CN106501250A - 一种快速检测试纸条以及采用该试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速检测试纸条，包括支撑背板和贴附在支撑背板上的检测膜，检测膜包括其上设有检测带的硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜左侧的支撑背板上粘贴有与硝酸纤维素膜相搭接的吸水膜，在硝酸纤维素膜右侧的支撑背板上依次搭接设置有底物垫、酶片和样品垫；本发明的优点在于首次利用偶合反应原理制作用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条，试剂条结构简单，制作快捷，检测时操作方便，不需要专用仪器设备，无需配制试剂，检测人员不需专业培训，通过观察检测带的颜色即可直接看出样品中有无农药残留的存在，非常直观。

Description

一种快速检测试纸条以及采用该试纸条检测有机磷和氨基甲 酸酯类农药残留的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种快速检测试纸条，本发明还涉及采用该试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法。

背景技术

农药作为防治病虫害的重要工具,已逐渐成为农业生产的一个重要环节。但是出于监管以及使用时的一些漏洞,农药残留问题已逐渐成为现代农业发展的障碍之一。有机磷类与氨基甲酸酯类杀农药以其广谱、高效、易降解、半衰期短等优点广泛应用在现代农业中,给人类带了巨大的经济效益,但同时也产生了环境和食品污染等问题。近年来食品安全重大事件层出不断,导致人们对于国内的食品安全普遍持怀疑态度,如何度过这场“信任危机”是我国食品行业急待解决的问题。

现行农药的检测方法主要包括仪器检测和快速检测,其中仪器检测主要包括气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱一质谱联用技术等在内的诸多仪器检测方法；快速检测主要包括比色法、酶片法及生物传感器法。采用仪器检测蔬菜农药残留时，因对检测人员素质要求高、设备昂贵、检验分析周期长、检验费用多等特点，难于实现市场的快速检测，可以作为检测结果的最终判定检测方法使用；快速检测法操作简便，不需要仪器设备和配制试剂，检测人员不需培训，是市场、车站、乡镇等对检测灵敏度要求较低的场所使用的最佳检测方法。现有的农残速测法与传统的色谱法、光谱法比较,虽然更适用于大量样品筛选及现场检测，但缺点是准确度及灵敏度欠缺。为了保证食品的质量安全,促进我国农产品的对外出口贸易，研究有效的农药残留速测分析方法有着十分重要的意义。

可以看出，现有食品质量监督体系普遍是建立在实验室仪器分析技术的基础上,食品的抽样送检过程,不仅耗时费力,且信息发布严重滞后,很难对消费者质疑的产品进行快速反应。同时,由于对监管体制的不信任,越来越多的消费者期望能自己对产品进行快速定性检测,尤其是对每日生活所必需的水果蔬菜。因此,迫切需要发展快速、灵敏、低成本的食品安全现场快测技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高灵敏、低成本、易操作的快速检测试纸条，本发明还提供采用该试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的快速检测试纸条，包括支撑背板和贴附在所述支撑背板上的检测膜，所述检测膜包括其上设有检测带的硝酸纤维素膜，在所述硝酸纤维素膜左侧的支撑背板上粘贴有与所述硝酸纤维素膜相搭接的吸水膜，在所述硝酸纤维素膜右侧的支撑背板上依次搭接设置有底物垫、酶片和样品垫；

具体制备方法包括下述步骤：

第一步，将重氮盐配制成20~60mg/ml的溶液，划线于硝酸纤维素膜上形成宽度1~2 mm的检测带；将划过重氮盐的硝酸纤维素膜剪成长10~20mm、宽3~5mm长条，室温避光晾干；

第二步，将厚度0.2~0.5mm的玻璃纤维膜剪成长10~20mm、宽3~5mm的长条，浸泡在活性2000U/ml的乙酰胆碱酯酶溶液中30min，取出后于真空冷冻干燥机中抽干，制成酶片备用；

第三步，将厚度0.3~0.6mm的聚酯纤维膜剪成长10~20mm、宽3~5mm的长条，浸泡在100mM的吲哚乙酸酯的溶液中30min，取出后于真空冷冻干燥机中抽干，制成底物垫备用；

第四步，将厚度0.4~0.7mm的吸水纸剪成长10~20mm、宽3~5mm的长条状，作为样品垫；将厚度0.3~0.5mm的吸水纸剪成长10~20mm、宽3~5mm的长条状，作为吸水膜；

第五步，将厚度0.3~0.7mm的聚氯乙烯塑料薄片剪切成长度60~100mm，宽度3~5mm的长条状作为支撑背板，将第一步制备的长条状硝酸纤维素膜粘贴于支撑背板的中部，在其左侧粘贴吸水膜，在其右侧依次粘贴底物垫、酶片和样品垫；避光、干燥后，低温保存。实际粘贴时，相邻两膜片之间的搭接长度为1~2mm。

为方便保存、运输和使用，制备好的快速检测试纸条可放置在扁平薄壳状的透明检测卡体中（支撑背板粘贴在卡体底部），在检测卡体的上表面开设有检测窗孔和加样孔，置于检测卡体内的试纸条的样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜上的检测带正对检测窗孔。

采用本发明快速检测试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法为：

第一步，将待测的蔬菜样品剪成1cm左右见方碎片，取1g放入小烧杯中，加入5mL缓冲溶液，振荡1min~2min，倒出样品提取液，静置3min~5min待用；

其中所用缓冲溶液为：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1L蒸馏水溶解既得；

第二步，将得到的样品提取液滴入到样品垫上，由于虹吸作用原理，样品液经过酶片到达底物垫，然后向硝酸纤维素膜上扩散，与固定在硝酸纤维素膜上的检测带发生偶合反应；

第三步，25℃条件下，5~15分钟内肉眼观察检测带的颜色变化，反应结果有以下两种情况：

a、当检测带显示出棕红色或蓝色印记带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品农药残留不超标；

b、当检测带不显示颜色或淡黄色，表示检测结果为阳性，说明被检测样品农药残留超标。

本发明的优点在于首次利用偶合反应原理制作用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条，试剂条结构简单，制作快捷，检测时操作方便，不需要专用仪器设备，无需配制试剂，检测人员不需专业培训，通过观察检测带的颜色即可直接看出样品中有无农药残留的存在，非常直观。

附图说明

图1是本发明的结构示意图。

图2是放置本发明制备的快速检测试纸条的透明检测卡体的结构图。

具体实施方式

如图1所示，本发明所述的快速检测试纸条，包括支撑背板1和贴附在支撑背板上的检测膜，检测膜包括其上设有检测带2的硝酸纤维素膜3，在硝酸纤维素膜3左侧的支撑背板上粘贴有与硝酸纤维素膜相搭接的吸水膜4，在硝酸纤维素膜右侧的支撑背板上依次搭接设置有底物垫5、酶片6和样品垫7；

其具体制备方法包括下述步骤：

第一步，将重氮盐（固红、固蓝等）配制成50mg/ml的溶液，划线于硝酸纤维素膜3上形成宽度2mm的检测带2；将划过重氮盐的硝酸纤维素膜剪成长20mm、宽4mm长条，室温避光晾干；

第二步，将厚度0.5mm的玻璃纤维膜剪成长10mm、宽4mm的长条，浸泡在活性2000U/ml的乙酰胆碱酯酶溶液中30min，取出后于真空冷冻干燥机中抽干，制成酶片6备用；

第三步，将厚度0.6mm的聚酯纤维膜剪成长10mm、宽4mm的长条，浸泡在100mM的吲哚乙酸酯的溶液中30min，取出后于真空冷冻干燥机中抽干（5min分钟即可），制成底物垫5备用；与玻璃纤维膜和吸水纸相比，聚酯纤维膜的样品溶液扩散性较好，能促进试纸条的层析作用，且显色效果良好，是底物固定化材料的最佳选择；

第四步，将厚度0.4mm的吸水纸剪成长10mm、宽4mm的长条状，作为样品垫7；将厚度0.5mm的吸水纸剪成长10mm、宽4mm的长条状，作为吸水膜4；

第五步，将厚度0.7mm的聚氯乙烯塑料薄片剪切成长度80mm，宽度4mm的长条状作为支撑背板1，将第一步制备的长条状硝酸纤维素膜3粘贴于支撑背板1的中部，在其左侧粘贴吸水膜4，在其右侧依次粘贴底物垫5、酶片6和样品垫7，相邻两膜片之间的搭接长度为1~2mm；避光、干燥后，低温保存。

