CN106361958A - 一种天门冬抗菌提取液的制备方法 - Google Patents

一种天门冬抗菌提取液的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种天门冬抗菌提取液的制备方法，属于生物技术领域。该方法包括：1)烘干、粉碎；2)预处理；3)超声、酶解；4)过滤浓缩；5)灭菌。本发明中通过首先对天门冬粉末采用热柠檬水进行预处理，使天门冬的细胞壁受到了一定程度的破坏，预处理后再通过超声辅助酶解，使天门冬中的有效成分得以充分提取出，使天门冬提取液抗菌性强。同时由于柠檬水为酸性，柠檬水的加入减少了酶解前调节pH时所需的盐酸的量，降低了成本。本发明还加入具有增溶分散等效果的表面活性剂，提高了天门冬粉末在乙醇溶液中的溶解性，促进超声、酶解过程中天门冬有效成分的提取，缩短了提取时间的同时还增强了提取液的抗菌性。

Description

一种天门冬抗菌提取液的制备方法
【技术领域】
本发明涉及技术领域，具体涉及一种天门冬抗菌提取液的制备方法。
【背景技术】
天门冬为百合科植物。又名天冬。性寒，味甘，微苦。具有养阴清热，润肺滋肾的功效。用于治阴虚发热、咳嗽吐血、肺痈、咽喉肿痛、消渴、便秘等病症。天门冬块根含淀粉33％，蔗糖4％及其他多种营养成分。天门冬全草含天冬酰胺(天门冬素)、β-谷固醇、固体皂苷、黏液质、糖醛衍生物、17种氨基酸、丰富的维生素、无机元素、豆固醇、内酯、黄酮、蒽醌及强心苷等成分。根据所用有机溶剂的提取效果，天门冬块根中抑菌成分可能为氨基酸、多糖、β－谷甾醇、甾体皂苷等物质。虽然天门冬有效抑菌物质的具体成分尚不清楚，其分离纯化有待进一步研究，但是天门冬抑菌成分的提取方法操作步骤简单、溶剂消耗量少、提取时间短、抑菌效果好、生产成本低，开发生产天门冬抑菌洗化用品将会逐步走向产业化。
天门冬具有如下作用：
(1)抗氧化、延缓衰老作用：天门冬提取物具有延缓衰老的作用，天门冬多糖有清除自由基及抗脂质过氧化活性。
(2)抗菌作用：体外试验证明，天门冬煎剂对炭疽杆菌、甲型及乙型溶血性链球菌、白喉杆菌、类白喉杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、白色葡萄球菌及枯草杆菌均有不同程度的抑菌作用。
(3)抗肿瘤作用：天门冬体外试验(美蓝法及瓦氏呼吸器测定)，其对慢性粒细胞型白血病、急性淋巴细胞型白血病及急性单核细胞型白血病患者白细胞的脱氢酶有一定的抑制作用，并能抑制急性淋巴细胞型白血病患者白细胞的呼吸。
(4)降低血糖：天门冬降糖胶囊能明显降低四氧嘧啶高血糖小鼠的血糖。
目前，市面上抑菌洗化用品多是利用三氯卡班、对氯间二甲苯酚、DMDM乙内酰脲等化学物质抑菌，而如能利用天门冬这种药食同源的的植物制成提取液抑菌，则更为健康安全。人们对天门冬的研究主要集中在抗氧化、抗肿瘤及降低血糖，而其抗菌作用的研究却鲜有报道。目前对天门冬提取液的提取方法主要有水提法、醇提法和超声提取法，但这些方法所提取的提取液抗菌效果较为一般，并没有达到良好的抗菌效果。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种天门冬抗菌提取液的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种天门冬抗菌提取液的制备方法，包括如下步骤：
(1)烘干、粉碎：将天门冬块根用清水洗涤干净，放置烘干机中烘干，然后放入粉碎机中进行粉碎，用0.5mm滤网筛选，得到天门冬粉末；
(2)预处理：将步骤(1)获得的天门冬粉末浸泡入50-60℃的柠檬水中并搅拌均匀，获得天门冬悬浊液；
(3)超声、酶解：将步骤(2)获得的天门冬悬浊液和表面活性剂放入体积分数为70-80％的乙醇溶液中，搅拌均匀后，采用盐酸调节pH为5-9，加入纤维素酶，超声提取；
(4)过滤浓缩：将超声的提取液过滤，然后将滤液置于旋转蒸发仪上减压浓缩，对浓缩后的浓缩液进行离心处理；
(5)灭菌：采用高压蒸汽对离心液灭菌后即可得到本发明的天门冬提取液。
优选地，所述步骤(2)中天门冬粉末与柠檬水的质量比为1-2:20-30。
优选地，所述步骤(3)中天门冬悬浊液与乙醇的质量比为1：5-10，所述表面活性剂占总质量的2-5％。
优选地，所述步骤(3)中超声提取的超声波频率为30-40kHz，超声提取的温度为40-50℃，提取时间为20-30分钟。
优选地，所述步骤(3)中超声提取的次数为2-3次。
优选地，所述步骤(4)中浓缩后浓缩液的体积浓度为1-5g/ml。
