CN106459934A - 包括具有磷脂酶c活性的多肽的组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及包括具有磷脂酶C活性的多肽的组合物并且涉及此类组合物用于水解磷脂或溶血磷脂的用途。本发明还涉及用于水解磷脂或溶血磷脂的方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与根据本发明的具有磷脂酶C活性的组合物或多种多肽接触。
Description
参照序列表
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发明背景
发明领域
本发明涉及包括多种具有磷脂酶C活性的多肽的组合物，其中至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自真菌的多肽，并且至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自细菌的多肽。
本发明还涉及这样的组合物，这类组合物用于例如对碳水化合物水溶液或浆液进行脱胶以及对油进行脱胶的方法中。
本发明进一步涉及用于水解磷脂或溶血磷脂的方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与如上定义的组合物接触。
相关领域描述
若干类型的磷脂酶是已知的，根据在磷脂分子中攻击的键的位置它们的特异性不同。磷脂酶A1(PLA1)除去1-位置的脂肪酸产生游离脂肪酸和1-溶血-2-酰基磷脂。磷脂酶A2(PLA2)除去2-位置的脂肪酸产生游离脂肪酸和1-酰基-2-溶血磷脂。术语磷脂酶B(PLB)被用于具有A1活性和A2活性两者的磷脂酶。磷脂酶C(PLC)除去磷酸盐部分产生1,2-二酰基甘油和磷酸酯。磷脂酶D(PLD)产生1,2-二酰基甘油磷酸盐和碱性基团(见图1)。
在消费之前，将植物油脱胶以提供中性味道和浅色的精炼的存储稳定的植物油。脱胶工艺包括从富含甘油三酯的油馏分中除去磷脂组分(胶)。在工业中最常用的工艺是水脱胶、化学/苛性精炼和物理精炼(包括酸辅助脱胶和/或酶辅助脱胶)。由于磷脂组分的乳化性质，脱胶步骤导致油，即甘油三酯的损失。
由于磷脂的有效水解降低了胶质形成和减少胶相中带走的油，酶法脱胶会减少油损失。有关酶法脱胶的综述参见迪杰斯特拉(Dijkstra)2010，欧洲脂质科学与技术杂志(Eur.J.Lipid Sci.Technol.)112，1178。磷脂酶A和/或磷脂酶C在脱胶中的使用例如被描述于克劳森(Clausen)2001，欧洲脂质科学与技术杂志，103 333-340，WO 2003/089620和WO2008/094847。磷脂酶A的解决方案产生溶血磷脂和游离脂肪酸，导致油损失。另一方面，磷脂酶C具有产生甘油二酯(图2)的优点，该甘油二酯将保留在油中，因此将减少损失。在植物油中有四种主要的磷脂：磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)和磷脂酰肌醇(PI)。磷脂酶C酶对这些磷脂具有不同的特异性。唯一已知的可商购的磷脂酶C是对PC和PE具有特异性的范恩尼姆(Verenium)/DSM的(f)PLC(迪杰斯特拉(Dijkstra)，第101届AOCS年会，2010年5月10日)。WO 07/059927描述了用于脱胶的热稳定的芽孢杆菌(Bacillus)PLC。WO 2012/062817描述了对所有四种磷脂具有特异性的真菌PLC。PI特异性磷脂酶C已经描述于WO 2011/046815中。尽管此类磷脂酶是可获得的，仍然需要通过降低转换成二酰基甘油和磷酸酯的反应时间并同时提供广泛的底物特异性来提高磷脂的酶水解效率。
发明概述
本发明涉及一种组合物，该组合物包括多种具有磷脂酶C活性的多肽，其中
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自真菌的多肽；并且
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自细菌的多肽。
本发明进一步提供这样一种组合物，用于以下各项中
i)对碳水化合物水溶液或浆液进行脱胶，对油、例如植物油或可食用植物油进行脱胶，或在包括来自水脱胶的胶馏分中的磷脂水解以释放截留的三酸甘油酯油的方法，
ii)包括磷脂水解以获得改进的磷脂乳化剂的方法，具体地是其中所述磷脂是卵磷脂，
iii)用于改进含水溶液的过滤性或碳水化合物来源的浆料的方法，其含有磷脂，
iv)用于提取油的方法，
v)用于生产动物饲料产品的方法，
vi)用于生产生物燃料，例如生物柴油的方法，
vii)在用于生产洗涤剂产品的方法中，和/或
viii)在用于制备烘焙产品的方法中，该方法包括将磷脂酶添加到生面团中，和将烘焙生面团制成焙烤产品。
最后，本发明提供了一种用于水解磷脂或溶血磷脂的方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与根据本发明所述的多种具有磷脂酶C活性的多肽和/或组合物接触。
附图简述
图1示出了不同的磷脂酶裂解磷脂的位置以及在磷脂上的四个主要官能团。
图2示出了磷脂与磷脂酶C反应以形成甘油二酯和磷酸酯或磷酸。
定义
磷脂酶C活性：术语“磷脂酶C活性”或“PLC活性”涉及从磷脂中除去磷酸酯部分以产生1,2-二酰基甘油的酶活性(见图2)。大多数PLC酶属于水解酶和磷酸二酯酶家族并大体上分类为EC 3.1.4.3。一些PLC酶可以在其他的EC分类中进行分类，例如PI特异性的PLC酶。磷脂酶C活性可以根据在实例1中所描述的程序或通过在“对于磷脂酶活性的测定”部分所描述的测定来确定。
磷脂酶A活性：在本发明的背景中，术语“磷脂酶A活性”包括具有磷脂酶A1和/或磷脂酶A2活性(A1或A2，EC3.1.1.32或EC3.1.1.4)的酶，该活性即对磷脂例如卵磷脂的一个或两个羧酸酯键的水解活性。同时具有A1和A2活性的磷脂酶也被称为磷脂酶B。
磷脂酶A活性可以通过在“对于磷脂酶活性的测定”部分所描述的测定中的一种来确定。出于本发明的目的，磷脂酶A活性还可以使用磷脂酶活性(LEU)测定来确定，其中磷脂酶A活性是从在pH 8.0，40℃下水解卵磷脂的能力来确定。在水解反应滞后，用NaOH来滴定，反应时间为2分钟。披露于WO 1998/26057中的来自尖孢镰孢菌(LIPOPAN F)具有1540LEU/mg酶蛋白的活性并且可以被作为标准使用。
在一方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:46的成熟多肽的和/或SEQ ID NO:47的多肽的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的磷脂酶A活性。
除了具有磷脂酶A活性，本发明的多肽还可以具有脂肪酶活性。
磷脂酶活性测定：用于确定磷脂酶A、C的常规指南是本领域中公知的。
示例性活性测定包括浊度测定、甲基伞形磷酸胆碱(荧光)测定、Amplex红(荧光)磷脂酶测定、薄层色谱测定(TLC)、细胞溶解测定和对硝基苯基磷酸胆碱测定。使用这些测定可以快速筛选多肽、肽和抗体的磷脂酶活性。
使用含琼脂的底物的平板测定可用于确定磷脂酶活性。有用的底物是卵磷脂或具体的磷脂。测定可以如下进行。通过混合2％琼脂糖(LITEX HSA1000)和5ml底物(95％来自大豆的L-α-磷脂酰胆碱(阿凡提(Avanti)441601)、或来自大豆的L-α-磷脂肌醇(阿凡提840044P)用于PI特异性、或来自大豆的L-α-磷脂酰乙醇胺(阿凡提840024P)或卵磷脂)浇铸平板，该琼脂糖通过在缓冲液(100mM HEPES和100mM柠檬酸，pH值从pH 3.0调至pH 7.0)中混合和煮5分钟，接着冷却至大约60℃来制备，在60℃下将底物用Ultra Turrax分散在水中(MilliQ)1分钟用于PC-特异性，轻轻混合到7cm直径的培养皿，并且在通过真空冲压直径约3mm的孔之前冷却至室温。在平板用封口膜密封并置于在55℃的恒温箱中48小时之前，将10微升稀释至0.4mg/ml纯化的酶添加到每个孔中。以规则间隔取出平板用于摄影。
用来确定磷脂酶活性的浊度测定描述于以下文献中：例如，考夫曼(Kauffmann)(2001)“通过定向进化和合理的设计将耐热链形芽孢杆菌(Bacillus thermocatenulatus)脂肪酶转化为对长链脂肪酰基底物具有增加的活性的有效的磷脂酶(Conversion ofBacillus thermocatenulatus lipase into an efficient phospholipase withincreased activity towards long-chain fatty acyl substrates by directedevolution and rational design)”蛋白质工程(Protein Engineering)14:919-928；易卜拉欣(Ibrahim)(1995)“暗指磷脂酶作为白色念珠菌的毒力因子的证据(Evidenceimplicating phospholipase as a virulence factor of Candida albicans)”，感染与免疫(Infect.Immun.)63:1993-1998。
用来确定磷脂酶活性的甲基伞形(荧光)磷酸胆碱测定描述于，例如，古德(Goode)(1997)“关于海鞘卵子内细胞表面内部的磷脂酶活性的证据(Evidence for cell surfaceinternal phospholipase activity in ascidian eggs)”，发育生长与分化(Develop.Growth Differ.)39:655-660；迪亚兹(Diaz)(1999)“基于直接荧光的脂肪酶活性测定(Direct fluorescence-based lipase activity assay)”，生物技术(BioTechniques)：27:696-700。
用来确定磷脂酶活性的Amplex红(荧光)磷脂酶测定可作为试剂盒获得，例如，使用来自分子探针公司(Molecular Probes)(尤金，俄勒冈)的Amplex红磷脂酰胆碱特异性磷脂酶测定试剂盒，根据制造商的说明来检测磷脂酰胆碱特异性磷脂酶。
在荧光酶标仪上利用560±10nm的激发光和590±10nm的荧光检测光来测量荧光。在非常低的酶浓度下该测定是敏感的。
用来确定磷脂酶活性的薄层色谱测定(TLC)被描述于，例如，雷诺兹(Reynolds)(1991)酶学方法(Methods in Enzymol.)197:3-13；田口(Taguchi)(1975)“来自诺维氏芽孢梭菌(Clostridium novyi)类型A.1的磷脂酶(Phospholipase from Clostridium novyitype A.I)”生物化学生物物理学报(Biochim.Biophys.Acta)409:75-85。薄层色谱分析(TLC)是用于检测磷脂酶活性的一种广泛使用的技术。这种方法的各种改进已经被用于从水性测定混合物中提取磷脂。在一些PLC测定中，通过向反应混合物添加氯仿/甲醇(2:1)来停止水解。未反应的起始材料和甘油二酯被提取到有机相中并且可以通过TLC进行分馏，而头组产物保留在水相中。对于磷脂消化的更精确的测量，可以使用放射性标记的底物(参见，例如，雷诺兹(Reynolds)(1991)酶学方法(Methods in Enzymol.)197:3-13)。产物和反应物的比率可用于计算每单位时间水解的底物的实际摩尔数量。如果相同地提取所有组分，提取中的任何损失将同样地影响所有组分。用氯仿/甲醇/水(65:25:4)作为溶剂系统，磷脂消化产物的分离可通过硅胶TLC来实现(参见，例如，田口(Taguchi)(1975)生物化学生物物理学报(Biochim.Biophys.Acta)409:75-85)。
用来确定磷脂酶活性的对硝基苯磷酸胆碱测定被描述于，例如，Khoobsurat(1999)临床微生物杂志(J.Clin.Microbiol.)37:3742-3745；贝尔卡(Berka)(1981)感染与免疫(Infect.Immun.)34:1071-1074。这项测定是基于底物类似物对硝基苯基磷酸胆碱的酶促水解以释放一种黄色显色化合物的对硝基苯酚，在405nm可检测到。这种底物便于高通量筛选。也可以应用使用针对其他磷脂基团的底物的类似测定，例如，用对硝基苯基磷酰基肌醇或对硝基苯基磷酰乙醇胺。
细胞溶解测定可以根据红细胞的裂解来检测具有细胞溶解活性的磷脂。有毒的磷脂酶可以与真核细胞膜相互作用并水解磷脂酰胆碱和鞘磷脂，导致细胞裂解。参见，例如，Titball(1993)微生物学评论(Microbiol.Rev.)57:347-366。
另外的测定像耦合到三重四极质谱仪(LC/MS/MS)的31P-NMR和液相色谱法在本申请的实例部分中描述。
PC和PE特异性的磷脂酶C：术语“PC和PE特异性的磷脂酶C”和“PC、PE特异性的磷脂酶C”和“具有针对磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)的活性的多肽”可互换使用。它们涉及对磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)有活性的多肽。除了PC和PE特异性，它还可能对磷脂酸(PA)和磷脂酰肌醇(PI)具有一些活性。优选地，当在酶的最佳pH和10mg/kg的酶剂量下使用实例1中的P-NMR测定时，PC和PE特异性的磷脂酶C从具有至少100ppm PC和100ppm PE的油或脂肪中去除至少30％PC和至少30％PE。更优选地，它去除40％、50％、60％、70％或80％，甚至更优选地，它去除90％并且最优选地它去除90％到100％之间的油或脂肪中的PC并且40％、50％、60％、70％或80％，甚至更优选地它去除90％并且最优选地它去除90％到100％之间的油或脂肪中的PE。
PI特异性磷脂酶C：术语“PI特异性的磷脂酶C”、“磷脂酰肌醇磷脂酶C”和“具有针对磷脂酰肌醇(PI)的活性的多肽”可互换使用。它们涉及具有针对磷脂酰肌醇(PI)的活性的多肽，这意味着与对PI活性相对，它对磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)的活性较低。PI特异性的磷脂酶C酶可或属于分类为EC 3.1.4.11的水解酶和磷酸二酯酶家族或属于分类为EC 4.6.1.13的脂肪酶家族。PI特异性的磷脂酶C活性可以根据实例5中描述的步骤来确定。优选地，当在酶的最佳pH和10mg/kg的酶剂量下使用实例1中的P-NMR测定时，PI特异性的磷脂酶C从具有至少50ppm PI的油或脂肪中去除至少30％PI。更优选地，它去除40％、50％、60％、70％或80％，甚至更优选地它去除90％并且最优选地它去除90％到100％之间的油或脂肪中的PI。
优选地，与它能去除的PC、PE或PA的量相比，PI特异性磷脂酶C至少多去除20％PI，与它能去除的PC、PE或PA的量相比，更优选地至少30％、40％，甚至更优选地至少50％并且最优选地至少多60％PI。
PC、PE、PA、和PI特异性的磷脂酶C：术语“PC、PE、PA和PI特异性的磷脂酶C”和“具有针对磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)和磷脂酰肌醇(PI)的活性的多肽”可以互换使用。它们涉及对磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)和磷脂酰肌醇(PI)有活性的多肽。更优选地，当在酶的最佳pH和10mg/kg的酶剂量下使用实例1中的P-NMR测定时，PC、PE、PA、和PI特异性磷脂酶C从具有至少100ppm Pc、75ppm Pe、5ppm Pa和50ppmPI的油或脂肪中去除四种磷脂中每一种的至少30％。更优选地，它去除40％、50％、60％、70％或80％，甚至更优选地，它去除90％并且最优选地它去除90％到100％之间的油或脂肪中的PC并且40％、50％、60％、70％或80％，甚至更优选地它去除90％并且最优选地它去除90％到100％之间的油或脂肪中的PE。
细菌磷脂酶C/源自细菌的磷脂酶C：出于本发明的目的，如在此结合一种给定的来源使用的术语“源自”应意指多肽由多核苷酸编码，在其天然形式时出现在该来源中并且该多肽是由该来源或插入了来自该来源的多核苷酸的菌株(“宿主细胞”)产生。该术语还与多肽结合使用，该多肽是由来自该来源的多核苷酸的修饰形式编码，其中该多核苷酸已经被修饰，例如通过一个或多个核苷酸的取代，缺失，插入或添加。因此，术语“细菌磷脂酶C”、“源自细菌的磷脂酶C”和“具有磷脂酶C活性并源自细菌的多肽”被互换使用来指代具有磷脂酶C活性，被以天然形式出现在细菌中的多核苷酸编码的多肽或被该多核苷酸的修饰形式编码的多肽。在一方面，从给定来源或宿主细胞中获得的多肽被分泌到细胞外。
本定义还包括一种多肽，其具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)一种多肽，其与具有磷脂酶C活性并被以天然形式存在于细菌中的多核苷酸编码的多肽的氨基酸序列具有至少60％、例如70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性；
(b)如在(a)中定义的多肽的一个片段；
包括这些多肽，其具有280-320个氨基酸残基的长度，例如280-310个氨基酸残基、280-305个氨基酸残基、280-300个氨基酸残基、280-298个氨基酸残基、280-297氨基酸残基、280-296个氨基酸残基、285-320个氨基酸残基、285-315个氨基酸残基、285-310个氨基酸残基、285-305个氨基酸残基、285-300个氨基酸残基、285-298个氨基酸残基、285-297个氨基酸残基、285-296个氨基酸残基、290-320个氨基酸残基、290-315个氨基酸残基、290-310个氨基酸残基、290-305个氨基酸残基、290-300氨基酸残基、290-298个氨基酸残基、290-297个氨基酸残基、290-296个氨基酸残基、295-320个氨基酸残基、295-315个氨基酸残基、295-310个氨基酸残基、295-305个氨基酸残基、295-300个氨基酸残基、295-298个氨基酸残基、255-297个氨基酸残基、或295-296个氨基酸残基的长度。
真菌磷脂酶C/源自真菌的磷脂酶C：根据以上，术语“真菌磷脂酶C”、“源自真菌的磷脂酶C”和“具有磷脂酶C活性并源自真菌的多肽”被互换使用来指代具有磷脂酶C活性，被以天然形式出现在真菌中的多核苷酸编码的多肽或被该多核苷酸的修饰形式编码的多肽。
本定义还包括一种多肽，其具有磷脂酶C活性，并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)一种多肽，其与具有磷脂酶C活性并被以天然形式存在于真菌中的多核苷酸编码的多肽的氨基酸序列具有至少60％、例如70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性；
(b)如在(a)中定义的多肽的一个片段；
包括这些多肽，其具有540-640个氨基酸残基的长度，例如550-640个氨基酸残基、560-640个氨基酸残基、570-640个氨基酸残基、540-630个氨基酸残基的长度，例如550-630个氨基酸残基、560-630个氨基酸残基、570-630个氨基酸残基、570-620个氨基酸残基、570-610个氨基酸残基、570-600个氨基酸残基、570-597个氨基酸残基、570-596个氨基酸残基、580-640个氨基酸残基、540-630个氨基酸残基的长度，例如540-620个氨基酸残基、540-610个氨基酸残基、540-600个氨基酸残基、540-590个氨基酸残基、540-580个氨基酸残基、540-570个氨基酸残基、540-560个氨基酸残基、540-560个氨基酸残基、550-630个氨基酸残基的长度，例如550-620个氨基酸残基、550-610个氨基酸残基、550-600个氨基酸残基、550-590个氨基酸残基、550-580个氨基酸残基、550-570个氨基酸残基、550-560个氨基酸残基、550-560个氨基酸残基、560-630个氨基酸残基的长度，例如560-620个氨基酸残基、560-610个氨基酸残基、560-600个氨基酸残基、560-590个氨基酸残基、560-580个氨基酸残基、560-570个氨基酸残基、560-560个氨基酸残基、560-560个氨基酸残基、570-630个氨基酸残基的长度，例如570-620个氨基酸残基、570-610个氨基酸残基、570-600个氨基酸残基、570-590个氨基酸残基、570-580个氨基酸残基、570-570个氨基酸残基、570-560个氨基酸残基、570-560个氨基酸残基、580-630个氨基酸残基、580-620个氨基酸残基、580-610个氨基酸残基、580-600个氨基酸残基、580-598个氨基酸残基、580-597个氨基酸残基、580-596个氨基酸残基、590-640个氨基酸残基、590-630个氨基酸残基、590-620个氨基酸残基、590-610个氨基酸残基、590-600个氨基酸残基、590-698个氨基酸残基、590-597个氨基酸残基、590-596个氨基酸残基、595-640个氨基酸残基、595-630个氨基酸残基、595-620个氨基酸残基、595-610个氨基酸残基、595-600个氨基酸残基、595-598个氨基酸残基、595-597氨基酸残基的长度、或595-596个氨基酸残基的长度。
反应时间：出于本发明的目的，磷脂酶C的“反应时间”是在脱胶测定(包括：向相当于基于油量的0.05％(100％纯的正磷酸)的所述油的样品中添加正磷酸(85％溶液)并将该样品在超声浴中混合5分钟，并在旋转器中孵育15min，随后在超声波浴中应用相当于纯的正磷酸的当量的4M NaOH进行碱中和5分钟；在低含水系统(基于总油量的3％的水)中加入量相当于10mg酶蛋白质/kg油的所述磷脂酶C，使该样品经受超声波处理并且在温度50℃-60℃下伴随搅拌孵育，并将该油700g在85℃下离心15分钟)中进行确定时，将粗制大豆油中磷脂酶C对其有活性的磷脂含量的50％进行转化要求的时间。脱胶测定的例子和由此获得的数据在实例1中提供。
催化结构域：术语“催化结构域”意思指酶的包含该酶的催化机器的区域。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录本是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列的步骤进行加工，包括剪接。
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定一个多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放阅读框架决定，该开放阅读框架从起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
片段：术语“片段”是指从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如，若干个)氨基酸的一种多肽或一个催化或磷脂结合结构域；其中该片段具有磷脂酸C活性。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包括本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。
分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其本质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于天然发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加物质的量而修饰的任何物质(例如宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)而修饰的任何物质。
低严格条件：术语“低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和25％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2％SDS，在50℃下洗涤三次，每次15分钟。
中严格条件：术语“中严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2％SDS，在55℃下洗涤三次，每次15分钟。
中-高严格条件：术语“中-高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA以及35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2％SDS，在60℃下洗涤三次，每次15分钟。
高严格条件：术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2％SDS，在65℃下洗涤三次，每次15分钟。
非常高严格条件：术语“非常高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5XSSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2％SDS，在70℃下洗涤三次，每次15分钟。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。在一方面，该成熟多肽可使用SignalP程序(尼尔森(Nielsen)等人，1997，蛋白质工程(Protein Engineering)10:1-6)预测。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有磷脂酶C活性的成熟多肽的多核苷酸。成熟多肽编码序列可使用SignalP程序(Nielsen等、1979，见上文)预测。
序列一致性：两个氨基酸序列之间或者两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列一致性”来描述。
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite)，赖斯(Rice)等人，2000，遗传学趋势(Trends Genet.)16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman(尼德尔曼)和Wunsch(翁施)，1970，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5，和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。尼德尔标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性，并且计算如下：
(相同残基x 100)/(比对的长度-在比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件，赖斯等人，2000，同上)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(尼德尔曼和翁施，1970，同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10，空位延伸罚分0.5，以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。尼德尔标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性，并且计算如下：
(相同脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对的长度-在比对中的空位总数)
子序列：当与核苷酸序列结合使用的时候，术语“子序列”意指使一个或多个(例如，若干个)核苷酸从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺少的多核苷酸；其中该子序列编码保留其具有磷脂酶活性的片段。
变体：术语“变体”意指在一个或多个(例如，若干个)位置处包括一个或多个改变(即，一个或多个取代、插入、和/或缺失)的具有磷脂酶C活性的多肽。取代意指占据一个位置的氨基酸残基由不同的氨基酸残基代替；缺失意指除去占据一个位置的氨基酸残基；以及插入意指在占据一个位置的氨基酸残基的毗邻处和紧邻处添加一个或多个氨基酸残基。
粗制油：术语“粗制油”是指(也称为非脱胶油)从例如植物来源的压榨油或提取油或其混合物，包括但不限于巴西莓油、杏仁油、巴巴苏油、黑加仑籽油、琉璃苣籽油、菜籽油、腰果油、蓖麻油、椰子油、芫荽油、玉米油、棉籽油、海甘蓝油、亚麻籽油、葡萄籽油、榛子油、大麻籽油、麻风树油、荷荷芭油、亚麻籽油、澳洲坚果油、芒果仁油、白池花油、芥子油、牛脚油、橄榄油、棕榈油、棕榈仁油、棕榈油精、花生油、美洲山核桃油、松子油、开心果油、罂粟籽油、菜籽油、米糠油、红花油、油茶油、芝麻油、牛油树脂、大豆油、向日葵籽油、妥尔油、山茶油、胡桃油、经由遗传修饰生物体(GMO)或传统“育种”具有改变的脂肪酸成分的各种各样的“天然”油，例如高油酸油、低亚麻酸油或低饱和油(高油酸油菜油、低亚麻酸大豆油或、高硬脂酸向日葵油)。
脱胶油：术语“脱胶油”是指从油中除去不可水合的磷脂、可水合的磷脂和卵磷脂(统称为“胶”)以产生可用于食品生产和/或非食品应用(例如生物柴油)的脱胶油或脂肪产品之后获得的油。在某些实施例中，脱胶油具有少于200ppm磷的磷脂含量，例如少于150ppm磷、少于100ppm磷、少于(或少于约)50ppm磷、少于(或少于约)40ppm磷、少于(或少于约)30ppm磷、少于(或少于约)20ppm磷、少于(或少于约)15ppm磷、少于(或少于约)10ppm磷、少于(或少于约)7ppm磷、少于(或少于约)5ppm磷、少于(或少于约)3ppm磷或少于(或少于约)1ppm磷的磷脂含量。
发明详述
诸位发明人已经观察到，在如对油进行脱胶的方法中可以通过将特征为广泛的底物特异性的真菌磷脂酶C和特征为有更快但更具体的活性的细菌磷脂酶C相结合来获得十分高效的磷脂水解。
酶组合物
因此，在一个第一方面，本发明提供了一种组合物，该组合物包括多种具有磷脂酶C活性的多肽，其中
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自真菌的多肽；并且
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自细菌的多肽。
在本发明的具体实施例中，该组合物包括2种或更多种多肽，例如2、3、4、5、或6种具有磷脂酶C活性的多肽，其中每一种均源自真菌。
根据本发明的其他实施例，该组合物包括2种或更多种多肽，例如1、2、3、4、5、或6种具有磷脂酶C活性的多肽，其中每一种均源自细菌。
具体而言，本发明提供组合物，其中一种或多种所述源自真菌的多肽具有广泛的底物可接受性，比如对2、3或4种选自下组的磷脂有活性，该组由以下各项组成：磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)和磷脂酰肌醇(PI)。根据一些实例，一种或多种所述源自真菌的多肽具有针对磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)和磷脂酰肌醇(PI)的活性。通常，源自细菌的具有磷脂酶C活性的多肽具有相对更快的活性和更短的反应时间。因此，根据一些实施例，至少一种所述源自细菌的多肽，例如至少2种、至少3种、至少4种、至少5种或至少6中所述源自细菌的多肽有1-5小时的反应时间，例如1-4小时、1-3小时、1.5-3.5小时、1.5-2.5小时、2-4小时，例如1小时、2小时、3小时、4小时或5小时。
根据一些实施例，本发明提供组合物，其中一种或多种所述源自细菌的多肽具有狭窄的底物可接受性，比如对1、2、或3种选自下组的磷脂有活性，该组由以下各项组成：磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)。在具体的实施例中，本发明提供组合物，其中一种或多种所述源自细菌的多肽具有针对磷脂酰肌醇(PI)的活性并且/或者是PI特异性的磷脂酶C。根据另外的实例，一种或多种所述源自细菌的多肽具有针对磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)的活性并且/或者是PC和PE特异性的磷脂酶C。
通常，具有磷脂酶C活性的源自真菌的多肽需要较长的反应时间来转化所有种类的磷脂(PI、PA、PE、PC)。因此，在一些实施例中，至少一种所述源自真菌的多肽，例如至少2种、至少3种、至少4种、至少5种或至少6中所述源自真菌的多肽有3-36小时的反应时间，例如3-30小时，或例如4-24小时。
该真菌(真菌界)可以是双核真菌，更具体地来自子囊菌门真菌，更具体地来自子囊菌亚门(Pezizomycotina)的丝状子囊菌(filamentous ascomycete)，更具体地来自粪壳菌纲真菌(Sordariomycetes)或散囊菌纲真菌(Eurotiomycetes)；更具体地来自粪壳菌目真菌、肉座菌目真菌和散囊菌目真菌，更具体地址选自丛赤壳科和曲霉科真菌；更具体地选自锥毛壳属、丛赤壳属、和青霉属真菌。
尽管一些真菌来源是可获得的，本发明的一些实施例涉及组合物，其中一种或多种所述源自真菌的多肽，例如2种、3种、4种、5种或6种所述源自真菌的多肽选自下组，该组由以下各项组成：源自锥毛壳菌的多肽、源自埃默森青霉菌的多肽和源自丛赤壳菌的多肽。同样地，技术人员将意识到许多种来源的细菌多肽具有磷脂酶C活性。细菌来源(细菌超界)可以是壁厚菌门或变形菌门的成员，更具体地来自杆菌纲或丙型变形菌纲，更具体的来自芽孢杆菌目或假单胞细菌目，更具体的来自芽孢杆菌科、李斯特氏菌科、或假单胞菌科；更具体的来自芽胞杆菌属、李斯特菌属、或假单胞菌属细菌。因此，在本发明的具体实施例中，一种或多种所述源自细菌的多肽是选自下组，该组由以下各项组成：源自芽孢杆菌属菌种的多肽、源自李斯特菌属菌种的多肽、源自假单胞菌属菌种的多肽。具体而言，所述芽孢杆菌属菌种可以选自下组，该组由以下各项组成：嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkaiophilus)、解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyioliquefaciens)、短芽抱杆菌(Bacillus brevis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、环状芽抱杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽抱杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽抱杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、假蕈状芽孢杆菌(Bacilluspseudomycoides)、蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。
在具体的实施例中，所述李斯特菌菌种是英诺克李斯特菌(Listeria innocua)。
在其他具体的实施例中，所述假单胞菌菌种选自下组，该组由以下各项组成：绿针假单胞菌和Pseudomonas protegens。
上述各种物种的菌株可以容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(NRRL)。
在本发明的具体实施例中，该至少一种具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽具有至少为38kDa的尺寸/分子量，例如在40-65kDa的范围内，摩尔量从多肽的氨基酸序列计算而来，将任何信号肽和/或前肽的氨基酸序列排除在外。
该至少一种具有磷脂酶C活性并源自真菌的多肽可以进一步以具有被氨基酸残基D171、H173、D245、H249、N285、H286、H393、H427和H429定义(使用SEQ ID NO:2的氨基酸编号)的催化位点为特征。优选地，氨基酸残基D171、H173、D245、N285、H393、H427和H429是锌结合残基，其中H249和H286不是。
在该至少一种具有磷脂酶C活性并源自真菌的多肽中，氨基酸序列的催化片段(即从第一(N-末端)至最末(C-末端)催化氨基酸残基的序列)的长度优选地在250-265个氨基酸残基的范围内，例如255-261个氨基酸残基或例如256-260个氨基酸残基。
同样地，在至少一种具有磷脂酶C活性并源自真菌的多肽中，第一催化位点前的氨基酸序列(即从成熟多肽的N-末端到第一(N-末端)催化氨基酸残基)的长度是从100至200个氨基酸残基，例如从100至180个氨基酸残基、从100至170、从100至160、从100至150、从110至180、从120至180、从130至180、从140至180、从150至180、从110至170、从120至170、或从130至170个氨基酸残基。
此外，在至少一种具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽中，在最末催化位点以后的氨基酸序列(即从最末(C-末端)催化氨基酸残基到成熟多肽的C-末端)的长度是从100至200个氨基酸残基，例如从100至190个氨基酸残基、从100至180、从100至175、从110至200、从110至190、从110至180、从110至175、从120至200、从120至190、从120至180、从120至175、从130至200、从130至190、从130至180、从130至175、从140至200、从140至190、从140至180、从140至170、从150至200、从150至190、从150至180、或例如从150至175个氨基酸残基。
根据一些实施例，该至少一种具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽包括如CATH ID3.60.21.10定义的类钙调磷酸酶的磷酸酯酶域。因此，该至少一种具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽可以选自如下多肽，该多肽因具有如CATH ID 3.60.21.10定义的类钙调磷酸酶的磷酸酯酶域(起始于成熟多肽的位置130-170处(例如在位置130-150处)并与余下的序列比对(允许在域中有插入))是可鉴定的(通过标准比对方法/工具(例如在“序列一致性”的定义中提供的那些))。在本发明的一些实施例中，当以10mg多肽每kg油在最佳pH(例如pH范围为4.5至8.5，例如在5.0至8.0的范围内或例如在6.5至7.5的范围内)下应用并在50℃-60℃的温度下孵育2-4小时时，所述一种或多种对磷脂酰肌醇(PI)有活性的多肽/所述PI特异性的磷脂酶C，和所述对磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)有活性的多肽/所述PC和PE特异性磷脂酶C能够减少在粗制油中的各磷脂的分别含量，例如粗制大豆油，减少至少30％(w/w)，例如35％(w/w)、40％(w/w)、45％(w/w)、50％(w/w)、55％(w/w)、60％(w/w)、65％(w/w)、70％(w/w)、75％(w/w)、80％(w/w)、85％(w/w)、90％(w/w)、95％(w/w)、98％(w/w)、99％(w/w)或例如100％(w/w)。
