CN102279242A - 一种温肾调经的中药制剂的检验方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种温肾调经的中药制剂的检验方法，其特征在于：检验方法中制定了当归、茜草、肉苁蓉和菟丝子的薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法，测定这种温肾调经的中药制剂中阿魏酸的含量。其优点是专属性高，检验方法稳定，通过对药物中的有效成分的精确检验和测定，能够有效的控制产品的质量。

Description

一种温肾调经的中药制剂的检验方法

技术领域：

本发明涉及一种温肾调经的中药制剂的检验方法，属于中药制剂的质量控制检验方法领域。

背景技术：

所述一种温肾调经的中药制剂其组方来源：本组方系由实践中来，是经过多年验证的经验方。国家级妇科主任医师柴嵩岩自1959年以来，在临床工作中主攻闭经、月经量少、月经稀发、不孕等病。经过近50年的治疗与研究，确已取得了良好的经验。尤其在近10年中看到门诊病例中多囊卵巢综合征(PCOS)发病比例明显增多，结合现代科学检查，如盆腔B超、女性激素、基础体温等结合主要征象，在临床治疗工作中，已重点侧重于PCOS病的有关资料的积累，相关资料的参照，加以对脾肾不足、湿浊蕴结证的病机所引起的临床证型，做重点研究。在1997年已做为专题研究，并经过查新，尚无我们所提出通利法的有关记载，应该说是属于创新的。如1998年北京中医研究所硕士研究生黄玉华的毕业论文中写到，名老中医柴嵩岩根据多年经验，认为本病属脾肾不足、痰湿阻遏而发病，本研究意在探讨其经验方，健脾益肾，养血通利，对脾肾阳虚型PCOS的治疗效果，并通过动物实验初步研究其作用机理，并对31例PCOS患者治疗3-6个月后，本研究实验结果显示疗后患者血清LH和T水平明显下降，糖耐量实验恢复正常范围，排卵率为17％，总有效率为84％。动物实验结果表明，本方具有降低血清胰岛素和LGF-1水平，减轻体重，促进排卵。病理组织学和电镜结果提示，本方对卵巢的微循环有改善作用。

在以上研究的基础临床工作中更加重了观察和研究力度，也有深入观察项目认真参阅现代医学及阶段性的反复总结，并对确诊为PCOS患者63例的中医诊断，如舌、脉象的重点观察及积累资料，已经明显地看出，无论其症状如何，或月经稀发、闭经，或出血，或肥胖，或多毛、痤疮等不同临床表现，而其脉象均为沉滑或沉细滑。中医学认为脉之应病，所以徵气血之盛衰，因为五脏六腑之气，无不通于血脉，不同疾病在很大程度上，脉象可以支持认证。但是脉象又是相当复杂的，只有在大量的同一病种中找出规律，对诊断有参考意义的客观所见。如对PCOS患者的脉象做了初步的归纳，曾对较典型的PCOS病例的脉象如何，无论出血、闭经、肥胖、消瘦等，其脉象均呈现为沉滑无力或细滑。其中年龄20-35岁55人，35岁以上或25岁以下者8人，患稀发8人，闭经37人，淋漓出血3人，其他症状者12人。

其组方为：当归6份、杜仲4份、肉苁蓉2.5份、川芎1.5份、薏苡仁5份、茜草3份、车前子5份、菟丝子6份、桂枝1份采用颗粒剂制法制成。功能主治为温肾养血，利温化浊，祛瘀调经。用于肾阳不足，冲任血虚，湿浊瘀阻所致之月经后期，经量稀少，甚或经闭不通；多囊卵巢综合征见上述证候者。

发明内容：

本发明的目的是提供一种温肾调经的中药制剂的检验方法，检验方法中制定了当归、茜草、肉苁蓉和菟丝子的薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法，测定这种温肾调经的中药制剂中阿魏酸的含量，以克服现有技术的弊端，提高产品的质量、疗效、生物利用度，更好地满足医疗的需要。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种温肾调经的中药制剂的检验方法，其特征在于：检验方法中包含有a鉴别方法和b含量测定方法：

a鉴别：

当归薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂10-50g，研碎，加乙醇10-100ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1-10ml溶解，作为供试品溶液，另取当归对照药材1-10g，加乙醇10-50ml，超声处理10-50分钟，同法制成对照药材溶液，按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10-30μl、对照药材溶液10-30μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-10∶5-15∶0.5-5的甲苯-三氯甲烷-无水乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