优选地，所述离心的转速为3000-4000r/min，离心时间为10-15min。
优选地，所述表面活性剂为聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯或月桂酰肌氨酸钠中的一种或两种以上。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
(1)本发明中通过在超声、酶解前首先对天门冬粉末采用热柠檬水进行预处理，在热柠檬水的搅拌作用下，天门冬的细胞壁受到了一定程度的破坏，该预处理后再通过超声辅助酶解，使天门冬瓜中的有效成分得以充分提取出，使天门冬提取液抗菌性强。同时由于柠檬水为酸性，柠檬水的加入减少了酶解前调解pH时所需的盐酸的量，降低了成本。柠檬水还具有杀菌作用，可以增强本发明天门冬提取液的抗菌效果。
(2)本发明还添加了表面活性剂，由于表面活性剂不仅具有乳化、抗粘、起泡或消泡以及增溶、分散、洗涤、防腐、抗静电等一系列物理化学作用及相应的实际应用，还具有消毒杀菌功能，因此加入具有增溶分散等效果的表面活性剂，提高了天门冬粉末在乙醇溶液中的溶解性，促进超声、酶解过程中天门冬有效成分的提取，缩短了提取时间的同时还增强了提取液的抗菌性。
【具体实施方式】
实施例1：
一种天门冬抗菌提取液的制备方法，具体步骤如下：
(1)烘干、粉碎：将天门冬块根用清水洗涤干净，放置烘干机中快速烘干，然后放入粉碎机中进行粉碎，用0.5mm滤网筛选，得到天门冬粉末；
(2)预处理：取步骤(1)获得的天门冬粉末1g浸泡入50-60℃的20mL的柠檬水中并搅拌均匀，获得天门冬悬浊液；
(3)超声、酶解：将步骤(2)获得的天门冬悬浊液和2mL聚山梨酯放入120mL体积分数为70-80％的乙醇溶液中，搅拌均匀后，采用盐酸调节pH为5，加入纤维素酶，超声提取2次，其中超声波频率为30kHz，超声提取的温度为40℃，提取时间为30分钟；
(4)过滤浓缩：将2次超声的提取液合并后过滤，然后将滤液置于旋转蒸发仪上减压浓缩至浓缩液的体积浓度为1g/ml，对浓缩后的浓缩液进行离心处理，其中转速为3500r/min，离心时间为15min；
(5)灭菌：采用高压蒸汽对离心液灭菌后即可得到本发明的天门冬提取液。
利用本发明实施例所得的天门冬提取液分别对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉进行最小抑菌浓度测定，结果如表1所示。
表1天门冬提取液对供试菌种的最小抑菌浓度
“-”表示没有菌落；“+”表示有少数菌落生长，“++”表示有多数菌落生长。
由上表可知，天门冬提取液对金黄色葡萄球菌的MIC为1.5mg/mL；对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为3.00mg/mL；对黑曲霉的MIC为6.00mg/mL。因此，天门冬提取液对3种菌的抑制效果依次为：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉。
实施例2：
一种天门冬抗菌提取液的制备方法，具体步骤如下：
(1)烘干、粉碎：将天门冬块根用清水洗涤干净，放置烘干机中快速烘干，然后放入粉碎机中进行粉碎，用0.5mm滤网筛选，得到天门冬粉末；
(2)预处理：取步骤(1)获得的天门冬粉末2g浸泡入50-60℃的40mL的柠檬水中并搅拌均匀，获得天门冬悬浊液；
(3)超声、酶解：将步骤(2)获得的天门冬悬浊液和5mL月桂酰肌氨酸钠放入200mL体积分数为70-80％的乙醇溶液中，搅拌均匀后，采用盐酸调节pH为7，加入纤维素酶，超声提取3次，其中超声波频率为40kHz，超声提取的温度为50℃，提取时间为20分钟；
(4)过滤浓缩：将3次超声的提取液合并后过滤，然后将滤液置于旋转蒸发仪上减压浓缩至浓缩液的体积浓度为1g/ml，对浓缩后的浓缩液进行离心处理，其中转速为4000r/min，离心时间为10min；
(5)灭菌：采用高压蒸汽对离心液灭菌后即可得到本发明的天门冬提取液。
利用本发明实施例所得的天门冬提取液分别对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉进行最小抑菌浓度测定，结果如表2所示。
表2天门冬提取液对供试菌种的最小抑菌浓度
由上表可知，天门冬提取液对金黄色葡萄球菌的MIC为1.5mg/mL；对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为3.00mg/mL；对黑曲霉的MIC为6.00mg/mL。因此，天门冬提取液对3种菌的抑制效果依次为：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉。
对比例：
一种天门冬抗菌提取液的制备方法，具体步骤如下：
(1)烘干、粉碎：将天门冬块根用清水洗涤干净，放置烘干机中快速烘干，然后放入粉碎机中进行粉碎，用0.5mm滤网筛选，得到天门冬粉末；
(2)超声、酶解：将步骤(1)获得的天门冬粉末放入200mL体积分数为70-80％的乙醇溶液中，搅拌均匀后，采用盐酸调节pH为7，加入纤维素酶，超声提取3次，其中超声波频率为40kHz，超声提取的温度为50℃，提取时间为20分钟；
(3)过滤浓缩：将3次超声的提取液合并后过滤，然后将滤液置于旋转蒸发仪上减压浓缩至浓缩液的体积浓度为1g/ml，对浓缩后的浓缩液进行离心处理，其中转速为4000r/min，离心时间为10min；
(4)灭菌：采用高压蒸汽对离心液灭菌后即可得到本发明的天门冬提取液。
采用该对比例所得的天门冬提取液分别对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和黑曲霉进行最小抑菌浓度测定，结果如表3所示。
表3天门冬提取液对供试菌种的最小抑菌浓度
由上表可知，天门冬提取液对金黄色葡萄球菌的MIC为3mg/mL；对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为6.00mg/mL；对黑曲霉的MIC为12.00mg/mL。因此，天门冬提取液对3种菌的抑制效果依次为：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉。
因此，根据上述实施例与对比例的最小抑菌浓度数据对比，本发明实施例的抑菌效果远大于对比例，表明本发明的抑菌作用强.
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (8)

1.一种天门冬抗菌提取液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)烘干、粉碎：将天门冬块根用清水洗涤干净，放置烘干机中烘干，然后放入粉碎机中进行粉碎，得天门冬粉末；
(2)预处理：将步骤(1)获得的天门冬粉末浸泡入50-60℃的柠檬水中并搅拌均匀，获得天门冬悬浊液；
(3)超声、酶解：将步骤(2)获得的天门冬悬浊液和表面活性剂放入体积分数为70-80％的乙醇溶液中，搅拌均匀后，采用盐酸调节pH为5-9，加入纤维素酶，超声提取；
(4)过滤浓缩：将超声后的提取液过滤，然后将滤液置于旋转蒸发仪上减压浓缩，对浓缩后的浓缩液进行离心处理；
(5)灭菌：采用高压蒸汽对离心液灭菌后即可得到本发明的天门冬提取液。
2.根据权利要求1所述的天门冬抗菌提取液的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中天门冬粉末与柠檬水的质量比为1-2:20-30。
3.根据权利要求1所述的天门冬抗菌提取液的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中天门冬悬浊液与乙醇的质量比为1：5-10，所述表面活性剂占总质量的2-5％。
4.根据权利要求1所述的天门冬抗菌提取液的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中超声提取的超声波频率为30-40kHz，超声提取的温度为40-50℃，提取时间为20-30min。
5.根据权利要求1所述的天门冬抗菌提取液的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中超声提取的次数为2-3次。
6.根据权利要求1所述的天门冬抗菌提取液的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中的浓缩液的体积浓度为1-5g/ml。
7.根据权利要求1所述的天门冬抗菌提取液的制备方法，其特征在于，所述离心的转速为3000-4000r/min，离心时间为10-15min。
8.根据权利要求1所述的天门冬抗菌提取液的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂为聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸酯或月桂酰肌氨酸钠中的一种或两种以上。
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