CN113884486A - 一种检测内吸性农药乐果残留的方法 - Google Patents

一种检测内吸性农药乐果残留的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113884486A
CN113884486A CN202111474445.XA CN202111474445A CN113884486A CN 113884486 A CN113884486 A CN 113884486A CN 202111474445 A CN202111474445 A CN 202111474445A CN 113884486 A CN113884486 A CN 113884486A
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
sample
detected
dimethoate
layer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202111474445.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113884486B (zh
Inventor
李拥军
熊文明
皮小弟
廖雪义
李叶青
汤胤旻
姚鸿州
周敏瑜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Jiangmen Vocational College Of Traditional Chinese Medicine
Original Assignee
Guangdong Jiangmen Vocational College Of Traditional Chinese Medicine
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Jiangmen Vocational College Of Traditional Chinese Medicine filed Critical Guangdong Jiangmen Vocational College Of Traditional Chinese Medicine
Priority to CN202111474445.XA priority Critical patent/CN113884486B/zh
Publication of CN113884486A publication Critical patent/CN113884486A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113884486B publication Critical patent/CN113884486B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/286—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q involving mechanical work, e.g. chopping, disintegrating, compacting, homogenising
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/02—Food

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种检测内吸性农药乐果残留的方法，包括以下：步骤a，待测样品粉碎，得到第一样品；步骤b，向第一样品中加入钠盐溶液和氯仿，离心处理至溶液明显分层，取氯仿相溶液，得到第一样液；步骤c，将第一样液吹干，得到第一待测物；步骤d，向第一待测物中加入二乙胺，复溶，加入氧化剂，将温度调节至80℃后，静置，得到第二样液，吹干，得到第二待测物；步骤e，向第二待测物中加入醚类有机溶剂，复溶，缓慢加入缓冲液，加入乙酰胆碱酯酶试剂，静置；步骤f，加入底物和显色剂，静置3min后，待溶液分层后观察下层颜色变化，震摇，静置，待溶液分层后观察下层颜色变化；步骤g，结果判定。

Description

一种检测内吸性农药乐果残留的方法
技术领域
本发明涉及食品安全检测领域，特别是涉及一种检测内吸性农药乐果残留的方法。
背景技术
乐果因其快速杀虫杀螨的良好作用效果，多应用于果蔬、棉花等作物，是应用较为广泛的内吸性农药之一。但在提高农作物产量的同时，乐果的大肆使用导致了水果及油料作物中大量的农药残留，其对人体健康造成了严重的危害。乐果可通过皮肤接触等途径进入人体组织，造成急性或者慢性中毒，严重时可致人死亡。
乐果被禁止在蔬菜、瓜果、茶叶、菌类和中草药作物上使用。因此对农产品中乐果残留的检测具有重要意义。但是现有的对乐果的残留检测方法多为气相色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱法，虽然这些方法具有检测限低、灵敏度高等优点，但是仍存在一些问题，如耗时长、成本高、对仪器条件要求高，限制了现场检测的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测内吸性农药乐果残留的方法。
根据本发明的一个方面，提供了一种检测内吸性农药乐果残留的方法，包括以下：
步骤a，称取100g待测样品于均质机中，粉碎，得到第一样品，待用；
步骤b，称取第一样品5g于第一离心管中，加入钠盐溶液，充分震荡混匀，加入氯仿，震荡混匀后，放入离心机中离心处理至第一离心管中溶液明显分层，取下层氯仿相溶液至第二离心管中，得到第一样液，本步骤中pH6.0的钠盐溶液用于提供酸性的提取环境，避免乐果分解，氯仿用于将样品中的乐果提取富集到第一样液中；
步骤c，将第二离心管放入空气浓缩仪中，在一定温度条件下，将第一样液空气吹干，得到第一待测物，本步骤将第一样液中的氯仿吹干，得到的第一待测物为乐果；
步骤d，向第一待测物中加入质量分数为33%的二乙胺水溶液，使用空气反复吹打1min，进行复溶，便于第一待测物与二乙胺进行反应，再加入氧化剂，使用空气反复吹打1min，将温度调节至80℃后，静置，得到第二样液，将第二样液空气吹干，得到第二待测物，本步骤中发生两个反应如下：
Figure 434149DEST_PATH_IMAGE001
（1）
本步骤中加入质量分数为33%的二乙胺水溶液对第一待测物即乐果进行复溶，二乙胺在水溶液中电离出氢氧根离子，呈碱性，乐果与氢氧根离子在水溶液中发生反应，生成二甲基硫代磷酸二酯和巯基乙酸，见反应式（1）；
Figure 776881DEST_PATH_IMAGE002
（2）
加入30%过氧化氢溶液后，二甲基硫代磷酸二酯与过氧化氢发生反应，二甲基硫代磷酸二酯中的硫被氧取代，生成磷酸二甲酯，见反应式（2），第二样液中含有磷酸二甲酯和巯基乙酸，吹干后得到的第二待测物中含有磷酸二甲酯和巯基乙酸；
步骤e，向第二待测物中加入醚类有机溶剂，使用空气吹打1min，进行复溶，使用移液枪吸取缓冲液，将枪头移至第二离心管的最低端，缓慢加入缓冲液，并吹打3~5次，吹打过程中避免缓冲液层与醚类有机溶剂层混合，保持缓冲液层与醚类有机溶剂层分开，静置，待液面稳定后，使用移液枪加入乙酰胆碱酯酶试剂，然后静置3min，本步骤发生的反应见以下反应式（3）：
Figure 179043DEST_PATH_IMAGE003
（3）
本步骤中加入醚类有机溶剂例如乙醚，乙醚对第二待测物即磷酸二甲酯和巯基乙酸进行复溶，巯基乙酸溶于乙醚溶液中，磷酸二甲酯不溶于乙醚，加入缓冲液后，磷酸二甲酯溶于缓冲液层，缓冲液层位于下方，巯基乙酸溶于乙醚层，位于缓冲液层上方，本发明通过加入乙醚，使巯基乙酸溶于乙醚层中，使巯基乙酸与磷酸二甲酯分离开，暂时屏蔽了巯基乙酸与DTNB的反应，使检测反应按照本发明的设定进行。加入乙酰胆碱酯酶试剂后，缓冲液层中的磷酸二甲酯与乙酰胆碱酯酶发生反应，亲电性的磷与乙酰胆碱酯酶的酯解部位中羟基进行共价结合，形成的磷酰化胆碱酯酶不易水解，酶失活后难以恢复活性，从而达到对乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用，使乙酰胆碱酯酶失活无法与底物进行反应；
步骤f，向所述步骤e中第二离心管加入底物和显色剂，静置3min后，待溶液分层后观察下层缓冲液层的颜色变化，盖紧第二离心管的管盖，震摇2min，静置，待溶液分层后观察下层缓冲液层的颜色变化，本步骤发生的反应见以下反应式（4）：
Figure 785605DEST_PATH_IMAGE004
（4）
本步骤中加入底物和显色剂后，步骤e中的乙酰胆碱酯酶活性被抑制而失活，静置3min后，底物与乙酰胆碱酯酶没有发生反应，无法与显色剂发生颜色反应，进而使缓冲液层保持无色，而巯基乙酸与显色剂中的DTNB发生反应，见反应式（4），DTNB的二硫键断裂，产生成2-硝基-5-硫代苯甲酸（NTB-），此时用力震摇，2-硝基-5-硫代苯甲酸（NTB-）进入缓冲液层，在碱性pH条件下的水中可以离子化，生成NTB2-二价阴离子。这种NTB2-离子呈现黄色，使下层缓冲液层颜色变成黄色；如果待测样品中不含有乐果，本步骤加入底物和显色剂后，乙酰胆碱酯酶仍然具有酶活性，静置3min后，乙酰胆碱酯酶与底物发生反应，底物水解生成含巯基的化合物，含巯基的化合物与显色剂中的DTNB反应，生成NTB2-二价阴离子，缓冲液层变成黄色，震摇后，缓冲液层仍然为黄色。
步骤g，结果判定：步骤f中震摇前下层缓冲液层颜色为无色，震摇后下层缓冲液层颜色变为黄色，判定为阳性，即待测样品中含有内吸性农药乐果；步骤f中震摇前缓冲液层颜色不变，说明第二待测物中有磷酸二甲酯，说明乙酰胆碱酯酶在步骤e中与磷酸二甲酯反应而失活，乙酰胆碱酯酶无法与底物进行反应，无法使缓冲液层颜色变黄，震摇后，缓冲层颜色变黄，说明第二待测物中有巯基乙酸，巯基乙酸与显色剂反应，生成的NTB2-阴离子进入缓冲液层，而使缓冲液层的颜色变为黄色，将步骤f中震摇前后的显色结果综合判断，得出第二待测物中含有磷酸二甲酯和巯基乙酸，即待测样品中含有乐果；
步骤f中震摇前下层缓冲液层颜色变为黄色，震摇后下层缓冲液层颜色仍为黄色，判定为阴性，即待测样品中不含有内吸性农药乐果；
步骤f震摇前缓冲液层颜色变为黄色，说明底物与乙酰胆碱酯酶发生反应，生成了含巯基的化合物，含巯基的化合物又与显色剂反应，生成了黄色的NTB2-二价阴离子，使缓冲液层颜色变黄，说明步骤e中乙酰胆碱酯酶仍有活性，第二待测物中没有磷酸二甲酯，得出步骤e中第二待测物中不含有磷酸二甲酯和巯基乙酸，即待测样品中不含有乐果。
本发明的有益效果：本发明通过化学反应的手段，对待测样品中的目标物乐果进行了处理，在钠盐溶液提供的酸性条件下，清洗样品保证乐果稳定，使用有机溶剂氯仿，作为提取剂，提取乐果后浓缩富集，提高检出灵敏度，加入二乙胺提供碱性条件，乐果在碱性条件下水解，水解反应迅速完成，生成的产物经过氧化剂氧化后，得到了磷酸二甲酯与巯基乙酸。其中磷酸二甲酯对乙酰胆碱酯酶可以起到极强的抑制作用，而巯基乙酸可以与DTNB反应，产生黄色的颜色变化，这与市面上常规检测方法不同，常规方法检测是酶被抑制后无色，未抑制显黄色。本发明的检测方法是通过先添加乙酰胆碱酯酶试剂，后添加底物和显色剂的手段，使阳性样本因磷酸二甲酯的存在先保持颜色不变，后因巯基乙酸的存在而变为黄色，而阴性样本先呈现黄色，然后保持黄色不变，现象明显，反应迅速，颜色变化差异大易于观察，并且采用本发明的检测方法无需使用检测仪器即可明显区分待测目标物中乐果是否超标。本发明的检测方法耗时短、成本低、操作简单，准确率高，对仪器条件要求低，适用于现场对农产品中乐果农药残留的检测应用，有助于提高食品安全检测的效率。
在一些实施方式中，待测样品为蔬菜、瓜果、茶叶或者食用菌中的一种。
在一些实施方式中，步骤b中的钠盐溶液为磷酸氢二钠溶液与柠檬酸溶液的混合溶液。磷酸氢二钠溶液与柠檬酸溶液的混合溶液为酸性溶液，为提取乐果提供酸性环境，保证乐果结构的稳定。
在一些实施方式中，钠盐溶液的pH值为6.0，磷酸氢二钠溶液为摩尔浓度为0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液，柠檬酸溶液为摩尔浓度为0.1mol/L的柠檬酸溶液。钠盐溶液为酸性溶液，为提取乐果提供酸性环境，保证乐果结构的稳定。
在一些实施方式中，步骤c中一定温度条件为65℃。
在一些实施方式中，步骤d中氧化剂是质量分数为30%的过氧化氢溶液。30%的过氧化氢溶液作为氧化剂，与二甲基硫代磷酸二酯发生氧化反应，生成磷酸二甲酯。
在一些实施方式中，步骤e中醚类有机溶剂为乙醚或石油醚中的一种。使用乙醚或石油醚等醚类有机溶剂将巯基乙酸与磷酸二甲酯分别位于不同的溶剂相中，使巯基乙酸与磷酸二甲酯分离开，暂时屏蔽了巯基乙酸与DTNB的反应，使检测反应按照本发明的设定进行。
在一些实施方式中，步骤e中缓冲液为将3.7mgEDTA溶解于pH8.0的磷酸缓冲液中，使用pH8.0的磷酸缓冲液定容至100ml。缓冲液为乙酰胆碱酯酶、底物和显色剂反应提供碱性环境。
在一些实施方式中，pH8.0的磷酸缓冲液为无水磷酸氢二钾与磷酸二氢钾配制的pH8.0的磷酸缓冲液。磷酸缓冲液用于配制缓冲液、显色剂和乙酰胆碱酯酶试剂。
在一些实施方式中，方法对内吸性农药乐果的检出限为0.2mg/kg。本发明的检测方法对内吸性农药乐果的检出限与国标的检出限相同，达到了国标的准确度要求。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
本实施例中石油醚选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯石油醚，乙醚选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯乙醚，磷酸氢二钠选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯磷酸氢二钠，柠檬酸选择国药集团化学试剂有限公司供应的99%柠檬酸，氯仿选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯三氯甲烷，33%的二乙胺水溶液选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯33%二乙胺水溶液，过氧化氢选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯30%过氧化氢，无水磷酸氢二钾选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯无水磷酸氢二钾，磷酸二氢钾选择国药集团化学试剂有限公司供应的分析纯磷酸二氢钾，EDTA选择国药集团化学试剂有限公司供应的乙二胺四乙酸，酶选择国药集团化学试剂有限公司供应的乙酰胆碱酯酶，底物选择国药集团化学试剂有限公司供应的98%碘代硫代乙酰胆碱，二硫代二硝基苯甲酸选择国药集团化学试剂有限公司供应的99% 二硫代二硝基苯甲酸；
钠盐溶液：称取12.36ml的0.2mol/L磷酸氢二钠溶液与7.37ml的0.1mol/L柠檬酸溶液，将两者混合制备得到pH6.0的钠盐溶液。
pH8.0磷酸缓冲液的配制：称取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾于烧杯中，用蒸馏水溶解后，用玻璃棒引流注入1000mL容量瓶，然后定容至刻度线；
缓冲液的配制：称取3.7mgEDTA于烧杯中，用pH8.0的磷酸缓冲液溶解后，用玻璃棒引流注入100mL容量瓶，然后用pH8.0的磷酸缓冲液定容至刻度线；
显色剂的配制：分别称取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氢钠，用20ml pH8.0的磷酸缓冲液溶解，4℃冰箱保存；
底物：取25.0mg碘代硫代乙酰胆碱，加3.0ml蒸馏水溶解，摇匀后置于4℃冰箱保存备用，保存期不超过两周；
乙酰胆碱酯酶试剂：用pH8.0的磷酸缓冲液溶解，3min的吸光度变化△A0值应控制在0.3以上，摇匀后置于4℃冰箱保存备用，保存期不超过两天；
以下实施例2-6均采用本实施例1中的试剂。
实施例2
本发明的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，包括以下：
步骤a，称取100g待测蔬菜样品于均质机中，粉碎，得到第一样品，待用；
步骤b，称取第一样品5g于50ml第一离心管中，加入10ml的pH6.0的钠盐溶液，充分震荡混匀2min，加入5ml氯仿，震荡混匀2min后，放入离心机中，10000rpm离心处理3min，至第一离心管中溶液明显分层，取4.5ml下层氯仿相溶液至15ml第二离心管中，得到第一样液，pH6.0的钠盐溶液为磷酸氢二钠溶液与柠檬酸溶液的混合溶液；
步骤c，将第二离心管放入空气浓缩仪中，在65℃下，将第一样液空气吹干，得到第一待测物；
步骤d，向第一待测物中加入0.2ml 33%的二乙胺水溶液，使用空气反复吹打1min，进行复溶，便于第一待测物与二乙胺进行反应，再加入3ml 30%过氧化氢溶液，使用空气反复吹打1min，将温度调节至80℃后，静置，得到第二样液，将第二样液空气吹干，得到第二待测物；
步骤e，向第二待测物中加入2.5ml乙醚，使用空气吹打1min，进行复溶，使用移液枪吸取2.5ml缓冲液，将枪头移至第二离心管的最底端，缓慢加入缓冲液，并吹打3次，吹打过程中避免缓冲液层与醚类有机溶剂层混合，保持缓冲液层与醚类有机溶剂层分开，静置，待液面稳定后，使用移液枪加入100μl乙酰胆碱酯酶试剂，然后静置3min；
步骤f，向步骤e中第二离心管中加入100μl底物和100μl显色剂，静置3min后，待溶液分层后，观察到下层缓冲液层的颜色变为黄色，盖紧第二离心管的管盖，震摇2min，静置，待溶液分层后，观察到下层缓冲液层的颜色仍为黄色；
步骤g，结果判定：步骤f中震摇前下层缓冲液层颜色变为黄色，震摇后下层缓冲液层颜色仍为黄色，判定为阴性，即待测样品中不含有内吸性农药乐果。
实施例3
本发明的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，包括以下：
步骤a，称取100g待测水果样品于均质机中，粉碎，得到第一样品，待用；
步骤b，称取第一样品5g于50ml第一离心管中，加入10ml的pH6.0的钠盐溶液，充分震荡混匀2min，加入5ml氯仿，震荡混匀2min后，放入离心机中，10000rpm离心处理3min，至第一离心管中溶液明显分层，取4.5ml下层氯仿相溶液至15ml第二离心管中，得到第一样液，pH6.0的钠盐溶液为磷酸氢二钠溶液与柠檬酸溶液的混合溶液；
步骤c，将第二离心管放入空气浓缩仪中，在65℃下，将第一样液空气吹干，得到第一待测物；
步骤d，向第一待测物中加入0.2ml 33%的二乙胺水溶液，使用空气反复吹打1min，进行复溶，便于第一待测物与二乙胺进行反应，再加入3ml 30%过氧化氢溶液，使用空气反复吹打1min，将温度调节至80℃后，静置，得到第二样液，将第二样液空气吹干，得到第二待测物；
步骤e，向第二待测物中加入2.5ml石油醚，使用空气吹打1min，进行复溶，使用移液枪吸取2.5ml缓冲液，将枪头移至第二离心管的最底端，缓慢加入缓冲液，并吹打5次，吹打过程中避免缓冲液层与醚类有机溶剂层混合，保持缓冲液层与醚类有机溶剂层分开，静置，待液面稳定后，使用移液枪加入100μl乙酰胆碱酯酶试剂，静置3min；
步骤f，向步骤e中第二离心管中加入100μl底物和100μl显色剂，静置 3min后，待溶液分层后，观察到下层缓冲液层的颜色无变化，盖紧第二离心管的管盖，震摇2min，静置，待溶液分层后，观察到下层缓冲液层的颜色变黄；
步骤g，结果判定：步骤f中震摇前下层缓冲液层颜色保持不变，震摇后下层缓冲液层颜色变为黄色，判定为阳性，即待测样品中含有内吸性农药乐果。
实施例4
本发明的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，包括以下：
步骤a，称取100g待测瓜类样品于均质机中，粉碎，得到第一样品，待用；
步骤b，称取第一样品7.5g于50ml第一离心管中，加入15ml的pH6.0的钠盐溶液，充分震荡混匀2min，加入7.5ml氯仿，震荡混匀2min后，放入离心机中，8000rpm离心处理3min，至第一离心管中溶液明显分层，取7.0ml下层氯仿相溶液至15ml第二离心管中，得到第一样液，pH6.0的钠盐溶液为磷酸氢二钠溶液与柠檬酸溶液的混合溶液；
步骤c，将第二离心管放入空气浓缩仪中，在65℃下，将第一样液空气吹干，得到第一待测物；
步骤d，向第一待测物中加入0.4ml 33%的二乙胺水溶液，使用空气反复吹打1min，进行复溶，便于第一待测物与二乙胺进行反应，再加入3ml 30%过氧化氢溶液，使用空气反复吹打1min，将温度调节至80℃后，静置，得到第二样液，将第二样液空气吹干，得到第二待测物；
步骤e，向第二待测物中加入5ml石油醚，使用空气吹打1min，进行复溶，使用移液枪吸取2.5ml缓冲液，将枪头移至第二离心管的最底端，缓慢加入缓冲液，并吹打3次，吹打过程中避免缓冲液层与醚类有机溶剂层混合，保持缓冲液层与醚类有机溶剂层分开，静置，待液面稳定后，使用移液枪加入100μl乙酰胆碱酯酶试剂，然后静置3min；
步骤f，向步骤e中第二离心管中加入100μl底物和100μl显色剂，静置3min后，待溶液分层后，观察到下层缓冲液层的颜色保持不变，盖紧第二离心管的管盖，震摇2min，静置，待溶液分层后，观察到下层缓冲液层的颜色变为黄色；
步骤g，结果判定：步骤f中震摇前下层缓冲液层颜色保持不变，震摇后下层缓冲液层颜色变为黄色，判定为阳性，即待测样品中含有内吸性农药乐果。
实施例5
本发明的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，包括以下：
步骤a，称取100g待测食用菌样品于均质机中，粉碎，得到第一样品，待用；
步骤b，称取第一样品10g于50ml第一离心管中，加入15ml的pH6.0的钠盐溶液，充分震荡混匀2min，加入7.5ml氯仿，震荡混匀2min后，放入离心机中，8000rpm离心处理3min，至第一离心管中溶液明显分层，取7.0ml下层氯仿相溶液至15ml第二离心管中，得到第一样液，pH6.0的钠盐溶液为磷酸氢二钠溶液与柠檬酸溶液的混合溶液；
步骤c，将第二离心管放入空气浓缩仪中，在65℃下，将第一样液空气吹干，得到第一待测物；
步骤d，向第一待测物中加入0.4ml质量分数为33%的二乙胺水溶液，使用空气反复吹打1min，进行复溶，便于第一待测物与二乙胺进行反应，再加入3ml 30%过氧化氢溶液，使用空气反复吹打1min，将温度调节至80℃后，静置，得到第二样液，将第二样液空气吹干，得到第二待测物；
步骤e，向第二待测物中加入5ml石油醚，使用空气吹打1min，进行复溶，使用移液枪吸取2.5ml缓冲液，将枪头移至第二离心管的最底端，缓慢加入缓冲液，并吹打4次，吹打过程中避免缓冲液层与醚类有机溶剂层混合，保持缓冲液层与醚类有机溶剂层分开，静置，待液面稳定后，使用移液枪加入100μl乙酰胆碱酯酶试剂，然后静置3min；
步骤f，向步骤e中第二离心管中加入100μl底物和100μl显色剂，静置 3min后，待溶液分层后，观察到下层缓冲液层的颜色变为黄色，盖紧第二离心管的管盖，震摇2min，静置，待溶液分层后，观察到下层缓冲液层的颜色仍为黄色；
步骤g，结果判定：步骤f中震摇前下层缓冲液层颜色变为黄色，震摇后下层缓冲液层颜色仍为黄色，判定为阴性，即待测样品中不含有内吸性农药乐果。
实施例6 检出限的测定
称取空白对照蔬菜样品，向空白对照样品中，分别添加不同质量的乐果农药，得到乐果添加量分别为0.1mg/kg、0.15mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg的系列加标样品，按照实施例1的方法，对上述系列加标样品进行乐果残留检测，检测结果见下表1：
Figure 451073DEST_PATH_IMAGE005
由上述表1可以直接得出，本实施例的检测方法对加标浓度为0.2mg/kg的加标样品的检测结果为阳性，对加标浓度为0.15mg/kg的加标样品的检测结果为阴性，说明本发明的检测方法对内吸型农药乐果的检出限为0.2mg/kg。
本发明的检测方法是通过两次显色进行定性判定的方法，当待测样品中乐果浓度低于0.2mg/kg时，乐果经过步骤d反应生成的磷酸二甲酯与巯基乙酸浓度较低，浓度较低的磷酸二甲酯与步骤e中添加的乙酰胆碱酯酶试剂发生反应，因磷酸二甲酯浓度低，只能对小部分的乙酰胆碱酯酶进行抑制，无法对全部的乙酰胆碱酯酶进行抑制，步骤e中仍存在具有酶活性的乙酰胆碱酯酶，步骤f添加底物和显色剂后，仍然具有酶活性的乙酰胆碱酯酶与底物进行反应，水解产生含巯基的化合物，然后与显色剂反应，使缓冲液层在震摇前变为黄色；
巯基乙酸的浓度较低，与步骤f中加入的显色剂发生反应，生成的NTB2-二价阴离子浓度较低，在震摇后无法使已经变为黄色的缓冲液层颜色再出现明显加深，肉眼观察震摇后缓冲层颜色仍为黄色，呈现与阴性样品相同的显色结果，被判定为阴性。因此，本发明的检测方法对于内吸性农药乐果的检出限为0.2mg/kg。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种检测内吸性农药乐果残留的方法，包括以下：
步骤a，称取100g待测样品于均质机中，粉碎，得到第一样品，待用；
步骤b，称取所述第一样品5g于第一离心管中，加入钠盐溶液，充分震荡混匀，加入氯仿，震荡混匀后，放入离心机中离心处理至第一离心管中溶液明显分层，取下层氯仿相溶液至第二离心管中，得到第一样液；
步骤c，将第二离心管放入空气浓缩仪中，在一定温度条件下，将第一样液空气吹干，得到第一待测物；
步骤d，向所述第一待测物中加入质量分数为33%的二乙胺水溶液，使用空气反复吹打1min，进行复溶，便于第一待测物与二乙胺进行反应，再加入氧化剂，使用空气反复吹打1min，将温度调节至80℃后，静置，得到第二样液，将第二样液空气吹干，得到第二待测物；
步骤e，向所述第二待测物中加入醚类有机溶剂，使用空气吹打1min，进行复溶，使用移液枪吸取缓冲液，将枪头移至第二离心管的最低端，缓慢加入缓冲液，并吹打3~5次，吹打过程中避免缓冲液层与醚类有机溶剂层混合，保持缓冲液层与醚类有机溶剂层分开，静置，待液面稳定后，使用移液枪加入乙酰胆碱酯酶试剂，静置3min；
步骤f，向所述步骤e中第二离心管加入底物和显色剂，静置3min后，待溶液分层后观察下层缓冲液层的颜色变化，盖紧第二离心管的管盖，震摇2min，静置，待溶液分层后观察下层缓冲液层的颜色变化；
步骤g，结果判定：所述步骤f中震摇前下层缓冲液层颜色为无色，震摇后下层缓冲液层颜色变为黄色，判定为阳性，即待测样品中含有内吸性农药乐果；
所述步骤f中震摇前下层缓冲液层颜色变为黄色，震摇后下层缓冲液层颜色仍为黄色，判定为阴性，即待测样品中不含有内吸性农药乐果。
2.根据权利要求1所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述待测样品为蔬菜、瓜果、茶叶或者食用菌中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述步骤b中的钠盐溶液为磷酸氢二钠溶液与柠檬酸溶液的混合溶液。
4.根据权利要求3所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述钠盐溶液的pH值为6.0，所述磷酸氢二钠溶液为摩尔浓度为0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液，所述柠檬酸溶液为摩尔浓度为0.1mol/L的柠檬酸溶液。
5.根据权利要求1所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述步骤c中一定温度条件为65℃。
6.根据权利要求1所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述步骤d中氧化剂是质量分数为30%的过氧化氢溶液。
7.根据权利要求1所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述步骤e中醚类有机溶剂为乙醚或石油醚中的一种。
8.根据权利要求1所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述步骤e中缓冲液为将3.7mgEDTA溶解于pH8.0的磷酸缓冲液中，并使用pH8.0的磷酸缓冲液定容至100ml。
9.根据权利要求8所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述pH8.0的磷酸缓冲溶液为无水磷酸氢二钾与磷酸二氢钾配制的pH8.0的磷酸缓冲溶液。
10.根据权利要求1-9中任一所述的一种检测内吸性农药乐果残留的方法，其特征在于，所述方法对内吸性农药乐果的检出限为0.2mg/kg。
CN202111474445.XA 2021-12-06 2021-12-06 一种检测内吸性农药乐果残留的方法 Active CN113884486B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111474445.XA CN113884486B (zh) 2021-12-06 2021-12-06 一种检测内吸性农药乐果残留的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111474445.XA CN113884486B (zh) 2021-12-06 2021-12-06 一种检测内吸性农药乐果残留的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113884486A true CN113884486A (zh) 2022-01-04
CN113884486B CN113884486B (zh) 2022-02-18

Family

ID=79015628

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111474445.XA Active CN113884486B (zh) 2021-12-06 2021-12-06 一种检测内吸性农药乐果残留的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113884486B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114323876A (zh) * 2022-03-14 2022-04-12 广东江门中医药职业学院 一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1460135A1 (en) * 2002-12-09 2004-09-22 Quality Engineering s.r.l. Acetylcholinesterase method to detect organophosphorate and carbamate insecticides in water, foods and beverages
CN1687756A (zh) * 2004-12-27 2005-10-26 南京农业大学 一种农药残留快速检测试剂盒及其用法
US20110045517A1 (en) * 2007-11-06 2011-02-24 Battelle Memorial Institute Toxic Material Detection Apparatus and Method
CN102455295A (zh) * 2010-10-28 2012-05-16 中国科学院上海生命科学研究院 用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测的显色方法
CN106198507A (zh) * 2016-04-21 2016-12-07 中国科学院大连化学物理研究所 含硫有机磷类农药传感器及其制备和应用
CN106501250A (zh) * 2016-11-08 2017-03-15 郑州贝贝生物科技有限公司 一种快速检测试纸条以及采用该试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法
CN109142322A (zh) * 2018-08-22 2019-01-04 滑县恒琢信息科技有限公司 一种农产品农药残留物检测方法
WO2020081765A1 (en) * 2018-10-18 2020-04-23 Academia Sinica Method and kit for pesticides detection, and plasmid, baculovirus, cell and method of preparing the same for pesticides detection

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1460135A1 (en) * 2002-12-09 2004-09-22 Quality Engineering s.r.l. Acetylcholinesterase method to detect organophosphorate and carbamate insecticides in water, foods and beverages
CN1687756A (zh) * 2004-12-27 2005-10-26 南京农业大学 一种农药残留快速检测试剂盒及其用法
US20110045517A1 (en) * 2007-11-06 2011-02-24 Battelle Memorial Institute Toxic Material Detection Apparatus and Method
CN102455295A (zh) * 2010-10-28 2012-05-16 中国科学院上海生命科学研究院 用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测的显色方法
CN106198507A (zh) * 2016-04-21 2016-12-07 中国科学院大连化学物理研究所 含硫有机磷类农药传感器及其制备和应用
CN106501250A (zh) * 2016-11-08 2017-03-15 郑州贝贝生物科技有限公司 一种快速检测试纸条以及采用该试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法
CN109142322A (zh) * 2018-08-22 2019-01-04 滑县恒琢信息科技有限公司 一种农产品农药残留物检测方法
WO2020081765A1 (en) * 2018-10-18 2020-04-23 Academia Sinica Method and kit for pesticides detection, and plasmid, baculovirus, cell and method of preparing the same for pesticides detection

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NAOKI NAGATANI ET AL.: "Rapid and sensitive visual detection of residual pesticides in food using acetylcholinesterase-based disposable membrane chips", 《FOOD CONTROL》 *
温艳霞 等: "酶抑制法在农残检测中的应用及乙酰胆碱酯酶的研究进展", 《食品研究与开发》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114323876A (zh) * 2022-03-14 2022-04-12 广东江门中医药职业学院 一种检测水产品中氯唑西林药物残留的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN113884486B (zh) 2022-02-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Norris et al. Pesticide residues, colorimetric estimation of malathion residues
Duke Proving allelopathy in crop–weed interactions
CN113884486B (zh) 一种检测内吸性农药乐果残留的方法
Soares et al. Organophosphorus pesticide determination in biological specimens: bioanalytical and toxicological aspects
Westlake et al. Organophosphate poisoning. Effects of selected organophosphate pesticides on plasma enzymes and brain esterases of Japanese quail (Coturnix coturnix japonica)
Archer et al. Insecticide Measurement, Direct Colorimetric Analysis of Cholinesterase-Inhibiting Insecticides with Indophenyl Acetate
Krishnan et al. Deletion of the SACPD-C locus alters the symbiotic relationship between Bradyrhizobium japonicum USDA110 and soybean, resulting in elicitation of plant defense response and nodulation defects
CN110637553A (zh) 一种水稻种子质量检测方法
Benson et al. Rapid procedure for carbaryl residues: Modification of the official colorimetric method
Qiu et al. Negative priming effect from tree leaf and root residues with contrasting chemical composition
Bunyan et al. Residue in Tissue, Esterase Inhibition in Pheasants Poisoned by O, O-Diethyl S-(Ethylthiomethyl) phosphorodithioate (Thimet)
Weber et al. Stereospecific analysis of maize triglycerides
Khaled et al. Rapid detection of methomyl and organophosphorous pesticides with portable potentiometric biosensor
MacLean et al. Analytical method for thujaplicins
NO140906B (no) Anordning for bestemmelse av kjemikalier i en proevestroem
Batchelder et al. Herbicide Residues, A Colorimetric Method for the Determination of EPTC Residues in Crops and Soils
CN106290200A (zh) 受农药侵害烟叶的超氧化物歧化酶活性的测定方法
Rowlands The in vitro and in vivo oxidation and hydrolysis of malathion by wheat grain esterases
Sharma et al. New Spectrophotometric Method for the Analysis of Commercial Malathion Formulation and Its Residues on Some Crop Produces and Environmental Samples
RU2367133C1 (ru) Средство для предпосевной обработки семян гороха
CN102121930A (zh) 一种含有阿维菌素和毒死蜱的样品测定前的处理方法
Faulstich et al. Trialkyllead. Occurrence, biological interactions, and possible impact on forest decline
Archer et al. Insecticide-Acaricide Residues, Residue Analysis of Ethion by Cholinesterase Inhibition after Oxidation
Sirons Gas-liquid chromatographic determination of methyl isothiocyanate in soils
PORTER et al. cios, _O O CH, 0s-o

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant