茶碱标准品溶液、咖啡因标准品溶液、可可碱标准品溶液分别与等体积的表面增强试剂混合，取1μL混合液滴于硅片上。采用拉曼光谱仪，选取100mW的激光强度、光谱采集的积分时间5s，光谱采集时间间隔0s，对硅片上液滴的边缘处进行连续的拉曼光谱采集，直到液滴由湿态挥发至干态，得到一系列一维动态表面增强拉曼光谱图。
步骤三(S3)：pH依赖-二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制
使用matlab软件编写的预处理程序，对步骤二所得图谱进行预处理，包括选取300～1800cm-1光谱范围，在选取范围内对光谱进行airPLS法基线校正，WhittakerSmooth法平滑。使用matlab软件编写的二维相关计算和绘图程序对预处理后的图谱再分别选取530～820cm-1和1200～1400cm-1两个范围进行二维相关计算并绘制二维相关谱图。二维相关图谱包括二维相关同步谱、二维相关异步谱。
这里对步骤S3，S4中的涉及的概念进行说明。
以下实施例中所涉及的概念解释：
同步谱：代表两个波数处光谱强度随外扰而产生变化的相似性。
异步谱：代表两个波数处光谱强度变化的差异性，它反映了这两个波数
处峰强变化的快慢程度以及变化的先后顺序。
同步谱的自相关峰Φ(ν1,ν1)：位于同步谱主对角线上的相关峰，强度代表了该波数处光谱强度变化的程度。
同步谱的交叉峰Φ(ν1,ν2)：位于同步谱非对角线上的相关峰。若两个波数处光谱强度变化同向(同时增加或减小)，交叉峰为正值；若变化反向，交叉峰为负值。
异步谱的交叉峰Ψ(ν1,ν2)：异步相关谱是关于主对角线反对称，不存在自相关峰，只有交叉峰。当两个变量处光谱强度变化速率不同时，就会产生交叉峰。
根据Noda规则，判断主对角线以下(ν1>ν2)区域两个峰变化的时序关系的方法：
①Φ(ν1,ν2)*Ψ(ν1,ν2)>0，说明高波数处ν1的峰强先于ν2处发生变化；
②Φ(ν1,ν2)*Ψ(ν1,ν2)<0，说明高波数处ν1的峰强后于ν2处发生变化；
③Φ(ν1,ν2)≠0,Ψ(ν1,ν2)＝0，表明两波数处对应的变化速率是同步的；
④Φ(ν1,ν2)＝0,Ψ(ν1,ν2)≠0，无法确定时序关系。
步骤四(S4)：根据二维相关谱图对待测样品中是否添加茶碱、可可碱、咖啡因中一种或多种化学药品进行鉴定。
对比步骤三所得待测样品和茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱，若待测样品的同步谱中出现与茶碱标准品或咖啡因标准品或可可碱标准品同步谱中相同的交叉峰；且同时待测样品的异步谱中出现与茶碱标准品或咖啡因标准品或可可碱标准品的异步谱中相同的交叉峰，则判断待测样品中添加了茶碱或可可碱或咖啡因。同理，若待测样品同步谱和异步谱中分别同时存在茶碱、咖啡因、可可碱标准品中两种或三种标准品的交叉峰，则判断存在茶碱、咖啡因、可可碱中两种或三种化学药品。若待测样品二维相关图谱中不存在茶碱、咖啡因、可可碱中任何一种标准品的交叉峰，则判断没有添加茶碱、咖啡因和可可碱。相同交叉峰的判断标准为：待测样品与标准品的交叉峰的横坐标和纵坐标正负相差均在3个波数之内，且待测样品与标准品的交叉峰正负符号相同。
茶碱标准品的交叉峰坐标和峰的正负符号为：
同步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0(1324,1293)>0
异步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0(1324,1293)<0
咖啡因标准品的交叉峰坐标和峰的正负符号为：
同步谱交叉峰：(640,556)>0，(648,640)>0，(694,648)>0，(1327,1308)>0，(1362,1308)>0，(1359,1327)>0
异步谱交叉峰：(640,556)>0，(648,640)<0，(694,648)>0，(1327,1308)<0，(1362,1308)<0，(1359,1327)>0
可可碱标准品的交叉峰坐标和峰的正负符号为：
同步谱交叉峰：(639,617)>0，(1319,1311)>0，(1359,1311)>0，(1359,1319)>0
异步谱交叉峰：(639,617)>0，(1319,1311)<0，(1359,1311)<0，(1359,1319)>0
本实施例1分别选取了三个待测样品对不同的掺杂药物进行分析鉴定：1号待测样品(只含茶碱)，2号待测样品(含有茶碱和可可碱混合物)，3号待测样品(含有茶碱、咖啡因、可可碱混合物)。下面就根据本发明方法提出的步骤，分别对1、2、3号样品进行分析鉴定。
1号待测样品
根据步骤一至步骤四(S1～S4)所述方法对1号待测样品进行分析鉴定。
经步骤一、二得茶碱标准品一维动态表面增强拉曼光谱图，如图2所示。咖啡因标准品一维动态表面增强拉曼光谱图，如图3所示。可可碱标准品一维动态表面增强拉曼光谱图，如图4所示。1号待测样品的一维动态表面增强拉曼光谱图，如图5所示。
经步骤三得茶碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图6(a)，6(b)所示。咖啡因标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图7(a)，7(b)所示。可可碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图8(a)，8(b)所示。1号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图9(a)，9(b)所示。
根据步骤四，对照茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱：图6，图7和图8，分析1号待测样品的二维相关图谱：图9。1号待测样品与茶碱标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0，(1324,1293)>0；异步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0，(1324,1293)<0。因此，判断1号待测样品中掺杂了茶碱。
2号待测样品
根据步骤一至步骤四(S1～S4)所述方法对2号待测样品进行分析鉴定。
经步骤一、二、三得2号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图10(a)，10(b)所示。
根据步骤四，对照茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱：图6，图7和图8，分析1号待测样品的二维相关图谱：图10。2号待测样品与茶碱标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1324,1293)>0；异步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1324,1293)<0。同时，2号待测样品与可可碱标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(639,617)>0，(1319,1311)>0(1359,1311)>0；异步谱交叉峰：(639,617)>0，(1319,1311)<0，(1359,1311)<0。综合分析，2号待测样品同时掺杂了茶碱和可可碱。
3号待测样品
根据步骤一至步骤四(S1～S4)所述方法对3号待测样品进行分析鉴定。
经步骤一、二、三得3号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图11(a)，11(b)所示。
根据步骤四，对照茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱：图6，图7和图8，分析3号待测样品的二维相关图谱：图11。3号待测样品与茶碱标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1324,1293)>0，(1293,1283)>0；异步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1324,1293)<0，(1293,1283)>0。同时，3号待测样品与可可碱标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(639,617)>0，(1319,1311)>0(1359,1311)>0；异步谱交叉峰：(639,617)>0，(1319,1311)<0，(1359,1311)<0。同时，3号待测样品与咖啡因标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(640,556)>0，(648,640)>0，(694,648)>0，(1359,1327)>0；异步谱交叉峰：(640,556)>0，(648,640)<0，(694,648)>0，(1359,1327)>0。综合分析，3号待测样品同时掺杂了茶碱、可可碱和咖啡因。
实施例2
本实施例2分别选取了四个待测样品对掺杂了不同浓度茶碱的中药进行分析鉴定：1号待测样品(含5％茶碱)，2号待测样品(含1％茶碱)，3号待测样品(含0.05％茶碱)。下面就根据本发明方法提出的步骤，分别对1、2、3号样品进行分析鉴定。其中百分比为质量分数。
1号待测样品
根据步骤一至步骤四(S1～S4)所述方法对1号待测样品进行分析鉴定。
经步骤一、二得茶碱标准品一维动态表面增强拉曼光谱图，如图2所示。咖啡因标准品一维动态表面增强拉曼光谱图，如图3所示。可可碱标准品一维动态表面增强拉曼光谱图，如图4所示。1号待测样品的一维动态表面增强拉曼光谱图，如图5所示。
经步骤三得茶碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图6(a)，6(b)所示。咖啡因标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图7(a)，7(b)所示。可可碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图8(a)，8(b)所示。1号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图12(a)，12(b)所示。
根据步骤四，对照茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱：图6，图7和图8，分析1号待测样品的二维相关图谱：图12。1号待测样品与茶碱标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0，(1324,1293)>0；异步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0，(1324,1293)<0。因此，判断1号待测样品中掺杂了茶碱。
2号待测样品
根据步骤一至步骤四(S1～S4)所述方法对2号待测样品进行分析鉴定。
经步骤一、二、三得2号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图13(a)，13(b)所示。
根据步骤四，对照茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱：图6，图7和图8，分析2号待测样品的二维相关图谱：图13。2号待测样品与茶碱标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0，(1324,1293)>0；异步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0，(1324,1293)<0。因此，判断2号待测样品中掺杂了茶碱。
3号待测样品
根据步骤一至步骤四(S1～S4)所述方法对3号待测样品进行分析鉴定。
经步骤一、二、三得3号待测样品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图14(a)，14(b)所示。
根据步骤四，对照茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱：图6，图7和图8，分析3号待测样品的二维相关图谱：图14。3号待测样品与茶碱标准品存在峰坐标相同且符号相同的同步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0，(1324,1293)>0；异步谱交叉峰：(686,678)>0，(565,552)>0，(1293,1238)>0，(1293,1286)>0，(1324,1293)<0。因此，判断3号待测样品中掺杂了茶碱。
对比例1
本对比例的待测样品为实施例1中的2号待样品。经实施例1分析，已知同时掺杂了茶碱和可可碱。
本比较例1与实施例1、实施例2不同。在对待测样品进行分析鉴定时，在步骤一(S1)中，不对待测样品溶液进行pH的预调节，而是对待测样品溶液直接进行步骤二(S2)的表面增强拉曼动态光谱的采集。同样的，标准品溶液也不进行pH预调节。即按照下述步骤进行检测：
步骤一(S1’)：待测溶液和标准品溶液的制备
在待测止咳平喘中药中加入纯化水作为提取溶剂，超声提取30min，离心后取上清液作为待测溶液。同时制备茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的水溶液作为对照品溶液。
步骤二(S2’)：一维动态表面增强拉曼光谱图的采集
将待测溶液、茶碱标准品溶液、咖啡因标准品溶液、可可碱标准品溶液分别与等体积的表面增强试剂混合，取1μL混合液滴于硅片上。采用拉曼光谱仪，选取100mW的激光强度、积分时间5s，光谱采集时间间隔0s，对硅片上液滴的边缘处进行连续的拉曼光谱采集，直到液滴由湿态挥发至干态，得到一系列一维动态表面增强拉曼光谱图。
步骤三(S3’)：二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制
使用matlab软件编写的预处理程序，对步骤二所得图谱进行预处理，包括选取300～1800cm-1光谱范围，在选取范围内对光谱进行airPLS法基线校正，WhittakerSmooth法平滑。使用matlab软件编写的二维相关计算和绘图程序对预处理后的图谱再分别选取530～820cm-1和1200～1400cm-1两个范围进行二维相关计算并绘制二维相关谱图。分别为茶碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图15(a)，15(b)所示。咖啡因标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图16(a)，16(b)所示。可可碱标准品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图17(a)，17(b)所示。待测样品的两个波数范围二维相关同步谱和异步谱，如图18(a)，18(b)所示。
步骤四(S4’)：根据二维相关谱图对待测样品中是否添加茶碱、可可碱、咖啡因中一种或多种化学药品进行鉴定。对照茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱：图15，图16和图17，分析待测样品的二维相关图谱：图18。
但是分析发现：茶碱标准品的二维相关异步谱1200～1400cm-1范围、咖啡因标准品的二维相关异步谱530～820cm-1和1200～1400cm-1范围，图谱均没有明显的特征交叉峰，以信号噪声为主，无法作为对照谱。且分析待测样品的二维相关同步谱和异步谱，发现待测样品二维相关异步谱的交叉峰与可可碱二维相关异步谱的异步谱交叉峰相似，而茶碱的信号均被可可碱的信号掩盖。因此，实施例1与此对比例1相比，实施例1提出的检测方法更具有灵敏性和特异性。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims (8)

1.一种鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：待测溶液pH的预调节
在待测止咳平喘中药中加入提取溶剂，超声提取，离心后取上清液作为待测溶液；采用酸或碱溶液，调节待测溶液的pH值在2.5～3.5范围内；分别配制茶碱、咖啡因、可可碱标准品水溶液，调节pH至2.5～3.5范围内；所述的提取溶剂为超纯水，乙醇或者乙醇和水体积比1:1混合溶剂，超声提取时间为10～30min；
步骤二：一维动态表面增强拉曼光谱图的采集
将步骤一中预调节pH后的待测溶液、茶碱标准品溶液、咖啡因标准品溶液、可可碱标准品溶液分别与等体积的纳米银溶胶混合，取1μL～3μL混合液滴于硅片上；采用拉曼光谱仪，选取，激光强度为60mW～200mW，光谱采集的积分时间为1s～10s，光谱采集时间间隔为0～5s，对硅片上液滴的边缘处进行连续的拉曼光谱采集，直到液滴由湿态挥发至干态，得到一系列一维动态表面增强拉曼光谱图；
步骤三：pH依赖-二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制
对步骤二所得图谱进行预处理，预处理包括选取300～1800cm-1光谱范围，在选取范围内对光谱进行airPLS法基线校正，WhittakerSmooth法平滑；对预处理后的图谱再分别选取530～820cm-1和1200～1400cm-1两个范围进行二维相关计算并绘制二维相关谱图；二维相关图谱包括二维相关同步谱、二维相关异步谱；
步骤四：根据二维相关谱图对待测样品中是否添加茶碱、可可碱、咖啡因中一种或多种化学药品进行鉴定。
2.根据权利要求1所述的鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，其特征在于，所述的步骤四的鉴定方法为：对比步骤三所得待测样品和茶碱标准品、咖啡因标准品、可可碱标准品的二维相关图谱，若待测样品同步谱和异步谱中分别同时存在茶碱、咖啡因、可可碱标准品中两种或三种标准品的交叉峰，则判断存在茶碱、咖啡因、可可碱中两种或三种化学药品；若待测样品二维相关图谱中不存在茶碱、咖啡因、可可碱中任何一种标准品的交叉峰，则判断没有添加茶碱、咖啡因和可可碱。
3.根据权利要求2所述的鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，其特征在于，所述的相同交叉峰的判断标准为：待测样品与标准品的交叉峰的横坐标和纵坐标正负相差均在3个波数之内，且待测样品与标准品的交叉峰正负符号相同。
4.根据权利要求1所述的鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，其特征在于，所述的步骤一中酸或碱溶液为0.1～1mol/L的氢氧化钠溶液、0.1～1mol/L盐酸溶液或0.5～5mol/L柠檬酸钠溶液。
5.根据权利要求1所述的鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，其特征在于，所述的步骤二中拉曼的激光强度为100mW～150mW。
6.根据权利要求1所述的鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，其特征在于，所述的步骤二中取1μL纳米银胶与待测样品的混合液滴于硅片上。
7.根据权利要求1所述的鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，其特征在于，所述的步骤二中光谱采集的积分时间为2s～5s。
8.根据权利要求1所述的鉴定止咳平喘类中药中是否添加茶碱咖啡因可可碱中的一种或多种化学药品的方法，其特征在于，所述的步骤二中光谱采集时间间隔为0s。
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