CN106370767A - 关节克痹丸中虎杖的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，是以大黄素对照品为对照，以沸程为30℃～60℃的石油醚‑甲酸乙酯‑甲酸＝12～16︰4～7︰1～3的上层液为展开剂的薄层色谱法。本发明提供的关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，能够实现高效、准确地鉴别关节克痹丸中虎杖。本发明方法步骤少，操作简单，耗时短，可控性高，专属性强，分离度高，重现性好，并且阴性对照无干扰，不同厂家薄层板和温度、湿度条件均不影响。本发明鉴别方法能够对关节克痹丸中虎杖成分进行准确、全面、科学有效的鉴别，提升了质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定、安全、有效。
Description
技术领域
本发明涉及关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，具体属于中药检测技术领域。
背景技术
关节克痹丸是由川乌、虎杖、草乌、黄芩、独活、秦艽、片姜黄、苍术、麻黄、薏苡仁、牛膝、海桐皮、桑枝、桂枝和生姜制成的。关节克痹丸具有祛风散寒、活络止痛的功效，主要用于关节炎、四肢酸痛、伸展不利等症。现有的关节克痹丸的质量标准中，检测项目单一，难以有效控制药品质量。在现有的关节克痹丸质量标准中，未涉及到虎杖的鉴别，因此，研究一种能够高效、准确鉴别关节克痹丸中虎杖的方法，有利于关节克痹丸的质量检测，显得尤为必要。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，该鉴别方法专属性强，重现性好。
本发明的关节克痹丸，是由川乌(制)75g、虎杖313g、草乌(制)75g、秦艽313g、麻黄156g、海桐皮438g、生姜1000g、桑枝625g、桂枝313g、黄芩313g、独活156g、片姜黄156g、苍术(炒)938g、薏苡仁938g和牛膝313g制成。以上十五味，取海桐皮、桑枝、生姜加水煎煮2次，每次2小时，滤过，浓缩至适量备用；余药粉碎成细粉，加入适量淀粉及药汁混匀，制丸，干燥，包糖衣，打光，制成约24000粒。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，是以大黄素对照品为对照，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝12～16︰4～7︰1～3的上层液为展开剂的薄层色谱法。
前述关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品，研碎，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝12～16︰4～7︰1～3的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
具体地，前述关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品10～12粒，研碎，加甲醇10mL～25mL超声处理10min～30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL～3mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液3～6μL、供试品溶液9～11μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝12～16︰4～7︰1～3的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
优选地，前述关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品10粒，研碎，加甲醇10mL超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15︰5︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
为了确保本发明鉴别方法科学、合理、可行，对本发明的鉴别方法进行了研究和考察。
虎杖，为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根。具有利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，止咳化痰的功效。用于湿热黄疸，淋浊，带下，风湿痹痛，痈肿疮毒，水火烫伤，经闭，症瘕，趺打损伤，肺热咳嗽。制何首乌具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨功效。用于血虚萎黄，眩晕耳鸣，须发早白，腰膝酸软，肢体麻木，崩漏带下，久疟体虚；高血脂。大黄素是虎杖在方中的专属性成分，因此，本实验将选取大黄素对照品和虎杖对照药材为对照，通过加甲醇超声处理提取本品中虎杖的专属成分，对其进行薄层鉴别，并考察不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对本品中虎杖薄层色谱的影响，试验结果表明：以大黄素对照品为对照，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝12～16︰4～7︰1～3的上层液为展开剂的薄层色谱法特征明显，专属性强，可作为本品中虎杖的鉴别方法。
1、仪器与试剂
MS304s/01电子天平(METTLER TOLEDO(梅特勒-托利多))、P-1型薄层色谱展开缸(上海信谊仪器厂有限公司)、硅胶G薄层板(青岛海洋化工)、5ul点样毛细管(天津市思利达科技有限公司)、SLD-1薄层色谱摄影仪(天津思利达色谱技术开发公司)。
关节克痹丸(20151201、20151202、20151203，江苏信邦制药有限公司)、大黄素对照品(中国药品生物制品检定所)、石油醚(西陇化工股份有限公司，分析纯)、甲酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)、甲酸(天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯)、甲醇(西陇化工股份有限公司，分析纯)、三氯甲烷(西陇化工股份有限公司，分析纯)。
2、鉴别方法的考察
2.1、供试品溶液的制备方法
现有技术中，虎杖鉴别时供试品溶液是通过先加甲醇超声处理后，滤过，残渣加硫酸溶液水浴加热，放冷后再用三氯甲烷振摇提取，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三滤甲烷溶解后得到。与现有技术相比，本发明中直接采用甲醇超声处理后用三氯甲烷溶解作为供试品溶液，操作简单，提取时间短，溶剂使用量少，提取效果好。使用两种方法分别制备供试品溶液，在同等条件下进行鉴别，采用现有技术的一组分离度较差，而采用本发明方法的一组分离度高，重现性好。
2.2、最佳点样量的考察
分别吸取步骤(1)、步骤(2)中供试品溶液、对照品溶液3μL、4μL、5μL、6μL、7μL、8μL、9μL、10μL、11μL、12μL，分别点于不同硅胶G薄层板上，进行考察，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15︰5︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，分别置365nm紫外光灯下检视和置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视。其中，供试品10μL点样量效果最佳，当点样量大于11μL时，供试品溶液位置斑点出现拖尾现象，点样量低于9μL时，供试品溶液位置斑点不明显；对照品溶液点样量3～6μL时效果好，尤其是在5μL时效果最佳；故选择供试品溶液点样量为9～11μL，最佳点样量10μL；对照品溶液点样量3～6μL，最佳点样量5μL。
3、专属性考察
吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照品溶液5μL、虎杖对照药材溶液10μL(按照步骤(1)方法制备)、大黄素阴性对照溶液5μL，按供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液、虎杖阴性对照溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15︰5︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，分别置365nm紫外光灯下检视和置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视。置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色，阴性对照色谱中相应位置上无斑点，表明该方法的专属性良好。
4、耐用性考察
4.1不同厂家薄层板
吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照品溶液5μL、虎杖对照药材溶液10μL(按照步骤(1)方法制备)、大黄素阴性对照溶液5μL，按供试品溶液、对照品溶液、虎杖对照药材溶液、虎杖阴性对照溶液分别点样，变换不同厂家的薄层板，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15︰5︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，分别置365nm紫外光灯下检视和置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视。置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色，阴性对照色谱中相应位置上无斑点，且更换不同厂家薄层板后，各薄层板之间无显著差异，表明更换不同厂家薄层板对虎杖的薄层鉴别无影响。
4.2湿度
吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照品溶液5μL、虎杖对照药材溶液10μL(按照步骤(1)方法制备)、大黄素阴性对照溶液5μL，按供试品溶液、对照品溶液、虎杖对照药材溶液、虎杖阴性对照溶液分别点样，变换不同湿度条件，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15︰5︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，分别置365nm紫外光灯下检视和置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视。置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色，阴性对照色谱中相应位置上无斑点，且变换不同湿度条件后，各薄层板之间无显著差异，表明变换不同湿度对虎杖的薄层鉴别无影响。
4.3、温度
吸取步骤(1)中供试品溶液10μL、步骤(2)中对照品溶液5μL、虎杖对照药材溶液10μL(按照步骤(1)制备)、大黄素阴性对照溶液5μL，按供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液、阴性对照溶液分别点样，变换不同温度条件，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15︰5︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，分别置365nm紫外光灯下检视和置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视。置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色，且变换不同温度条件后，各薄层板之间无显著差异，表明变换不同温度对虎杖的薄层鉴别无影响。
本发明的有益之处在于：本发明提供的关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，能够实现高效、准确地鉴别关节克痹丸中虎杖。本发明方法步骤少，操作简单，耗时短，可控性高，专属性强，分离度高，重现性好，并且阴性对照无干扰，不同厂家薄层板和温度、湿度条件均不影响。本发明鉴别方法能够对关节克痹丸中虎杖成分进行准确、全面、科学有效的鉴别，提升了质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定、安全、有效。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。
实施例1
关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品11粒，研碎，加甲醇25mL超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷3mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液3μL、供试品溶液9μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝12︰4︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
实施例2
关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品12粒，研碎，加甲醇15mL超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液6μL、供试品溶液11μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝16︰7︰3的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
实施例3
关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品10粒，研碎，加甲醇10mL超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15︰5︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
实施例4
关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品10粒，研碎，加甲醇20mL超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液4μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝13︰5︰2的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
Claims (4)
1.关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，其特征在于：所述鉴别方法是以大黄素对照品为对照，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝12～16︰4～7︰1～3的上层液为展开剂的薄层色谱法。
2.根据权利要求1所述的关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品，研碎，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝12～16︰4～7︰1～3的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
3.根据权利要求2所述的关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品10～12粒，研碎，加甲醇10mL～25mL超声处理10min～30min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL～3mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液3～6μL、供试品溶液9～11μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝12～16︰4～7︰1～3的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
4.根据权利要求2或3所述的关节克痹丸中虎杖的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品10粒，研碎，加甲醇10mL超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加三氯甲烷制成每1mL中含有1mg大黄素对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液5μL、供试品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程为30℃～60℃的石油醚-甲酸乙酯-甲酸＝15︰5︰1的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同橙色荧光斑点，置氨蒸汽中熏蒸后日光下检视，斑点变为红色。
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