菟丝子薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂5-20g，研细，加甲醇10-100ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1-10ml溶解，滤过，滤液浓缩至1-10ml，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材1-10g，研碎，加甲醇1-50ml，超声处理1-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1-15ml，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-10∶1-10∶1-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

肉苁蓉薄层色谱鉴别：取这种温肾养血、利温化浊，祛瘀调经的中药制剂10-30g，研细，加甲醇10-100ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1-10ml溶解，作为供试品溶液，另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每1ml含1-5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-50μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5-50∶1-10∶1-5的乙酸乙酯-甲醇-体积比浓度9％醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-10wt％三氯化铁乙醇溶液，在90-150℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

茜草薄层色谱鉴别：取这种温肾养血、利温化浊，祛瘀调经的中药制剂10-30g，研细，加甲醇10-100ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，滤过，滤液浓缩至1-5ml，作为供试品溶液，另取茜草对照药材0.5-5g，研碎，加甲醇1-30ml，超声处理10-50分钟，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-20∶1-10的60～90℃石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b含量测定：照高效液相色谱法测定

色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10-50∶10-100的甲醇-体积比浓度5％HAC为流动相；流速1-10ml/min；检测波长为300-400nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，精密称定，置棕色容量瓶中，加体积比1-5∶1-10的甲醇∶体积比浓度5％HAC的溶液制成每1ml含阿魏酸1-20.00μg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取这种温肾养血，利温化浊，祛瘀调经的中药制剂，研细，取1-5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加体积比1-10∶5-20的甲醇∶体积比浓度5％HAC混合溶液10-50ml，称重，超声处理10-60分钟，放冷，再称重，用以上溶剂补充减失的重量，滤过，取续滤液经微孔滤膜滤过，即得；

测定法：精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10-20μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；

每袋含当归与川芎以阿魏酸C₁₀H₁₀O₄计，暂定不得少于0.5-1.0mg。

本发明的有益效果：本发明经过多次试验，检验方法中制定了当归、肉苁蓉、菟丝子和茜草的薄层色谱鉴别；采用高效相色谱法，测定这种温肾调经的中药制剂中阿魏酸的含量。通过建立明确专属性强的鉴别及重现性、稳定性及精密度良好的含量测定方法，能够有效控制这种温肾调经的中药制剂的质量，使其质量达到稳定、可控、高效及安全，是对产品的投料要求及质量控制严格，克服现有技术的不足，提高产品的质量、疗效、生物利用度，产品质量高，能保证产品疗效，更好地满足医疗的需要。经含量测定方法学研究结果表明，该方法专属性强，其它组分不干扰阿魏酸的测定；精密度测定、重复性测定、溶液的稳定性和加样回收率均符合《中药新药研究的技术要求》。

附图说明：

图1是本发明当归的薄层鉴别图；

图2是本发明肉苁蓉的薄层鉴别图；

图3是本发明菟丝子的薄层鉴别图；

图4是本发明茜草的薄层鉴别图；

图5是本发明阿魏酸对照品的高效液相图；

图6是本发明这种温肾调经的中药制剂高效液相色谱图谱；

图7是本发明阴性对照溶液的液相色谱图谱。

在图1-4中，1、2、3均为供试品，4为对照品溶液，5为阴性对照溶液。

具体实施方式：

实施例1：

a鉴别：

当归的薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂20g，研碎，加乙醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材1g，加乙醇10ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液；按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比6∶9∶1的甲苯-三氯甲烷-无水乙醇为展开剂，展开，取出、晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

菟丝子的薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂10g，研细，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1～2ml，作为供试品溶液；另取菟丝子对照药材1g，研碎，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1～2ml，作为对照药材溶液；按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5∶5∶3的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

肉苁蓉的薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂15g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1～2ml使溶解，作为供试品溶液；另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每1ml含2.5mg麦角甾苷的溶液；按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比20∶3∶2的乙酸乙酯-甲醇-体积比浓度9％醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5wt％三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

茜草的薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂15g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，滤过，滤液浓缩至1～2ml，作为供试品溶液；另取茜草对照药材1g，研碎，加甲醇10ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液；按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比4∶1的60～90℃石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b含量测定：按照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VID)测定：

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比20∶80的甲醇-体积比浓度5％HAC为流动相，流速1ml/min；检测波长为323nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，置棕色容量瓶中，按体积比1∶4加甲醇-体积比浓度5％HAC的溶液制成每1ml含阿魏酸10.00μg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取这种温肾调经的中药制剂，研细，取1.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，按体积比1∶4精密加甲醇-体积比浓度5％HAC的混合溶液25ml，称重，超声处理40分钟，放冷，再称重，用以上溶剂补充减失的重量，滤过，取续滤液经0.45μm的微孔滤膜滤过，即得；

测定法：精密吸取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。

经测定后控制每袋含当归与川芎以阿魏酸(C₁₀H₁₀O₄)计，暂定不得少于0.8mg。

实施例2：

a鉴别：

当归薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂10g，研细，加乙酸乙酯-甲酸9.5∶0.5 50ml，超声40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液，另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比8∶2∶0.2的苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

菟丝子薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂10g，研细，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1～2ml，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材1g，研碎，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1～2ml，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5∶5∶3的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

肉苁蓉薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂15g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1～2ml溶解，作为供试品溶液，另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每1ml含2.5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比20∶3∶2的乙酸乙酯-甲醇-体积比浓度9％醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5wt％三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

茜草薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂15g，研细，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，滤过，滤液浓缩至1～2ml，作为供试品溶液，另取茜草对照药材1g，研碎，加甲醇10ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比4∶1的60～90℃石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b含量测定：照高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比20∶80的甲醇-体积比浓度5％HAC为流动相；流速1ml/min；检测波长为323nm；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备取阿魏酸对照品，精密称定，置棕色容量瓶中，加体积比1∶4的甲醇∶体积比浓度5％HAC的溶液制成每1ml含阿魏酸10.00μg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备取这种温肾调经的中药制剂，研细，取1.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加体积比1∶4的甲醇∶体积比浓度5％HAC混合溶液25ml，称重，超声处理40分钟，放冷，再称重，用以上溶剂补充减失的重量，滤过，取续滤液经微孔滤膜滤过，即得；

测定法：精密吸取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得；

每袋含当归与川芎以阿魏酸C₁₀H₁₀O₄计，暂定不得少于0.8mg。

实施例：3：

1.当归的薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂20g，研碎，加乙醇80ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，加乙醇10ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液15μl、对照药材溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-无水乙醇(体积比6∶9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

参照有关文献资料，结合本制剂的剂型及工艺特点，以当归为对照药材，并随行阴性(弃去当归)对照，鉴别这种温肾调经的中药制剂中的当归。结果表明：供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上呈现相同的蓝色荧光斑点。按同工艺制备的不含当归的阴性对照液，同供试品方法提取、展开、显色，结果在与供试品及对照药材色谱相应的位置上，无斑点出现，证明方中其它味药无干扰、斑点清晰、专属性强，方法可行(见图1)。故收入标准部分。

当归对照药材购自中国药品生物制品检定所，批号：120927-200613。

2.菟丝子的薄层色谱鉴别。据文献报道，菟丝子主含化学成分为黄酮类、香豆精类等。参照文献资料，结合本制剂的剂型及工艺特点，以菟丝子为对照药材，随行阴性对照(弃去菟丝子)鉴别这种温肾调经的中药制剂中的菟丝子。结果表明：供试品色谱中在与对照药材相应的位置上呈现相同的蓝色荧光斑点。按同工艺制备的不含菟丝子的阴性对照液，同供试品方法提供，展开，显色，结果在与供试品及对照药材相应的位置上，无斑点出现。证明方中其它药味无干扰，斑点清晰，分离度好，专属性强，方法可行。见图2。

菟丝子对照药材购自中国药品生物制品检定所。批号：121232-200401

3.肉苁蓉的薄层色谱鉴别。肉苁蓉为本方中的主要组成药物。据文献报道，肉苁蓉所含的主要化学成分为多糖类、萜类及麦角甾苷(毛蕊花糖苷)及甜菜碱类等。参照文献资料及《中国药典》2005年版一部肉苁蓉项下麦角甾苷的薄层色谱鉴别方法及条件，以麦角甾苷为对照品，并设阴性对照(去掉肉苁蓉)。经实验研究证明：供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置呈现相同蓝紫色斑点。按同工艺制备的不含肉苁蓉的阴性对照液，同供试品方法提取，展开，显色，结果在与供试品及对照品相应的位置上，无斑点出现。证明方中其它药味无干扰。薄层分离好，斑点清晰，方法可行。见图3。

麦角甾苷由中国药品生物制品鉴定所提供。批号：111530-200404

4.茜草的薄层色谱鉴别。茜草已知含有蒽醌类成分，茜草素类等。参照有关文献资料，并经实验反复摸索，以茜草为对照药材，并随行阴性对照(去掉茜草)，鉴别这种温肾调经的中药制剂中的茜草。结果表明：供试品色谱中在与对照药材相应的位置上呈现相同的荧光斑点。按同工艺制备的不含茜草的阴性对照液，同供试品方法提取，展开，显色，结果在与供试品及对照药材相应的位置上，无斑点出现。证明方中其它药味无干扰。斑点清楚，方法可行。见图4。

茜草对照药材购自中国药品生物制品检定所。批号：121049-0301

5.含量测定

这种温肾调经的中药制剂是由当归等九味中药组成的复方制剂。经提取方中组成药物的主要活性成分制成的颗粒剂。当归为本方中的君药，当归主含补血活血的有效成分为阿魏酸，成分明确，有关阿魏酸的分析检测方法技术成熟。故选择方中君药当归与方中另一组成药物川芎两者共含的主要有效成分-阿魏酸为检测指标，以高效液相色谱法测定其在这种温肾调经的中药制剂中的含量。经方法学考查证明：方法灵敏，专属性强，结果满意，方法可行。

1)、仪器与试药

(1)仪器：岛津SCL-10AVP液相色谱仪(日本)，配有柱温箱，SPD-10AVP检测器，Class-VP工作站。

(2)试剂与试药：甲醇为色谱纯试剂，水为双重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

阿魏酸对照品，购自中国药品生物制品检定所，批号：110773-9910

2)、实验条件的选择

(1)色谱条件的选择：色谱柱：Kromasil 5u 100A C18柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-5％醋酸(20∶80)；流速1ml/min；柱温：35℃；检测波长：323nm。

在上述选定的色谱条件下，阿魏酸与其它组分色谱峰可达到基线分离，分离度符合规定，理论板数按阿魏酸峰计在10000以上。且阴性样品无干扰。对照品、供试品及阴性样品色谱图见图5、图6、图7。

在选择流动相时，曾参照文献试验了甲醇与不同浓度的醋酸(5％和2％)的不同比例以及甲醇与0.1％磷酸的不同比例，结果表明，本法所确定的以甲醇-5％醋酸(20∶80)效果最佳。

(2)提取条件的选择：为增加阿魏酸的稳定性，选择甲醇∶5％HAC(1∶4)混合溶剂作为提取溶剂。提取方法分别试验了超声处理法和回流提取法。结果见表1。

表1不同提取方法阿魏酸测定结果

由上表测定结果可知，超声处理法阿魏酸含量较回流提取法高，且超声处理法操作简便，故选择了超声提取法。

(3)提取时间考察：采用超声处理法，分别考察了不同超声处理时间，对阿魏酸测定结果的影响。结果见表2。

表2不同超声时间阿魏酸测定结果

上述测定结果表明，超声处理40分钟，即可提取完全，故确定提取时间为40分钟。

3)、线性关系的考察

取阿魏酸对照品适量，精密称定，用甲醇∶5％HAC(1∶4)混合溶剂制成每1ml含50.00μg的对照品溶液。

分别精密吸取该溶液0.5、1.0、1.5、2.0、4.0ml置10ml量瓶中，用上述溶剂稀释至刻度，摇匀，分别吸取20μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。结果见表3。

表3线性关系测定结果

以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程为y＝118234X+3026.98  r＝0.9999。

结果表明，阿魏酸浓度在2.50-20.00μg/ml范围内呈良好的线性关系。

4)、精密度试验

分别取对照品及同一批号供试品，按【含量测定】项下方法操作分别制备对照品及供试品溶液，连续进样5次，记录峰面积。结果见表4。

表4精密度试验结果

结果表明，该方法精密度符合规定。

5)、稳定性试验

取同一批号供试品，按【含量测定】项下方法操作制备供试品溶液，分别于0、3、6、9小时进样，记录峰面积积分值。结果见表5。

表5稳定性试验结果

结果表明，供试品溶液在9小时内稳定。

6)、重现性试验

取同一批号样品6份，分别按【含量测定】项下方法操作并测定每份含量。结果见表6。

表6重现性试验结果

结果表明，该方法的重现性符合规定。

7)、回收率试验

取已知含量的样品5份，精密称定，精密加入阿魏酸对照品溶液，按【含量测定】项下方法操作并测定每份含量，计算回收率，结果见表7。

表7加样回收试验结果

结果平均回收率为97.89，RSD为1.2％。

8)、样品测定

取这种温肾调经的中药制剂约1.4g，精密称定，按【含量测定】项下方法操作并测定，含量测定结果见表8。

表8样品中阿魏酸含量测定结果

根据以上六批样品含量测定结果，考虑到大生产的实际以及药材产地批号不同等因素，暂定这种温肾调经的中药制剂每袋含当归、川芎以阿魏酸(C₁₀H₁₀O₄)计，不得少于0.8mg为宜。

9)、阴性对照试验

取按处方量比例以相同工艺制备的阴性对照溶液(缺当归与川芎)，同法测定。结果阴性对照液的HPLC色谱中在与阿魏酸对照品色谱相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明处方中其它组分对阿魏酸的测定无干扰。

10)、药材含量测定

按样品含量测定方法，分别对2批当归与川芎药材中阿魏酸的含量进行了测定。结果见表9。

表9药材中阿魏酸含量测定结果

根据以上测定结果，当归中阿魏酸含量应不低于0.05％，川芎中阿魏酸含量应不低于0.07％为宜。

Claims (1)

1.一种温肾调经的中药制剂的检验方法，其特征在于：检验方法中包含有a鉴别方法和b含量测定方法：

a鉴别：

当归薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂10-50g，研碎，加乙醇10-100ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1-10ml溶解，作为供试品溶液，另取当归对照药材1-10g，加乙醇10-50ml，超声处理10-50分钟，同法制成对照药材溶液，按照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10-30μl、对照药材溶液10-30μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-10∶5-15∶0.5-5的甲苯-三氯甲烷-无水乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

菟丝子薄层色谱鉴别：取这种温肾调经的中药制剂5-20g，研细，加甲醇10-100ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1-10ml溶解，滤过，滤液浓缩至1-10ml，作为供试品溶液，另取菟丝子对照药材1-10g，研碎，加甲醇1-50ml，超声处理1-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，滤过，滤液浓缩至1-15ml，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-10∶1-10∶1-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

肉苁蓉薄层色谱鉴别：取这种温肾养血、利温化浊，祛瘀调经的中药制剂10-30g，研细，加甲醇10-100ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1-10ml溶解，作为供试品溶液，另取麦角甾苷对照品，加乙醇制成每1ml含1-5mg的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-50μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5-50∶1-10∶1-5的乙酸乙酯-甲醇-体积比浓度9％醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1-10wt％三氯化铁乙醇溶液，在90-150℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

茜草薄层色谱鉴别：取这种温肾养血、利温化浊，祛瘀调经的中药制剂10-30g，研细，加甲醇10-100ml，超声处理10-50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，滤过，滤液浓缩至1-5ml，作为供试品溶液，另取茜草对照药材0.5-5g，研碎，加甲醇1-30ml，超声处理10-50分钟，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1-20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比1-20∶1-10的60～90℃石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b含量测定：照高效液相色谱法测定

色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10-50∶10-100的甲醇-体积比浓度5％HAC为流动相；流速1-10ml/min；检测波长为300-400nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，精密称定，置棕色容量瓶中，加体积比1-5∶1-10的甲醇∶体积比浓度5％HAC的溶液制成每1ml含阿魏酸1-20.00μg的溶液，作为对照品溶液；

供试品溶液的制备：取这种温肾养血，利温化浊，祛瘀调经的中药制剂，研细，取1-5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加体积比1-10∶5-20的甲醇∶体积比浓度5％HAC混合溶液10-50ml，称重，超声处理10-60分钟，放冷，再称重，用以上溶剂补充减失的重量，滤过，取续滤液经微孔滤膜滤过，即得；

测定法：精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10-20μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。

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