CN106596442A - 一种快速定量检测甲拌磷残留的方法 - Google Patents
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Abstract
一种快速定量检测甲拌磷残留的方法,利用甲拌磷水溶液在紫外特定波长下表现出稳定吸收峰的特性建立,甲拌磷的含量与其吸光度值的大小成正比,在坐标系中呈现正比例变化趋势,依此建立标准曲线,求得回归方程为Y=aX十b(b=0),将待检样品测得的吸光度平均值代入回归方程即可计算出样品的甲拌磷含量,达到快速、定量检测甲拌磷残留的目的。
Description
技术领域
本发明属于药物检测技术领域,具体涉及一种快速定量检测甲拌磷残留的方法。
背景技术
甲拌磷是有机磷类重要的杀虫杀螨剂,主要用来防治小麦、水稻、高粱、棉花等大田作物害虫,为土壤和种子的处理剂,是高等毒性,甲拌磷在植物体内氧化为更高毒性的氧化物,并有较长的残效期,对人类的健康存在潜在威胁,因此,对甲拌磷残留快速检测方法的研究具有一定意义。近年来,对有甲拌磷残留检测的研究越来越多,手段与方法也不断更新,常见的方法主要有波谱法、色谱法和酶抑制法。波谱法灵敏度不高,一般只做为定性的鉴别方法用于粗选;色谱法是目前检测有机磷农药的最主要检测方法,又分为气相色谱法、薄层色谱法和高效液相色谱法三类,气相色谱法是进入20世纪50年代以后,在柱层析的基础上发展起来的一种新型的仪器分析方法,是目前应用最广的分析方法;薄层色谱法受分析的灵敏度、定量困难的制约,应用较少;液相色谱法与气相色谱法相比,不受样品的挥发度和热稳定性的限制,适合于大分子、不稳定的化合物的分析,但其在速度、灵敏度和便捷方面不如气相色谱法,并且耗费要高出很多。气相色谱法在分析有机磷农药时,是利用不同的有机磷农药在固定相中分离,经不同的检测器检测扫描绘出气相色谱图,通过保留时间来定性,通过峰高或峰面积与标准曲线对照来定量,气相色谱仪的使用条件要求高,对使用环境和操作条件要求严格,使用人员要经过专门的培训,操作繁琐,前左右理比较麻烦,耗时长,没有特定的设备和条件无法实现快速、定量检测。酶抑制法是利用有机磷农药有抑制胆碱酷酶活性的作用,从而影响乙酞胆碱或丁酞胆碱在胆碱酷酶作用下产生胆碱、乙酸或丁酸的反应,使分解产物乙酸或丁酸减少,由此根据指示剂颜色或反应液pH值的变化,达到检测的目的。酶抑制法的优点是操作简便,速度快,不需昂贵的仪器,适合现场检测以及人批样品的筛选检测,不足之左右是精确度低,重复性、回收率还有待提高,并且该法仅限于蔬菜、水果和食品类有机磷农药残留的定性检测,快速、定量的检测还未见有应用。
现有一些技术研究报道表明,有机磷农药分子中含有P=0或P=S双键结构,该结构特征表现出在紫外特定波长下显示稳定吸收峰值的特性,这一特性仅用于不同有机磷农药的定性检测,利用这一特性,对有机磷农药残留进行定量检测是可行的,但此类技术至今未见有报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速定量检测甲拌磷残留的方法。
本发明的方法利用甲拌磷分子中所含P=0双键结构在紫外特定波长下显示稳
定吸收峰值的特性建立,用紫外分光光度计对甲拌磷水溶液进行测定,其在紫外波长210nm处显示最人的稳定吸收峰值,峰值图见附图,不同浓度的甲拌磷水溶液与其吸光度值的大小成正比,二者在坐标系中呈现正比例变化趋势,以浓度为横坐标、以其对应的吸光度值为纵坐标绘制标准曲线,即求得回归方程,依此测定计算出待检样品的甲拌磷含量,
具体步骤如下:
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的标准水溶液:取甲拌磷标准溶液,以甲拌磷终浓度为0做为基准,按照0.5或1.0的浓度梯度配制一组不同甲拌磷终浓度的标准水溶液;
步骤二,标准曲线的制作:取步骤一配制的不同甲拌磷终浓度的标准水溶液,以甲拌磷终浓度为0的标准水溶液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得各自的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以不同终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y=aX+b( b=0 ), a, b为常数;
步骤三,污染样品的测定:取污染样品的水溶液以甲拌磷终浓度为0的标准水溶液为空白对照,用紫外分光光度计测定污染样品的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得平均值;
步骤四,结果计算:将步骤三求得的平均值代入回归方程Y=aX+b
(b=0),计算得出污染样品甲拌磷的含量。
本方法对甲拌磷污染的上壤、水、叶菜中甲拌磷含量的测定如下:
甲拌磷污染土壤中甲拌磷含量的测定
土壤样品处理为:将不含甲拌磷的土样和甲拌磷污染的土样分别经由风干、研磨、过100目筛的处理,制得空白土样和污染土样。
测定步骤为:
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的土样上清液:取6个50mL的三角瓶,各加入0.05g空白土样,按照1.0的浓度梯度,分别添加甲拌磷标准溶液使其空白土样含甲拌磷的终浓度分别为0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0g/kg土,然后分别加入10mL去离子水,摇床震荡30min,放置30min,置离心机6000r/min离心10 min,取上清液,制得不同甲拌磷终浓度的上样上清液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0g/kg土的土样上清液为空白对照,用紫外分光光度计分别测出土样上清液的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得各自的吸光度平均值,以不同终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y土=aX+b ( b=0 )a, b为常数;
步骤三,污染上样上清液的测定:准确称取0.5摊污染上样于50mL三角瓶中,加入10mL去离子水,摇床震荡30min,放置30min,置离心机6000r/min离心l0min,取上清液得污染土样上清液,以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0g/kg土的土样上清液为空白对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染土样上清液的吸光度平均值;
步骤四,结果计算:将步骤三所得的吸光度平均值代入回归方程Y土=a土X+b (b=0),计算得出污染土样甲拌磷的含量。
甲拌磷污染水中甲拌磷含量的测定
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的标准水溶液:取6支试管,各加入10ml去离子水,按照0.5的浓度梯度,分别加入甲拌磷标准溶液,制成甲拌磷终浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mg/L的标准水溶液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的标准水溶液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得各自的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以不同终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y水=a水X+b (b=0);
步骤三,污染水样的测定:将污染水样调PH至6.5,取5ml加入试管内,以甲拌磷终浓度为0.0mg/L的标准水溶液为空自对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染水样的吸光度平均值;
步骤四,结果计算:将步骤三求得的吸光度平均值代入回归方程Y水=a水X+b(b=0),计算得出污染水样甲拌磷的含量。
甲拌磷污染叶菜中甲拌磷含量的测定
叶菜样品的处理为:将空白叶菜样品和污染叶菜样品分别经切条,榨汁,稀释10倍后离心,取上清液,制得空白叶菜上清液和污染叶菜上清液。
测定步骤为:
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的叶菜上清液:取6支试管,各加入5ml空白叶菜上清液,按照0.5的浓度梯度,加入甲拌磷标准溶液使其终浓度分别为0、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L,振荡器震荡5min,静止10min,得6支不同甲拌磷终浓度的叶菜上清液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的叶菜上清液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得不同甲拌磷终浓度的叶菜上清液的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y叶菜=a叶菜X+b(b=0), a,b为常数;
步骤三,污染叶菜上清液的测定:取污染叶菜上清液5ml加人试管内,以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的叶菜上清液为空白对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染叶菜上清液的吸光度平均值;
步骤四,结果计算:将步骤三求得的污染叶菜上清液的吸光度平均值代入回归方程Y叶菜=a叶菜X+b (b=0),计算得出污染叶菜中甲拌磷的含量。
本方法的重复性和稳定性测定:以5.0mg/L和10.0mg/L的甲拌磷标准品水溶液为测定对象,分别用本方法同时连续测定10次,并且连续测10天,每天平行测定2次,计算得到其批内变异系数和批间变异系数分别为1.45%和2.83%,显示具有良好的重复性和稳定性。
本方法的回收率测定:在甲拌磷污染土样上清液中添加1.0mg/L甲拌磷标准品,用本方法进行检测,重复三次,检测所得到的吸光度平均值,计算出其样品添加回收率均达95%以上,结果用气相色谱法检测验证,符合率在90%以上。
本方法要求每次或每批的测定均要同时做标准曲线,以取得各自的标准方程,依此得到准确的结果。
本发明方法与现有方法相比具有操作简便,速度快,成本低,检测误差小,灵敏度高,重复性好,回收率高等优点,本方法不需要化学试剂和昂贵的仪器,适于人批量的样品和多种样品的检测,批内变异系数和批间变异系数分别为1.45%和2,83%,具有良好的重复性和稳定性,样品添加回收率均达95%以上,结果用气相色谱法检测验证,符合率在90%以上。本方法易于推广普及,为农业质检部门和技术研究人员提供了方便快捷的检测手段,除本方法描述的甲拌磷污染的土壤、水和大自菜的检测外,其他甲拌磷污染样品在消除了影响紫外分光光度测定结果的因素后,也可应用本方法进行甲拌磷残留的定量检测。
附图说明
图1为甲拌磷水溶液在紫外分光光度计的测定中,于波长210nm处显示最大的稳定吸收峰值的峰值图。
具体实施方式
实施例1某市郊农药厂甲拌磷污染上壤的检测
土壤样品处理:取无污染的土壤样品和市郊农药厂甲拌磷污染的土壤样品分别经风干,研磨后过100目筛,得空白上样和污染土样。
测定步骤为:
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的土样上清液:取6个50mL的三角瓶,各加入0.50g空白土样,按照1.0的浓度梯度,分别添加甲拌磷标准溶液使其空白土样含甲拌磷的终浓度分别为0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0g/kg土,然后分别加入10mL去离子水,摇床震荡30min,放置30min,置离心机6000r/min离心10 min,取上清液,制得不同甲拌磷终浓度的土样上清液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0g/kg土的土样上清液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得不同甲拌磷终浓度的土样上清液的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以不同终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y土=0.3053X+b
(b=0);
步骤三,污染土样上清液的测定:准确称取0.50g污染土样于50mL三角瓶中,加入10mL去离子水,摇床震荡30min,放置30min,置离心机6000r/min离心10min,取上清液得污染土样上清液,以甲拌磷终浓度为0.0g/kg上的上样上清液为空白对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染土样上清液的吸光度平均值为0.105;
步骤四,结果计算:将步骤三测得的污染土样上清液的吸光度平均值0.105代入回归方程Y土=0. 3053X+ b (b=0),计算得出污染土样甲拌磷的含量为0.3439g/kg土。
实施例2豫东某县农药厂排水沟甲拌磷污染水中甲拌磷含量的测定
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的标准水溶液:取6支试管,各加入10ml去离子水,按照0.5的浓度梯度,分别加入甲拌磷标准溶液,制成甲拌磷终浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mg/L的标准水溶液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的标准水溶液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得各自的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以不同终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y水=0. 0272X+b(b=0);
步骤三,污染水样的测定:将农药厂排水沟中的污染水样调PH至6.5,取5ml加入试管内,以甲拌磷终浓度为0.0mg/L的标准水溶液为空白对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染水样的吸光度平均值为0.386;
步骤四,结果计算:将步骤三求得的污染水样的吸光度平均值0.386代入回归方程Y水=0. 0272X+b ( b=0 ),计算得出农药厂排水沟中污染水样甲拌磷的含量为14. 191mg/L。
实施例3须水乡东菜园甲拌磷污染的大白菜中甲拌磷含量的测定
大白菜样品处理:取无污染的大白菜和须水乡东菜园甲拌磷污染的大白菜分别切条,榨汁,稀释10倍后离心,取上清液制得空白大白菜上清液和污染人白菜上清液。
测定步骤为:
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的人白菜上清液:取6支试管,各加入5ml空白大白菜上清液,按照0.5的浓度梯度,加入甲拌磷标准溶液使其终浓度分别为0、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L,振荡器震荡5min,静止10min,得6支不同甲拌磷终浓度的大白菜上清液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的大白菜上清液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得不同甲拌磷终浓度的大白菜上清液的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y叶菜=0.