在检测卡体8的上表面开设有检测窗孔9和加样孔10，置于检测卡体8内的试纸条的样品垫7正对加样孔10，硝酸纤维素膜3上的检测带2正对检测窗孔9。检测卡体8的结构见图2。

采用本发明制备的快速检测试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法，其特征在于包括下述步骤：

第一步，将待测的蔬菜样品剪成1cm左右见方碎片，取1g放入小烧杯中，加入5mL缓冲溶液，振荡1min~2min，倒出样品提取液，静置3min~5min待用；

其中所用缓冲溶液为：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1L蒸馏水溶解既得；

第二步，将得到的样品提取液滴入到样品垫7上，由于虹吸作用原理，样品液经过酶片6到达底物垫5，然后向硝酸纤维素膜3上扩散，与固定在硝酸纤维素膜3上的检测带2发生偶合反应；

第三步，25℃条件下，5~15分钟内肉眼观察检测带2的颜色变化，反应结果有以下两种情况：

a、当检测带2显示出棕红色或蓝色印记带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品农药残留不超标；

b、当检测带2不显示颜色或淡黄色，表示检测结果为阳性，说明被检测样品农药残留超标。

下面选择三种常用的农药马拉硫磷、甲胺磷和氧化乐果样品按本发明方法进行检测试验

检测实例1

第一步，分别将0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L的马拉硫磷喷洒在青菜叶片上，24~48h后，擦拭表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，分别取样品1g，放入小烧杯中，加入5mL缓冲溶液，振荡1min-2min，倒出提取液，静置3min~5min待用。

第二步，分别将对照PBS和待检测的样品液从加样孔10中滴入到样品垫7上，由于虹吸作用原理，样品液经过酶垫6到达底物垫5，向硝酸纤维素膜3扩散，与固定在硝酸纤维素膜3上的固红试剂（检测带2）发生偶合反应。

第三步，25℃条件下，5~15分钟内肉眼观察检测孔9中颜色变化并与检测对照孔进行比对。检测结果显示：

a、当马拉硫磷浓度为0.01mg/L、0.1mg/L时，所述检测带2显示出棕红色印记带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品农药残留不超标；

b、当马拉硫磷浓度为1mg/L时，检测带2不显示颜色，表示检测结果为阳性，说明被检测样品农药残留超标。

检测实例2

第一步，分别将0.03mg/L、0.3mg/L、1mg/L的甲胺磷喷洒在青菜叶片上，24~48h后，擦拭表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，分别取样品1g，放入小烧杯中，加入5mL缓冲溶液，振荡1min-2min，倒出提取液，静置3min-5min待用。

第二步，分别将对照PBS和待检测的样品液从加样孔10中滴入到样品垫7上，由于虹吸作用原理，样品液经过酶垫6到达底物垫5，向硝酸纤维素膜3扩散，与固定在硝酸纤维素膜3上的固红试剂（检测带2）发生偶合反应。

第三步，25℃条件下，5~15分钟内肉眼观察检测孔中颜色变化并与检测对照孔进行比对。结果显示：

a、当甲胺磷浓度为0.03mg/L时，检测带2显示出棕红色印记带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品农药残留不超标；

b、当甲胺磷浓度为0. 3mg/L时，检测带2不显示颜色；当甲胺磷浓度为1mg/L时，检测带2显示淡黄色。表示甲胺磷浓度为0. 3mg/L和1mg/L时检测结果为阳性，说明被检测样品农药残留超标。

检测实例3

第一步，分别将0.05mg/L、0.5mg/L、2.0mg/L的氧化乐果喷洒在青菜叶片上，24~48h后，擦拭表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，分别取样品1g，放入小烧杯中，加入5mL缓冲溶液，振荡1min-2min，倒出提取液，静置3min-5min待用。

第二步，分别将对照PBS和检测的样品液从加样孔10中滴入到试纸条的样品垫7上，由于虹吸作用原理，样品液经过酶垫6到达底物垫5，向硝酸纤维素膜3扩散，与固定在硝酸纤维素膜3上的固蓝试剂（检测带2）发生偶合反应。

第三步，25℃条件下，5~15分钟内肉眼观察检测孔中颜色变化并与检测对照孔进行比对。结果显示：

a、当氧化乐果浓度为0.05mg/L时，检测带2显示出蓝色印记带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品农药残留不超标；

b、当氧化乐果浓度为0. 5mg/L时，检测带2不显示颜色；当氧化乐果浓度为2mg/L时，检测带显示颜色为淡黄色，表示氧化乐果浓度为0. 5mg/L和2mg/L时，检测结果为阳性，说明被检测样品农药残留超标。

将待检测的农药马拉硫磷、甲胺磷和氧化乐果与以GB/T 5009.199－2003中规定的速测卡检出限进行对比，其结果见下表。

结果显示，本发明制备的快速检测试纸条的检出限明显低于国标规定的速测卡的检出限。说明本发明试纸条在没有仪器设备的条件下，可用于肉眼直接检测有机磷农药残留，具有很高的实用价值。

Claims (3)

1.一种快速检测试纸条，包括支撑背板（1）和贴附在所述支撑背板上的检测膜，其特征在于：所述检测膜包括其上设有检测带（2）的硝酸纤维素膜（3），在所述硝酸纤维素膜（3）左侧的支撑背板上粘贴有与所述硝酸纤维素膜相搭接的吸水膜（4），在所述硝酸纤维素膜右侧的支撑背板上依次搭接设置有底物垫（5）、酶片（6）和样品垫（7）；

具体制备方法包括下述步骤：

第一步，将重氮盐配制成20~60mg/ml的溶液，划线于硝酸纤维素膜（3）上形成宽度1~2mm的检测带（2）；将划过重氮盐的硝酸纤维素膜剪成长10~20mm、宽3~5mm长条，室温避光晾干；

第二步，将厚度0.2~0.5mm的玻璃纤维膜剪成长10~20mm、宽3~5mm的长条，浸泡在活性2000U/ml的乙酰胆碱酯酶溶液中30min，取出后于真空冷冻干燥机中抽干，制成酶片（6）备用；

第三步，将厚度0.3~0.6mm的聚酯纤维膜剪成长10~20mm、宽3~5mm的长条，浸泡在100mM的吲哚乙酸酯的溶液中30min，取出后于真空冷冻干燥机中抽干，制成底物垫（5）备用；

第四步，将厚度0.4~0.7mm的吸水纸剪成长10~20mm、宽3~5mm的长条状，作为样品垫（7）；将厚度0.3~0.5mm的吸水纸剪成长10~20mm、宽3~5mm的长条状，作为吸水膜（4）；

第五步，将厚度0.3~0.7mm的聚氯乙烯塑料薄片剪切成长度60~100mm，宽度3~5mm的长条状作为支撑背板（1），将第一步制备的长条状硝酸纤维素膜（3）粘贴于支撑背板（1）的中部，在其左侧粘贴吸水膜（4），在其右侧依次粘贴底物垫（5）、酶片（6）和样品垫（7）；避光、干燥后，低温保存。

2.根据权利要求1所述的快速检测试纸条，其特征在于：第五步中相邻两膜片之间的搭接长度为1~2mm。

3.采用权利要求1的快速检测试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法，其特征在于包括下述步骤：

第一步，将待测的蔬菜样品剪成1cm左右见方碎片，取1g放入小烧杯中，加入5mL缓冲溶液，振荡1min~2min，倒出样品提取液，静置3min~5min待用；

其中所用缓冲溶液为：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1L蒸馏水溶解既得；

第二步，将得到的样品提取液滴入到样品垫（7）上，由于虹吸作用原理，样品液经过酶片（6）到达底物垫（5），然后向硝酸纤维素膜（3）上扩散，与固定在硝酸纤维素膜（3）上的检测带（2）发生偶合反应；

第三步，25℃条件下，5~15分钟内肉眼观察检测带（2）的颜色变化，反应结果有以下两种情况：

a、当检测带（2）显示出棕红色或蓝色印记带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品农药残留不超标；

b、当检测带（2）不显示颜色或淡黄色，表示检测结果为阳性，说明被检测样品农药残留超标。