CN106359092B - 小立碗藓原丝体快速繁殖方法 - Google Patents
小立碗藓原丝体快速繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106359092B CN106359092B CN201610772610.2A CN201610772610A CN106359092B CN 106359092 B CN106359092 B CN 106359092B CN 201610772610 A CN201610772610 A CN 201610772610A CN 106359092 B CN106359092 B CN 106359092B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protonema
- small liwan
- liwan moss
- rapid propagation
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000005498 polishing Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 15
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 9
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 claims description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 4
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 4
- NGPGDYLVALNKEG-UHFFFAOYSA-N azanium;azane;2,3,4-trihydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O NGPGDYLVALNKEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Inorganic materials [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 3
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 claims description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 claims description 3
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 2
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 claims 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910004619 Na2MoO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 claims 1
- 229910052603 melanterite Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000021332 multicellular organism growth Effects 0.000 claims 1
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 claims 1
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 abstract description 16
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 13
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 3
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000195889 Funariaceae Species 0.000 description 2
- 241000195875 Funariales Species 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 108700003861 Dominant Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000195887 Physcomitrella patens Species 0.000 description 1
- 241001504286 Physcomitrium Species 0.000 description 1
- 241000135309 Processus Species 0.000 description 1
- 241000592344 Spermatophyta Species 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000005418 vegetable material Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供小立碗藓原丝体快速繁殖方法，将生长5天的小立碗藓原丝体材料经过机械打磨粉碎继代，设置以BCD培养基为基础培养基的不同钙离子浓度的测试平板，经过打磨继代后接种于各种不同浓度的CaCl2的BCD培养基平板上，进行生长状态观测，最终确定原丝体生长及分化状态最佳的钙离子浓度。本发明针对小立碗藓的原丝体培养进行了培养及配方的改进实验表明，在控制培养箱温度为23℃，80μmol photons m‑ 2s‑1光强，16小时长日照下，5mM钙离子浓度可获得生长最旺盛、材料最多的植物原丝体，为后期原生质体制备及转化重组实验提供了技术基础。
Description
所属领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种小立碗藓原丝体组织培养快速繁殖方法，尤其涉及一种促进小立碗藓原丝体快速大量繁殖的培养基。
背景技术
苔藓是最古老的陆生植物之一，在进化地位上位于藻类之后、蕨类和种子植物之前，和微管植物属于单起源系统上的姐妹进化支，具有极其重要的研究地位(Kidron,2014；曹同等，2014)。全世界约有21200种，遍布除海洋外的地球上每个角落，甚至生长于荒漠、冻原及岩石上，耐旱、耐寒、耐贫瘠，适应力极强，是大自然的先锋与拓荒者(Kidron,2014；曹同等，2014)。
小立碗藓是葫芦藓目(Funariales)葫芦藓科(Funariaceae)小立碗藓属(Physcomitrium)的藓类。因其具有较高的核DNA同源重组率及较特殊的系统进化地位，已经成为研究植物功能基因组学等方面的模式植物。小立碗藓是以单倍体世代占优势的植物，作为基因组学研究模式系统主要是利用其原丝体阶段进行原生质体制备及同源重组的外源基因转化。以小立碗藓为对象开展的基因组学和分子生物学研究发现，为适应陆地生活，小立碗藓获得耐干旱基因、耐高温基因、感光基因、紫外修复基因等陆地胁迫响应基因(Rabara et al.,2013；Rensing et al.,2008)。此外，还具有易培养、生活周期短、基因组与外源基因具有极高的同源重组率、生活史中单倍体的配子体阶段占优势、基因敲除后突变表型易于观察等独特的研究优势(Schaefer and1997)。而且由于其抗逆能力极强，能经历长期脱水而迅速恢复再生，对于研究植物抗逆性形成机制和进化意义非常有价值(Hiss et al.,2014)。然而作为转基因材料的主要来源原丝体的生长状态和数量是限制转基因效率的主要因素，现有技术的繁殖效率较低，急需改良方法来增加繁殖效率。
发明内容
本发明旨在提供一种小立碗藓原丝体的组织培养方法，公开一种原丝体快速繁殖的培养基配方，为基因功能研究打下了基础。该方法利用5mM终浓度的CaCl2与BCD完全培养基进行小立碗藓的组织培养繁殖，使小立碗藓原丝体在快繁3-5天分化效率最高，并在快繁5天仍能维持较高的繁殖效率。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
小立碗藓原丝体快速繁殖方法，取小立碗藓孢子，经过两次植物组织快繁培养后，将继代用的无菌培养小立碗藓材料在23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol photons m-2s-1的培养箱中培养1周后，取其植株材料，经机械打磨粉碎后移液管接种于BCD+CaCl2的培养基平板中，设置0mM，1mM，3mM，5mM，10mM五种不同CaCl2浓度，置于23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol photons m-2s-1的培养箱中培养一周，期间定期显微镜进行原丝体生长状态观测，并进行原丝体生物量测量和分枝数统计。
如所述的小立碗藓原丝体快速繁殖方法，其中所述BCD培养基配方为:MgSO4.7H2O1μM，KH2PO4 18.4μM，KNO3 10μM，FeSO4.7H2O 45μM；CuSO4.5H2O 0.22μM，H3BO3 10μM，CoCl2.6H2O0.23μM，Na2MoO4.2H2O 0.1μM，ZnSO4.7H2O 0.19μM，MnCl2.4H2O 2μM，KI 0.17μM，酒石酸铵5mM，琼脂0.8％，121℃，20min灭菌。
如所述的小立碗藓原丝体快速繁殖方法，其中所述的培养基中设置为含有5mMCaCl2浓度。
如所述的小立碗藓原丝体快速繁殖方法，其中所述机器打磨是用匀浆仪打磨，采用10s/次，3次/材料打磨参数进行材料打磨与继代快繁。
如所述的小立碗藓原丝体快速繁殖方法，其中所述小立碗藓原丝体生长状态观测是采用光学显微镜及带荧光通道的显微镜进行不同放大倍数下的原丝体生长状态观测，并每天拍照记录，对比原丝体分支及生长状态。
如所述的小立碗藓原丝体快速繁殖方法，其中所述小立碗藓原丝体生物量测量和分枝数统计是随机挑选每个时间点每个浓度下不少于10个显微照片，使用ImageJ测量生物量，统计分枝数，用student’s t-test进行统计分析。
本发明的小立碗藓组织培养快繁方法，是将继代用的无菌培养小立碗藓材料在23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol photons m-2s-1的培养箱中培养1周左右，取其植株材料，经机械打磨粉碎后移液管接种于BCD+CaCl2的培养基平板中，设置0mM，1mM，3mM，5mM，10mM五种不同CaCl2浓度，置于23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol photons m-2s-1的培养箱中培养一周左右。BCD培养基配方为:MgSO4.7H2O 1μM，KH2PO4 18.4μM，KNO3 10μM，FeSO4.7H2O 45μM；CuSO4.5H2O 0.22μM，H3BO3 10μM，CoCl2.6H2O 0.23μM，Na2MoO4.2H2O 0.1μM，ZnSO4.7H2O0.19μM，MnCl2.4H2O 2μM，KI 0.17μM，酒石酸铵5mM，琼脂0.8％，121℃，20min灭菌。培养条件为：23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol photons m-2s-1的培养箱。小立碗藓原丝体在5mMCaCl2浓度下，可以达到原丝体的最大量分枝生长，并在培养5天后依旧维持原丝体旺盛生长状态。
与现有技术相比，本发明的原丝体的分枝数增加了3倍，生物量增加了1.6倍，极大的提高了后续作为转基因材料的应用潜力。本发明通过培养材料的显微观测进行原丝体生长状态的判断及记录。本发明方法的使用能以最适条件促进小立碗藓原丝体的分枝及生长，在短时间内获得最大量的小立碗藓原丝体材料。
附图说明：
图1为本发明小立碗藓原丝体生长状态显微镜照片，从上至下对应机械粉碎继代后生长1-6天；从左至右对应培养基中CaCl2浓度0mM，1mM，3mM，5mM，10mM；图1为显微镜观测目镜16倍前提下，物镜放大倍数20倍自然光下的原丝体生长形态；
图2为不同钙离子浓度梯度下原丝体生物量测量数；
图3为不同钙离子浓度梯度下原丝体分枝数鉴定统计数。
具体实施方式
下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
实施例1：
1.材料和方法：
1.1研究材料：
本发明使用材料为小立碗藓(Physcomitrella patens)GD2004种，经过多代植物组织快繁培养保存在实验室培养箱中。
1.2研究方法：
1.2.1实验设计：将生长5天的小立碗藓原丝体材料经过机械打磨粉碎继代，设置以BCD培养基为基础培养基的不同钙离子浓度的测试平板，经过打磨继代后接种于各种不同浓度的CaCl2的BCD培养基平板上，进行生长状态观测，最终确定原丝体生长及分化状态最佳的钙离子浓度。