根据一些实施例，根据本发明使用的对磷脂酰肌醇有活性的一种或多种多肽/所述PI特异性的磷脂酶C或许能将粗制大豆油中的磷脂酰肌醇含量减少50％或更多、50％，例如减少55％、减少60％、减少65％、减少70％、减少75％、减少80％、减少85％、减少90％或减少95％或更多，磷脂酰肌醇含量的减少是在添加100mg酶蛋白(EP)每千克油并将油和酶在50℃下、pH 5.5中孵育2小时后通过31P-NMR确定的。
优选地，根据本发明使用的对磷脂酰肌醇有活性的一种或多种多肽/所述PI特异性的磷脂酶C或许能将粗制大豆油中的磷含量减少至20mg/kg油或更少，该数据通过电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)在4mg酶蛋白/kg油在包含基于油量的3％的水的低含水系统中，在50℃-60℃下孵育5小时后确定。
在进一步的实施例中，针对PC和PE具有活性的多肽/PC和PE特异性的磷脂酶C能够将粗制大豆油中的磷脂酰乙醇胺和/或磷脂酰胆碱的含量减少50％或更多、50％，例如减少55％、减少60％、减少65％、减少70％、减少75％、减少80％、减少85％、减少90％或减少95％或更多，磷脂酰乙醇胺和/或磷脂酰胆碱的含量的减少是在添加100mg酶蛋白(EP)每千克油并将油和酶在50℃下、pH 5.5中孵育2小时后通过31P-NMR确定的。
在更进一步的实施例中，针对PC和PE具有活性的多肽/PC和PE特异性的磷脂酶C能够将粗制大豆油中的磷含量减少至20mg/kg油或更少，该数据通过电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)在4mg酶蛋白/kg油在包含基于油量的3％的水的低含水系统中，在50℃-60℃下孵育5小时后确定。
具体地，可使用粗制大豆油来确定多肽降低磷含量的能力，该粗制大豆油包括80-140ppm磷作为磷脂酸(PA)存在，140-200ppm磷作为磷脂酰乙醇胺(PE)存在，70-110ppm磷作为磷脂酸(PI)存在和130-200ppm磷作为磷脂酰胆碱存在；磷含量由31P-NMR测量。
此外，所述磷含量的减少可以在油脱胶的方法中获得，该方法包括如下步骤：
i)任选地用酸/碱处理粗制大豆油，该处理是通过添加对应于基于油量的0.05％(100％纯的正磷酸)的量的85％正磷酸溶液，在超声波浴中混合5分钟，紧接着是在旋转器中孵育15分钟并且在超声波浴中应用相当于纯的正磷酸的当量(从0.5至0.15)的NaOH进行碱中和5分钟；
ii)在低含水系统中将多肽添加至油(以4mg酶蛋白/kg油的量)中，该低含水系统包含基于油量的3％的水并且使该油和该多肽经受超声波处理5分钟；
iii)在50℃-60℃下孵育该多肽和油5小时，在20rpm下搅拌；
iv)在85℃、700g下离心该油和该多肽15分钟。
同样地，在根据本发明的一些实施例中，当以100mg多肽每kg油在最佳pH(例如pH范围为4.5至8.5，例如在5.0至8.0的范围内或例如在6.5至7.5的范围内)下应用并在50℃-60℃的温度下孵育2-4小时时，所述一种或多种对磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)和磷脂酰肌醇(PI)有活性的多肽能够减少在粗制油中的各磷脂的分别含量，例如粗制大豆油，减少至少30％(w/w)，例如35％(w/w)、40％(w/w)、45％(w/w)、50％(w/w)、55％(w/w)、60％(w/w)、65％(w/w)、70％(w/w)、75％(w/w)、80％(w/w)、85％(w/w)、90％(w/w)、95％(w/w)、98％(w/w)、99％(w/w)或例如100％(w/w)。
具体地，PA、PC、PE和PI含量的减少可以在添加100mg酶蛋白(EP)/kg油和在50℃、pH 5.5下孵育该油和酶2小时之后由31P-NMR来确定。
具体地，可使用粗制大豆油来确定多肽降低磷含量和增加二酰基甘油含量的能力，该粗制大豆油包括80-140ppm磷作为磷脂酸(PA)存在，140-200ppm磷作为磷脂酰乙醇胺(PE)存在，70-110ppm磷作为磷脂酸(PI)存在和130-200ppm磷作为磷脂酰胆碱存在；磷含量由31P-NMR测量并且二酰基甘油含量由HPLC-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)测量。
具体地，本发明的多肽当以8.5mg EP/kg油的量应用到粗制大豆油中并孵育3小时时，能够增加二酰基甘油酯至少0.1％w/w的量。优选地，该油已经过酸/碱处理，该酸/碱处理是通过以对应于基于油量的0.05％(100％纯的正磷酸)的量添加85％正磷酸溶液，和以相当于纯的正磷酸的0.5当量应用4M NaOH的碱中和来进行。
优选地，当粗制大豆油已经使用0.05％正磷酸和1当量的NaOH进行酸/碱处理时，本发明的多肽当以8.5mg EP/kg的量应用于该粗制大豆油并与该油一起在50℃下孵育3小时时，能够增加二酰基甘油酯的量至少0.3％w/w。
具体地，PA、PC、PE和PI含量的减少和/或二酰基甘油的产生可以在包括以下步骤的油脱胶工艺中获得：
i)任选地用酸/碱处理粗制大豆油，该处理是通过添加对应于基于油量的0.05％(100％纯的正磷酸)的量的85％正磷酸溶液，在超声波浴中混合5分钟，紧接着是在旋转器中孵育15分钟并且在超声波浴中应用相当于纯的正磷酸的当量(从0.5至0.15)的NaOH进行碱中和5分钟；
ii)在低含水系统中将多肽添加至油中，该低含水系统包含基于油量的3％的水并且使该油和该多肽经受超声波处理5分钟；
iii)在50℃-60℃下孵育该多肽和油，在20rpm下搅拌；
iv)在85℃、700g下离心该油和该多肽15分钟。
该组合物可以具体地包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQID NO:5中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:5中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQID NO:5中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
在具体的实施例中，根据本发明的组合物包括一种多肽，其具有磷脂酶C活性，并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:l的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:l的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的包含在一个或多个位置的取代、缺失和/或插入的变体；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
在其他的具体实施例中，该组合物包括一种多肽，其具有磷脂酶C活性，并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:4的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
本定义还包括一种多肽，其具有磷脂酶C活性，并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
所述成熟多肽可以具体地由选自下组的氨基酸组成，主要地由下组的氨基酸组成或包括下组的氨基酸，该组由以下各项组成：SEQ ID NO.:2的氨基酸残基19-643、SEQ IDNO.:4的氨基酸残基17-610、SEQ ID NO.:7的氨基酸残基20-626、和SEQ ID NO.:7的氨基酸残基37-626。
在其他的实施例中，SEQ ID NO:2的成熟多肽包括SEQ ID NO:2的氨基酸43-618，由其组成或基本由其组成。在进一步的实施例中，SEQ ID NO:4的成熟多肽包括SEQ ID NO:4的氨基酸20-576，由其组成或基本由其组成。在本发明的更进一步的实施例中，SEQ IDNO:7的成熟多肽包括SEQ ID NO:7的氨基酸37-618，由其组成或基本由其组成。
在进一步的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
在更进一步的实施例中，根据本发明的组合物包括一种多肽，其具有磷脂酶C活性，并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(d)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
根据本发明的组合物，可以根据一些实施例包括具有磷脂酶C活性并且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(d)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
在另外的实施例中，根据本发明的组合物包括一种多肽，其具有磷脂酶C活性，并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:41的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
根据如以上所阐述的实施例，所述成熟多肽包括或由一种选自下组的氨基酸序列组成，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:9的氨基酸残基23-322、SEQ ID NO:9的氨基酸残基24-322、SEQ ID NO:9的氨基酸残基、SEQ ID NO:9的氨基酸残基、SEQ ID NO:9的氨基酸残基27-322、SEQ ID NO:9的氨基酸残基28-322、SEQ ID NO:10的氨基酸残基、SEQ ID NO:12的氨基酸残基26-323、SEQ ID NO:13的氨基酸序列、SEQ ID NO:15的氨基酸残基26-323、SEQ ID NO:16的氨基酸序列、SEQ ID NO:18的基酸残基29-323、SEQ ID NO:19的氨基酸序列、SEQ ID NO:21的氨基酸残基26-322、SEQ ID NO:22的氨基酸序列、SEQ ID NO:24的氨基酸残基26-322、SEQ ID NO:26的氨基酸残基34-278、SEQ ID NO:27的氨基酸序列、SEQ IDNO:29的氨基酸残基29-283、SEQ ID NO:31的氨基酸残基25-283、SEQ ID NO:32的氨基酸序列、SEQ ID NO:34的氨基酸残基25-283、SEQ ID NO:36的氨基酸残基28-289、SEQ ID NO:37的氨基酸序列、SEQ ID NO:39的氨基酸序列、SEQ ID NO:41的氨基酸残基24-328、SEQ IDNO:43的氨基酸28-339和SEQ ID NO:45的氨基酸25-280。
另外，根据本发明的组合物可以是一个组合物，其中所述多种具有磷脂酶C活性的多肽选自下组，该组由以下各项组成：
-一种如上定义的且源自真菌的多肽和一种如上定义的且源自细菌的多肽；
-一种如上定义的且源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-一种如上定义的且源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和一种如上定义的且源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和一种如上定义的且源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽。
在涉及多肽的具体组合的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
以及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的进一步的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
以及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(i)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的其他的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:4的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的其他的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:4的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(i)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的其他的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中-高严格条件条件下与(i)SEQID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的其他的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(i)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的仍其他的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(k)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(l)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(m)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(n)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(o)和(k)、(l)、(m)、或(n)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的仍其他的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
以及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(k)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(l)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(m)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(n)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(o)和(k)、(l)、(m)、或(n)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的甚至进一步的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(k)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(l)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(m)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(n)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(o)和(k)、(l)、(m)、或(n)的多肽的片段。
本发明的具体实施例提供了组合物，其包括至少一种多肽，该多肽具有磷脂酶C活性且源自真菌和至少一种选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:40的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:41的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
在涉及多肽的具体组合的甚至进一步的实施例中，该组合物包括具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段；
及
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(k)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(l)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(m)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(n)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(o)和(k)、(l)、(m)、或(n)的多肽的片段。
应当理解的是该组合物可以有与以上公开的其他相关组合物阐述的任一特性和特征。
同样地，该所述成熟多肽可以包括SEQ ID NO:41的氨基酸残基24-328或由SEQ IDNO:41的氨基酸残基24-328的组成并且/或者在(d)中的该所述变体可以包括SEQ ID NO:41的氨基酸残基56-195。
在项目(e)中的该所述片段可以在一些实施例中包括SEQ ID NO:41的氨基酸残基56-195。
进一步认为，根据本发明的组合物包括一种或多种选自下组的多肽，该组由以下各项组成：磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶B、磷脂酶D和蛋白酶，氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、a-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、a-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、面素过氧化物酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、果胶分解酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶或木聚糖酶。
关于如上阐述的各方面和实施例中定义的项目(a)、(f)和/或(k)，该多肽与与具体实施例中的项目(a)中提供的任意序列一致性所定义的成熟多肽具有至少65％序列一致性，像至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％。另外，关于上述实施例各项，该多肽可能已经分离。
根据本发明的各方面和实施例，各成熟多肽的变体可以在一个或多个(例如若干个)位置上包括取代、缺失、和/或插入。在一个实施例中，引入SEQ ID NO:2的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。这些氨基酸变化可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基-末端的或羧基末端的延伸，例如氨基末端甲硫氨酸残基；高达20-25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一功能有利于纯化的小的延伸，例如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
保守取代的实例是在下组的范围内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.诺伊拉特(Neurath)和R.L.希尔(Hill)，1979，在蛋白质(The Proteins)，学术出版社(Academic Press)，纽约中描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、以及Asp/Gly。
可替代地，氨基酸改变具有这样一种性质:改变多肽的物理化学特性。例如，氨基酸改变可以提高多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH，等等。
正如技术人员所知，可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham(坎宁汉)和Wells(威尔斯)，1989，Science(科学)244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的磷脂酶C活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见希尔顿(Hilton)等人，1996，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)271:4699-4708。也可结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记进行确定，对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见，例如，德沃斯(de Vos)等人，1992，科学(Science)255:306-312；史密斯(Smith)等人，1992，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)224:899-904；Wlodaver等人，1992，欧洲生化学会联合会快报(FEBS Lett.)309:59-64。还可以从与相关多肽的比对推断鉴别必需氨基酸。
可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用诱变、重组和/或改组的已知方法进行测试，随后进行相关筛选程序，如由里德哈尔-奥尔森(Reidhaar-Olson)和萨奥尔(Sauer)，1988，科学(Science)241:53-57；博维(Bowie)和萨奥尔，1989，美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625所披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，罗曼(Lowman)等人，1991，生物化学(Biochemistry)30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)和区域定向诱变(德比舍尔(Derbyshire)等人，1986，基因(Gene)46:145；Ner等人，1988，DNA 7:127)。
可以结合诱变/改组方法与高通量自动化筛选方法来检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(内斯(Ness)等人，1999，自然生物技术(Nature Biotechnology)17:893-896)。编码活性多肽的诱变的DNA分子可以回收自宿主细胞，并且使用本领域的标准方法对其进行迅速测序。这些方法允许迅速确定多肽中单个氨基酸残基的重要性。
根据本发明中的各方面和各实施例，该多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的区域在另一种多肽的区域的N-末端或C-末端处融合。
该多肽可以是融合多肽或可裂解的融合多肽，其中另一种多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一多肽的多核苷酸融合到本发明的多核苷酸而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术在本领域是已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列，这样使得它们在框内并且使得融合多肽的表达处于相同的一个或多个启动子和终止子的控制下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(库珀(Cooper)等人，1993，欧洲分子生物学学会杂志12:2575-2583；道森(Dawson)，1994，科学(Science)266:776-779)。
切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：马丁(Martin)等人，2003，工业微生物与生物技术杂志(J.Ind.Microbiol.Biotechnol.)3:568-576；斯维特娜(Svetina)等人，2000，生物技术杂志(J.Biotechnol.)76:245-251；拉斯穆森-威尔逊(Rasmussen-Wilson)等人，1997，应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)63:3488-3493；沃德(Ward)等人，1995，生物技术(Biotechnology)13:498-503；以及孔特雷拉斯(Contreras)等人，1991，生物技术(Biotechnology)9:378-381；伊顿(Eaton)等人，1986，生物化学(Biochemistry)25:505-512；柯林斯-瑞思(Collins-Racie)等人，1995，生物技术13:982-987；卡特(Carter)等人，1989，蛋白质：结构、功能以及遗传学(Proteins:Structure,Function,and Genetics)6:240-248；以及史蒂文斯(Stevens)，2003，世界药物发现(Drug Discovery World)4:35-48。
在以上提供的本发明的实施例中，与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽优选地有540-640个氨基酸残基的长度、例如550-640个氨基酸残基、560-640个氨基酸残基、570-640个氨基酸残基、540-630个氨基酸残基的长度、例如550-630个氨基酸残基、560-630个氨基酸残基、570-630个氨基酸残基、570-620个氨基酸残基、570-610个氨基酸残基、570-600个氨基酸残基、570-597个氨基酸残基、570-596个氨基酸残基、580-640个氨基酸残基、540-630个氨基酸残基的长度、例如540-620个氨基酸残基、540-610个氨基酸残基、540-600个氨基酸残基、540-590个氨基酸残基、540-580个氨基酸残基、540-570个氨基酸残基、540-560个氨基酸残基、540-560个氨基酸残基、550-630个氨基酸残基的长度、例如550-620个氨基酸残基、550-610个氨基酸残基、550-600个氨基酸残基、550-590个氨基酸残基、550-580个氨基酸残基、550-570个氨基酸残基、550-560个氨基酸残基、550-560个氨基酸残基、560-630个氨基酸残基的长度、例如560-620个氨基酸残基、560-610个氨基酸残基、560-600个氨基酸残基、560-590个氨基酸残基、560-580个氨基酸残基、560-570个氨基酸残基、560-560个氨基酸残基、560-560个氨基酸残基、570-630个氨基酸残基的长度、例如570-620个氨基酸残基、570-610个氨基酸残基、570-600个氨基酸残基、570-590个氨基酸残基、570-580个氨基酸残基、570-570个氨基酸残基、570-560个氨基酸残基、570-560个氨基酸残基、580-630个氨基酸残基、580-620个氨基酸残基、580-610个氨基酸残基、580-600个氨基酸残基、580-598个氨基酸残基、580-597个氨基酸残基、580-596个氨基酸残基、590-640个氨基酸残基、590-630个氨基酸残基、590-620个氨基酸残基、590-610个氨基酸残基、590-600个氨基酸残基、590-698个氨基酸残基、590-597个氨基酸残基、590-596个氨基酸残基、595-640个氨基酸残基、595-630个氨基酸残基、595-620个氨基酸残基、595-610个氨基酸残基、595-600个氨基酸残基、595-598个氨基酸残基、595-597个氨基酸残基的长度、或595-596个氨基酸残基的长度。
同样地，在以上提供的本发明的实施例中，与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:43中任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽优选地有280-320个氨基酸残基的长度、例如280-310个氨基酸残基、280-305个氨基酸残基、280-300个氨基酸残基、280-298个氨基酸残基、280-297个氨基酸残基、280-296个氨基酸残基、285-320个氨基酸残基、285-315个氨基酸残基、285-310个氨基酸残基、285-305个氨基酸残基、285-300个氨基酸残基、285-298个氨基酸残基、285-297个氨基酸残基、285-296个氨基酸残基、290-320个氨基酸残基、290-315个氨基酸残基、290-310个氨基酸残基、290-305个氨基酸残基、290-300个氨基酸残基、290-298个氨基酸残基、290-297个氨基酸残基、290-296个氨基酸残基、295-320个氨基酸残基、295-315个氨基酸残基、295-310个氨基酸残基、295-305个氨基酸残基、295-300个氨基酸残基、295-298个氨基酸残基、255-297个氨基酸残基的长度、或295-296个氨基酸残基的长度。
相似地，与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽优选地有220-280氨基酸残基的长度，例如220-270个氨基酸残基、220-260个氨基酸残基、220-250个氨基酸残基、220-248个氨基酸残基、220-246个氨基酸残基、220-244个氨基酸残基、225-280个氨基酸残基、225-270个氨基酸残基、225-260个氨基酸残基、225-250个氨基酸残基、225-248个氨基酸残基、225-246个氨基酸残基、225-244个氨基酸残基、230-280个氨基酸残基、230-270个氨基酸残基、230-260个氨基酸残基、230-250个氨基酸残基、230-248个氨基酸残基、230-246个氨基酸残基、230-244个氨基酸残基、235-280个氨基酸残基、235-270个氨基酸残基、235-260个氨基酸残基、235-250个氨基酸残基、235-248个氨基酸残基、235-246个氨基酸残基、235-244个氨基酸残基、240-280个氨基酸残基、240-270个氨基酸残基、240-260个氨基酸残基、240-250个氨基酸残基、240-248个氨基酸残基、240-246个氨基酸残基、240-244个氨基酸残基、242-280个氨基酸残基、242-270个氨基酸残基、242-260个氨基酸残基、242-250个氨基酸残基、242-248个氨基酸残基、242-246个氨基酸残基、242-244个氨基酸残基、243-280个氨基酸残基、243-270个氨基酸残基、243-260个氨基酸残基、243-250个氨基酸残基、243-248个氨基酸残基、243-246个氨基酸残基、243-244个氨基酸残基的长度。
在本发明的进一步的实施例中，除了该所述多种具有磷脂酶C活性的多肽，该组合物包括一种或多种酶活性。具体地，该组合物可能包括一种或多种具有磷脂酶A活性的多肽。该一种或多种具有磷脂酶A活性的多肽可以具体地是一种具有磷脂酶A活性的分离的多肽，选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:46的成熟多肽或SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％序列一致性，例如至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的多肽；
(b)(a)的多肽的一个片段，该片段具有磷脂酶A活性。
根据本发明的该组合物可以根据本领域已知的方法制备，并可以是液体或干燥组合物的形式。所述组合物可依照本领域中已知的方法稳定化。
用途
本发明的磷脂酶或组合物可被应用于从油(例如植物油、动物油或脂肪、牛脂、或油脂)中除去磷脂的工艺中，即减少油中的磷脂含量的工艺。脱胶工艺适用于任何含有磷脂的食用油(例如，植物油如大豆油、菜籽油、或葵花油、或粗制油的定义下提到的任何其它油)的纯化。
其中可以使用本发明的磷脂酶的应用包括：i)油(例如植物油、或可食用植物油)的脱胶，或在包括来自水脱胶的胶馏分中的磷脂水解以释放截留的三酸甘油酯油的工艺中，ii)在一个工艺中，其包括磷脂水解以获得改进的磷脂乳化剂，具体地是其中所述磷脂是卵磷脂，iii)在用于改进含水溶液的过滤性或碳水化合物来源的浆料的工艺中，其含有磷脂，iv)在提取油的工艺中，v)在用于生产动物饲料产品的工艺中，vi)在用于生产生物燃料(例如，生物柴油)的工艺中，vii)在用于生产洗涤剂产品的工艺中，和/或viii)在用于制备烘焙产品(包括将磷脂酶添加到生面团，和烘焙生面团制成焙烤产品)的工艺中。因此，本发明的另一个方面提供了在前述的申请中任一要求保护的用途中如上述的任一方面和实施例所定义的组合物。
方法
以上所阐述的该组合物和本发明的组合物可以被应用在包括使磷脂或溶血磷脂与真菌和细菌PLC的组合(例如本发明的组合物中提供的组合)接触的方法中。组合物中的磷脂酶与磷脂或溶血磷脂反应以形成甘油单酯或甘油二酯和磷酸酯或磷酸。
因此，在另一个方面，本发明提供了一种用于水解磷脂或溶血磷脂的工艺，包括使所述磷脂或溶血磷脂与多种具有磷脂酶C活性的多肽接触，其中
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自真菌的多肽；并且
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自细菌的多肽。
根据一些实施例，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性，源自真菌且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQID NO:5中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:5中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQID NO:5中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
在其他的实施例中，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的一种多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:l的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:l的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性，
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的包含在一个或多个位置的取代、缺失和/或插入的变体；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
该方法还可以包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:4的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
在其他的实施例中，本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
根据这些实施例以及如下公开的实施例，所述成熟多肽可以具体地由选自下组的氨基酸组成或包括选自下组的氨基酸，该组由以下各项组成：SEQ ID NO.:2的氨基酸残基19-643、SEQ ID NO.:4的氨基酸残基17-610、SEQ ID NO.:7的氨基酸残基20-626、和SEQ IDNO.:7的氨基酸残基37-626。
在其他的实施例中，SEQ ID NO:2的成熟多肽包括SEQ ID NO:2的氨基酸43-618，由其组成或基本由其组成。在进一步的实施例中，SEQ ID NO:4的成熟多肽包括SEQ ID NO:4的氨基酸20-576，由其组成或基本由其组成。在本发明的更进一步的实施例中，SEQ IDNO:7的的成熟多肽包括SEQ ID NO:7的氨基酸37-618，由其组成或基本由其组成。
在进一步的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、和SEQ ID NO:42以及SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41、和SEQ ID NO:43以及SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
在仍进一步的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(d)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
根据其他的实施例，该方法还可以包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(d)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
根据本发明的方法在仍进一步的实施例中可以包括使所述磷脂或溶血磷脂与多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:41的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
(f)PLC，可以从DSM商业购得。
SEQ ID NO 41的成熟多肽和PLC的变体在国际专利公开文本WO2011/0146812中有公开。具体地，SEQ ID NO 41的变体可以有一个或多个氨基酸改变或取代如在所述WO-公开文本中的表12(第210页)、表13(第211-18页)、表14(第220-21页)和/或表15(第222-23页)中描述。全部四个表中的内容包含在本说明中作为参考。
关于以上阐述的实施例，所述成熟多肽可包括，主要包括或由一种选自下组的氨基酸序列组成，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:9的氨基酸残基23-322、SEQ ID NO:9的氨基酸残基24-322、SEQ ID NO:9的氨基酸残基、SEQ ID NO:9的氨基酸残基、SEQ ID NO:9的氨基酸残基27-322、SEQ ID NO:9的氨基酸残基28-322、SEQ ID NO:10的氨基酸残基、SEQID NO:12的氨基酸残基26-323、SEQ ID NO:13的氨基酸序列、SEQ ID NO:15的氨基酸残基26-323、SEQ ID NO:16的氨基酸序列、SEQ ID NO:18的基酸残基29-323、SEQ ID NO:19的氨基酸序列、SEQ ID NO:21的氨基酸残基26-322、SEQ ID NO:22的氨基酸序列、SEQ ID NO:24的氨基酸残基26-322、SEQ ID NO:26的氨基酸残基34-278、SEQ ID NO:27的氨基酸序列、SEQ ID NO:29的氨基酸残基29-283、SEQ ID NO:31的氨基酸残基25-283、SEQ ID NO:32的氨基酸序列、SEQ ID NO:34的氨基酸残基25-283、SEQ ID NO:36的氨基酸残基28-289、SEQID NO:37的氨基酸序列、SEQ ID NO:39的氨基酸序列、SEQ ID NO:41的氨基酸残基24-328、SEQ ID NO:43的氨基酸残基28-339和SEQ ID NO:45的氨基酸残基25-280。
具体地，所述多种具有磷脂酶C活性的多肽选自下组，该组由以下各项组成：
-一种如上定义的且源自真菌的多肽和一种如上定义的且源自细菌的多肽；
-一种如上定义的且源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-一种如上定义的且源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和一种如上定义的且源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和一种如上定义的且源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽。
在具体的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:440中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在进一步的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(i)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在其他的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:4的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在其他的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:4的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(i)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；和
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在仍其他的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在其他的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(i)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段。
在甚至进一步的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(k)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(l)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(m)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(n)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(o)和(k)、(l)、(m)、或(n)的多肽的片段。
在仍其他的实施例中，本根据本发明的方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性并且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:7的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:7的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段；
并且
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(k)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(l)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(m)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(n)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(o)(k)、(l)、(m)、或(n)的多肽的片段。
根据一些实施例，本发明还提供了一种方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性且源自细菌的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段；
并且
有具有磷脂酶C活性且源自细菌，选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(k)与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(l)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQID NO:35、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(m)与SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(n)SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(o)(k)、(l)、(m)、或(n)的多肽的片段。
在甚至进一步非实施例中，本发明提供了一种方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与一种多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽，
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；
并且
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(f)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(g)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(h)与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、和SEQ ID NO:42中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性的多核苷酸编码的多肽；
(i)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:43中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(j)(f)、(g)、(h)、或(i)的多肽的片段；
并且
具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(k)与SEQ ID NO:39的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(l)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(m)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:38的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(n)SEQ ID NO:39的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；及
(o)(k)、(l)、(m)、或(n)的多肽的片段。
本发明的一个进一步的方面提供了一种用于水解磷脂或溶血磷脂的方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与至少一种具有磷脂酶C活性的多肽且源自真菌的多肽和至少一种具有磷脂酶C活性且选自下组的多肽接触，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在非常低严格性条件、低严格性条件、中严格性条件、中-高严格性条件、高严格性条件或极高严格性条件下与(i)SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，(iii)SEQ ID NO:40的cDNA序列、或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:41的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失、和/或插入；和
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
(f)PLC，可以从DSM商业购得。
如上所述，SEQ ID NO 41的成熟多肽和PLC的变体在国际专利公开文本WO 2011/0146812中有公开。具体地，SEQ ID NO41的变体可以有一个或多个氨基酸改变或取代如在所述WO-公开文本中的表12(第210页)、表13(第211-18页)、表14(第220-21页)和/或表15(第222-23页)中描述。全部四个表中的内容包含在本说明中作为参考。
在该方法的具体实施例中，该所述成熟多肽可以包括SEQ ID NO:41的氨基酸残基24-328或由SEQ ID NO:41的氨基酸残基24-328的组成并且/或者在(d)中的该所述变体包括SEQ ID NO:41的氨基酸残基56-195并且/或者在(e)中的该所述片段包括SEQ ID NO:41的氨基酸残基56-195。
同样地，在以上提供的本发明的实施例中，与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:43中任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽优选地有280-320个氨基酸残基的长度、例如280-310个氨基酸残基、280-305个氨基酸残基、280-300个氨基酸残基、280-298个氨基酸残基、280-297个氨基酸残基、280-296个氨基酸残基、285-320个氨基酸残基、285-315个氨基酸残基、285-310个氨基酸残基、285-305个氨基酸残基、285-300个氨基酸残基、285-298个氨基酸残基、285-297个氨基酸残基、285-296个氨基酸残基、290-320个氨基酸残基、290-315个氨基酸残基、290-310个氨基酸残基、290-305个氨基酸残基、290-300个氨基酸残基、290-298个氨基酸残基、290-297个氨基酸残基、290-296个氨基酸残基、295-320个氨基酸残基、295-315个氨基酸残基、295-310个氨基酸残基、295-305个氨基酸残基、295-300个氨基酸残基、295-298个氨基酸残基、255-297个氨基酸残基的长度、或295-296个氨基酸残基的长度。
相似地，与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:45中任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽优选地有220-280氨基酸残基的长度，例如220-270个氨基酸残基、220-260个氨基酸残基、220-250个氨基酸残基、220-248个氨基酸残基、220-246个氨基酸残基、220-244个氨基酸残基、225-280个氨基酸残基、225-270个氨基酸残基、225-260个氨基酸残基、225-250个氨基酸残基、225-248个氨基酸残基、225-246个氨基酸残基、225-244个氨基酸残基、230-280个氨基酸残基、230-270个氨基酸残基、230-260个氨基酸残基、230-250个氨基酸残基、230-248个氨基酸残基、230-246个氨基酸残基、230-244个氨基酸残基、235-280个氨基酸残基、235-270个氨基酸残基、235-260个氨基酸残基、235-250个氨基酸残基、235-248个氨基酸残基、235-246个氨基酸残基、235-244个氨基酸残基、240-280个氨基酸残基、240-270个氨基酸残基、240-260个氨基酸残基、240-250个氨基酸残基、240-248个氨基酸残基、240-246个氨基酸残基、240-244个氨基酸残基、242-280个氨基酸残基、242-270个氨基酸残基、242-260个氨基酸残基、242-250个氨基酸残基、242-248个氨基酸残基、242-246个氨基酸残基、242-244个氨基酸残基、243-280个氨基酸残基、243-270个氨基酸残基、243-260个氨基酸残基、243-250个氨基酸残基、243-248个氨基酸残基、243-246个氨基酸残基、243-244个氨基酸残基的长度。
应当理解的是，根据本发明的这一方面的方法可以有与上述提供的发明的其他方面的方法相关阐释的任一特性和特征。同样地，应当理解的是，根据本发明的这一方面的方法中使用的具有磷脂酶C活性的多种多肽可以是如对上述提供的发明的其他方面的方法中的多种具有磷脂酶C活性的多肽描述的那样。正如本领域技术人员还会理解的是，本发明的方法可以包括使磷脂或溶血磷脂与至少一种具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽和至少一种具有磷脂酶C活性且源自细菌的多肽同时或依次接触。
当接触是同时完成时，该多肽可以是在如上所述的组合物中，或者是同时独立添加。当多肽是依次添加时，该至少一种具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽被首先添加并且所述至少一种具有磷脂酶C活性且源自细菌的多肽的添加被延迟，例如延迟5分钟至3小时、10分钟至3小时、20分钟至3小时、30分钟至3小时、1至3小时、2至3小时、5分钟至2小时、10分钟至2小时、20分钟至2小时、30分钟至2小时、1至2小时、5分钟至1.5小时、10分钟至1.5小时、20分钟至1.5小时、30分钟至1.5小时、1至1.5小时、5分钟至1小时、10分钟至1小时、20分钟至1小时、30分钟至1小时、5至30分钟、10至30分钟或20至30分钟。
可替代地，该至少一种具有磷脂酶C活性且源自细菌的多肽被首先添加并且所述至少一种具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽的添加被延迟，例如延迟5分钟至3小时、10分钟至3小时、20分钟至3小时、30分钟至3小时、1至3小时、2至3小时、5分钟至2小时、10分钟至2小时、20分钟至2小时、30分钟至2小时、1至2小时、5分钟至1.5小时、10分钟至1.5小时、20分钟至1.5小时、30分钟至1.5小时、1至1.5小时、5分钟至1小时、10分钟至1小时、20分钟至1小时、30分钟至1小时、5至30分钟、10至30分钟或20至30分钟。
在本发明的进一步的实施例中，除了该所述多种具有磷脂酶C活性的多肽，该组合物包括一种或多种酶活性。具体地，该组合物可能包括一种或多种具有磷脂酶A活性的多肽。该一种或多种具有磷脂酶A活性的多肽可以具体地是一种具有磷脂酶A活性的分离的多肽，选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:46的成熟多肽或SEQ ID NO:47的多肽具有至少80％序列一致性，例如至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列一致性的多肽；
(b)(a)的多肽的一个片段，该片段具有磷脂酶A活性。
该所述磷脂可以是在包含甘油三酯的组合物中。该组合物可以是一种油，例如植物油，像可食用植物油。该方法可以进一步包括使所述磷脂或溶血磷脂或所述包括甘油三酯例如所述油的组合物与多种具有磷脂酶C活性的多肽在足够使所述具有磷脂酶C活性的多肽与所述磷脂或溶血磷脂反应以产生甘油二酯和磷酸酯的条件下接触。
此外，根据本发明的方法可以包括使磷酸酯从甘油三酯或该油中分离。
根据本发明的具体实施例，所述磷酯是在包含甘油三酯的组合物中。该组合物可以具体地是一种油，例如植物油，像可食用植物油。
PI特异性的PLC将磷脂酰肌醇(PI)转化成甘油二酯和磷酸肌醇。PC特异性的PLC将磷脂酰胆碱(PC)转化为甘油二酯和磷酸胆碱。PE特异性的PLC将磷脂酰乙醇胺(PE)转化为甘油二酯和磷酸乙醇胺。甘油二酯停留在油相(改进油产率)并且含磷部分分离在水相中，其中它在离心期间作为重相组分被除去。可以使用本发明的磷脂酶或组合物进一步处理胶相(重相)以增加来自水脱胶的胶馏分中磷脂的水解以释放截留甘油三酯油。在脱胶工艺还没有应用磷脂酶时，这是特别有用的。根据本发明的组合物或磷脂酶可以掺入水脱胶或化学或物理油精炼工艺中，优选地具有小于10％、9％、8％、7％、6％或5％的水，甚至更优选地小于4％、3％或2％的水，优选地在50℃以上，甚至更优选地在60℃以上。在一个优选的实施例中，本发明的组合物被掺入水脱胶工艺中、苛性精炼工艺或酸脱胶工艺中。
在另一个优选的实施例中，本发明的磷脂酶被掺入应用柠檬酸或磷酸和氢氧化钠的物理精炼工艺中以促进不溶性磷脂的水化能力和确保适合于酶的环境，优选地使用小于0.15％的柠檬酸或磷酸，甚至更优选地小于0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％或0.05％；且小于4％、3％或2％的水，优选地在50℃以上，甚至更优选地在60℃以上。
在其他实施例中，脱胶工艺是苛性精炼工艺或酸脱胶工艺。
磷脂在油中通常测量为每百万份中的“磷含量”。表1列出了存在于主要油籽作物中磷脂的典型的量，和各种官能团作为存在于粗制油中磷脂的百分比的分布。
表1：来自普通油籽的粗制油中的典型水平和磷脂分布
| 大豆油 | 卡诺拉油 | 葵花籽油 | |
| 磷(ppm) | 400-1500 | 200-900 | 300-700 |
| PC％ | 12-46 | 25-40 | 29-52 |
| PE％ | 8-34 | 15-25 | 17-26 |
| PA％ | 17-26 | 10-20 | 15-30 |
| PI％ | 2-15 | 2-25 | 11-22 |
本发明的组合物和工艺可用于实现高磷油更完全的脱胶，这些高磷油例如是大于200ppm磷的油，优选是大于300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm、800ppm、900ppm磷的油，甚至更优选地该油包含大于1000ppm磷。
优选地，该油包括磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、和磷脂酰肌醇(PI)。优选地，该油含有大于50ppm源自于磷脂酰肌醇(PI)的磷，更优选地它含有大于75ppm、100ppm、125ppm的PI，甚至更优选地它含有大于150ppm，最优选地它包含大于175ppm源自于PI的磷。优选地，该油含有大于100ppm源自于磷脂酰胆碱(PC)的磷，更优选地它含有大于150ppm、200ppm、250ppm的PC，甚至更优选地它含有大于300ppm，最优选地它包含大于400ppm源自于PC的磷。优选地，该油含有大于75ppm源自于磷脂酰乙醇胺(PE)的磷，更优选地它含有大于100ppm、125ppm、150ppm的PE，甚至更优选地它含有大于200ppm，最优选地它包含大于300ppm源自于PE的磷。该油可以还含有大于5ppm来源于磷脂酸(PA)的磷，例如大约10ppm来源于磷脂酸(PA)的磷，大于15ppm、20ppm、25ppm、40ppm、50ppm PA、或75ppm来源于PA的磷。
在一个优选的实施里中，该油是食用油。更优选地，该食用油是选自米糠、油菜籽、棕榈、花生和其他坚果、大豆、玉米、卡诺拉和向日葵油。本发明的多种具有磷脂酶C活性的多肽和组合物可在任何“脱胶”程序使用，包括水脱胶、ALCON油脱胶(例如，对于大豆)、safinco脱胶、“超脱胶”、UF脱胶、TOP脱胶、uni-脱胶、干燥脱胶和ENZYMAXTM脱胶。对于本发明的磷脂酶可以应用的脱胶工艺的描述，参见，例如，WO 2007/103005、US 2008/0182322、US 6,355,693、US6,162,623、US 6,103,505、US 6,001,640、US 5,558,781和US 5,264,367。被本发明的方法包含的各种“脱胶”程序被描述于Bockisch,M.(1998)脂肪和油手册(Fats and Oils Handbook)中，植物油的提取(The extraction of Vegetable Oils)(第五章)，345-5 445，AOCS出版社，尚佩恩，伊利诺伊州。本发明的多种具有磷脂酶C活性的多肽和组合物可以在甘油三酯油的酶促脱胶的工业应用中使用，如在(例如)EP 513709中所描述的。在另外的实施例中，该油选自粗制油、水脱胶油、苛性精制油和酸脱胶油。粗制油或脂肪的水脱胶可通过彻底混合具有50℃至90℃之间温度的热水和温油或脂肪持续30至60分钟来实现。这个工艺用于部分除去水合磷脂。并且，酸处理可以在酶促脱胶之前进行，其中所使用的酸是选自下组，该组由以下各项组成：磷酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、和它们的混合物，具体地使用柠檬酸或磷酸的处理是优选的。优选地，该酸处理后接着是中和步骤以调整pH值为约4.0至7.0之间，更优选地为4.5至6.5，优选地使用NaOH或KOH。该酸处理有助于螯合金属结合磷脂，由此制得更易水合的形式。优选地，在油的水脱胶或酸处理后添加在此所述的磷脂酶。也可以使用在此所述的多种具有磷脂酶C活性的多肽和/或组合物在粗制油或脂肪(即，以前没有水脱胶或酸处理的油或脂肪)上进行脱胶步骤。
在一个方面，本发明提供了在低水条件下(例如，在约0.1％至20％的水或0.5％至10％的水的范围内)用于酶促脱胶的方法。在一个方面，这导致在离心期间重相从油相中分离的改进。这些相的改进的分离可导致磷脂从油中更有效地除去，包括水合和非水合的磷脂两者。在一个方面，这可以产生包含较少截留中性油(甘油三酯)的胶馏分，由此改进脱胶工艺期间油的总产率。在一个方面，本发明的多种具有磷脂酶C活性的多肽和组合物被用于处理油，通过减少油截留来减少胶量和增加中性油增益。在一个方面，本发明的多种具有磷脂酶C活性的多肽和组合物被用于二酰基甘油(DAG)生产并贡献于油相。
在具体的实施例中，该油与0.5-200mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶接触；例如与0.5-100mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与0.5-25mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与0.5-15mg酶蛋白(EP)/kg油的所述磷脂，与0.5-10mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与0.5-5mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与1-200mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与1-100mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与1-25mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与1-15mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与1-10mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与1-5mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与2-200mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与2-100mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与2-50mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与2-25mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与2-15mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与2-10mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，与2-7mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶，或与2-5mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌和细菌磷脂酶接触。
在优选的实施例中，该油与5-50mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌磷脂酶接触，并与与0.5-20mg酶蛋白(EP)/kg油的所述细菌磷脂酶接触。在进一步的实施例中，该油与5-40mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌磷脂酶接触，并与与1-15mg酶蛋白(EP)/kg油的所述细菌磷脂酶接触。在仍进一步的实施例中，该油与5-30mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌磷脂酶接触，并与与1-15mg酶蛋白(EP)/kg油的所述细菌磷脂酶接触。在其他的实施例中，该油与10-30mg酶蛋白(EP)/kg油的所述真菌磷脂酶接触，并与与1-5mg酶蛋白(EP)/kg油的所述细菌磷脂酶接触。
磷脂酶处理可以通过磷脂酶的水溶液分散来进行，优选地作为平均直径低于10微米的液滴。优选地水的量为以重量计相对于油的0.5％-5％。可任选地添加乳化剂。机械搅拌可以应用于保持乳剂。可以使用尖端速度高于1400cm/s的高剪切搅拌器进行搅拌。
在某些实施例中，合适的油脱胶方法包括：a)混合水性酸与油以得到具有pH约1至4的酸性混合物，b)将碱与该酸性混合物混合以获得具有pH约6至9的反应混合物，以及c)使用本发明的多种具有磷脂酶C活性的多肽和/或组合物将该反应混合物脱胶得到脱胶油。在某些实施例中，混合步骤a)和/或b)制造乳剂，该乳剂包括平均液滴尺寸在约15微米与45微米之间的水相。在某些实施例中，混合步骤a)和/或b)制造乳剂，该乳剂包括至少约60％(体积)的水相，该水相的液滴尺寸在约15微米与45微米之间，其中水相的百分比是基于水相的总体积。被本领域中的技术人员认为适合的任何酸都可用于在此提供的方法中。在某些实施例中，该酸是选自下组，该组由以下各项组成：磷酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、以及它们的混合物。被本领域中的技术人员认为适合的任何酸都可用于在此提供的方法中。在某些实施例中，该碱是选自下组，该组由以下各项组成：氢氧化钠、氢氧化钾、硅酸钠、碳酸钠、碳酸钙、和它们的组合物。
在一个优选的实施例中，磷脂酶处理可在pH为约4.0至7.0的范围内进行，更优选地为4.5至6.5。pH值是在乳剂中或在油和水溶液之间的界面内测量。合适的温度一般为30℃-80℃。在一个优选的实施例中，该油的温度是在50℃和70℃之间，更优选是在55℃和65℃之间，最优选是在50℃和60℃之间。在其他优选的实施例中，该油的温度是在60℃和80℃之间，更优选是在65℃和75℃之间，最优选是在67℃和72℃之间。
典型地，反应时间将是1-12小时(例如，1-6小时、或者1-3小时、最优选地反应时间为1.5小时和4小时之间，甚至更优选地在1.5至2小时之间)。通常，合适的酶剂量将是0.1-10mg/L(例如，0.5-5mg/L)。磷脂酶处理可以分批进行，例如，在搅拌的罐中，或者它可以是连续的，例如，一系列搅拌的罐反应器。磷脂酶处理后可接着是水相和油相的分离。分离可以通过常规方法(例如，离心)来进行。当使用液体脂肪酶时，水相将含有磷脂酶，并且该酶可以被重新使用以改进工艺经济性。
在本发明的一个优选实施例中，该处理减少该油的总磷含量到200ppm，优选地低于100ppm、低于50ppm、优选地低于40ppm、30ppm、20ppm1、5ppm，更优选地低于10ppm、低于9ppm、低于8ppm、低于7ppm、低于6ppm，最优选地低于5ppm。
本发明的组合物和工艺可被用于磷脂(优选是卵磷脂)的部分水解以获得改进的磷脂乳化剂。这个应用进一步描述于在乌尔曼工业化学的百科全书(Ullmann'sEncyclopedia of Industrial Chemistry)(出版社：VCH魏因海姆(VCH Weinheim)(1996))、日本专利2794574和JP-B6-087751。
本发明的组合物和工艺可被用于处理碳水化合物来源的水溶液或浆料来改进它的可过滤性。这尤其适用于含淀粉水解产物(特别是小麦淀粉水解产物)的浆料的溶液，因为这趋向于难于过滤和得到混浊的滤液。该处理可以与EP 219,269(CPC国际)类比来进行。
本发明的组合物和工艺可被用于生产动物饲料的工艺中，其包括混合该磷脂酶与包含至少一种磷脂的饲料物质。这可以与EP 743 017类比来进行。
本发明的多种具有磷脂酶C活性的多肽和组合物可与一种或多种脂解酶结合使用来将脂肪和油转化为脂肪酸烷基酯，而在同一工艺中实现脱胶。这样的工艺例如描述于US8,012,724中。
本发明具有磷脂酶C活性的多种多肽和组合物可添加至洗涤剂组合物并因此使用成为洗涤剂组合物的组分。该洗涤剂组合物可以例如配制成手洗或机洗洗衣添加剂组合物，其中包括适用于污染织物的预处理的洗衣添加剂组合物以及添加了漂洗剂的织物软化剂组合物，或配制成用于在一般家用硬表面清洁操作中使用的洗涤剂组合物，或配制成用于手洗或机洗餐具操作的洗涤剂组合物。
本发明的多种具有磷脂酶C活性的多肽和组合物可用于生产生面团和从生面团生产烘焙产品，以及用于生产烘焙组合物和烘焙添加剂。生面团通常包括小麦粗粉或小麦面粉和/或其它类型的粗粉、面粉或淀粉，例如玉米粉、玉米淀粉、黑麦粗粉、黑麦粉、燕麦粉、燕麦粗粉、大豆粉、高粱粗粉、高粱粉、马铃薯粗粉、马铃薯粉或马铃薯淀粉。生面团可以是新鲜的、冷冻的或标准焙焙的。生面团通常是经发酵的生面团或将要经受发酵的生面团。该生面团可以各种方式来发酵，诸如通过添加化学膨松剂(例如碳酸氢钠)或通过添加发酵剂(发酵生面团)，但优选的是通过添加适合的酵母培养物如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)(面包酵母)的培养物(例如可商购的酿酒酵母菌株)来发酵该生面团。该生面团还可包含其他常规生面团成分，例如：蛋白质，如奶粉、面筋和大豆；鸡蛋(全蛋、蛋黄或蛋清)；氧化剂如抗坏血酸、溴酸钾、碘酸钾、偶氮二甲酰胺(ADA)或过硫酸铵；氨基酸，如L-半胱氨酸；糖；盐，如氯化钠、乙酸钙、硫酸钠或硫酸钙。该生面团可以包括脂肪(甘油三酯)诸如颗粒状的脂肪或起酥油，但本发明特别适用于其中添加按重量计小于1％的脂肪的生面团，并且特别适用于未添加脂肪而制成的生面团。该生面团还可以包含乳化剂，如单或二甘油酯、单或二甘油酯的二乙酰酒石酸酯、脂肪酸的糖酯、脂肪酸的聚甘油酯、单酸甘油酯的乳酸酯、单酸甘油酯的乙酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、或溶血卵磷脂。该生面团可被用于从生面团制备的任何一种烘焙产品，无论是柔软的或脆的特性，无论是白色、浅色或深色类型。实例是面包(具体地是白色的、全麦或黑麦面包)，通常处于面包或面包卷、法式面包型面包、皮塔饼、墨西哥玉米粉圆饼(tortillas)、蛋糕、薄煎饼、饼干、薄饼、曲奇、馅饼皮、脆面包、馒头、比萨等等的形式。
通过以下实施例进一步对本发明进行描述，但不应将其理解为对本发明范围的限制。
实例
实例1：
纯化的PLC酶的P-NMR测定
概念
通过将PLC在10:1的粗制植物油和柠檬酸盐水溶液缓冲剂的混合物中，在pH4.0、5.5或7.0下孵育进行测定。酶浓度是10mg/kg和100mg/kg(mg酶蛋白(EP)每kg油)。该混合物在50℃下剧烈振摇孵育2h。然后通过P-NMR分析该反应混合物。这包括一个水提取的步骤，在其中通过PLC释放的磷种类被从油相中去除。因此，只有亲脂的磷种类被监测到，即，未反应的磷脂。
测定步骤
在100mM柠檬酸盐缓冲剂中，在pH 4.0、5.5或7.0下，将纯化的酶稀释至0.9mg/mL和0.09mg/mL。在2mL艾本德(Eppendorf)管中，通过将25uL稀释的酶添加至250uL粗制植物油中开始该测定并且将该混合物在恒温振荡器(thermoshaker)中在50℃下孵育2h。使用的该油是粗制大豆油，其中含有显著量的PA(128ppm P)、PE(141ppm P)、PI(103ppm P)和PC(157ppm P)。为测定SEQ ID NO:4的成熟多肽，使用了完全精制的大豆油，其中加入了PA(180ppm P)、PE(349ppm P)、PI(595ppm P)和PC(431ppm P)的混合物。
NMR分析
然后向该油样品中添加0.500mL内标(IS)溶液，接着添加0.5mL CDCl3和0.5mLCs-EDTA缓冲液。将该样品震荡30s，并然后离心(台式离心机，3分钟，13,400rpm)以获得相分离。将较低相转移至NMR管。使用128次扫描、5秒延迟时间运行P-NMR。根据IS信号(-17.75ppm)设定尺度参考。整合所有信号分配(大约ppm，且在25℃下)：1.7(PA)、-0.1(PE)、-0.5(PI)、-0.8(PC)。各种类的浓度计算为“ppm P”，即，每kg油样品中的mg元素磷。因此，ppmP＝I/I(IS)*n(IS)*M(P)/m(油)。最后，将残余磷脂含量计算为酶处理的样品vs空白对照的比率。
内标溶液是2mg/mL甲醇中的磷酸三苯酯。
Cs-EDTA缓冲液以如下方式制备：将EDTA(5.85g)分散在水(大约50mL)中。使用50％w/w CsOH将pH调节至7.5。以此给出澄清溶液。添加水至100mL以给出浓度0.2M EDTA。
结果
下表给出了残余磷脂含量(以百分比计)。
PLC，100mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 107 | 107 | 91 | 114 |
| pH 5.5 | 107 | 38 | 106 | 20 |
| pH 7.0 | 89 | 0 | 94 | 0 |
10mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 106 | 106 | 98 | 105 |
| pH 5.5 | 101 | 114 | 106 | 98 |
| pH 7.0 | 112 | 18 | 102 | 0 |
Bt-PLC/SEQ ID NO:29的成熟多肽(批次A)
100mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 94 | 102 | 91 | 94 |
| pH 5.5 | 92 | 90 | 92 | 70 |
| pH 7.0 | 98 | 19 | 100 | 7 |
10mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 100 | 101 | 92 | 92 |
| pH 5.5 | 103 | 100 | 93 | 96 |
| pH 7.0 | 112 | 54 | 103 | 13 |
Bt-PLC/SEQ ID NO:29的成熟多肽(批次B)
100mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. |
| pH 5.5 | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. |
| pH 7.0 | 61 | 0 | 90 | 0 |
10mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 105 | 103 | 96 | 98 |
| pH 5.5 | 95 | 90 | 99 | 61 |
| pH 7.0 | 103 | 23 | 96 | 6 |
SEQ ID NO:7的成熟多肽(批次A)
100mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 68 | 72 | 77 | 68 |
| pH 5.5 | 26 | 19 | 28 | 33 |
| pH 7.0 | 10 | 19 | 9 | 30 |
10mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 90 | 90 | 90 | 91 |
| pH 5.5 | 66 | 77 | 60 | 77 |
| pH 7.0 | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. |
SEQ ID NO:7的成熟多肽(批次B)
100mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. |
| pH 5.5 | 17 | 18 | 10 | 16 |
| pH 7.0 | 7 | 0 | 0 | 11 |
10mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. |
| pH 5.5 | 45 | 65 | 41 | 29 |
| pH 7.0 | 31 | 65 | 23 | 63 |
SEQ ID NO:2的成熟多肽
100mg/kg
10mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 85 | 91 | 90 | 80 |
| pH 5.5 | 63 | 83 | 51 | 61 |
| pH 7.0 | 61 | 78 | 61 | 67 |
SEQ ID NO:4的成熟多肽
100mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 51 | 49 | 0 | 10 |
| pH 5.5 | 38 | 47 | 0 | 12 |
| pH 7.0 | 0 | 58 | 0 | 16 |
10mg/kg
| PA | PE | PI | PC | |
| pH 4.0 | 79 | 80 | 43 | 72 |
| pH 5.5 | 94 | 93 | 55 | 64 |
| pH 7.0 | 108 | 82 | 69 | 73 |
实例2：脱胶测定/粗制油的金属成分
本发明的磷脂酶C酶组合物的性能：
·细菌：a)Bt-PLC(SEQ ID NO:29的成熟多肽)和b)SEQ ID NO:9的成熟多肽
·真菌：a)SEQ ID NO:4的成熟多肽和B)SEQ ID NO:2的成熟多肽和C)SEQ ID NO:9的成熟多肽
·
在脱胶测定中均被检测，该脱胶测定模仿工业规模脱胶。在脱胶后该测定测量了油相中的以下参数：
a)甘油二酯含量，通过耦合到蒸发光散射检测器(ELSD)或电雾式检测器(CoronaVeo)的高性能液相色谱(HPLC)。
b)对个别磷脂种类的定量：磷脂酰胆碱(PC)；磷脂酰肌醇(PI)；磷脂酰乙醇胺(PE)；磷脂酸(PA)；通过液相色谱四极质谱仪渡越时间(LC/TOF/MS)。
c)总磷减少，通过电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)。
在实验中使用的粗制大豆油中的磷、钙、镁和锌组合物以及磷脂组合物在表1A和1B中示出。通过ICP-OES测量金属成分并通过LCMS测量个别磷脂。
脱胶测定
首先，对粗制大豆油(75g)进行酸/碱预处理(或不)，以促进不溶性磷脂盐转化成多种可水合的形式，并确保适合于酶的环境。酸/碱预处理是通过以下来进行，酸的添加是应用相当于基于油量的0.05％(100％纯的正磷酸)的量的正磷酸(85％溶液)，并在超声浴(BRANSON 3510)中混合5分钟，并在旋转器中孵育15min，接着是碱中和，是在超声浴中应用相当于纯的正磷酸的当量(从0.5至1.5)的4M NaOH持续5min。酶反应是在低含水系统中(基于总油量的3％的水)在100ml离心管(圆柱形的、圆锥形底部)进行。将样品超声处理5min，接着在加热柜中在选定的温度(从50℃至60℃)下孵育，以20rpm搅拌持续选定的孵育时间(从1至5小时)。为了将混合物分离成油相和重水/胶相，将样品在700g、85℃离心15分钟(克勒仪器公司(Koehler Instruments)，K600X2油离心机)。
a)对甘油二酯进行测量
HPLC-方法(使用DIONEX设备和Lichrocart Si-60，5μm，Lichrosphere 250-4mm，MERCK柱)是基于AOCS标准方法Cd 11d-96的原理并对甘油二酯含量定量下至0.1wt％。
b)对磷/磷脂进行测量
ICP-OES定量磷(P)含量和其它金属如Ca、Mg、Zn直至4ppm，具有大约±1ppm P的精度。
c)通过LCMS/MS对磷脂进行定量分析
耦合到三重四极质谱仪(LC/MS/MS)或耦合到四极质谱仪渡越时间(LC/TOF/MS)的液相色谱用于定量个别磷脂种类：磷脂酰胆碱(PC)；磷脂酰肌醇(PI)；磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酸(PA)。该测定的灵敏度对于PC、PE及PI(ppm)达到低于1mg磷/kg油，并且对于PA低于10mg磷/kg。将油样品溶于氯仿中。然后将萃取液用以下设置在LC-TOF-MS(或在LC-MS/MS上，如果需要更低的检测极限)上分析：
LC-设置
MS-设置
数据使用MassLynx版本4.1软件处理。在下述实例中该方法只是叫做LCMS。
下面的实例3至6描述了使用本实例的脱胶测定获得的结果。
实例3：SEQ ID NO:2的成熟多肽和PLC混合物
SEQ ID NO:2的成熟多肽在60℃下应用于脱胶测定，结合PLC在各种酶剂量(酶蛋白每kg油)下施用至油1。测量酶促脱胶2、3、4和5小时后的甘油二酯含量(用0.05％磷酸/1.5当量的NaOH预处理油)，并且4小时孵育后通过LCMS测量个别磷脂的成分。结果示于表2A和2B。
*低于PA检测极限
在60℃下SEQ ID NO:2的成熟多肽结合PLC的脱胶带来显著的甘油二酯的形成并且在测试的条件下转化多达80％的磷脂(60℃，5小时)。转化率计算是基于这样的假定：通过LC/MS测量的732ppm磷总量等于1.83wt％磷脂(平均PL Mw～772g/mol、Mw P～31g/mol)等于可获得的最大1.46％Dg的增加(磷脂分子的80％)。
结果显示了来源于脱胶油样品中的PI、PC、PE、PA少于10mg磷/kg油并且证实了酶混合物会攻击所有磷脂种类。
实例4：SEQ ID NO:2的成熟多肽和SEQ ID NO:29的成熟多肽的混合物
粗制油2
将在60℃的脱胶测定中施用的SEQ ID NO:29的成熟多肽结合SEQ ID NO:2的成熟多肽施用至用0.05％磷酸/1.5当量的NaOH预处理的粗制大豆油2。测量酶促脱胶2、3、4和5小时后的甘油二酯含量，并且5小时脱胶后测量磷含量。表3中呈现了结果。
SEQ ID NO:29的PE、PC特异性的成熟多肽结合SEQ ID NO:2的成熟多肽的脱胶带来60℃下相比独立溶液的组合的作用。
4小时后完全转化是基于这样的假定：通过LC/MS测量的649ppm磷总量等于1.62wt％磷脂(平均PL Mw约772g/mol、Mw P约31g/mol)等于可获得的最大1.3％Dg的增加(磷脂分子的80％)。
脱胶油中的磷含量减少至少于10mg/kg来源于PI、PC、PE、PA的磷总量并证实了该混合物攻击所有磷脂种类。
实例5：SEQ ID NO:4的成熟多肽和SEQ ID NO:29的成熟多肽
将在脱胶测定中施用的SEQ ID NO:29的成熟多肽结合SEQ ID NO:4的成熟多肽施用至未经任何酸/碱预处理的的粗制大豆油3。在60℃下完成酶孵育(持续第一个小时)，随后在80℃下孵育(持续另外23个小时)。测量酶促脱胶1、2、4和24小时后的甘油二酯含量。
表3中呈现了结果。
SEQ ID NO:29的PE、PC特异性的成熟多肽结合SEQ ID NO:4的成熟多肽的脱胶带来相比独立溶液的组合的作用。24小时后几乎完全转化(92.3％)是基于这样的假定：通过LC/MS测量的1030ppm磷总量等于2.58wt％磷脂(平均PL Mw约772g/mol、Mw P约31g/mol)等于可获得的最大2.06％Dg的增加(磷脂分子的80％)。
实例6：三种多肽：SEQ ID NO:9的成熟多肽+SEQ ID NO:29的成熟多肽+SEQ IDNO:2的成熟多肽
将在60℃下在脱胶测定中施用的SEQ ID NO:2的成熟多肽结合SEQ ID NO:9的成熟多肽和SEQ ID NO:29的成熟多肽施用至粗制油4。测量酶促脱胶2、3、5和24小时后的甘油二酯含量(用0.05％磷酸/1.5当量的NaOH预处理油)，并且在24小时后测量磷总含量。
结果示于表5A和5B。
三重PLC溶液的脱胶相比二重PLC溶液带来改进的作用。脱胶油中的磷含量(24小时孵育后)减少至少于3mg/kg P来源于PI、PC、PE、PA的磷总量并证实了在上述测定中使用的该酶混合物带来所有磷脂种类的完全去除/转化。
实例7：三种多肽：SEQ ID NO:9的成熟多肽+SEQ ID NO:29的成熟多肽+SEQ IDNO:7的成熟多肽
将在60℃下在脱胶测定中施用的SEQ ID NO:7的成熟多肽结合SEQ ID NO:9的成熟多肽和SEQ ID NO:29的成熟多肽施用至粗制油5。测量酶促脱胶2、3、和5小时后的甘油二酯含量(用0.05％磷酸/1.5当量的NaOH预处理油)，并且在5小时后测量磷总含量。
表6:通过HPLC-Corona Veo测量酶处理后甘油二酯的增加并通过ICP测量用0.05％磷酸/1.5当量的NaOH预处理油之后的磷含量。
用SEQ ID NO:5+29+9三重PLC溶液脱胶在2-5小时反应后带来显著的甘油二酯的形成(高达0.76wt％DG)。当水含量基于油量从3％至5％增加时，观察到了SEQ ID NO:5+29+9在额外的甘油二酯的形成方面的改进的性能。
实例8：SEQ ID NO:5的成熟多肽和SEQ ID NO:29的成熟多肽
将在脱胶测定中施用的SEQ ID NO:29的成熟多肽结合SEQ ID NO:5的成熟多肽施用至用355ppm磷酸+1.5当量的NaOH预处理的粗制大豆油5。在60℃下，进行酶孵育5小时。
用SEQ ID 5+SEQ ID 29的混合PLC溶液脱胶，当与单一组份PLC溶液SEQ ID 5相比较时，在甘油二酯的形成方面带来改进的性能。
实例9：SEQ ID NO:4的成熟多肽和SEQ ID NO:29的成熟多肽
将在脱胶测定中施用的SEQ ID NO:29的成熟多肽结合SEQ ID NO:4的成熟多肽施用至用650ppm柠檬酸+1.5当量的NaOH预处理的粗制大豆油。总含水量是3％w/w。在60℃或70℃下，进行酶孵育22小时。
用SEQ ID NO:4+SEQ ID NO:29的混合PLC溶液脱胶，当与单一组份PLC溶液SEQ IDNO:29相比较时，在甘油二酯的形成方面带来改进的性能。
实例10：SEQ ID NO:2的成熟多肽和SEQ ID NO:29的成熟多肽
将在脱胶测定中施用的SEQ ID NO:29的成熟多肽结合SEQ ID NO:2的成熟多肽施用至用650ppm柠檬酸+1.5当量的NaOH预处理的粗制大豆油。总含水量是3％w/w。在60℃下，进行酶孵育5小时。
用SEQ ID NO:2+SEQ ID 29的混合PLC溶液脱胶，当与单一组份PLC溶液SEQ IDNO:29或SEQ ID NO:2相比较时，在甘油二酯的形成方面带来改进的性能。
在本文描述并且提出权利要求的发明的范围不受本文公开的多个具体方面的限制，因为这些方面旨在例举本发明的几个方面。预期任何等效方面都处于本发明的范围内。实际上，除在此所示和描述的那些之外，本发明的不同修改对于本领域普通技术人员而言从前述描述将变得清楚。这样的实施例也旨在落入所附权利要求的范围内。在有冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 包括具有磷脂酶C活性的多肽的组合物
及其应用
<130> 12870-WO-PCT
<160> 47
<170> PatentIn 3.5版本
<210> 1
<211> 1932
<212> DNA
<213> Kinochaeta属
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(54)
<400> 1
atgcgtgcct cctcgattct ttcgctggct ctgggcctct cggttgccca ggccgctgtg 60
aaccccgccg atgtcctgtc tgttgtggag aagcgagtcg acccggctag cggcctagag 120
gtgcgcagca tttgggacac catctggaac gacattaaat cggcggccga ctgtactgcc 180
tgcgaggccg tcttgactct gctcaagggc gtcgcggcct ttggcgataa ttttttcgta 240
gaggttttga ccgagatctg tgacctttcc ggggctgagg atgatgatgt gtgctccggt 300
gttcttagcc tcgagggccc aatcatagcc aacgatatcc gtaagatgag cattggctcc 360
aagacatcag agctcttctg catcaccttc ctgggactgt gctcgtaccc ggcggtggac 420
gctttcaccg tccccttccc gaccgcgaag tcagccgcca cccggcccgt gtcgtcgggc 480
aaagacccca tctacgtcgt gcactactct gacatccaca tcgatccctt ctatgtggca 540
ggatccgcca gcaactgcac caagcccatc tgctgccgag attacacttc ggcgtcgtcc 600
ccgggcaaca acaactcccc tgccggcccg tacggcgacc acaactgcga cgtcccgatt 660
agcctggagg acagcatgta tgctgccatc aagaagctgg tgcctgatgc cgccttcggc 720
atctttactg gcgatattgt cgaccacgcc gtctggaata cctcggagag tcagaacatc 780
atcgacatga atgacgccta cacgcgcatg aagaactcgg gcatgctgcc gaccatcttc 840
gccacggcgg gcaaccatga agcgtcgccc gtcaactcgt tcccgccgcc ggccatcggc 900
aacgagtcgc agtgggttta cgacacactg gccagcgact ggagccagtg gatcggcacg 960
tcgggcgcga gctcggtcga gtccatcggc gcttacagcg tgcagtacgg cagcaccaag 1020
ctgcgcgtca tctcgctcaa caccaacatg tactacatcg agaacttcta cctctatgag 1080
cccaccatgg agcaagatcc agccgggcag ttcgcctggc tcgtgtccga gctgagcgcc 1140
gccgaagccg ccggcgagcg cgtgtggatc atcggccaca tgccgctggg tctctcggac 1200
gccttccacg acccgagcaa ctactttgac cagatcgtca accgctacga ggccaccatc 1260
gccgccatgt tcttcggcca cacccacgag gaccatttcc agatctcgta ctcggactac 1320
aacgcccgca cggccgccaa cgcccgcgcc gtctcctaca tcatgccgtc gctgacgccg 1380
acctcgggcc acccgacctt ccgcgtctac acggtcgacc ccgagacctt cggcgtgctg 1440
gacgcgacga cctactacgc cgacatgtcg cagccgacct accagaccgc ggggccggcc 1500
tggtccgtct actacagcgc caaggccgcc tacggcgggc tcgtcgaccc gcccgtcgcc 1560
gccgacgacg ccgccgccga gctgacgccc gccttctggc acaacgtgac ggccgcgctg 1620
gccgccgacc cggccagctt cgacgcctac tacgcgcgca agacgcgcgg ctgggacgtg 1680
gccgcctgcg ccggcgcctg cgcggccgcc gaggtctgcg ccctgcgcgc cgcccgcgcc 1740
caggacaact gcgtcgtgcc cacgcccggc gtgcacttca gcaagcgcgc cgacgagggc 1800
accctggccc accaccgcga cgagtgcggc gtcagcgtcg cccgcaacag cctctccagc 1860
ctcgtcgtgc agcgcgaggc gctggagcac ctcgagggcc gcctgagcga gaagcggagg 1920
atggccgtgt ga 1932
<210> 2
<211> 643
<212> PRT
<213> Kinochaeta属
<400> 2
Met Arg Ala Ser Ser Ile Leu Ser Leu Ala Leu Gly Leu Ser Val Ala
1 5 10 15
Gln Ala Ala Val Asn Pro Ala Asp Val Leu Ser Val Val Glu Lys Arg
20 25 30
Val Asp Pro Ala Ser Gly Leu Glu Val Arg Ser Ile Trp Asp Thr Ile
35 40 45
Trp Asn Asp Ile Lys Ser Ala Ala Asp Cys Thr Ala Cys Glu Ala Val
50 55 60
Leu Thr Leu Leu Lys Gly Val Ala Ala Phe Gly Asp Asn Phe Phe Val
65 70 75 80
Glu Val Leu Thr Glu Ile Cys Asp Leu Ser Gly Ala Glu Asp Asp Asp
85 90 95
Val Cys Ser Gly Val Leu Ser Leu Glu Gly Pro Ile Ile Ala Asn Asp
100 105 110
Ile Arg Lys Met Ser Ile Gly Ser Lys Thr Ser Glu Leu Phe Cys Ile
115 120 125
Thr Phe Leu Gly Leu Cys Ser Tyr Pro Ala Val Asp Ala Phe Thr Val
130 135 140
Pro Phe Pro Thr Ala Lys Ser Ala Ala Thr Arg Pro Val Ser Ser Gly
145 150 155 160
Lys Asp Pro Ile Tyr Val Val His Tyr Ser Asp Ile His Ile Asp Pro
165 170 175
Phe Tyr Val Ala Gly Ser Ala Ser Asn Cys Thr Lys Pro Ile Cys Cys
180 185 190
Arg Asp Tyr Thr Ser Ala Ser Ser Pro Gly Asn Asn Asn Ser Pro Ala
195 200 205
Gly Pro Tyr Gly Asp His Asn Cys Asp Val Pro Ile Ser Leu Glu Asp
210 215 220
Ser Met Tyr Ala Ala Ile Lys Lys Leu Val Pro Asp Ala Ala Phe Gly
225 230 235 240
Ile Phe Thr Gly Asp Ile Val Asp His Ala Val Trp Asn Thr Ser Glu
245 250 255
Ser Gln Asn Ile Ile Asp Met Asn Asp Ala Tyr Thr Arg Met Lys Asn
260 265 270
Ser Gly Met Leu Pro Thr Ile Phe Ala Thr Ala Gly Asn His Glu Ala
275 280 285
Ser Pro Val Asn Ser Phe Pro Pro Pro Ala Ile Gly Asn Glu Ser Gln
290 295 300
Trp Val Tyr Asp Thr Leu Ala Ser Asp Trp Ser Gln Trp Ile Gly Thr
305 310 315 320
Ser Gly Ala Ser Ser Val Glu Ser Ile Gly Ala Tyr Ser Val Gln Tyr
325 330 335
Gly Ser Thr Lys Leu Arg Val Ile Ser Leu Asn Thr Asn Met Tyr Tyr
340 345 350
Ile Glu Asn Phe Tyr Leu Tyr Glu Pro Thr Met Glu Gln Asp Pro Ala
355 360 365
Gly Gln Phe Ala Trp Leu Val Ser Glu Leu Ser Ala Ala Glu Ala Ala
370 375 380
Gly Glu Arg Val Trp Ile Ile Gly His Met Pro Leu Gly Leu Ser Asp
385 390 395 400
Ala Phe His Asp Pro Ser Asn Tyr Phe Asp Gln Ile Val Asn Arg Tyr
405 410 415
Glu Ala Thr Ile Ala Ala Met Phe Phe Gly His Thr His Glu Asp His
420 425 430
Phe Gln Ile Ser Tyr Ser Asp Tyr Asn Ala Arg Thr Ala Ala Asn Ala
435 440 445
Arg Ala Val Ser Tyr Ile Met Pro Ser Leu Thr Pro Thr Ser Gly His
450 455 460
Pro Thr Phe Arg Val Tyr Thr Val Asp Pro Glu Thr Phe Gly Val Leu
465 470 475 480
Asp Ala Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Met Ser Gln Pro Thr Tyr Gln Thr
485 490 495
Ala Gly Pro Ala Trp Ser Val Tyr Tyr Ser Ala Lys Ala Ala Tyr Gly
500 505 510
Gly Leu Val Asp Pro Pro Val Ala Ala Asp Asp Ala Ala Ala Glu Leu
515 520 525
Thr Pro Ala Phe Trp His Asn Val Thr Ala Ala Leu Ala Ala Asp Pro
530 535 540
Ala Ser Phe Asp Ala Tyr Tyr Ala Arg Lys Thr Arg Gly Trp Asp Val
545 550 555 560
Ala Ala Cys Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Glu Val Cys Ala Leu Arg
565 570 575
Ala Ala Arg Ala Gln Asp Asn Cys Val Val Pro Thr Pro Gly Val His
580 585 590
Phe Ser Lys Arg Ala Asp Glu Gly Thr Leu Ala His His Arg Asp Glu
595 600 605
Cys Gly Val Ser Val Ala Arg Asn Ser Leu Ser Ser Leu Val Val Gln
610 615 620
Arg Glu Ala Leu Glu His Leu Glu Gly Arg Leu Ser Glu Lys Arg Arg
625 630 635 640
Met Ala Val
<210> 3
<211> 1833
<212> DNA
<213> 埃默森青霉菌
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(48)
<400> 3
atgagagttc tcgccctcat cgctgctctg gccacggtgg ccaccgcaag tgccccctat 60
gacaagcgcg acttggccca ggagatttgg gacgacatca agaatgcggt ggattgcgct 120
ggctgccagg tcgttctgac tgccctgaag ggtgtggccg atctgggcac gactgccctt 180
gtcgatgtgc tgaccgaagt gtgcaacatc agtggcaaag aagattccga tgtctgctcg 240
ggcatcatct cccgcgaggg tccggtgctg gattatgtcc tgcagcacct cgatatcggc 300
tcgcacacct cccaggtcat ctgtgccagc gcattcggcc tctgccagta tcctgaggtc 360
cggccctaca acctcacctt ccctaaaccc aagcccaaca cgactcgtcc agaacccagt 420
ggagagtcac caatccaggt cgtccacttc agcgatactc acgtggacct ctcctacgag 480
acggggtcca attacaactg tacaaagccc atctgctgtc gcccttacac ggccgaggat 540
gcaccgggaa acacgacgac tccgtgcggg ccatatggca acaccaaatg tgatgctccc 600
ttgagcctcg aggagagcat gttcgccgcg atcaaagcgc tcaaccccca gcccgccttt 660
tccatttata cgggcgacgt cgtcgcacac gacatctggc tggtggatca aaacgaggtc 720
attgaggacc tgaatgccac ctacgaccgc atggccgggc tggggctggt ctatgcggcc 780
attgggaatc acgacacggc gccggtcaac gatctgccga cgagcaacat ccccagcgag 840
tacagcgcga actggaccta cgaggccctc tcgtacgact ttacgatgct gacgcagtcg 900
gcctctgccc agaccgcggc gaattacggg tcttattcgg ccatctatcc cggcagctac 960
ggcacggatc tccgcgtcat ttcctacaac agcatcttct actacgtgga caatttctgg 1020
gcgtaccaag atcctatgga attcgacccg gatggacaac tggcctggct gatcaacgag 1080
ctccaggagg ccgagacggc ggggcagcgg gtctggatta ttgcgcatgt gccgacgggc 1140
acgtcggatc acttccacga ctattcgcac tactttgacc agatcgtgca gcgctacgag 1200
gccactattg cggcgctgtt ctacggccac actcacatcg accagttcca aatctcgtac 1260
tcgaactatt ccaaccgagc attcgacacg gcgaccgcca tcgggtatat catgccgtca 1320
ttgactccga cctcgggacc tcctaccttc cgggtctatg acgttgatcc caagacgttt 1380
gccgtgctgg acttcaccaa ctacattgcc aacatcagcg acccggcgtt ccagtcgggc 1440
ccgtcgtggc agaagtacta ctcggccaag gagacgtacg gctcgttgct gtctcctcca 1500
gtgacggacc cgacggcgga gctgacgccg gccttctggc acaacgtcac ggtggccttt 1560
gagcaggaca acgcgacctt ccaggagtac tgggcgcggc agacgcgggg gtacgacgtg 1620
tcgagctgca cggggtcctg catcactcag gccatctgcg gcctgcgcgc gggagacgcg 1680
cagtacaact gcgtgacgcc gacgccgggc ttcaactttg ccaaacggga tacctccaac 1740
cccaagcagg ctctatctca tgtcgagaaa tgcgagggct cgggattgct ggggctgctg 1800
cgcaggatgg tggctgacag taagtcttcc tag 1833
<210> 4
<211> 610
<212> PRT
<213> 埃默森青霉菌
<400> 4
Met Arg Val Leu Ala Leu Ile Ala Ala Leu Ala Thr Val Ala Thr Ala
1 5 10 15
Ser Ala Pro Tyr Asp Lys Arg Asp Leu Ala Gln Glu Ile Trp Asp Asp
20 25 30
Ile Lys Asn Ala Val Asp Cys Ala Gly Cys Gln Val Val Leu Thr Ala
35 40 45
Leu Lys Gly Val Ala Asp Leu Gly Thr Thr Ala Leu Val Asp Val Leu
50 55 60
Thr Glu Val Cys Asn Ile Ser Gly Lys Glu Asp Ser Asp Val Cys Ser
65 70 75 80
Gly Ile Ile Ser Arg Glu Gly Pro Val Leu Asp Tyr Val Leu Gln His
85 90 95
Leu Asp Ile Gly Ser His Thr Ser Gln Val Ile Cys Ala Ser Ala Phe
100 105 110
Gly Leu Cys Gln Tyr Pro Glu Val Arg Pro Tyr Asn Leu Thr Phe Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Pro Asn Thr Thr Arg Pro Glu Pro Ser Gly Glu Ser Pro
130 135 140
Ile Gln Val Val His Phe Ser Asp Thr His Val Asp Leu Ser Tyr Glu
145 150 155 160
Thr Gly Ser Asn Tyr Asn Cys Thr Lys Pro Ile Cys Cys Arg Pro Tyr
165 170 175
Thr Ala Glu Asp Ala Pro Gly Asn Thr Thr Thr Pro Cys Gly Pro Tyr
180 185 190
Gly Asn Thr Lys Cys Asp Ala Pro Leu Ser Leu Glu Glu Ser Met Phe
195 200 205
Ala Ala Ile Lys Ala Leu Asn Pro Gln Pro Ala Phe Ser Ile Tyr Thr
210 215 220
Gly Asp Val Val Ala His Asp Ile Trp Leu Val Asp Gln Asn Glu Val
225 230 235 240
Ile Glu Asp Leu Asn Ala Thr Tyr Asp Arg Met Ala Gly Leu Gly Leu
245 250 255
Val Tyr Ala Ala Ile Gly Asn His Asp Thr Ala Pro Val Asn Asp Leu
260 265 270
Pro Thr Ser Asn Ile Pro Ser Glu Tyr Ser Ala Asn Trp Thr Tyr Glu
275 280 285
Ala Leu Ser Tyr Asp Phe Thr Met Leu Thr Gln Ser Ala Ser Ala Gln
290 295 300
Thr Ala Ala Asn Tyr Gly Ser Tyr Ser Ala Ile Tyr Pro Gly Ser Tyr
305 310 315 320
Gly Thr Asp Leu Arg Val Ile Ser Tyr Asn Ser Ile Phe Tyr Tyr Val
325 330 335
Asp Asn Phe Trp Ala Tyr Gln Asp Pro Met Glu Phe Asp Pro Asp Gly
340 345 350
Gln Leu Ala Trp Leu Ile Asn Glu Leu Gln Glu Ala Glu Thr Ala Gly
355 360 365
Gln Arg Val Trp Ile Ile Ala His Val Pro Thr Gly Thr Ser Asp His
370 375 380
Phe His Asp Tyr Ser His Tyr Phe Asp Gln Ile Val Gln Arg Tyr Glu
385 390 395 400
Ala Thr Ile Ala Ala Leu Phe Tyr Gly His Thr His Ile Asp Gln Phe
405 410 415
Gln Ile Ser Tyr Ser Asn Tyr Ser Asn Arg Ala Phe Asp Thr Ala Thr
420 425 430
Ala Ile Gly Tyr Ile Met Pro Ser Leu Thr Pro Thr Ser Gly Pro Pro
435 440 445
Thr Phe Arg Val Tyr Asp Val Asp Pro Lys Thr Phe Ala Val Leu Asp
450 455 460
Phe Thr Asn Tyr Ile Ala Asn Ile Ser Asp Pro Ala Phe Gln Ser Gly
465 470 475 480
Pro Ser Trp Gln Lys Tyr Tyr Ser Ala Lys Glu Thr Tyr Gly Ser Leu
485 490 495
Leu Ser Pro Pro Val Thr Asp Pro Thr Ala Glu Leu Thr Pro Ala Phe
500 505 510
Trp His Asn Val Thr Val Ala Phe Glu Gln Asp Asn Ala Thr Phe Gln
515 520 525
Glu Tyr Trp Ala Arg Gln Thr Arg Gly Tyr Asp Val Ser Ser Cys Thr
530 535 540
Gly Ser Cys Ile Thr Gln Ala Ile Cys Gly Leu Arg Ala Gly Asp Ala
545 550 555 560
Gln Tyr Asn Cys Val Thr Pro Thr Pro Gly Phe Asn Phe Ala Lys Arg
565 570 575
Asp Thr Ser Asn Pro Lys Gln Ala Leu Ser His Val Glu Lys Cys Glu
580 585 590
Gly Ser Gly Leu Leu Gly Leu Leu Arg Arg Met Val Ala Asp Ser Lys
595 600 605
Ser Ser
610
<210> 5
<211> 2115
<212> DNA
<213> 玛丽安丛赤壳菌
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(57)
<220>
<221> 内含子
<222> (169)..(222)
<220>
<221> 内含子
<222> (310)..(360)
<220>
<221> 内含子
<222> (666)..(727)
<220>
<221> 内含子
<222> (937)..(985)
<400> 5
atgcaattac tctctatcct cgccgtcggg ctcggcctcg cgcagaacgc attctgccaa 60
gaggtcactc atgatcttgc cggtatcaag cgatccctag aatccagaga ttgggttgag 120
gatctttggg ataagttcga aagtgatgca acatgcgcgg gatgcgaggt tagccattca 180
tgttgatttg gtgttgagca tgacgagcta atgaaatatt agtcactcgt gttagtgctc 240
aagggcttgg ccgctataag tgatcaagcg tttattgacg tccttcagga gatttgcaag 300
atctccgggg tgagtacacc ttgactatgg tgcttctaag tggagttgac gatgcagtag 360
gctgaggatg acgatgtttg tgacggttca attcaacttg aaggccccgt tattgccagc 420
ggtcttcgat caatggctat cggctctcga acttccaaag aattctgtac tacattcctt 480
ggactttgcg cgtaccctgc ggtgcagcaa tggagtgttc ccttctcgtc ctccaagtct 540
tccaagactc gtccttcgtc cagtggaaag gaccctatca aggtggttca ttattctgat 600
attcatatcg atcctttata tgtcgggggc tcaaactcca actgcactaa gcccatatgt 660
tgtaggtaag agataacccc aaacacttgc cagcaaaact ggacatgttg ataactaaac 720
tacgaaggtc atacaccaag gctgaccagc ccgggaacaa caaatatcct gctggaccga 780
acggcgacca taactgcgat tctccagtca gtcttgagaa gagcatgtac aacgccatca 840
aggaaatcgt tccagatgca gccttcacca tcttcaccgg ggacattgtc gatcatgcag 900
tctggaatac tagccaatcc tataatacgg aacaaagtgt gttcagtata atccatccag 960
tggaataact tactaaatct cacagttacc aatgcctacg gcttgatgag tgataatctg 1020
ggcacaatct atgggactgc cggcaaccat gaagctcatc ccgctaatgc cttccaacct 1080
aactccgtcg gcaacgtgag ccaatgggta tacgatcttc tttcaggtct ctggtcacag 1140
tggattagca ccgaagccaa agctgactcg gagaagcttg gcgcttactc taccaagtat 1200
cctggcggca acttgcgcat tatctctctc aacaccaaca tgtactatcg agaaaactac 1260
tggctctacc gcaagacgat gattcaggac cctagcaatc agatttcctg gctcgtaaac 1320
gaactcgaag ccgctgagac tgcgggcgag cgcgtttata tcatcggcca catgccgctt 1380
ggagactcta acagttttca cgaccagtcc aactaccttg accaagtaat caaccgctac 1440
tccgcaacta tctctgccat gttctttggc cacacacacg acgaccagtt ccagataagt 1500
tactccaatt ggtcaaatcg caacttctcc aatgccctcg taacctccta cattggtccc 1560
tcactcactc ccaccgccgg tatgcccgcc tttcgcgttt acgatgtcga ccccgtgacg 1620
ttcggaatcc tcgactcgac cacatacatc gctgacatga ccgactctgc ctttcaaacc 1680
actggcccag tgtggaagaa gtattattct gccaaagaag tttacggctc tttattgagc 1740
ccggctgtga ctgacagcag cgccgagctc acggcagcct tctggcacaa cgtgacgacc 1800
ctgttcgagg cggacaacac cgcatttgag gcgtttcttt cccgcaagag ccgtgggtgg 1860
aagtcagaat cctgcacagg cacttgcaag gccaacgaga tctgtcaatt gcgcgcggct 1920
cgcagcgaga acaattgcta caccccgtcg ctaggaatta gcttcaacaa acgaagtctg 1980
aacccagttg aagagcggga cgagtgtggg atttcagtga ctagggctac ggttagtgct 2040
atgggcgtaa ggaaagacgt tttgcgtttg ttaaagaaga ggtttatcga gaaggcgggt 2100
gaggtccgtg gctga 2115
<210> 6
<211> 1899
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> cDNA
<400> 6
atgcaattac tctctatcct cgccgtcggg ctcggcctcg cgcagaacgc attctgccaa 60
gaggtcactc atgatcttgc cggtatcaag cgatccctag aatccagaga ttgggttgag 120
gatctttggg ataagttcga aagtgatgca acatgcgcgg gatgcgagtc actcgtgtta 180
gtgctcaagg gcttggccgc tataagtgat caagcgttta ttgacgtcct tcaggagatt 240
tgcaagatct ccggggctga ggatgacgat gtttgtgacg gttcaattca acttgaaggc 300
cccgttattg ccagcggtct tcgatcaatg gctatcggct ctcgaacttc caaagaattc 360
tgtactacat tccttggact ttgcgcgtac cctgcggtgc agcaatggag tgttcccttc 420
tcgtcctcca agtcttccaa gactcgtcct tcgtccagtg gaaaggaccc tatcaaggtg 480
gttcattatt ctgatattca tatcgatcct ttatatgtcg ggggctcaaa ctccaactgc 540
actaagccca tatgttgtag gtcatacacc aaggctgacc agcccgggaa caacaaatat 600
cctgctggac cgaacggcga ccataactgc gattctccag tcagtcttga gaagagcatg 660
tacaacgcca tcaaggaaat cgttccagat gcagccttca ccatcttcac cggggacatt 720
gtcgatcatg cagtctggaa tactagccaa tcctataata cggaacaaat taccaatgcc 780
tacggcttga tgagtgataa tctgggcaca atctatggga ctgccggcaa ccatgaagct 840
catcccgcta atgccttcca acctaactcc gtcggcaacg tgagccaatg ggtatacgat 900
cttctttcag gtctctggtc acagtggatt agcaccgaag ccaaagctga ctcggagaag 960
cttggcgctt actctaccaa gtatcctggc ggcaacttgc gcattatctc tctcaacacc 1020
aacatgtact atcgagaaaa ctactggctc taccgcaaga cgatgattca ggaccctagc 1080
aatcagattt cctggctcgt aaacgaactc gaagccgctg agactgcggg cgagcgcgtt 1140
tatatcatcg gccacatgcc gcttggagac tctaacagtt ttcacgacca gtccaactac 1200
cttgaccaag taatcaaccg ctactccgca actatctctg ccatgttctt tggccacaca 1260
cacgacgacc agttccagat aagttactcc aattggtcaa atcgcaactt ctccaatgcc 1320
ctcgtaacct cctacattgg tccctcactc actcccaccg ccggtatgcc cgcctttcgc 1380
gtttacgatg tcgaccccgt gacgttcgga atcctcgact cgaccacata catcgctgac 1440
atgaccgact ctgcctttca aaccactggc ccagtgtgga agaagtatta ttctgccaaa 1500
gaagtttacg gctctttatt gagcccggct gtgactgaca gcagcgccga gctcacggca 1560
gccttctggc acaacgtgac gaccctgttc gaggcggaca acaccgcatt tgaggcgttt 1620
ctttcccgca agagccgtgg gtggaagtca gaatcctgca caggcacttg caaggccaac 1680
gagatctgtc aattgcgcgc ggctcgcagc gagaacaatt gctacacccc gtcgctagga 1740
attagcttca acaaacgaag tctgaaccca gttgaagagc gggacgagtg tgggatttca 1800
gtgactaggg ctacggttag tgctatgggc gtaaggaaag acgttttgcg tttgttaaag 1860
aagaggttta tcgagaaggc gggtgaggtc cgtggctga 1899
<210> 7
<211> 632
<212> PRT
<213> 玛丽安丛赤壳菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(19)
<220>
<221> 前肽
<222> (20)..(36)
<400> 7
Met Gln Leu Leu Ser Ile Leu Ala Val Gly Leu Gly Leu Ala Gln Asn
1 5 10 15
Ala Phe Cys Gln Glu Val Thr His Asp Leu Ala Gly Ile Lys Arg Ser
20 25 30
Leu Glu Ser Arg Asp Trp Val Glu Asp Leu Trp Asp Lys Phe Glu Ser
35 40 45
Asp Ala Thr Cys Ala Gly Cys Glu Ser Leu Val Leu Val Leu Lys Gly
50 55 60
Leu Ala Ala Ile Ser Asp Gln Ala Phe Ile Asp Val Leu Gln Glu Ile
65 70 75 80
Cys Lys Ile Ser Gly Ala Glu Asp Asp Asp Val Cys Asp Gly Ser Ile
85 90 95
Gln Leu Glu Gly Pro Val Ile Ala Ser Gly Leu Arg Ser Met Ala Ile
100 105 110
Gly Ser Arg Thr Ser Lys Glu Phe Cys Thr Thr Phe Leu Gly Leu Cys
115 120 125
Ala Tyr Pro Ala Val Gln Gln Trp Ser Val Pro Phe Ser Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Ser Lys Thr Arg Pro Ser Ser Ser Gly Lys Asp Pro Ile Lys Val
145 150 155 160
Val His Tyr Ser Asp Ile His Ile Asp Pro Leu Tyr Val Gly Gly Ser
165 170 175
Asn Ser Asn Cys Thr Lys Pro Ile Cys Cys Arg Ser Tyr Thr Lys Ala
180 185 190
Asp Gln Pro Gly Asn Asn Lys Tyr Pro Ala Gly Pro Asn Gly Asp His
195 200 205
Asn Cys Asp Ser Pro Val Ser Leu Glu Lys Ser Met Tyr Asn Ala Ile
210 215 220
Lys Glu Ile Val Pro Asp Ala Ala Phe Thr Ile Phe Thr Gly Asp Ile
225 230 235 240
Val Asp His Ala Val Trp Asn Thr Ser Gln Ser Tyr Asn Thr Glu Gln
245 250 255
Ile Thr Asn Ala Tyr Gly Leu Met Ser Asp Asn Leu Gly Thr Ile Tyr
260 265 270
Gly Thr Ala Gly Asn His Glu Ala His Pro Ala Asn Ala Phe Gln Pro
275 280 285
Asn Ser Val Gly Asn Val Ser Gln Trp Val Tyr Asp Leu Leu Ser Gly
290 295 300
Leu Trp Ser Gln Trp Ile Ser Thr Glu Ala Lys Ala Asp Ser Glu Lys
305 310 315 320
Leu Gly Ala Tyr Ser Thr Lys Tyr Pro Gly Gly Asn Leu Arg Ile Ile
325 330 335
Ser Leu Asn Thr Asn Met Tyr Tyr Arg Glu Asn Tyr Trp Leu Tyr Arg
340 345 350
Lys Thr Met Ile Gln Asp Pro Ser Asn Gln Ile Ser Trp Leu Val Asn
355 360 365
Glu Leu Glu Ala Ala Glu Thr Ala Gly Glu Arg Val Tyr Ile Ile Gly
370 375 380
His Met Pro Leu Gly Asp Ser Asn Ser Phe His Asp Gln Ser Asn Tyr
385 390 395 400
Leu Asp Gln Val Ile Asn Arg Tyr Ser Ala Thr Ile Ser Ala Met Phe
405 410 415
Phe Gly His Thr His Asp Asp Gln Phe Gln Ile Ser Tyr Ser Asn Trp
420 425 430
Ser Asn Arg Asn Phe Ser Asn Ala Leu Val Thr Ser Tyr Ile Gly Pro
435 440 445
Ser Leu Thr Pro Thr Ala Gly Met Pro Ala Phe Arg Val Tyr Asp Val
450 455 460
Asp Pro Val Thr Phe Gly Ile Leu Asp Ser Thr Thr Tyr Ile Ala Asp
465 470 475 480
Met Thr Asp Ser Ala Phe Gln Thr Thr Gly Pro Val Trp Lys Lys Tyr
485 490 495
Tyr Ser Ala Lys Glu Val Tyr Gly Ser Leu Leu Ser Pro Ala Val Thr
500 505 510
Asp Ser Ser Ala Glu Leu Thr Ala Ala Phe Trp His Asn Val Thr Thr
515 520 525
Leu Phe Glu Ala Asp Asn Thr Ala Phe Glu Ala Phe Leu Ser Arg Lys
530 535 540
Ser Arg Gly Trp Lys Ser Glu Ser Cys Thr Gly Thr Cys Lys Ala Asn
545 550 555 560
Glu Ile Cys Gln Leu Arg Ala Ala Arg Ser Glu Asn Asn Cys Tyr Thr
565 570 575
Pro Ser Leu Gly Ile Ser Phe Asn Lys Arg Ser Leu Asn Pro Val Glu
580 585 590
Glu Arg Asp Glu Cys Gly Ile Ser Val Thr Arg Ala Thr Val Ser Ala
595 600 605
Met Gly Val Arg Lys Asp Val Leu Arg Leu Leu Lys Lys Arg Phe Ile
610 615 620
Glu Lys Ala Gly Glu Val Arg Gly
625 630
<210> 8
<211> 969
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(75)
<400> 8
atgactcatc tcattggttt cgcccctcgg ttgctggctt tttcggcgct gttgctcagc 60
cagacggcat tcagccagga aagcccggca ttcatcgatc ctgcgtcgtg gaacaccccg 120
ttcaatggca ttgcccaggt ggcttgtcat aactgctacg agaagcaata cgcgaacacc 180
ttcagcagtg tgcttgacag tgtacggacc ctggagctgg acttctggga ccagcgcgat 240
gcggtgagcg gcggttcgcc ccatcactgg ttcgtgcggc acaaccccgg caccttgttc 300
caatccggca acgacaataa ctgcaccggc gatggcaccg gcaagaacga cctcgaagcc 360
tgtctgaacg acgtcaagaa ctggagtgac aagcatccgg ggcacttccc catcacgctg 420
atcctggaca agaaacaggg ctggtcgaaa gaaagttcgg ggcgcacacc aaaggatttc 480
gacgaactgg tggcgcgggt gttccagggc aagctcttta ccccccagga tctggcgacg 540
cacattggca gtggcgcggg ggccttgcag ggcaacctca agggtaagtc ctggcccacc 600
gccaacgatc tgcagggcaa ggtgctgttg gtgctcaacc actcggaaaa ccagaagctc 660
tcgcagtacg ccgaggcccg cacctctaag gctaaggtgt tcatttcgcc agtaaccaac 720
ggccagaacg atatcagtgg caaggtcagc ggcatgtcca gccagtcatc cggctatgta 780
gccatgaaca acatgggcaa gggcgacaaa agttgggcaa agcaggcctt tgcctacagc 840
catatcggcc gcgtctgggg tgatgacgag gtgtcgttcg cccagcacat caaccagaag 900
atcaatctgt cggcgtacta caggttcgcc gcgcagagcg ctggcggcta ccgcatccgg 960
ccgttctga 969
<210> 9
<211> 322
<212> PRT
<213> 假单胞菌属物种
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(25)
<400> 9
Met Thr His Leu Ile Gly Phe Ala Pro Arg Leu Leu Ala Phe Ser Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ser Gln Thr Ala Phe Ser Gln Glu Ser Pro Ala Phe Ile
20 25 30
Asp Pro Ala Ser Trp Asn Thr Pro Phe Asn Gly Ile Ala Gln Val Ala
35 40 45
Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln Tyr Ala Asn Thr Phe Ser Ser Val
50 55 60
Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp
65 70 75 80
Ala Val Ser Gly Gly Ser Pro His His Trp Phe Val Arg His Asn Pro
85 90 95
Gly Thr Leu Phe Gln Ser Gly Asn Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly
100 105 110
Thr Gly Lys Asn Asp Leu Glu Ala Cys Leu Asn Asp Val Lys Asn Trp
115 120 125
Ser Asp Lys His Pro Gly His Phe Pro Ile Thr Leu Ile Leu Asp Lys
130 135 140
Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe
145 150 155 160
Asp Glu Leu Val Ala Arg Val Phe Gln Gly Lys Leu Phe Thr Pro Gln
165 170 175
Asp Leu Ala Thr His Ile Gly Ser Gly Ala Gly Ala Leu Gln Gly Asn
180 185 190
Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr Ala Asn Asp Leu Gln Gly Lys Val
195 200 205
Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala
210 215 220
Glu Ala Arg Thr Ser Lys Ala Lys Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn
225 230 235 240
Gly Gln Asn Asp Ile Ser Gly Lys Val Ser Gly Met Ser Ser Gln Ser
245 250 255
Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn Met Gly Lys Gly Asp Lys Ser Trp
260 265 270
Ala Lys Gln Ala Phe Ala Tyr Ser His Ile Gly Arg Val Trp Gly Asp
275 280 285
Asp Glu Val Ser Phe Ala Gln His Ile Asn Gln Lys Ile Asn Leu Ser
290 295 300
Ala Tyr Tyr Arg Phe Ala Ala Gln Ser Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Arg
305 310 315 320
Pro Phe
<210> 10
<211> 298
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 10
Ala Gln Glu Ser Pro Ala Phe Ile Asp Pro Ala Ser Trp Asn Thr Pro
1 5 10 15
Phe Asn Gly Ile Ala Gln Val Ala Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln
20 25 30
Tyr Ala Asn Thr Phe Ser Ser Val Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu
35 40 45
Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp Ala Val Ser Gly Gly Ser Pro His
50 55 60
His Trp Phe Val Arg His Asn Pro Gly Thr Leu Phe Gln Ser Gly Asn
65 70 75 80
Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly Thr Gly Lys Asn Asp Leu Glu Ala
85 90 95
Cys Leu Asn Asp Val Lys Asn Trp Ser Asp Lys His Pro Gly His Phe
100 105 110
Pro Ile Thr Leu Ile Leu Asp Lys Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser
115 120 125
Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe Asp Glu Leu Val Ala Arg Val Phe
130 135 140
Gln Gly Lys Leu Phe Thr Pro Gln Asp Leu Ala Thr His Ile Gly Ser
145 150 155 160
Gly Ala Gly Ala Leu Gln Gly Asn Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr
165 170 175
Ala Asn Asp Leu Gln Gly Lys Val Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu
180 185 190
Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala Glu Ala Arg Thr Ser Lys Ala Lys
195 200 205
Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn Gly Gln Asn Asp Ile Ser Gly Lys
210 215 220
Val Ser Gly Met Ser Ser Gln Ser Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn
225 230 235 240
Met Gly Lys Gly Asp Lys Ser Trp Ala Lys Gln Ala Phe Ala Tyr Ser
245 250 255
His Ile Gly Arg Val Trp Gly Asp Asp Glu Val Ser Phe Ala Gln His
260 265 270
Ile Asn Gln Lys Ile Asn Leu Ser Ala Tyr Tyr Arg Phe Ala Ala Gln
275 280 285
Ser Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Arg Pro Phe
290 295
<210> 11
<211> 972
<212> DNA
<213> 绿针假单胞菌
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(75)
<400> 11
atgtcccgtc tcactcgctt tgccctccgt accgccgtga tgcccctggt gctggccagc 60
cagatggcgt ccagccagga ggctgtggga ttcatttccc cggcttcctg gtacaccgcc 120
ttcaacgcta tcgcccaggt ggcgtgccat aactgctacg aaaaacagta cgccggcacc 180
ttcaccagcg tgctcgacag cgtgcgcacc ctggagctgg acttctggga ccaacgcgat 240
gcggtcaccg gaggttcgcc ccgccactgg ttcgtgcggc acaaccccgg cagcctgttc 300
cagtccggca atgacaacaa ttgcaccggc gacggcaaag gcaccaacga tcttgaggcc 360
tgcctcaatg acatcaagct ctggagcgac agccatcccg ggcacttccc gattaccctg 420
atcctcgaca agaagcaggg ctggtcgaag gaaagctccg ggcgtacgcc taaagacttc 480
gatgacctgg tcagccggat tttccagggc aagctctaca ccccgggcga cctggcccag 540
cacctgggtg tcagcagcag tgccttgcag ggctcgctca agggcaagtc ctggccgacc 600
gccagccaac tgcagggcaa ggtgctgttg gtgctcaacc actcggagaa ccagaagctc 660
tcgcaatacg ccgaggcccg caccaccagc gccaaggtgt tcatttcccc ggtcaccaac 720
ggccagaacg atgtcagtgg cgaggtcagc ggcatgtcca ggacgtcgtc cggctacgtg 780
gccatgaaca acatgggcaa gggcgacaag cagtgggccg cgcaagcctt tgcctacagc 840
cacatcggtc gggtgtgggg cgatgacggc gtgtcattca cccagcacat cgccgagaag 900
gtcaatctgt cggcgtatta caaattcgcc gaggccaagg atggcaacgg ctatcgcatc 960
cggccgttct ga 972
<210> 12
<211> 323
<212> PRT
<213> 绿针假单胞菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(25)
<400> 12
Met Ser Arg Leu Thr Arg Phe Ala Leu Arg Thr Ala Val Met Pro Leu
1 5 10 15
Val Leu Ala Ser Gln Met Ala Ser Ser Gln Glu Ala Val Gly Phe Ile
20 25 30
Ser Pro Ala Ser Trp Tyr Thr Ala Phe Asn Ala Ile Ala Gln Val Ala
35 40 45
Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln Tyr Ala Gly Thr Phe Thr Ser Val
50 55 60
Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp
65 70 75 80
Ala Val Thr Gly Gly Ser Pro Arg His Trp Phe Val Arg His Asn Pro
85 90 95
Gly Ser Leu Phe Gln Ser Gly Asn Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Asn Asp Leu Glu Ala Cys Leu Asn Asp Ile Lys Leu Trp
115 120 125
Ser Asp Ser His Pro Gly His Phe Pro Ile Thr Leu Ile Leu Asp Lys
130 135 140
Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe
145 150 155 160
Asp Asp Leu Val Ser Arg Ile Phe Gln Gly Lys Leu Tyr Thr Pro Gly
165 170 175
Asp Leu Ala Gln His Leu Gly Val Ser Ser Ser Ala Leu Gln Gly Ser
180 185 190
Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr Ala Ser Gln Leu Gln Gly Lys Val
195 200 205
Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala
210 215 220
Glu Ala Arg Thr Thr Ser Ala Lys Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn
225 230 235 240
Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Glu Val Ser Gly Met Ser Arg Thr Ser
245 250 255
Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn Met Gly Lys Gly Asp Lys Gln Trp
260 265 270
Ala Ala Gln Ala Phe Ala Tyr Ser His Ile Gly Arg Val Trp Gly Asp
275 280 285
Asp Gly Val Ser Phe Thr Gln His Ile Ala Glu Lys Val Asn Leu Ser
290 295 300
Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Arg Ile
305 310 315 320
Arg Pro Phe
<210> 13
<211> 299
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 13
Ala Gln Glu Ala Val Gly Phe Ile Ser Pro Ala Ser Trp Tyr Thr Ala
1 5 10 15
Phe Asn Ala Ile Ala Gln Val Ala Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln
20 25 30
Tyr Ala Gly Thr Phe Thr Ser Val Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu
35 40 45
Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp Ala Val Thr Gly Gly Ser Pro Arg
50 55 60
His Trp Phe Val Arg His Asn Pro Gly Ser Leu Phe Gln Ser Gly Asn
65 70 75 80
Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly Lys Gly Thr Asn Asp Leu Glu Ala
85 90 95
Cys Leu Asn Asp Ile Lys Leu Trp Ser Asp Ser His Pro Gly His Phe
100 105 110
Pro Ile Thr Leu Ile Leu Asp Lys Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser
115 120 125
Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe Asp Asp Leu Val Ser Arg Ile Phe
130 135 140
Gln Gly Lys Leu Tyr Thr Pro Gly Asp Leu Ala Gln His Leu Gly Val
145 150 155 160
Ser Ser Ser Ala Leu Gln Gly Ser Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr
165 170 175
Ala Ser Gln Leu Gln Gly Lys Val Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu
180 185 190
Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala Glu Ala Arg Thr Thr Ser Ala Lys
195 200 205
Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Glu
210 215 220
Val Ser Gly Met Ser Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn
225 230 235 240
Met Gly Lys Gly Asp Lys Gln Trp Ala Ala Gln Ala Phe Ala Tyr Ser
245 250 255
His Ile Gly Arg Val Trp Gly Asp Asp Gly Val Ser Phe Thr Gln His
260 265 270
Ile Ala Glu Lys Val Asn Leu Ser Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Ala
275 280 285
Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Arg Ile Arg Pro Phe
290 295
<210> 14
<211> 972
<212> DNA
<213> 假单胞菌属物种
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(75)
<400> 14
atgtcccgtc tcactggttt tgccctccgt accgccgtgc tgcccctggc actggccagc 60
cagatggcgt ccagccagga ggccgtggga ttcatttccc cggcgtcctg gtacaccgcc 120
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ttcaccagcg tgctcgatag cgtgcgcacc ctggagctgg acttctggga ccaacgcgat 240
gcggtcaccg gaggttcgcc ccgccactgg ttcgtgcggc acaaccccgg cagcctgttc 300
cagtccggca atgacaacaa ttgcaccggc gacggcaacg gcaccaacga tctcgaagcc 360
tgcctcaacg acatcaagct ctggagcgac agccatcccg ggcacttccc gattaccctg 420
atcctcgaca agaagcaggg ctggtcgaag gaaagctccg ggcgtacgcc gaaagacttc 480
gatgacctgg tcagccggat tttccagggc aagctctaca ccccgggcga cctggcccag 540
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gtcaatctgt cggcgtatta caaattcgcc gaggccaagg atggcaacgg ctatcgcatc 960
cgaccgttct ga 972
<210> 15
<211> 323
<212> PRT
<213> 假单胞菌属物种
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(25)
<400> 15
Met Ser Arg Leu Thr Gly Phe Ala Leu Arg Thr Ala Val Leu Pro Leu
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ser Gln Met Ala Ser Ser Gln Glu Ala Val Gly Phe Ile
20 25 30
Ser Pro Ala Ser Trp Tyr Thr Ala Phe Asn Ala Ile Ala Gln Val Ala
35 40 45
Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln Tyr Ala Gly Thr Phe Thr Ser Val
50 55 60
Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp
65 70 75 80
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100 105 110
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Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe
145 150 155 160
Asp Asp Leu Val Ser Arg Ile Phe Gln Gly Lys Leu Tyr Thr Pro Gly
165 170 175
Asp Leu Ala Gln His Leu Gly Val Ser Ser Ser Ala Leu Gln Gly Ser
180 185 190
Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr Ala Ser Gln Leu Gln Gly Lys Val
195 200 205
Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala
210 215 220
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225 230 235 240
Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Glu Val Ser Gly Met Ser Arg Thr Ser
245 250 255
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260 265 270
Ala Ala Gln Ala Phe Val Tyr Ser His Ile Gly Arg Val Trp Gly Asp
275 280 285
Asp Gly Val Ser Phe Thr Gln His Ile Ala Glu Lys Val Asn Leu Ser
290 295 300
Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Arg Ile
305 310 315 320
Arg Pro Phe
<210> 16
<211> 299
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 16
Ala Gln Glu Ala Val Gly Phe Ile Ser Pro Ala Ser Trp Tyr Thr Ala
1 5 10 15
Phe Asn Ala Ile Ala Gln Val Ala Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln
20 25 30
Tyr Ala Gly Thr Phe Thr Ser Val Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu
35 40 45
Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp Ala Val Thr Gly Gly Ser Pro Arg
50 55 60
His Trp Phe Val Arg His Asn Pro Gly Ser Leu Phe Gln Ser Gly Asn
65 70 75 80
Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly Asn Gly Thr Asn Asp Leu Glu Ala
85 90 95
Cys Leu Asn Asp Ile Lys Leu Trp Ser Asp Ser His Pro Gly His Phe
100 105 110
Pro Ile Thr Leu Ile Leu Asp Lys Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser
115 120 125
Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe Asp Asp Leu Val Ser Arg Ile Phe
130 135 140
Gln Gly Lys Leu Tyr Thr Pro Gly Asp Leu Ala Gln His Leu Gly Val
145 150 155 160
Ser Ser Ser Ala Leu Gln Gly Ser Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr
165 170 175
Ala Ser Gln Leu Gln Gly Lys Val Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu
180 185 190
Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala Glu Ala Arg Thr Thr Ser Ala Lys
195 200 205
Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Glu
210 215 220
Val Ser Gly Met Ser Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn
225 230 235 240
Met Gly Lys Gly Asp Lys Gln Trp Ala Ala Gln Ala Phe Val Tyr Ser
245 250 255
His Ile Gly Arg Val Trp Gly Asp Asp Gly Val Ser Phe Thr Gln His
260 265 270
Ile Ala Glu Lys Val Asn Leu Ser Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Ala
275 280 285
Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Arg Ile Arg Pro Phe
290 295
<210> 17
<211> 972
<212> DNA
<213> 绿针假单胞菌
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(84)
<400> 17
atgtcccgtc tcactcgttt tgccctccgt acagccgtac tgcccctggc gctggccagc 60
cagatggcgt ccagccagga ggccgcggga ttcatttctc cggcttcctg gtacagcgcc 120
ttcaacgcta tcgcccaggt ggcgtgccat aactgctacg aaaaacagta cgccagcacc 180
ttcaccagtg tgctcgacag cgtgcgtacc ctggagctgg atttctggga ccagcgcgat 240
gcggtcaccg gtggttcggc cggtcactgg ttcgtgcggc acaaccccgg cacgctgttc 300
cagtccggca atgacaacaa ctgcaccggc gacggcaaag gcaccaacga tctcgaggcc 360
tgcctcaacg acatcaggct ctggagcgac agccatcccg ggcacttccc gattaccctg 420
atcctcgaca agaagcaggg ctggtcgaag gaaagctccg ggcgtacgcc gaaagacttc 480
gatgatctgg tcagccggat tttccagggc aagctctata ccccgggcga cctggcccag 540
cacctgggtg tcagcagcgg tgccttgcag ggctcgctcg agggcaagtc ctggccgacc 600
gctagccaac tgcagggcaa ggtgctgctg gtgctcaacc actcggagaa ccagaagctc 660
tcgcaatacg ccgaagcccg gaccaccagc gccaaggtgt tcatttcacc ggtcaccaac 720
ggccagaacg atgtcagtgg cgaggtcagc ggcatgtcca ggacgtcgtc cggttacgtg 780
gccatgaaca acatgggcaa gggcgacaag cagtgggccg cacaagcctt tgcctacagc 840
cacatcggtc gggtgtgggg tgatgacggc gtgtcattca cccagcacat cgccgagaag 900
gtcaatctgt cggcgtatta caagttcgcc gaagccaagg atggcaacgg ctatcgcatc 960
cggccgttct aa 972
<210> 18
<211> 323
<212> PRT
<213> 绿针假单胞菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(28)
<400> 18
Met Ser Arg Leu Thr Arg Phe Ala Leu Arg Thr Ala Val Leu Pro Leu
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ser Gln Met Ala Ser Ser Gln Glu Ala Ala Gly Phe Ile
20 25 30
Ser Pro Ala Ser Trp Tyr Ser Ala Phe Asn Ala Ile Ala Gln Val Ala
35 40 45
Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln Tyr Ala Ser Thr Phe Thr Ser Val
50 55 60
Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp
65 70 75 80
Ala Val Thr Gly Gly Ser Ala Gly His Trp Phe Val Arg His Asn Pro
85 90 95
Gly Thr Leu Phe Gln Ser Gly Asn Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Asn Asp Leu Glu Ala Cys Leu Asn Asp Ile Arg Leu Trp
115 120 125
Ser Asp Ser His Pro Gly His Phe Pro Ile Thr Leu Ile Leu Asp Lys
130 135 140
Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe
145 150 155 160
Asp Asp Leu Val Ser Arg Ile Phe Gln Gly Lys Leu Tyr Thr Pro Gly
165 170 175
Asp Leu Ala Gln His Leu Gly Val Ser Ser Gly Ala Leu Gln Gly Ser
180 185 190
Leu Glu Gly Lys Ser Trp Pro Thr Ala Ser Gln Leu Gln Gly Lys Val
195 200 205
Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala
210 215 220
Glu Ala Arg Thr Thr Ser Ala Lys Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn
225 230 235 240
Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Glu Val Ser Gly Met Ser Arg Thr Ser
245 250 255
Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn Met Gly Lys Gly Asp Lys Gln Trp
260 265 270
Ala Ala Gln Ala Phe Ala Tyr Ser His Ile Gly Arg Val Trp Gly Asp
275 280 285
Asp Gly Val Ser Phe Thr Gln His Ile Ala Glu Lys Val Asn Leu Ser
290 295 300
Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Arg Ile
305 310 315 320
Arg Pro Phe
<210> 19
<211> 296
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 19
Ala Ala Gly Phe Ile Ser Pro Ala Ser Trp Tyr Ser Ala Phe Asn Ala
1 5 10 15
Ile Ala Gln Val Ala Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln Tyr Ala Ser
20 25 30
Thr Phe Thr Ser Val Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu Leu Asp Phe
35 40 45
Trp Asp Gln Arg Asp Ala Val Thr Gly Gly Ser Ala Gly His Trp Phe
50 55 60
Val Arg His Asn Pro Gly Thr Leu Phe Gln Ser Gly Asn Asp Asn Asn
65 70 75 80
Cys Thr Gly Asp Gly Lys Gly Thr Asn Asp Leu Glu Ala Cys Leu Asn
85 90 95
Asp Ile Arg Leu Trp Ser Asp Ser His Pro Gly His Phe Pro Ile Thr
100 105 110
Leu Ile Leu Asp Lys Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser Ser Gly Arg
115 120 125
Thr Pro Lys Asp Phe Asp Asp Leu Val Ser Arg Ile Phe Gln Gly Lys
130 135 140
Leu Tyr Thr Pro Gly Asp Leu Ala Gln His Leu Gly Val Ser Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Gln Gly Ser Leu Glu Gly Lys Ser Trp Pro Thr Ala Ser Gln
165 170 175
Leu Gln Gly Lys Val Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu Asn Gln Lys
180 185 190
Leu Ser Gln Tyr Ala Glu Ala Arg Thr Thr Ser Ala Lys Val Phe Ile
195 200 205
Ser Pro Val Thr Asn Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Glu Val Ser Gly
210 215 220
Met Ser Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn Met Gly Lys
225 230 235 240
Gly Asp Lys Gln Trp Ala Ala Gln Ala Phe Ala Tyr Ser His Ile Gly
245 250 255
Arg Val Trp Gly Asp Asp Gly Val Ser Phe Thr Gln His Ile Ala Glu
260 265 270
Lys Val Asn Leu Ser Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Ala Lys Asp Gly
275 280 285
Asn Gly Tyr Arg Ile Arg Pro Phe
290 295
<210> 20
<211> 969
<212> DNA
<213> Pseudomonas protegens
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(75)
<400> 20
atgactcatc tttcccgttt cgtcccccgc gccctggcgc tgtcggcact cttgctcagc 60
ccggcggcgt tcagccagga aagcccggcg ttcatcgccc cggctacctg gaataccccg 120
ttcaacggca tcgcccaggt ggcctgtcac aactgctacg agaagcaata cgcaagcacc 180
ttcagcagcg tgctcgacag tgtgcgcacc ctggaactgg acttctggga ccagcgcgat 240
gcggtgaccg gcggctcgcc ccggcactgg ttcgtgcggc acaaccccgg caccctgttc 300
cagtccggca acgacaacaa ttgcacgggc gatggcaccg gcaagaacga tctcgaagcc 360
tgcctcaacg acgtcaagaa ctggagcgaa aaccaccccg ggcactttcc catcacggtg 420
atcctcgaca agaagcaggg ctggtcgaag gaaagctcgg ggcgcacgcc caaggatttc 480
gatgagctgg tgacccgggt cttccagggc aagctctata ccccccagga cctggccacg 540
cacatcggca gcagcgcggg cgccttgcag ggcaacctca agggcaagtc ctggcccacc 600
gccagccagc ttcagggcaa ggtcctgctg gtgctcaacc actcggaaaa ccagaagctc 660
tcgcagtacg ccgaggcccg gacttccagc gccaaggtgt tcatctcgcc ggtgaccaat 720
ggccagaacg atgtcagcgg caaggtcagt ggcatgtccg gccagtcgtc cggctacgtg 780
gccatgaaca acatgtccaa gggcgacaag aagtgggcgg cccaggcctt tgcctacagc 840
catgtgggcc gggtctgggg cgatgacggg gtgtcgttcg cccagcacat cagcgagaag 900
gtcaacctct cggcctacta caagttcgcc gagcagaact ccggcggcta tcgcatccgg 960
ccgttctga 969
<210> 21
<211> 322
<212> PRT
<213> Pseudomonas protegens
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(25)
<400> 21
Met Thr His Leu Ser Arg Phe Val Pro Arg Ala Leu Ala Leu Ser Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ser Pro Ala Ala Phe Ser Gln Glu Ser Pro Ala Phe Ile
20 25 30
Ala Pro Ala Thr Trp Asn Thr Pro Phe Asn Gly Ile Ala Gln Val Ala
35 40 45
Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln Tyr Ala Ser Thr Phe Ser Ser Val
50 55 60
Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp
65 70 75 80
Ala Val Thr Gly Gly Ser Pro Arg His Trp Phe Val Arg His Asn Pro
85 90 95
Gly Thr Leu Phe Gln Ser Gly Asn Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly
100 105 110
Thr Gly Lys Asn Asp Leu Glu Ala Cys Leu Asn Asp Val Lys Asn Trp
115 120 125
Ser Glu Asn His Pro Gly His Phe Pro Ile Thr Val Ile Leu Asp Lys
130 135 140
Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe
145 150 155 160
Asp Glu Leu Val Thr Arg Val Phe Gln Gly Lys Leu Tyr Thr Pro Gln
165 170 175
Asp Leu Ala Thr His Ile Gly Ser Ser Ala Gly Ala Leu Gln Gly Asn
180 185 190
Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr Ala Ser Gln Leu Gln Gly Lys Val
195 200 205
Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala
210 215 220
Glu Ala Arg Thr Ser Ser Ala Lys Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn
225 230 235 240
Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Lys Val Ser Gly Met Ser Gly Gln Ser
245 250 255
Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn Met Ser Lys Gly Asp Lys Lys Trp
260 265 270
Ala Ala Gln Ala Phe Ala Tyr Ser His Val Gly Arg Val Trp Gly Asp
275 280 285
Asp Gly Val Ser Phe Ala Gln His Ile Ser Glu Lys Val Asn Leu Ser
290 295 300
Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Gln Asn Ser Gly Gly Tyr Arg Ile Arg
305 310 315 320
Pro Phe
<210> 22
<211> 298
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 22
Ala Gln Glu Ser Pro Ala Phe Ile Ala Pro Ala Thr Trp Asn Thr Pro
1 5 10 15
Phe Asn Gly Ile Ala Gln Val Ala Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln
20 25 30
Tyr Ala Ser Thr Phe Ser Ser Val Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu
35 40 45
Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp Ala Val Thr Gly Gly Ser Pro Arg
50 55 60
His Trp Phe Val Arg His Asn Pro Gly Thr Leu Phe Gln Ser Gly Asn
65 70 75 80
Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly Thr Gly Lys Asn Asp Leu Glu Ala
85 90 95
Cys Leu Asn Asp Val Lys Asn Trp Ser Glu Asn His Pro Gly His Phe
100 105 110
Pro Ile Thr Val Ile Leu Asp Lys Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser
115 120 125
Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe Asp Glu Leu Val Thr Arg Val Phe
130 135 140
Gln Gly Lys Leu Tyr Thr Pro Gln Asp Leu Ala Thr His Ile Gly Ser
145 150 155 160
Ser Ala Gly Ala Leu Gln Gly Asn Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr
165 170 175
Ala Ser Gln Leu Gln Gly Lys Val Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu
180 185 190
Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala Glu Ala Arg Thr Ser Ser Ala Lys
195 200 205
Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Lys
210 215 220
Val Ser Gly Met Ser Gly Gln Ser Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn
225 230 235 240
Met Ser Lys Gly Asp Lys Lys Trp Ala Ala Gln Ala Phe Ala Tyr Ser
245 250 255
His Val Gly Arg Val Trp Gly Asp Asp Gly Val Ser Phe Ala Gln His
260 265 270
Ile Ser Glu Lys Val Asn Leu Ser Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Gln
275 280 285
Asn Ser Gly Gly Tyr Arg Ile Arg Pro Phe
290 295
<210> 23
<211> 969
<212> DNA
<213> Pseudomonas protegens
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(75)
<400> 23
atgactcatc tttcccgttt cgtcccccgc gccctggcgc tgtcggcact cctgctcagc 60
ccggcggcgt tcagccagga aagcccggcg ttcatcgccc cggctacctg gaataccccg 120
ttcaacggca tcgcccaggt ggcctgtcac aactgctacg agaagcagta cgcaagcacc 180
tttagcagcg tgctcgacag tgtgcgcacc ctggaactgg acttctggga ccagcgcgat 240
gcggtgaccg gcggctcgcc ccggcactgg ttcgtgcggc acaaccccgg caccctgttc 300
cagtccggca acgacaacaa ttgcacgggc gatggcaccg gcaagaacga tctcgaagcc 360
tgcctcaacg acgtgaagaa ctggagcgac aaccaccccg ggcactttcc cattacggtg 420
atcctcgaca agaagcaggg ctggtcgaag gaaagctcgg ggcgcacgcc caaggatttc 480
gatgagctgg tgacccgggt cttccagggc aagctctata ccccccagga cctggccacg 540
cacatcggca gcagcgcggg cgccttgcag ggcaacctca agggcaagtc ctggcccacc 600
gccagccagc ttcagggcaa ggtcctgctg gtgctcaacc actcggaaaa ccagaagctc 660
tcgcagtacg ccgaggcccg gacttccagc gccaaggtgt tcatctcgcc ggtgaccaat 720
ggccagaacg atgtcagtgg caaggtcagt ggcatgtccg gccagtcgtc cggctacgtg 780
gccatgaaca acatgtccaa gggcgacaag aagtgggcgg cccaggcctt tgcctacagc 840
catgtgggcc gggtctgggg cgatgacggg gtgtcgttcg cccagcacat cagcgagaag 900
gtcaacctct cggcctacta caagttcgcc gagcagaacg ccggcggcta tcgcatccgg 960
ccgttctga 969
<210> 24
<211> 322
<212> PRT
<213> Pseudomonas protegens
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(25)
<400> 24
Met Thr His Leu Ser Arg Phe Val Pro Arg Ala Leu Ala Leu Ser Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ser Pro Ala Ala Phe Ser Gln Glu Ser Pro Ala Phe Ile
20 25 30
Ala Pro Ala Thr Trp Asn Thr Pro Phe Asn Gly Ile Ala Gln Val Ala
35 40 45
Cys His Asn Cys Tyr Glu Lys Gln Tyr Ala Ser Thr Phe Ser Ser Val
50 55 60
Leu Asp Ser Val Arg Thr Leu Glu Leu Asp Phe Trp Asp Gln Arg Asp
65 70 75 80
Ala Val Thr Gly Gly Ser Pro Arg His Trp Phe Val Arg His Asn Pro
85 90 95
Gly Thr Leu Phe Gln Ser Gly Asn Asp Asn Asn Cys Thr Gly Asp Gly
100 105 110
Thr Gly Lys Asn Asp Leu Glu Ala Cys Leu Asn Asp Val Lys Asn Trp
115 120 125
Ser Asp Asn His Pro Gly His Phe Pro Ile Thr Val Ile Leu Asp Lys
130 135 140
Lys Gln Gly Trp Ser Lys Glu Ser Ser Gly Arg Thr Pro Lys Asp Phe
145 150 155 160
Asp Glu Leu Val Thr Arg Val Phe Gln Gly Lys Leu Tyr Thr Pro Gln
165 170 175
Asp Leu Ala Thr His Ile Gly Ser Ser Ala Gly Ala Leu Gln Gly Asn
180 185 190
Leu Lys Gly Lys Ser Trp Pro Thr Ala Ser Gln Leu Gln Gly Lys Val
195 200 205
Leu Leu Val Leu Asn His Ser Glu Asn Gln Lys Leu Ser Gln Tyr Ala
210 215 220
Glu Ala Arg Thr Ser Ser Ala Lys Val Phe Ile Ser Pro Val Thr Asn
225 230 235 240
Gly Gln Asn Asp Val Ser Gly Lys Val Ser Gly Met Ser Gly Gln Ser
245 250 255
Ser Gly Tyr Val Ala Met Asn Asn Met Ser Lys Gly Asp Lys Lys Trp
260 265 270
Ala Ala Gln Ala Phe Ala Tyr Ser His Val Gly Arg Val Trp Gly Asp
275 280 285
Asp Gly Val Ser Phe Ala Gln His Ile Ser Glu Lys Val Asn Leu Ser
290 295 300
Ala Tyr Tyr Lys Phe Ala Glu Gln Asn Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Arg
305 310 315 320
Pro Phe
<210> 25
<211> 837
<212> DNA
<213> 芽孢杆菌属物种
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(99)
<400> 25
atgaaacatc atcgttttcg aacgaattta ttatcggctc tttcagtaag ttcaattgtc 60
atcacctcaa tcatcggctc cactcaaacc acgtacgctt ggtcggccga tgctccgcat 120
gatcccaatc agagcacaca cctgtttatc gtgaacggtg ctgtcaatct ggttgccaac 180
aatacggacc cgcagatcaa caagcccacc gcgctgttgc aacagtggcg ttctcaatgg 240
gagcaagggt tgtacgatgc cgatcatctg aacccttact atgactccgg cacttttatg 300
tcccattttt acgatccgga cacgcaaacg aactacgcag ggttgtcgta cccgacagca 360
cgccaaacag gggcaaaata ttttacgatt gcctcgaatg actatcaagc aggggatatg 420
tcggatgcat tttacaattt aggcttgtcc ctgcactatt tcacagatgt cacgatgccg 480
cttcatgccg gaaatatttc caatctcgat cacgaagcac ccggctacca tgcgaaactc 540
gaagcgtatg ccgaatcgat tcaaaatcaa gtgacgcctc cgactgccgg actctacaat 600
tgggtctctc cgaatgatcc ggaactctgg attcatcaag cggctgtgca agcgaaatcc 660
gtcttgccgc aagtatggaa cagtgatatc acgagttggt tctgggaggc ggctttcagc 720
aattactact cgcaacaatg gcacaacgca gtaaccactc cggtcctgaa tcagttgtcg 780
caagcggagg cagagaccgc cggatatatt gatctgttct tccgtgtaaa cggttag 837
<210> 26
<211> 278
<212> PRT
<213> 芽孢杆菌属物种
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(33)
<400> 26
Met Lys His His Arg Phe Arg Thr Asn Leu Leu Ser Ala Leu Ser Val
1 5 10 15
Ser Ser Ile Val Ile Thr Ser Ile Ile Gly Ser Thr Gln Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Trp Ser Ala Asp Ala Pro His Asp Pro Asn Gln Ser Thr His Leu
35 40 45
Phe Ile Val Asn Gly Ala Val Asn Leu Val Ala Asn Asn Thr Asp Pro
50 55 60
Gln Ile Asn Lys Pro Thr Ala Leu Leu Gln Gln Trp Arg Ser Gln Trp
65 70 75 80
Glu Gln Gly Leu Tyr Asp Ala Asp His Leu Asn Pro Tyr Tyr Asp Ser
85 90 95
Gly Thr Phe Met Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Thr Gln Thr Asn Tyr
100 105 110
Ala Gly Leu Ser Tyr Pro Thr Ala Arg Gln Thr Gly Ala Lys Tyr Phe
115 120 125
Thr Ile Ala Ser Asn Asp Tyr Gln Ala Gly Asp Met Ser Asp Ala Phe
130 135 140
Tyr Asn Leu Gly Leu Ser Leu His Tyr Phe Thr Asp Val Thr Met Pro
145 150 155 160
Leu His Ala Gly Asn Ile Ser Asn Leu Asp His Glu Ala Pro Gly Tyr
165 170 175
His Ala Lys Leu Glu Ala Tyr Ala Glu Ser Ile Gln Asn Gln Val Thr
180 185 190
Pro Pro Thr Ala Gly Leu Tyr Asn Trp Val Ser Pro Asn Asp Pro Glu
195 200 205
Leu Trp Ile His Gln Ala Ala Val Gln Ala Lys Ser Val Leu Pro Gln
210 215 220
Val Trp Asn Ser Asp Ile Thr Ser Trp Phe Trp Glu Ala Ala Phe Ser
225 230 235 240
Asn Tyr Tyr Ser Gln Gln Trp His Asn Ala Val Thr Thr Pro Val Leu
245 250 255
Asn Gln Leu Ser Gln Ala Glu Ala Glu Thr Ala Gly Tyr Ile Asp Leu
260 265 270
Phe Phe Arg Val Asn Gly
275
<210> 27
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 27
Ala Trp Ser Ala Asp Ala Pro His Asp Pro Asn Gln Ser Thr His Leu
1 5 10 15
Phe Ile Val Asn Gly Ala Val Asn Leu Val Ala Asn Asn Thr Asp Pro
20 25 30
Gln Ile Asn Lys Pro Thr Ala Leu Leu Gln Gln Trp Arg Ser Gln Trp
35 40 45
Glu Gln Gly Leu Tyr Asp Ala Asp His Leu Asn Pro Tyr Tyr Asp Ser
50 55 60
Gly Thr Phe Met Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Thr Gln Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Ala Gly Leu Ser Tyr Pro Thr Ala Arg Gln Thr Gly Ala Lys Tyr Phe
85 90 95
Thr Ile Ala Ser Asn Asp Tyr Gln Ala Gly Asp Met Ser Asp Ala Phe
100 105 110
Tyr Asn Leu Gly Leu Ser Leu His Tyr Phe Thr Asp Val Thr Met Pro
115 120 125
Leu His Ala Gly Asn Ile Ser Asn Leu Asp His Glu Ala Pro Gly Tyr
130 135 140
His Ala Lys Leu Glu Ala Tyr Ala Glu Ser Ile Gln Asn Gln Val Thr
145 150 155 160
Pro Pro Thr Ala Gly Leu Tyr Asn Trp Val Ser Pro Asn Asp Pro Glu
165 170 175
Leu Trp Ile His Gln Ala Ala Val Gln Ala Lys Ser Val Leu Pro Gln
180 185 190
Val Trp Asn Ser Asp Ile Thr Ser Trp Phe Trp Glu Ala Ala Phe Ser
195 200 205
Asn Tyr Tyr Ser Gln Gln Trp His Asn Ala Val Thr Thr Pro Val Leu
210 215 220
Asn Gln Leu Ser Gln Ala Glu Ala Glu Thr Ala Gly Tyr Ile Asp Leu
225 230 235 240
Phe Phe Arg Val Asn Gly
245
<210> 28
<211> 852
<212> DNA
<213> 苏云金芽孢杆菌
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(72)
<400> 28
atgaaaaaga aagtacttgc tttagcagca gctattacat tagtagctcc tttacaaagc 60
gttgcatttg ctcatgaaaa tgatggggga agtaaaataa aaatagttca ccgctggtct 120
gctgaagata aacataaaga aggcgtaaat tctcatttat ggattgtaaa ccgtgcgatt 180
gatattatgt ctcgcaatac aacacttgta aaacaagatc gagttgcaca attaaatgaa 240
tggcgtacag agttagagaa cggtatttat gctgctgact atgaaaatcc ttattatgat 300
aatagcacat ttgcttcaca tttctatgat ccagacaatg gaaaaacata tattccattt 360
gcaaagcagg caaaagaaac tggagctaaa tattttaaat tagcgggtga atcatacaaa 420
aataaagata tgaaacaagc attcttctat ttaggattat ctcttcatta tttaggagat 480
gtaaatcaac cgatgcatgc ggcaaacttt acaaatcttt cgtatccaca aggattccat 540
tctaaatatg aaaactttgt agatacgata aaagataatt ataaagtaac ggatggaaat 600
ggatattgga attggaaagg tacaaatcca gaagattgga tccatggagc ggcagtagtg 660
gcgaaacaag attactctgg aattgtaaat gataatacga aagattggtt cgtaaaagca 720
gctgtgtcac aagaatatgc agataaatgg cgtgctgaag ttacaccgat gacaggtaag 780
cgattaatgg atgcacaacg tgttactgct ggatacattc agctttggtt tgatacgtac 840
ggagatcgtt aa 852
<210> 29
<211> 283
<212> PRT
<213> 苏云金芽孢杆菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(24)
<220>
<221> 前肽
<222> (25)..(38)
<400> 29
Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Ala Ile Thr Leu Val Ala
1 5 10 15
Pro Leu Gln Ser Val Ala Phe Ala His Glu Asn Asp Gly Gly Ser Lys
20 25 30
Ile Lys Ile Val His Arg Trp Ser Ala Glu Asp Lys His Lys Glu Gly
35 40 45
Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser
50 55 60
Arg Asn Thr Thr Leu Val Lys Gln Asp Arg Val Ala Gln Leu Asn Glu
65 70 75 80
Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn
85 90 95
Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp
100 105 110
Asn Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Phe Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly
115 120 125
Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly Glu Ser Tyr Lys Asn Lys Asp Met
130 135 140
Lys Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp
145 150 155 160
Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro
165 170 175
Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asp
180 185 190
Asn Tyr Lys Val Thr Asp Gly Asn Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Thr
195 200 205
Asn Pro Glu Asp Trp Ile His Gly Ala Ala Val Val Ala Lys Gln Asp
210 215 220
Tyr Ser Gly Ile Val Asn Asp Asn Thr Lys Asp Trp Phe Val Lys Ala
225 230 235 240
Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Pro
245 250 255
Met Thr Gly Lys Arg Leu Met Asp Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr
260 265 270
Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr Gly Asp Arg
275 280
<210> 30
<211> 852
<212> DNA
<213> 假蕈状芽孢杆菌
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(72)
<400> 30
atgaaaaaga aagtattagc cttagcagca gctattacat tagtagcacc attgcaaagt 60
gtagcgtttg cccatgaaaa tgagggcgga aataaggtaa gagtaattca atattggtct 120
gctgaagata aacatgcaga aggtgtaaac tcccatttat ggattgtcaa tcgtgcaatt 180
gatattatgt ctcgtaatac aacggttgta aaacaagatc aagttgcagt attaaatgaa 240
tggcgtacag agttagagaa tggtatatat gctgctgatt atgaaaaccc ttactatgat 300
aacagtacat ttgcttctca tttctacgag cctgatacag ggaagacata tatacctttt 360
gctaagcagg caaaagaaac tggggctaaa tattttaaac ttgctggtga agcttatcaa 420
aagcaagata tgaaacaagc attcttctat ttgggtttat cccttcatta cttaggcgat 480
gtcaatcaac cgatgcatgc agcaaacttt acaaatcttt cttatccaca aggtttccac 540
tccaaatatg aaaattttgt agatacaata aaaaataatt ataaagtggc tgatggaaat 600
ggatattgga attggaaagg agtaaatcct gaagactgga ttcatggagc ggctgtagct 660
gctaagcaag attatgctgg tattgtaaat ggcactacaa aagattggtt cgtaagagcg 720
gcagtttcac aagaatatgc agataaatgg cgtgcagaag ttacactaac aacaggaaaa 780
cgtttagtag aagcacagcg tgtcacagcg ggatatattc agctttggtt tgatacgtat 840
gtaaatcgct ag 852
<210> 31
<211> 283
<212> PRT
<213> 假蕈状芽孢杆菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(24)
<220>
<221> 前肽
<222> (25)..(38)
<400> 31
Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Ala Ile Thr Leu Val Ala
1 5 10 15
Pro Leu Gln Ser Val Ala Phe Ala His Glu Asn Glu Gly Gly Asn Lys
20 25 30
Val Arg Val Ile Gln Tyr Trp Ser Ala Glu Asp Lys His Ala Glu Gly
35 40 45
Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser
50 55 60
Arg Asn Thr Thr Val Val Lys Gln Asp Gln Val Ala Val Leu Asn Glu
65 70 75 80
Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn
85 90 95
Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe Ala Ser His Phe Tyr Glu Pro Asp
100 105 110
Thr Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Phe Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly
115 120 125
Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly Glu Ala Tyr Gln Lys Gln Asp Met
130 135 140
Lys Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp
145 150 155 160
Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro
165 170 175
Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asn
180 185 190
Asn Tyr Lys Val Ala Asp Gly Asn Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Val
195 200 205
Asn Pro Glu Asp Trp Ile His Gly Ala Ala Val Ala Ala Lys Gln Asp
210 215 220
Tyr Ala Gly Ile Val Asn Gly Thr Thr Lys Asp Trp Phe Val Arg Ala
225 230 235 240
Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Leu
245 250 255
Thr Thr Gly Lys Arg Leu Val Glu Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr
260 265 270
Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr Val Asn Arg
275 280
<210> 32
<211> 260
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 32
Ala His Glu Asn Glu Gly Gly Asn Lys Val Arg Val Ile Gln Tyr Trp
1 5 10 15
Ser Ala Glu Asp Lys His Ala Glu Gly Val Asn Ser His Leu Trp Ile
20 25 30
Val Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser Arg Asn Thr Thr Val Val Lys
35 40 45
Gln Asp Gln Val Ala Val Leu Asn Glu Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn
50 55 60
Gly Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr
65 70 75 80
Phe Ala Ser His Phe Tyr Glu Pro Asp Thr Gly Lys Thr Tyr Ile Pro
85 90 95
Phe Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala
100 105 110
Gly Glu Ala Tyr Gln Lys Gln Asp Met Lys Gln Ala Phe Phe Tyr Leu
115 120 125
Gly Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp Val Asn Gln Pro Met His Ala
130 135 140
Ala Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr
145 150 155 160
Glu Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asn Asn Tyr Lys Val Ala Asp Gly
165 170 175
Asn Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Val Asn Pro Glu Asp Trp Ile His
180 185 190
Gly Ala Ala Val Ala Ala Lys Gln Asp Tyr Ala Gly Ile Val Asn Gly
195 200 205
Thr Thr Lys Asp Trp Phe Val Arg Ala Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala
210 215 220
Asp Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Leu Thr Thr Gly Lys Arg Leu Val
225 230 235 240
Glu Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr
245 250 255
Tyr Val Asn Arg
260
<210> 33
<211> 852
<212> DNA
<213> 蕈状芽孢杆菌
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(72)
<400> 33
atgaaaaaga aagtattagc cttagcagca gctattacat tagtagcacc attgcaaagt 60
gtagcgtttg cccatgaaaa tgagggcgga aataaggtaa gagtaattca atattggtct 120
gctgaagata aacatgcaga aggtgtaaac tcccatttat ggattgtcaa tcgtgcaatt 180
gatattatgt ctcgtaatac aacggttgta aaacaagatc aagttgcatt attaaatgaa 240
tggcgtacag agttagagaa tggtatatat gctgctgatt atgaaaaccc ttattatgat 300
aacagtacat ttgcttctca tttctacgat cctgacacag ggaagacata tatacctttt 360
gctaagcagg caaaagaaac tggggctaaa tattttaaac ttgctggtga agcctatcaa 420
aagcaagaaa taaaacaagc attcttctat ttaggcttat cgcttcatta cttaggagat 480
gtaaatcaac caatgcatgc agcaaacttt acaaatcttt cttatccaca aggtttccac 540
tccaaatatg aaaattttgt agatacaata aaaaataatt ataaagtggc tgatggaaat 600
ggatattgga attggaaagg agtaaatcct gaagactgga ttcatggagc ggctgtagct 660
gctaagcaag attatgctgg tattgtaaat ggcactacaa aagattggtt cgtaagagcg 720
gcagtttcac aagaatatgc agataaatgg cgtgcagaag ttacactaac aacaggaaaa 780
cgtttagtag aagcacagcg tgtcacagcg ggatatattc agctttggtt tgatacatat 840
gtaaatcgct ag 852
<210> 34
<211> 283
<212> PRT
<213> 蕈状芽孢杆菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(24)
<400> 34
Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Ala Ile Thr Leu Val Ala
1 5 10 15
Pro Leu Gln Ser Val Ala Phe Ala His Glu Asn Glu Gly Gly Asn Lys
20 25 30
Val Arg Val Ile Gln Tyr Trp Ser Ala Glu Asp Lys His Ala Glu Gly
35 40 45
Val Asn Ser His Leu Trp Ile Val Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser
50 55 60
Arg Asn Thr Thr Val Val Lys Gln Asp Gln Val Ala Leu Leu Asn Glu
65 70 75 80
Trp Arg Thr Glu Leu Glu Asn Gly Ile Tyr Ala Ala Asp Tyr Glu Asn
85 90 95
Pro Tyr Tyr Asp Asn Ser Thr Phe Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp
100 105 110
Thr Gly Lys Thr Tyr Ile Pro Phe Ala Lys Gln Ala Lys Glu Thr Gly
115 120 125
Ala Lys Tyr Phe Lys Leu Ala Gly Glu Ala Tyr Gln Lys Gln Glu Ile
130 135 140
Lys Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp
145 150 155 160
Val Asn Gln Pro Met His Ala Ala Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro
165 170 175
Gln Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asn
180 185 190
Asn Tyr Lys Val Ala Asp Gly Asn Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Val
195 200 205
Asn Pro Glu Asp Trp Ile His Gly Ala Ala Val Ala Ala Lys Gln Asp
210 215 220
Tyr Ala Gly Ile Val Asn Gly Thr Thr Lys Asp Trp Phe Val Arg Ala
225 230 235 240
Ala Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Leu
245 250 255
Thr Thr Gly Lys Arg Leu Val Glu Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr
260 265 270
Ile Gln Leu Trp Phe Asp Thr Tyr Val Asn Arg
275 280
<210> 35
<211> 870
<212> DNA
<213> 英诺克李斯特菌
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(81)
<400> 35
atgaaattca aaaaggtagt tctaggtatg tgtttgactg caagtgttct agtctttccg 60
gtaacgataa aagcaagtgc ctgttgcgat gaatatttac aagcacccgc agctccgcat 120
gatatcgaca gtaaattacc acataaactt agttggtccg cggataaccc gacaaatact 180
gacgtaaata cacactattg gctttttaaa caagctgaaa aaatactagc taaagatgta 240
aatcatatac gagctaattt aatgaatgag cttaaaaatt tcgataaaca aattgctcaa 300
ggtatatatg atgcggatca taaaaatcca tattatgata ctagtacatt tttatctcat 360
ttttataatc ctgatagaga taatacttat ttgccgggtt ttgctaatgc gaaaataact 420
ggagccaagt atttcaatca atcggtggct gattatcgag aaggtaaatt tgacacagca 480
ttttataaat taggtctagc aatccattat tatacggata ttagtcaacc tatgcacgcc 540
aataatttta ccgcaatatc atacccacca ggctaccact gcgcatatga aaattatgtg 600
gatactatta aacacaatta tcaagcaaca gaagacatgg tagtgaaaag attttgctca 660
gatgacgtga aagtctggct ctatgaaaat gcgaaaagag caaaagccga ctaccctaaa 720
atagtcaatg caaaaactaa aaaatcatat ttagtaggaa attccaaatg gaaaaaggat 780
acagtggaac ctactggagc tagactaaga gattcacagc aaactttggc aggcttttta 840
gaattttggt ccaaaaaaac aaatgaataa 870
<210> 36
<211> 289
<212> PRT
<213> 英诺克李斯特菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(27)
<400> 36
Met Lys Phe Lys Lys Val Val Leu Gly Met Cys Leu Thr Ala Ser Val
1 5 10 15
Leu Val Phe Pro Val Thr Ile Lys Ala Ser Ala Cys Cys Asp Glu Tyr
20 25 30
Leu Gln Ala Pro Ala Ala Pro His Asp Ile Asp Ser Lys Leu Pro His
35 40 45
Lys Leu Ser Trp Ser Ala Asp Asn Pro Thr Asn Thr Asp Val Asn Thr
50 55 60
His Tyr Trp Leu Phe Lys Gln Ala Glu Lys Ile Leu Ala Lys Asp Val
65 70 75 80
Asn His Ile Arg Ala Asn Leu Met Asn Glu Leu Lys Asn Phe Asp Lys
85 90 95
Gln Ile Ala Gln Gly Ile Tyr Asp Ala Asp His Lys Asn Pro Tyr Tyr
100 105 110
Asp Thr Ser Thr Phe Leu Ser His Phe Tyr Asn Pro Asp Arg Asp Asn
115 120 125
Thr Tyr Leu Pro Gly Phe Ala Asn Ala Lys Ile Thr Gly Ala Lys Tyr
130 135 140
Phe Asn Gln Ser Val Ala Asp Tyr Arg Glu Gly Lys Phe Asp Thr Ala
145 150 155 160
Phe Tyr Lys Leu Gly Leu Ala Ile His Tyr Tyr Thr Asp Ile Ser Gln
165 170 175
Pro Met His Ala Asn Asn Phe Thr Ala Ile Ser Tyr Pro Pro Gly Tyr
180 185 190
His Cys Ala Tyr Glu Asn Tyr Val Asp Thr Ile Lys His Asn Tyr Gln
195 200 205
Ala Thr Glu Asp Met Val Val Lys Arg Phe Cys Ser Asp Asp Val Lys
210 215 220
Val Trp Leu Tyr Glu Asn Ala Lys Arg Ala Lys Ala Asp Tyr Pro Lys
225 230 235 240
Ile Val Asn Ala Lys Thr Lys Lys Ser Tyr Leu Val Gly Asn Ser Lys
245 250 255
Trp Lys Lys Asp Thr Val Glu Pro Thr Gly Ala Arg Leu Arg Asp Ser
260 265 270
Gln Gln Thr Leu Ala Gly Phe Leu Glu Phe Trp Ser Lys Lys Thr Asn
275 280 285
Glu
<210> 37
<211> 263
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 37
Ala Cys Cys Asp Glu Tyr Leu Gln Ala Pro Ala Ala Pro His Asp Ile
1 5 10 15
Asp Ser Lys Leu Pro His Lys Leu Ser Trp Ser Ala Asp Asn Pro Thr
20 25 30
Asn Thr Asp Val Asn Thr His Tyr Trp Leu Phe Lys Gln Ala Glu Lys
35 40 45
Ile Leu Ala Lys Asp Val Asn His Ile Arg Ala Asn Leu Met Asn Glu
50 55 60
Leu Lys Asn Phe Asp Lys Gln Ile Ala Gln Gly Ile Tyr Asp Ala Asp
65 70 75 80
His Lys Asn Pro Tyr Tyr Asp Thr Ser Thr Phe Leu Ser His Phe Tyr
85 90 95
Asn Pro Asp Arg Asp Asn Thr Tyr Leu Pro Gly Phe Ala Asn Ala Lys
100 105 110
Ile Thr Gly Ala Lys Tyr Phe Asn Gln Ser Val Ala Asp Tyr Arg Glu
115 120 125
Gly Lys Phe Asp Thr Ala Phe Tyr Lys Leu Gly Leu Ala Ile His Tyr
130 135 140
Tyr Thr Asp Ile Ser Gln Pro Met His Ala Asn Asn Phe Thr Ala Ile
145 150 155 160
Ser Tyr Pro Pro Gly Tyr His Cys Ala Tyr Glu Asn Tyr Val Asp Thr
165 170 175
Ile Lys His Asn Tyr Gln Ala Thr Glu Asp Met Val Val Lys Arg Phe
180 185 190
Cys Ser Asp Asp Val Lys Val Trp Leu Tyr Glu Asn Ala Lys Arg Ala
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Pro Lys Ile Val Asn Ala Lys Thr Lys Lys Ser Tyr
210 215 220
Leu Val Gly Asn Ser Lys Trp Lys Lys Asp Thr Val Glu Pro Thr Gly
225 230 235 240
Ala Arg Leu Arg Asp Ser Gln Gln Thr Leu Ala Gly Phe Leu Glu Phe
245 250 255
Trp Ser Lys Lys Thr Asn Glu
260
<210> 38
<211> 849
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 38
atgaaaaaga aagtattagc actagcagct atggttgctt tagctgcgcc agttcaaagt 60
gtagtatttg cacaaacaaa taatagtgaa agtcctgcac cgattttaag atggtcagct 120
gaggataagc ataatgaggg gattaactct catttgtgga ttgtaaatcg tgcaattgac 180
atcatgtctc gtaatacaac gattgtgaat ccgaatgaaa ctgcattatt aaatgagtgg 240
cgtgctgatt tagaaaatgg tatttattct gctgattacg agaatcctta ttatgatgat 300
agtacatatg cttctcactt ttatgatccg gatactggaa caacatatat tccttttgcg 360
aaacatgcaa aagaaacagg cgcaaaatat tttaaccttg ctggtcaagc ataccaaaat 420
caagatatgc agcaagcatt cttctactta ggattatcgc ttcattattt aggagatgtg 480
aatcagccaa tgcatgcagc atcttttacg gatctttctt atccaatggg tttccattct 540
aaatacgaaa attttgttga tacaataaaa aataactata ttgtttcaga tagcaatgga 600
tattggaatt ggaaaggagc aaacccagaa gattggattg aaggagcagc ggtagcagct 660
aaacaagatt atcctggcgt tgtgaacgat acgacaaaag attggtttgt aaaagcagcc 720
gtatctcaag aatatgcaga taaatggcgt gcggaagtaa caccggtgac aggaaagcgt 780
ttaatggaag cgcagcgcgt tacagctggt tatattcatt tgtggtttga tacgtatgta 840
aatcgctaa 849
<210> 39
<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 变体
<400> 39
Met Lys Lys Lys Val Leu Ala Leu Ala Ala Met Val Ala Leu Ala Ala
1 5 10 15
Pro Val Gln Ser Val Val Phe Ala Gln Thr Asn Asn Ser Glu Ser Pro
20 25 30
Ala Pro Ile Leu Arg Trp Ser Ala Glu Asp Lys His Asn Glu Gly Ile
35 40 45
Asn Ser His Leu Trp Ile Val Asn Arg Ala Ile Asp Ile Met Ser Arg
50 55 60
Asn Thr Thr Ile Val Asn Pro Asn Glu Thr Ala Leu Leu Asn Glu Trp
65 70 75 80
Arg Ala Asp Leu Glu Asn Gly Ile Tyr Ser Ala Asp Tyr Glu Asn Pro
85 90 95
Tyr Tyr Asp Asp Ser Thr Tyr Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Thr
100 105 110
Gly Thr Thr Tyr Ile Pro Phe Ala Lys His Ala Lys Glu Thr Gly Ala
115 120 125
Lys Tyr Phe Asn Leu Ala Gly Gln Ala Tyr Gln Asn Gln Asp Met Gln
130 135 140
Gln Ala Phe Phe Tyr Leu Gly Leu Ser Leu His Tyr Leu Gly Asp Val
145 150 155 160
Asn Gln Pro Met His Ala Ala Ser Phe Thr Asp Leu Ser Tyr Pro Met
165 170 175
Gly Phe His Ser Lys Tyr Glu Asn Phe Val Asp Thr Ile Lys Asn Asn
180 185 190
Tyr Ile Val Ser Asp Ser Asn Gly Tyr Trp Asn Trp Lys Gly Ala Asn
195 200 205
Pro Glu Asp Trp Ile Glu Gly Ala Ala Val Ala Ala Lys Gln Asp Tyr
210 215 220
Pro Gly Val Val Asn Asp Thr Thr Lys Asp Trp Phe Val Lys Ala Ala
225 230 235 240
Val Ser Gln Glu Tyr Ala Asp Lys Trp Arg Ala Glu Val Thr Pro Val
245 250 255
Thr Gly Lys Arg Leu Met Glu Ala Gln Arg Val Thr Ala Gly Tyr Ile
260 265 270
His Leu Trp Phe Asp Thr Tyr Val Asn Arg
275 280
<210> 40
<211> 987
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 从环境样品中获得的DNA
<400> 40
atgaacaata agaagtttat tttgaagtta ttcatatgta gtatggtact tagcgccttt 60
gtatttgctt tcaatgataa gaaaaccgtt gcagctagct ctattaatgt gcttgaaaat 120
tggtctagat ggatgaaacc tataaatgat gacataccgt tagcacgaat ttcaattcca 180
ggaacacatg atagtggaac gttcaagttg caaaatccga taaagcaagt gtggggaatg 240
acgcaagaat atgattttcg ttatcaaatg gatcatggag ctagaatttt tgatataaga 300
gggcgtttaa cagatgataa tacgatagtt cttcatcatg ggccattata tctttatgta 360
acactgcacg aatttataaa cgaagcgaaa caatttttaa aagataatcc aagtgaaacg 420
attattatgt ctttaaaaaa agagtatgag gatatgaaag gggcggaaag ctcatttagt 480
agtacgtttg agaaaaatta ttttcgtgat ccaatctttt taaaaacaga agggaatata 540
aagcttggag atgctcgtgg gaaaattgta ttactaaaaa gatatagtgg tagtaatgaa 600
tctgggggat ataataattt ctattggcca gacaatgaga cgtttacctc aactataaat 660
caaaatgtaa atgtaacagt acaagataaa tataaagtga gttatgatga gaaaataaac 720
gctattaaag atacattaaa tgaaacgatt aacaatagtg aagatgttaa tcatctatat 780
attaatttta caagcttgtc ttctggtggt acagcatgga atagtccata ttattatgcg 840
tcctacataa atcctgaaat tgcaaattat atgaagcaaa agaatcctac gagagtgggc 900
tggataatac aagattatat aaatgaaaaa tggtcaccat tactttatca agaagttata 960
agagcgaata agtcacttgt aaaatag 987
<210> 41
<211> 328
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 从环境样品中获得的蛋白质
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(23)
<220>
<221> 域
<222> (56)..(195)
<223> 磷脂酰肌醇-特异性的磷脂酶C，X域
<400> 41
Met Asn Asn Lys Lys Phe Ile Leu Lys Leu Phe Ile Cys Ser Met Val
1 5 10 15
Leu Ser Ala Phe Val Phe Ala Phe Asn Asp Lys Lys Thr Val Ala Ala
20 25 30
Ser Ser Ile Asn Val Leu Glu Asn Trp Ser Arg Trp Met Lys Pro Ile
35 40 45
Asn Asp Asp Ile Pro Leu Ala Arg Ile Ser Ile Pro Gly Thr His Asp
50 55 60
Ser Gly Thr Phe Lys Leu Gln Asn Pro Ile Lys Gln Val Trp Gly Met
65 70 75 80
Thr Gln Glu Tyr Asp Phe Arg Tyr Gln Met Asp His Gly Ala Arg Ile
85 90 95
Phe Asp Ile Arg Gly Arg Leu Thr Asp Asp Asn Thr Ile Val Leu His
100 105 110
His Gly Pro Leu Tyr Leu Tyr Val Thr Leu His Glu Phe Ile Asn Glu
115 120 125
Ala Lys Gln Phe Leu Lys Asp Asn Pro Ser Glu Thr Ile Ile Met Ser
130 135 140
Leu Lys Lys Glu Tyr Glu Asp Met Lys Gly Ala Glu Ser Ser Phe Ser
145 150 155 160
Ser Thr Phe Glu Lys Asn Tyr Phe Arg Asp Pro Ile Phe Leu Lys Thr
165 170 175
Glu Gly Asn Ile Lys Leu Gly Asp Ala Arg Gly Lys Ile Val Leu Leu
180 185 190
Lys Arg Tyr Ser Gly Ser Asn Glu Ser Gly Gly Tyr Asn Asn Phe Tyr
195 200 205
Trp Pro Asp Asn Glu Thr Phe Thr Ser Thr Ile Asn Gln Asn Val Asn
210 215 220
Val Thr Val Gln Asp Lys Tyr Lys Val Ser Tyr Asp Glu Lys Ile Asn
225 230 235 240
Ala Ile Lys Asp Thr Leu Asn Glu Thr Ile Asn Asn Ser Glu Asp Val
245 250 255
Asn His Leu Tyr Ile Asn Phe Thr Ser Leu Ser Ser Gly Gly Thr Ala
260 265 270
Trp Asn Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ala Ser Tyr Ile Asn Pro Glu Ile Ala
275 280 285
Asn Tyr Met Lys Gln Lys Asn Pro Thr Arg Val Gly Trp Ile Ile Gln
290 295 300
Asp Tyr Ile Asn Glu Lys Trp Ser Pro Leu Leu Tyr Gln Glu Val Ile
305 310 315 320
Arg Ala Asn Lys Ser Leu Val Lys
325
<210> 42
<211> 1020
<212> DNA
<213> Amycolatopsis azurea
<400> 42
atgaaactcg tccccgcggt atccctcgtc ggcgtgatct tggcggcttc gctgtccgga 60
acggtcgcga acgccgacgc cgccaaggtc tcccacgtga caacggtcgg cgtccacaac 120
acctacgaga ccggtgccta cgactacctg gcgcgctcgc tggacgccgg tacctcgctg 180
atcgaactcg acgtctggcc gaacatcatc actcgcgagt ggaaagtgag tcactcgaac 240
ccgttgggga acaacaacaa ctgcgtcgcg gcgagtacgc cgtcgcagtt gtactccggt 300
gggcggaaca agaacctcga acactgcctc gatgacatcc gcgtctggct gggcgcgcat 360
ccggacagca aaccggtcac gctcaaactg gagatgaaga ccgggttcgc cgacaaccgc 420
ggcctcggcc cggacgaact cgacgcgtcc atccgggcac atctgggcag tacggtgttc 480
cggccggcgg acctgctcgg cgggtacgcg acgctcgacg acgcggccaa agcggacaac 540
tggccgtccc tggacgcgct gcggggcaag gtgatcatcg agatcatccc cggcacggtc 600
gaagagggaa atccgacgga cacgctcaag accgacgtcg agtacgggcg atatctgcgg 660
tcgctcaagg acgcgggccg cgtcggcgag gtgcagatct tcccgacggt gcacggcgcg 720
gcacccggcg acccgcgcac gaagtacgcc gacgccgggc tgcggccgtg gttcgtggtc 780
ttcgacggcg acgccaccgc gttcctgacg cagaccgggc ccggctggta cgacgacaac 840
cactactacg tggtgatgac cgacgcgcac aacgtcgcgc cggccatcga ctcccgtgcc 900
cccacggtgg accaggcgag cgcgcgagcg gccctgctgg cgaagaacca cgcttcggtg 960
ctgacctcgg attggacggg gctgaccacc gtgctgccgc aggtacttcc gcgcggctag 1020
<210> 43
<211> 339
<212> PRT
<213> Amycolatopsis azurea
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(27)
<400> 43
Met Lys Leu Val Pro Ala Val Ser Leu Val Gly Val Ile Leu Ala Ala
1 5 10 15
Ser Leu Ser Gly Thr Val Ala Asn Ala Asp Ala Ala Lys Val Ser His
20 25 30
Val Thr Thr Val Gly Val His Asn Thr Tyr Glu Thr Gly Ala Tyr Asp
35 40 45
Tyr Leu Ala Arg Ser Leu Asp Ala Gly Thr Ser Leu Ile Glu Leu Asp
50 55 60
Val Trp Pro Asn Ile Ile Thr Arg Glu Trp Lys Val Ser His Ser Asn
65 70 75 80
Pro Leu Gly Asn Asn Asn Asn Cys Val Ala Ala Ser Thr Pro Ser Gln
85 90 95
Leu Tyr Ser Gly Gly Arg Asn Lys Asn Leu Glu His Cys Leu Asp Asp
100 105 110
Ile Arg Val Trp Leu Gly Ala His Pro Asp Ser Lys Pro Val Thr Leu
115 120 125
Lys Leu Glu Met Lys Thr Gly Phe Ala Asp Asn Arg Gly Leu Gly Pro
130 135 140
Asp Glu Leu Asp Ala Ser Ile Arg Ala His Leu Gly Ser Thr Val Phe
145 150 155 160
Arg Pro Ala Asp Leu Leu Gly Gly Tyr Ala Thr Leu Asp Asp Ala Ala
165 170 175
Lys Ala Asp Asn Trp Pro Ser Leu Asp Ala Leu Arg Gly Lys Val Ile
180 185 190
Ile Glu Ile Ile Pro Gly Thr Val Glu Glu Gly Asn Pro Thr Asp Thr
195 200 205
Leu Lys Thr Asp Val Glu Tyr Gly Arg Tyr Leu Arg Ser Leu Lys Asp
210 215 220
Ala Gly Arg Val Gly Glu Val Gln Ile Phe Pro Thr Val His Gly Ala
225 230 235 240
Ala Pro Gly Asp Pro Arg Thr Lys Tyr Ala Asp Ala Gly Leu Arg Pro
245 250 255
Trp Phe Val Val Phe Asp Gly Asp Ala Thr Ala Phe Leu Thr Gln Thr
260 265 270
Gly Pro Gly Trp Tyr Asp Asp Asn His Tyr Tyr Val Val Met Thr Asp
275 280 285
Ala His Asn Val Ala Pro Ala Ile Asp Ser Arg Ala Pro Thr Val Asp
290 295 300
Gln Ala Ser Ala Arg Ala Ala Leu Leu Ala Lys Asn His Ala Ser Val
305 310 315 320
Leu Thr Ser Asp Trp Thr Gly Leu Thr Thr Val Leu Pro Gln Val Leu
325 330 335
Pro Arg Gly
<210> 44
<211> 771
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成基因
<400> 44
gaagatgacg cacaaccgcc tattacagca aaatggtcag cggaagatcc gcatcatgaa 60
gatacaaata cacatctgtg gattgttcgc catgccatgg agattatggc gaataacaaa 120
gatgttgtca aacctggcga agtcgaacaa ctgaaacaat ggcaatcaga tctggaacag 180
ggcatttatg atgcagatca tgcaaacccg tattatgata atgcaacatt tgcgagccat 240
ttttatgatc cggatacagg caaatcatat attccgctgg cagcacatgc aaaaacaaca 300
agcgttaaat actttaaaag agcaggcgaa gcgtatcaga aaggcgatca taaacaagcg 360
ttttacaatc tgggcctggc gctgcattat attggcgatc tgaatcaacc gatgcatgca 420
gcgaatttta caaatctgtc atatccgcaa ggctttcata gcaaatatga aaactatgtc 480
gatagcttta aagaagatta cgcggtcaaa gatggcgaag gctattggca ttggaaaggc 540
acaaatccgg aagattggct gcatggcaca gcagttgcag caaaaaaaga ttatccggat 600
atcgtcaacg atacaacgaa agcatggttt gttaaagcag cagtctcaaa tagctatgca 660
gcaaaatggc gtgcagcagt tgttccggca acaggcaaaa gactgacaga agcacaaaga 720
attctggcag gctatatgca actgtggttt gatacatatg tcaacaaata a 771
<210> 45
<211> 280
<212> PRT
<213> 澳门芽孢杆菌
<220>
<221> 信号
<222> (1)..(24)
<220>
<221> 前肽
<222> (25)..(35)
<400> 45
Met Lys Lys Thr Phe Val Ala Val Ala Thr Ala Ala Leu Leu Val Thr
1 5 10 15
Gly Phe Gln Gly Asn Ala Ser Ala Glu Asp Asp Ala Gln Pro Pro Ile
20 25 30
Thr Ala Lys Trp Ser Ala Glu Asp Pro His His Glu Asp Thr Asn Thr
35 40 45
His Leu Trp Ile Val Arg His Ala Met Glu Ile Met Ala Asn Asn Lys
50 55 60
Asp Val Val Lys Pro Gly Glu Val Glu Gln Leu Lys Gln Trp Gln Ser
65 70 75 80
Asp Leu Glu Gln Gly Ile Tyr Asp Ala Asp His Ala Asn Pro Tyr Tyr
85 90 95
Asp Asn Ala Thr Phe Ala Ser His Phe Tyr Asp Pro Asp Thr Gly Lys
100 105 110
Ser Tyr Ile Pro Leu Ala Ala His Ala Lys Thr Thr Ser Val Lys Tyr
115 120 125
Phe Lys Arg Ala Gly Glu Ala Tyr Gln Lys Gly Asp His Lys Gln Ala
130 135 140
Phe Tyr Asn Leu Gly Leu Ala Leu His Tyr Ile Gly Asp Leu Asn Gln
145 150 155 160
Pro Met His Ala Ala Asn Phe Thr Asn Leu Ser Tyr Pro Gln Gly Phe
165 170 175
His Ser Lys Tyr Glu Asn Tyr Val Asp Ser Phe Lys Glu Asp Tyr Ala
180 185 190
Val Lys Asp Gly Glu Gly Tyr Trp His Trp Lys Gly Thr Asn Pro Glu
195 200 205
Asp Trp Leu His Gly Thr Ala Val Ala Ala Lys Lys Asp Tyr Pro Asp
210 215 220
Ile Val Asn Asp Thr Thr Lys Ala Trp Phe Val Lys Ala Ala Val Ser
225 230 235 240
Asn Ser Tyr Ala Ala Lys Trp Arg Ala Ala Val Val Pro Ala Thr Gly
245 250 255
Lys Arg Leu Thr Glu Ala Gln Arg Ile Leu Ala Gly Tyr Met Gln Leu
260 265 270
Trp Phe Asp Thr Tyr Val Asn Lys
275 280
<210> 46
<211> 277
<212> PRT
<213> Talaromyces leycettanus
<400> 46
Ala Pro Ala Pro Val Leu Arg Arg Asp Val Ser Ser Ser Val Leu Ser
1 5 10 15
Glu Leu Asp Leu Phe Ala Gln Tyr Ser Ala Ala Ala Tyr Cys Ser Ser
20 25 30
Asn Ile Gly Ser Pro Gly Thr Lys Leu Thr Cys Ser Val Gly Asn Cys
35 40 45
Pro Arg Val Glu Ala Ala Asp Thr Glu Thr Leu Ile Glu Phe Asn Glu
50 55 60
Ser Ser Ser Phe Gly Asp Val Thr Gly Tyr Ile Ala Val Asp Arg Thr
65 70 75 80
Asn Ser Leu Leu Val Leu Ala Phe Arg Gly Ser Ser Thr Val Ser Asn
85 90 95
Trp Glu Ala Asp Leu Asp Phe Pro Leu Thr Asp Ala Ser Ser Leu Cys
100 105 110
Ser Gly Cys Glu Ile His Ser Gly Phe Trp Ala Ala Trp Gln Thr Val
115 120 125
Gln Ala Ser Ile Thr Ser Thr Leu Glu Ser Ala Ile Ala Ser Tyr Pro
130 135 140
Gly Tyr Thr Leu Val Phe Thr Gly His Ser Tyr Gly Ala Ala Leu Ala
145 150 155 160
Ala Ile Ala Ala Thr Thr Leu Arg Asn Ala Gly Tyr Thr Ile Gln Leu
165 170 175
Tyr Asp Tyr Gly Gln Pro Arg Leu Gly Asn Leu Ala Leu Ala Gln Tyr
180 185 190
Ile Thr Ala Gln Thr Gln Gly Ala Asn Tyr Arg Val Thr His Thr Asp
195 200 205
Asp Ile Val Pro Lys Leu Pro Pro Glu Leu Phe Gly Tyr His His Phe
210 215 220
Ser Pro Glu Tyr Trp Ile Thr Ser Gly Asp Asn Val Thr Val Thr Thr
225 230 235 240
Ser Asp Val Gln Val Val Thr Gly Ile Asp Ser Thr Ala Gly Asn Asp
245 250 255
Gly Thr Leu Leu Asp Ser Thr Ser Ala His Asp Trp Tyr Ile Val Tyr
260 265 270
Ile Asp Gly Cys Asp
275
<210> 47
<211> 277
<212> PRT
<213> Talaromyces leycettanus
<400> 47
Ala Pro Ala Pro Val Leu Arg Arg Asp Val Ser Ser Ser Val Leu Ser
1 5 10 15
Glu Leu Asp Leu Phe Ala Gln Tyr Ser Ala Ala Ala Tyr Cys Ser Ser
20 25 30
Asn Ile Gly Ser Pro Gly Thr Lys Leu Thr Cys Ser Val Gly Asn Cys
35 40 45
Pro Arg Val Glu Ala Ala Asp Thr Glu Thr Leu Ile Glu Phe Asn Glu
50 55 60
Ser Ser Ser Phe Gly Asp Val Thr Gly Tyr Ile Ala Val Asp Arg Thr
65 70 75 80
Asn Ser Leu Leu Val Leu Ala Phe Arg Gly Ser Ser Thr Val Ser Asn
85 90 95
Trp Glu Ala Asp Leu Asp Phe Pro Leu Thr Asp Ala Ser Ser Leu Cys
100 105 110
Ser Gly Cys Glu Ile His Ser Gly Phe Trp Ala Ala Trp Gln Thr Val
115 120 125
Gln Ala Ser Ile Thr Ser Thr Leu Glu Ser Ala Ile Ala Ser Tyr Pro
130 135 140
Gly Tyr Thr Leu Val Phe Thr Gly His Ser Tyr Gly Ala Ala Leu Ala
145 150 155 160
Ala Ile Ala Ala Thr Thr Leu Arg Asn Ala Gly Tyr Thr Ile Gln Leu
165 170 175
Tyr Asp Tyr Gly Gln Pro Arg Leu Gly Asn Leu Ala Leu Ala Gln Tyr
180 185 190
Ile Thr Ala Gln Thr Gln Gly Ala Asn Tyr Arg Val Thr His Thr Asp
195 200 205
Asp Ile Val Pro Lys Leu Pro Pro Glu Leu Phe Gly Tyr His His Phe
210 215 220
Ser Pro Glu Tyr Trp Ile Thr Ser Gly Asp Asn Val Thr Val Thr Thr
225 230 235 240
Ser Asp Val Gln Val Val Thr Gly Ile Asp Ser Thr Ala Gly Asn Asp
245 250 255
Gly Thr Leu Leu Asp Ser Thr Ser Ala His Asp Trp Tyr Ile Val Tyr
260 265 270
Ile Asp Gly Cys Asp
275
Claims (14)
1.一种组合物，该组合物包括多种具有磷脂酶C活性的多肽，其中
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自真菌的多肽；并且
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自细菌的多肽。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中一种或多种所述源自真菌的多肽具有针对磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、和磷脂酰肌醇(PI)的活性。
3.根据以上权利要求中任一项所述的组合物，其中一种或多种所述源自细菌的多肽具有针对磷脂酰肌醇(PI)的活性。
4.根据以上权利要求中任一项所述的组合物，其中一种或多种所述源自细菌的多肽具有针对磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)的活性。
5.根据以上权利要求中任一项所述的组合物，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自真菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1、SEQID NO:3和SEQ ID NO:5中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、(iii)SEQ IDNO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:5中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，该组合物包括具有磷脂酶C活性、源自细菌且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQID NO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42和SEQID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
7.根据以上权利要求中任一项所述的组合物，该组合物包括具有磷脂酶C活性并且选自下组的多肽，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中高严格条件下与(i)SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:41的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
8.根据以上权利要求中任一项所述的组合物，其中所述多种具有磷脂酶C活性的多肽选自下组，该组由以下各项组成：
-一种如在权利要求2或5中定义的且源自真菌的多肽和一种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且源自细菌的多肽；
-一种如在权利要求2或5中定义的且源自真菌的多肽和两种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且各自源自细菌的多肽；
-一种如在权利要求2或5中定义的且源自真菌的多肽和三种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且各自源自细菌的多肽；
-两种如在权利要求2或5中定义的且各自源自真菌的多肽和一种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且源自细菌的多肽；
-两种如在权利要求2或5中定义的且各自源自真菌的多肽和两种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且各自源自细菌的多肽；
-两种如在权利要求2或5中定义的且各自源自真菌的多肽和三种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且各自源自细菌的多肽；
-三种如在权利要求2或5中定义的且各自源自真菌的多肽和一种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且源自细菌的多肽；
-三种如在权利要求2或5中定义的且各自源自真菌的多肽和两种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且各自源自细菌的多肽；
-三种如在权利要求2或5中定义的且各自源自真菌的多肽和三种如在权利要求3、4、6和7中的任一项中定义的且各自源自细菌的多肽。
9.一种如权利要求1-8中任一项所定义的组合物，用于以下各项中
i)对碳水化合物水溶液或浆液进行脱胶，对油、例如植物油或可食用植物油进行脱胶，或在包括来自水脱胶的胶馏分中的磷脂水解以释放截留的三酸甘油酯油的方法中，
ii)包括磷脂水解以获得改进的磷脂乳化剂的方法，具体地其中所述磷脂是卵磷脂，
iii)用于改进含水溶液的过滤性或碳水化合物来源的浆料的方法，其含有磷脂，
iv)用于提取油的方法，
v)用于生产动物饲料产品的方法，
vi)用于生产生物燃料，例如生物柴油的方法，
vii)用于生产洗涤剂产品的方法，和/或
viii)用于制备烘焙产品的方法，该方法包括将磷脂酶添加到生面团中，和将烘焙生面团制成焙烤产品。
10.一种用于水解磷脂或溶血磷脂的方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与多种具有磷脂酶C活性的多肽接触，其中
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自真菌的多肽；并且
-至少一种所述具有磷脂酶C活性的多肽是源自细菌的多肽。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述多种具有磷脂酶C活性的多肽选自下组，该组由以下各项组成：
-一种源自真菌的多肽和一种源自细菌的多肽；
-一种如上定义的且源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-一种如上定义的且源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和一种如上定义的且源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-两种如上定义的且各自源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和一种如上定义的且源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和两种如上定义的且各自源自细菌的多肽；
-三种如上定义的且各自源自真菌的多肽和三种如上定义的且各自源自细菌的多肽。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述具有磷脂酶C活性且源自真菌的多肽选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:5中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:1、SEQID NO:3和SEQ ID NO:5中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、(iii)SEQ IDNO:5(SEQ ID NO:6)的cDNA序列或(iv)(i)、(ii)或(iii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:5中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、和SEQ ID NO:7中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中高严格条件下与(i)SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:41的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的方法，该方法包括使所述磷脂或溶血磷脂与多肽接触，该多肽具有磷脂酶C活性且选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQID NO:39、SEQ ID NO:41、和SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽具有至少60％序列一致性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中高严格条件下与(i)SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列、(ii)包含SEQ IDNO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列或(iii)(i)或(ii)的全长互补链杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42和SEQID NO:44中的任一项的成熟多肽编码序列具有至少60％序列一致性；
(d)SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:36、SEQ IDNO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:45中的任一项的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及
(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段。
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