CN109444054A - 一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡及方法 - Google Patents

一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡及方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于中药制剂检测技术领域，具体涉及一种快速检测祛风除湿中药制剂中非法添加吡罗昔康含量的检测卡，并进一步公开一种快速检测祛风除湿中药制剂中非法添加吡罗昔康含量的方法。本发明所述快速检测祛风除湿中药制剂中非法添加吡罗昔康含量的检测卡，通过对中药制剂中的吡罗昔康进行提取并显色的反应过程，能够快速的对中药制剂中添加的吡罗昔康进行定性检测，并利用现有技术中可定量分析的手持机对所述吡罗昔康的含量进行定量测定，可用于现场快速检测祛除风湿中成药剂中化学成分吡罗昔康的含量；弥补了现有仪器存在成本较高、耗时较长等缺点，并解决了现有试剂盒因其样品中干扰因素多样性，易出现了误检及漏检现象的问题。

Description

一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡及方法
技术领域
本发明属于中药制剂检测技术领域，具体涉及一种快速检测祛风除湿中药制剂中非法添加吡罗昔康含量的检测卡，并进一步公开一种快速检测祛风除湿中药制剂中非法添加吡罗昔康含量的方法。
背景技术
吡罗昔康（Piroxicam，简称PIR），化学式C15H13N3O4S，化学名2-甲基-4-羟基-N-(2-吡啶基)-2H-1或2-苯并噻嗪-3-甲酰胺1,1-二氧化物，商品名又名安尔克、吡罗昔康、吡氧噻嗪、炎痛喜康、希普康或费啶，是一种新型的是非甾体类西药，对治疗风湿性、类风湿性关节炎有明显的镇痛、抗炎及一定的消肿作用，具备较高的治愈率。
目前，市场上的祛风除湿药品主要为风湿片剂、丸剂以及中成药酒两大类产品。为谋求巨额利润，一些不法商家通常会在宣传是纯中药制剂产品中添加价格低廉的西药吡罗昔康以降低成本。但是，长期不当误服吡罗昔康却会导致胃病患者提高胃溃疡发生率，甚至会引起胃穿孔、胃出血；而肝病患者长期误服吡罗昔康则会加重肝损伤，出现中性粒细胞减少、嗜酸性粒细胞增多，头晕恶心，血小板减少，中毒性上皮坏死、多形性红斑、中毒性上皮坏死、大疱性多形红斑（Stevens-Johnson综合征），视力模糊、眼部红肿、高血压、血尿、低血糖，精神抑郁，失眠及精神紧张等严重不良反应。可见，擅自非法在中药制剂中添加吡罗昔康，会给患者带来极大的安全隐患，因此，国家已规定严禁在未标注含有吡罗昔康组分的中成药中使用西药吡罗昔康。
现有技术中，对于非法添加西药吡罗昔康成分检测的常用方法包括高效液相色谱（HPLC法）、液质联用法、超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用法、紫外分光光度法、荧光分光光度法、薄层色谱法等。其中，高效液相色谱（HPLC法）、液质联用法、超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用法由于检测成本高、仪器固定、前处理过程复杂、耗时，操作人员专业要求高等问题，而不适合现场监控和大量样本筛查；而紫外分光光度法、荧光分光光度法、薄层色谱法则存在假阳性、假阴性等干扰问题，并且在检测过程中需要使用大量有机溶剂，会引起检测后的环境污染，不利于现场初筛。
目前，影响市场上针对中药制剂中快速筛查吡罗昔康的方法和手段较少的原因主要包括如下几个方面：
1、多数祛风除湿中成药或保健食品中多含有诸如白芷、威灵仙、独活、补骨脂、香加皮等药材成分，和/或，诸如红糖、红曲、硬脂酸镁、蔗糖、糊精、滑石粉、虫白蜡等辅料成分，这些成分容易与检测液反应而生成紫色化合物，导致肉眼识别容易造成假阳性或假阴性的误判，进而引起检测结果误差；
2、现有快速检测方法中检测液通常使用三氯化铁试剂，但该试剂不仅易溶于水并且有强烈的吸水性，能吸收空气里的水分而潮解，导致检测产品的成分稳定性不好；
3、现有吡罗昔康快速检测常见的提取液为丙酮和三氯甲烷，其中丙酮为易制毒的化学试剂，属于国内禁运试剂，有安全及环境隐患；而三氯甲烷则遇光照会与空气中的氧作用，逐渐分解而生成剧毒的光气（碳酰氯）和氯化氢，并且三氯甲烷有致癌性，对检测人员易造成人身危害；
4、市面上的快检方法通常均只能定性不能定量检测，即只能检测出产品中是否含有吡罗昔康成分，却不能确定具体含量。
可见，现有检测吡罗昔康的方法均存在着无法快速准确的检测目标物质等问题，亟需开发一种可快速检测祛风除湿中药制剂中非法添加吡罗昔康含量的方法。
发明内容
为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，以解决现有技术中吡罗昔康检测存在检测成本高、准确率差、耗时较长的问题；
本发明所要解决的第二个技术问题在于提供一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡。
为解决上述技术问题，本发明所述的一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡，包括外壳以及设置于所述外壳内的试纸条；
所述外壳包括相扣合的上盖和下盖，所述下盖的中间位置成型有容纳所述试纸条的凹槽，所述上盖对应于所述试纸条的位置处设置有加样孔，实现向所述试纸条上滴加所述待检测液；
所述试纸条为浸渍负载有指示剂的试纸，所述指示剂为含有硝酸铁、PEG200和曲拉通X-100的水溶液，其中，
所述硝酸铁的质量浓度为5-35wt%，所述PEG200的质量浓度为1-10wt%，所述曲拉通X-100的质量浓度为1-5wt%。
优选的，所述指示剂中，所述硝酸铁、PEG200、曲拉通X-100的质量比为5：1：1。
本发明还提供了一种制备所述快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡的方法，包括取可降解试纸浸泡于所述指示剂中的步骤，以及将浸泡后的试纸烘干、并置于所述外壳中的步骤。
本发明还提供了一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的装置，即包括所述的检测卡，以及适配的光谱分析手持机；所述光谱分析手持机用于通过预先内置的吡罗昔康浓度曲线定量读取待检样品中吡罗昔康的含量。
本发明还提供了一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，即包括对待检测样品进行提取以制备待检测液的步骤，以及将所述待检测液滴加至所述的检测卡的试纸条上进行检测的步骤；若所述试纸条变色为红色或橙红色，则为含有吡罗昔康，若试纸条颜色无变化或为淡黄色，则不含有吡罗昔康。
本发明还提供了一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，即包括对待检测样品进行提取以制备待检测液的步骤，以及将所述待检测液滴加至所述检测装置中的所述检测卡上进行显色的步骤，并将显色后的检测卡放置于所述手持机上，通过预先内置的浓度曲线定量读取待检样品中吡罗昔康的含量。
本发明还提供了一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，即包括对待检测样品进行提取以制备待检测液的步骤，以及向所述待检测液中加入所述指示剂进行显色检测的步骤，若待检测液变色为红色或橙红色，则为含有吡罗昔康，若待检测液颜色无变化或为淡黄色，则不含有吡罗昔康。
具体的，所述制备待检测液的步骤，包括以含乙酸乙酯和甲醇的混合溶液为提取剂对待检测的中药制剂进行提取的步骤，以及离心收集提取液制得所需待检测液的步骤。
优选的，所述乙酸乙酯与甲醇的体积比为2：1。
更优的所述的快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，还包括对待检测的中药制剂进行前处理的步骤：
当所述中药制剂为胶囊剂时，所述前处理步骤为旋开胶囊壳，将内容物倒出，进行称量；
当所述中药制剂为片剂时，所述前处理步骤为取片剂压碎成粉末，进行称量；
当所述中药制剂为丸剂时，所述前处理步骤为取丸剂剪碎，研细成颗粒，进行称量。
本发明所述快速检测祛风除湿中药制剂中非法添加吡罗昔康含量的检测卡，通过对中药制剂中的吡罗昔康进行提取并检测的反应过程，能够快速的对中药制剂中添加的吡罗昔康进行定性检测，并利用现有技术中可定量分析的手持机对所述吡罗昔康的含量进行定量测定，可用于现场快速检测祛除风湿中成药剂中化学成分吡罗昔康的含量；弥补了现有仪器在检测祛除风湿中成药剂中化学成分吡罗昔康存在成本较高、耗时较长等缺点，并解决了现有吡罗昔康试剂盒因其样品中干扰因素多样性，易出现了误检及漏检现象的问题。
本发明所述检测方法，通过简化的样品提取处理方式，可以将大多数干扰因素去除，形成一种绿色环保“检测卡”+“前处理办法”+“检测仪器”的定量检测方式，有效减少了祛除风湿类中药制剂吡罗昔康快速检测时干扰因子引起的误检和漏检的情况，切实解决了基层监管面临的检测成本高、准确率差、耗时、对检测人员专业素质要求高、对检测人员有安全隐患、检测后废弃检测试纸对环境造成等问题。
本发明所述快速检测祛风除湿中药制剂中非法添加吡罗昔康含量的检测卡，其基材为可降解检测纸，并通过浸渍固化的方式在使用时将原本高危的液体化学试剂变为固定形态，形成空间构型，避免试剂直接接触空气引起的易燃易爆情况，并且在检测后浸泡液与检测目标物中和形成无害的盐类，进一步降低因检测引起的环境问题。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，
图1为本发明所述检测卡的结构示意图；
图2为吡罗昔康浓度与灰阶色度值的标准曲线；
图3为吡罗昔康检测过程中各物质扫描示意图；
图中附图标记表示为：1-上盖，2-下盖，3-凹槽，4-试纸条，5-加样孔，6-PVC板。
具体实施方式
实施例1
如图1所示的结构，本实施例所述快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡，包括外壳以及设置于所述外壳内的试纸条4；
所述外壳包括相扣合的上盖1和下盖2，所述下盖的中间位置成型有容纳所述试纸条的凹槽3，除凹槽3外的其他位置为PVC板6，所述上盖对应于所述试纸条的位置处设置有加样孔5，实现向所述试纸条上滴加所述待检测液；
所述试纸条为浸渍负载有指示剂的试纸，所述指示剂为包括硝酸铁质量浓度20wt%、PEG200质量浓度4wt%，曲拉通X-100质量浓度4wt%的水溶液。
本实施例所述检测卡按照如下方法步骤制备：
（1）制备试纸基材：以可降解的试纸作为吡罗昔康检测试纸的基材；
（2）制备浸泡液：分别取硝酸铁、PEG200、曲拉通X-100溶于水，制成硝酸铁质量浓度20wt%、PEG200质量浓度4wt%，曲拉通X-100质量浓度4wt%的水溶液，备用；
（3）浸泡：将制得的吡罗昔康试纸基材浸泡在浸泡液中50分钟；
（4）制备检测试纸：将浸泡后的吡罗昔康检测试纸基材放置于80摄氏度真空干燥器中，烘干50分钟，得到吡罗昔康检测试纸；
（5）制备检测卡：将检测试纸裁剪成条状，安装于外壳中，制作检测卡。
本实施例所述快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法基于所述试剂卡进行，具体包括如下步骤：
（1）取祛风除湿中药胶囊制剂，旋开胶囊壳，将内容物倒出，进行称量；并取称0.30g样品置于2ml离心管中，加入1.5mL吡罗昔康提取液（v乙酸乙酯：v甲醇=2：1）上下摇匀30秒，于3000转/min离心1分钟，收集上层清液，即为待检测液；
（2）取50ul待检测液滴加到所述检测卡中试纸条的中间位置，静置一分钟；
（3）观察试纸条的颜色变化，本实施例中，所述试纸条变为红色，则检测所述中药中含有吡罗昔康；反之，若试纸条颜色无变化，则中药制剂中不含有吡罗昔康。
实施例2
如图1所示的结构，本实施例所述快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡的结构同实施例1。
本实施例所述快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测装置，包括如图1所示结构的检测卡，以及如中国专利CN105277680A中公开的智能化免疫层析及光谱分析一体化装置，即所述的光谱分析手持机。所述待检测液经检测卡显色反应后，通过在手持机中读取待检物中吡罗昔康含量，可作为吡罗昔康定量检测快检筛查的判断依据。
本实施例中所述光谱分析手持机内置曲线的设定方式为：在质控样品中添加浓度为0、2、5、10、20mg/g的吡罗昔康标准物质，并对该质控样品平均测试20次，检测结果见下表1。通过吡罗昔康浓度与20次平均灰阶色度值建立标准曲线，以灰度色度值为横坐标，吡罗昔康浓度为纵坐标建立标准曲线，如附图2所示。
表1吡罗昔康浓度与灰阶色度值检测结果
浓度mg/g 0 2 5 10 20
20次平均灰阶色度值 298 368 475 630 900
将拟合的吡罗昔康的标准曲线通过后台内置与手持机中，并对待测中药样品进行检测。
本实施例所述快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，基于所述检测装置进行，具体包括如下步骤：
（1）取祛风除湿中药片剂，压碎成粉末后，进行称量；并取称0.30g样品置于2ml离心管中，加入1.5mL吡罗昔康提取液（v乙酸乙酯：v甲醇=2：1）上下摇匀30秒，于3000转/min离心1分钟，收集上层清液，即为待检测液；
（2）用移液器吸取待检液50uL，将其垂直缓慢滴至检测卡观察窗的中间位置，静置一分钟，试纸条变为红色，显示待检测液中含有吡罗昔康；
（3）将检测卡放置于手持机上，通过手持机内置曲线读取检测样品中吡罗昔康的含量。
经测定，本实施例检测的所述中药制剂中吡罗昔康的添加含量为0.03mg/g。
实施例3
本实施例所述快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，包括如下步骤：
（1）取祛风除湿中药丸剂，研细成颗粒后，进行称量；并取称0.30g样品置于2ml离心管中，加入1.5mL吡罗昔康提取液（v乙酸乙酯：v甲醇=2：1）上下摇匀30秒，于3000转/min离心1分钟，收集上层清液，即为待检测液；
（2）分别取硝酸铁、PEG200、曲拉通X-100溶于水，制成硝酸铁质量浓度20wt%、PEG200质量浓度4wt%，曲拉通X-100质量浓度4wt%的水溶液，即为所述指示剂，备用；
（3）取所述待检测液1ml，并滴加所述指示剂1ml混合，静置一分钟，观察溶液的颜色变化，本实施例中，所述溶液变为红色，则判定所述中药中含有吡罗昔康；反之，若反应液颜色无变化，则判定中药制剂中不含有吡罗昔康。
实验例
1、全波长扫描结果
取吡罗昔康稀释后浓度为10mg/kg的标准溶液，以岛津UV2600分光光度计进行全波长扫描，结果如附图3所示，可见其最大吸收波长为335nm，吸光度为2.619ABS；另取按照实施例1中配制的指示剂进行全波长扫描，结果如图3所示，可见其最大吸收波长为320nm，吸光度为5.01ABS；将吡罗昔康10mg/kg的标准溶液与按照实施例1中配制的指示剂进行等体积混合后，进行全波长扫描，结果如附图3所示，可见新生成的红色配位物最大吸收波长为520nm，吸光度为0.710ABS。
可见，本发明所述检测方法中，整个反应过程中使用和产生的物质之间并无相互影响。
2、祛除风湿有效成分特异性实验
因双氯芬酸钠、布洛芬为治疗祛除风湿止痛的有效成分，故而选择这两种做特异性试验，实验过程如实施例3的提取和指示剂检测方式，实验测定结果见下表2所示。
表2特异性反应结果
名称 显色 检测结果
双氯芬酸钠 黄色 0.00
布洛芬 黄色 0.01
由上表可知，本发明所述方法中，检测物与双氯芬酸钠、布洛芬无交叉影响。
3、祛除风湿中成药剂辅料交叉反应
由于祛除风湿中药制剂中经常添加红糖、红曲、硬脂酸镁、蔗糖、糊精、滑石粉、虫白蜡等辅料成分，其中红糖、糊精、蔗糖等溶于水，硬脂酸镁不溶于醇，滑石粉、虫白蜡属于硬质物质。故而选择这两种做特异性试验，实验过程如实施例3的提取和指示剂检测方式，实验测定结果见下表3所示。
表3祛除风湿中成药剂辅料检测结果
名称 显色情况 检测结果
红糖 淡黄色 0.01
红曲 淡黄色 0
硬脂酸镁 淡黄色 0
蔗糖 淡黄色 0
糊精 淡黄色 0
滑石粉 淡黄色 0
虫白蜡 淡黄色 0
可见，上述辅料本发明通过相似相溶原理去除，均不能提取，故而上述辅料对本发明无干扰。
4、加标回收率
取片剂样品按照实例3中方法进行检测，检测结果如下表4所示：
表4片剂样品检测结果
加标浓度（mg/ml） 0.00 2.00 5.00 10.00 20.00
100次平均检测结果（mg/ml） 0.05 1.97 4.98 9.95 19.78
扣除空白结果 0 1.92 4.93 9.90 19.73
平均加标回收率（%） / 96.00% 98.60% 99.00% 98.65%
可见，在加标浓度分别为0、2、5、10、20mg/ml，检测100次后平均加标回收率96.00-99.00%，该项试验符合置信区间95%的要求。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡，其特征在于，包括外壳以及设置于所述外壳内的试纸条；
所述外壳包括相扣合的上盖和下盖，所述下盖的中间位置成型有容纳所述试纸条的凹槽，所述上盖对应于所述试纸条的位置处设置有加样孔，实现向所述试纸条上滴加所述待检测液；
所述试纸条为浸渍负载有指示剂的试纸，所述指示剂为含有硝酸铁、PEG200和曲拉通X-100的水溶液，其中，
所述硝酸铁的质量浓度为5-35wt%，所述PEG200的质量浓度为1-10wt%，所述曲拉通X-100的质量浓度为1-5wt%。
2.根据权利要求1所述的快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡，其特征在于，所述指示剂中，所述硝酸铁、PEG200、曲拉通X-100的质量比为5：1：1。
3.一种制备权利要求1或2所述快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的检测卡的方法，其特征在于，包括取可降解试纸浸泡于所述指示剂中的步骤，以及将浸泡后的试纸烘干、并置于所述外壳中的步骤。
4.一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的装置，其特征在于，包括权利要求1或2所述的检测卡，以及适配的光谱分析手持机；所述光谱分析手持机用于通过预先内置的吡罗昔康浓度曲线定量读取待检样品中吡罗昔康的含量。
5.一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，其特征在于，包括对待检测样品进行提取以制备待检测液的步骤，以及将所述待检测液滴加至权利要求1或2所述的检测卡的试纸条上进行检测的步骤；若所述试纸条变色为红色或橙红色，则为含有吡罗昔康；若试纸条颜色无变化或为淡黄色，则不含有吡罗昔康。
6.一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，其特征在于，包括对待检测样品进行提取以制备待检测液的步骤，以及将所述待检测液滴加至权利要求3所述检测装置中的所述检测卡上进行显色的步骤，并将显色后的检测卡放置于所述手持机上，通过预先内置的浓度曲线定量读取待检样品中吡罗昔康的含量。
7.一种快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，其特征在于，包括对待检测样品进行提取以制备待检测液的步骤，以及向所述待检测液中加入所述指示剂进行显色检测的步骤，若待检测液变色为红色或橙红色，则为含有吡罗昔康，若待检测液颜色无变化或为淡黄色，则不含有吡罗昔康。
8.根据权利要求5或6或7所述的快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，其特征在于，所述制备待检测液的步骤，包括以含乙酸乙酯和甲醇的混合溶液为提取剂对待检测的中药制剂进行提取的步骤，以及离心收集提取液制得所需待检测液的步骤。
9.根据权利要求8所述的快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，其特征在于，所述乙酸乙酯与甲醇的体积比为2：1。
10.根据权利要求8或9所述的快速检测祛风除湿中药中吡罗昔康含量的方法，其特征在于，还包括对待检测的中药制剂进行前处理的步骤：
当所述中药制剂为胶囊剂时，所述前处理步骤为旋开胶囊壳，将内容物倒出，进行称量；
当所述中药制剂为片剂时，所述前处理步骤为取片剂压碎成粉末，进行称量；当所述中药制剂为丸剂时，所述前处理步骤为取丸剂剪碎，研细成颗粒，进行称量。
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