1.2.2原丝体组织培养快繁技术：利用匀浆仪进行植物材料的机械打磨，将植物匀浆接种于培养基上，置于23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol photons m-2s-1的培养箱，本发明使用匀浆仪为：IKA(ULTRA TURRAX Tube Drive)，采用10s/次，3次/材料打磨参数进行材料打磨与继代快繁。
1.2.3培养基设置：本发明利用BCD基础培养基作为背景培养基，该培养基配方为：MgSO4.7H2O 1μM，KH2PO4 18.4μM，KNO3 10μM，FeSO4.7H2O 45μM；CuSO4.5H2O 0.22μM，H3BO310μM，CoCl2.6H2O 0.23μM，Na2MoO4.2H2O 0.1μM，ZnSO4.7H2O 0.19μM，MnCl2.4H2O2μM，KI0.17μM，酒石酸铵5mM，琼脂0.8％，121℃，20min灭菌。在该培养基基础上进行0mM，1mM，3mM，5mM，10mM五种不同CaCl2浓度的设置。
1.2.4小立碗藓原丝体生长状态观测：采用光学显微镜及带荧光通道的显微镜进行不同放大倍数下的原丝体生长状态观测，并每天拍照记录，对比原丝体分支及生长状态。本发明使用显微镜为中国科学院昆明植物研究所生物技术平台荧光显微镜，仪器型号：Leica DM5500B。
1.2.5小立碗藓原丝体生物量测量和分枝数统计：随机挑选每个时间点每个浓度下不少于10个显微照片，使用ImageJ测量生物量，统计分枝数，用student’s t-test统计分析。
2.结果与分析
2.1不同钙离子浓度下小立碗藓原丝体形态：
小立碗藓是单倍体占优势的植物，其再生能力极强，经过植株材料的机械粉碎后无菌条件下接种培养基可进行大量繁殖。新生植物组织为小立碗藓的原丝体形态，原丝体为在培养基表面匍匐生长，通过不断地细胞分枝及细胞延长获得生物量的增加。功能基因组学的研究一般是利用原丝体生长状态的小立碗藓进行原生质体的制备，进一步进行基因转化。分枝越多和生物量越大是制备原生质体的最佳条件。我们利用显微观测的方式进行不同钙离子浓度下小立碗藓原丝体生长状态观测，依据同一视野下新生细胞分支判断植物材料的活力及原丝体的生长状态，发现0mM和10mM生长最缓慢，主枝延生，但基本上不新生分枝，在5mM钙离子浓度下，小立碗藓原丝体分枝及活力最为旺盛(图1，箭头显示新生分枝)。标尺＝100μm。
2.2不同钙离子浓度下小立碗藓原丝体生物量
统计结果显示，置于23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol photons m-2s-1的培养箱中时，在5mM钙离子浓度下，小立碗藓原丝体的生物量最高(图2)。星号显示t-test检测5mM钙离子浓度生物量与其他钙离子浓度生物量在p<0.01水平上的显著性差异；数据表示为平均值±标准误，n≧10。
2.3不同钙离子浓度下小立碗藓原丝体分枝数统计
计数每一种培养下新生分枝或侧枝数，发现0mM和10mM生长最缓慢，主枝延生，但基本上不新生分枝，在5mM钙离子浓度下，小立碗藓原丝体分枝最多(图3)。星号显示t-test检测在5mM钙离子浓度分枝数与其他钙离子浓度分枝数p<0.01水平上的显著性差异；数据表示为平均值±标准误，n≧10。
Claims (4)
1.小立碗藓原丝体快速繁殖方法，取小立碗藓孢子，经过两次植物组织快繁培养后，将继代用的无菌培养小立碗藓材料在23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol·m-2s-1的培养箱中培养1周后，取其植株材料，经机械打磨粉碎后接种于BCD+CaCl2的培养基平板中，CaCl2浓度为5mM，置于23℃，16h光照，8h黑暗，光强80μmol·m-2s-1的培养箱中培养一周，期间定期显微镜进行原丝体生长状态观测，并进行原丝体生物量测量和分枝数统计；
所述BCD培养基配方为：MgSO4·7H2O 1μM，KH2PO4 18.4μM，KNO3 10μM，FeSO4·7H2O 45μM；CuSO4.5H2O 0.22μM，H3BO3 10μM，CoCl2.6H2O 0.23μM，Na2MoO4·2H2O 0.1μM，ZnSO4·7H2O0.19μM，MnCl2·4H2O 2μM，KI 0.17μM，酒石酸铵5mM，琼脂0.8％，121℃，20min灭菌。
2.如权利要求1所述的小立碗藓原丝体快速繁殖方法，其特征在于所述机器打磨是用匀浆仪打磨，采用10s/次、3次/材料打磨参数进行材料打磨与继代快繁。
3.如权利要求1所述的小立碗藓原丝体快速繁殖方法，其特征在于所述小立碗藓原丝体生长状态观测是采用光学显微镜及带荧光通道的显微镜进行不同放大倍数下的原丝体生长状态观测，并每天拍照记录，对比原丝体分枝及生长状态。
4.如权利要求1所述的小立碗藓原丝体快速繁殖方法，其特征在于所述小立碗藓原丝体生物量测量和分枝数统计是随机挑选每个时间点每个浓度下不少于10个显微照片，使用ImageJ测量生物量，统计分枝数，用student’s t-test进行统计分析。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610772610.2A CN106359092B (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 小立碗藓原丝体快速繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610772610.2A CN106359092B (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 小立碗藓原丝体快速繁殖方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106359092A CN106359092A (zh) | 2017-02-01 |
| CN106359092B true CN106359092B (zh) | 2018-12-14 |
Family
ID=57902295
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610772610.2A Active CN106359092B (zh) | 2016-08-30 | 2016-08-30 | 小立碗藓原丝体快速繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106359092B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107135792A (zh) * | 2017-06-22 | 2017-09-08 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种对齿藓用于生态修复的方法 |