0034X+b ( b=0
) ;
步骤三,污染大白菜上清液的测定:取污染大白菜上清液5ml加人试管内,以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的大白菜上清液为空白对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染人白菜上清液的吸光度平均值为0.097;
步骤四,结果计算:将步骤三求得的污染大白菜上清液的吸光度平均值0.097代入回归方程Y叶菜=0.0034X+b
( b=0,计算得出污染人自菜甲拌磷的含量为28.5294mg/L。
Claims (7)
1.一种快速定量检测甲拌磷残留的方法,其特征在于本方法利用甲拌磷分子中所含P=0双键结构在紫外特定波长下显示稳定吸收峰值的特性建立,具体步骤如下:
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的标准水溶液:取甲拌磷标准溶液,以甲拌磷终浓度为0做为基准,按照0.5或1.0的浓度梯度配制一组不同甲拌磷终浓度的标准水溶液;
步骤二,标准曲线的制作:取步骤一配制的不同甲拌磷终浓度的标准水溶液,以甲拌磷终浓度为0的标准水溶液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得各自的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以不同终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y=aX+b (b=0), a,b为常数;
步骤三,污染样品的测定:取污染样品的水溶液以甲拌磷终浓度为0的标准水溶液为空白对照,用紫外分光光度计测定污染样品的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得平均值;
步骤四,结果计算:将步骤三求得的平均值代入回归方程Y=aX+b (b=0),计算得出污染样品甲拌磷的含量。
2.如权利要求1所述的一种快速定量检测甲拌磷残留的方法,其特征在于步骤三中所述甲拌磷污染的样品为上壤,土壤样品的处理为:将不含甲拌磷的土样和甲拌磷污染的土样分别经由风干、研磨、过100目筛的处理,制得空白土样和污染土样。
3.如权利要求2所述的一种快速定量检测甲拌磷残留的方法,其特征在于测定步骤
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的土样上清液:取6个50mL的三角瓶,各加入0. 50g空白土样,按照1. 0的浓度梯度,分别添加甲拌磷标准溶液使其空白上样含甲拌磷的终浓度分别为0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0g/kg土,然后分别加入10mL去离子水,摇床震荡30min,放置30min,置离心机6000r/min离心10min,取上清液,制得6瓶不同甲拌磷终浓度的上样上清液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0g/kg土的土样上清液为空白对照,用紫外分光光度计分别测出步骤一配制的上样上清液的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得各自的吸光度平均值,以不同终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y十=aX+b ( b=0 ), a, b为常数;
步骤三,污染土样上清液的测定:准确称取0.50g污染土样于50mL三角瓶中,加入10mL去离子水,摇床震荡30min,放置30min,置离心机6000r/min离心l0min,取上清液得污染土样上清液,以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0g/kg上的土样上清液为空白对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染土样上清液的吸光度平均值;
步骤四,结果计算:将步骤三所得的污染上样上清液的吸光度平均值代入回归方程Y=aX+b(b=0),计算得出污染上样甲拌磷的含量。
4.如权利要求1所述的一种快速定量检测甲拌磷残留的方法,其特征在于步骤三中所述甲拌磷污染的样品为甲拌磷污染的水:
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的标准水溶液:取6支试管,各加入10ml去离子水,按照0.5的浓度梯度,分别加入甲拌磷标准溶液,制成甲拌磷终浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mg/L标准水溶液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的标准水溶液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得各自的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以不同终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y水=a水X+b(b=0);
步骤三,污染水样的测定:将污染水样调PH至6.5,取5ml污染水样入试管内,以甲拌磷终浓度为0.0mg/L的标准水溶液为空自对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染水样的吸光度平均值;
步骤四,结果计算:将步骤三求得的污染水样的吸光度平均值代入回归方程Y水=a水X+b(b=0),计算得出污染水样甲拌磷的含量。
5.如权利要求1所述的一种快速定量检测甲拌磷残留的方法,其特征在于步骤三中所述甲拌磷污染的样品为叶菜,叶菜样品的处理为:将空白叶菜样品和污染叶菜样品分别经切条,榨汁,稀释10倍后离心,取上清液制得空自叶菜上清液和污染叶菜上清液。
6.如权利要求5所述的一种快速定量检测甲拌磷残留的方法,其特征在于测定步骤
步骤一,配制不同甲拌磷终浓度的叶菜上清液:取6支试管,各加入清液,按照0.5的浓度梯度,加入甲拌磷标准溶液使其终浓度分别为0.5ml空白叶菜上0、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L,振荡器震荡5min,静止10min,得6支不同甲拌磷终浓度的叶菜上清液;
步骤二,标准曲线的制作:以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的叶菜上清液为空白对照,用紫外分光光度计分别测得不同甲拌磷终浓度的叶菜上清液的吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求其平均值,以终浓度为横坐标,以其对应的吸光度平均值为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程Y叶菜=a叶菜X+b (b=0)a, b为常数;
步骤三,污染叶菜上清液的测定:取污染叶菜上清液5ml加人试管内,以步骤一中甲拌磷终浓度为0.0mg/L的叶菜上清液为空白对照,用紫外分光光度计测定其吸光度值,紫外波长210nm,重复做三次,求得污染叶菜上清液的吸光度平均值;
步骤四,结果计算:将步骤三求得的污染叶菜上清液的吸光度平均值代入回归方程Y叶菜=a叶菜X+b( b=0 ),计算得出污染叶菜中甲拌磷的含量。
7.如权利要求5所述的一种快速定量检测甲拌磷残留的方法,其特征在于所述的叶菜样品为人白菜。
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