| CN109937881A (zh) * | 2019-04-21 | 2019-06-28 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种明叶藓原丝体和配子体的快速繁殖方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1685809A (zh) * | 2005-06-09 | 2005-10-26 | 上海师范大学 | 诱导小立碗藓产生愈伤组织并分化生成配子体的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100425529B1 (ko) * | 2001-07-13 | 2004-03-30 | 학교법인고려중앙학원 | 이끼의 조직배양을 이용한 문자 및 그림 캐릭터 생산방법 |
-
2016
- 2016-08-30 CN CN201610772610.2A patent/CN106359092B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1685809A (zh) * | 2005-06-09 | 2005-10-26 | 上海师范大学 | 诱导小立碗藓产生愈伤组织并分化生成配子体的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Tissue Culturing and Harvesting of Protonemata from the Moss Physcomitrella patens;Xiaoqin Wang et.al.,;《bio-protocol》;20150805;第5卷(第15期);材料和试剂、方法部分 * |
| 小立碗藓愈伤组织诱导和培养;潘一廷等;《植物生理学通讯》;20050630;第41卷(第3期);第293-296页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106359092A (zh) | 2017-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100370005C (zh) | 土壤藻类对荒漠半荒漠土壤的改良方法 | |
| CN102119655B (zh) | 铁皮石斛自然光快繁育苗方法 | |
| CN104611227B (zh) | 一种耐受高ph的斜生栅藻及其选育方法 | |
| CN103444523B (zh) | 一种花药快速诱导胚性愈伤组织再生植株的方法 | |
| CN106359092B (zh) | 小立碗藓原丝体快速繁殖方法 | |
| CN107177505A (zh) | 一株栅藻及其培养方法和应用 | |
| CN102388828A (zh) | 一种海水珍珠贝快速生长品系培育的育种方法 | |
| CN102827756B (zh) | 应用于大豆下胚轴外植体转化受体系统的农杆菌局部侵染方法和装置 | |
| CN100477906C (zh) | 采用甲基磺酸乙酯诱变木本植物的方法 | |
| CN103993036A (zh) | 一种用于紫萍愈伤诱导并且能实现转基因稳定遗传的转化体系 | |
| CN106386483B (zh) | 一种皱叶青藓的快速繁殖方法 | |
| CN102138524B (zh) | 一种黄连木茎段快速繁殖的方法 | |
| CN105638484A (zh) | 浮萍室内培养与繁殖的方法 | |
| CN106119185A (zh) | 一种小立碗藓原生质体的制备方法 | |
| CN103160440B (zh) | 一株栅藻藻株及其应用 | |
| CN110663551A (zh) | 一种抗逆性花椰菜新品种的培育方法 | |
| CN113265369B (zh) | 一种快速提高短叶对齿藓原丝体生物量的液体培养方法 | |
| CN103540533B (zh) | 产油单针藻lb59的获得及应用 | |
| CN1736163A (zh) | 海带良种化生产工艺 | |
| CN112913678A (zh) | 一种在裙带菜中构建永久f2孢子体群体的方法 | |
| CN101824396B (zh) | 诱导培养基及用其培养番茄小孢子获得愈伤组织的方法 | |
| CN103168689B (zh) | 一种花生短周期组织培养方法 | |
| CN1817111A (zh) | 一种羊栖菜苗种技术 | |
| Waters et al. | Arabidopsis hydroponics and shoot branching assay | |
| CN116138162B (zh) | 一种利用凤梨果实冠芽诱变新种质的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240131 Address after: 323000 1101-1, building 1, Lvgu Information Industrial Park, Liandu District, Lishui City, Zhejiang Province Patentee after: LISHUI RUNSHENG BRYOPHYTA TECHNOLOGY CO.,LTD. Country or region after: China Address before: 650201 No. 132 Lanhei Road, Kunming City, Yunnan Province Patentee before: KUNMING INSTITUTE OF BOTANY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES Country or region before: China |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Rapid propagation method of small bowl moss protonema Granted publication date: 20181214 Pledgee: China Zheshang Bank Co.,Ltd. Lishui Branch Pledgor: LISHUI RUNSHENG BRYOPHYTA TECHNOLOGY CO.,LTD. Registration number: Y2024980027708 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |