CN105638484A - 浮萍室内培养与繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种浮萍室内培养与繁殖的方法，包括以下步骤：将浮萍去根、灭菌后，置于Hoagland`s？E+培养基中培养；选择培养后的一簇单克隆浮萍，在无菌环境下转接至无菌培养液中，继续培养。本发明提供了一种可操作的、实现浮萍在室内自然培养的方法，可为风险评价试验提供高质量的生物试材，有利于浮萍生物毒性试验的顺利开展。
Description
技术领域
本发明涉及植物培养技术领域，尤其涉及一种浮萍室内培养与繁殖的方法。
背景技术
浮萍科植物是被子植物中最小和最简化的，以其生长迅速、营养价值高、生物产量高而著称，在生活污水处理、饲料和沼气生产中具有较大的作用。浮萍为漂浮水生维管束植物，全球广泛分布，多年来被用于植物生理学研究，近年来，国外许多学者已经就浮萍的应用进行了深入的水生生态毒理学研究，在国内，浮萍植物作为毒理学材料加以应用的报道尚属少见。
我国《化学品测试方法生物系统效应卷》中推荐使用浮萍作为试验物种，用于评价化学品及其有毒物质对水生植物的毒性。目前国内文献多是对浮萍生长条件及生长环境方面的研究，一般在水田池沼或其它静水水域中采用种子繁殖和分株繁殖的方法去进行种植，而大面积的繁殖与培养，很难保证检测试验中对浮萍质量的要求。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种可操作的、实现浮萍在室内自然培养的方法，可为风险评价试验提供高质量的生物试材，有利于浮萍生物毒性试验的顺利开展。
为解决上述技术问题，提供了一种浮萍室内培养与繁殖的方法，包括以下步骤：
S1、将浮萍去根、灭菌后，置于Hoagland`sE+培养基中培养；
S2、选择培养后的一簇单克隆浮萍，在无菌环境下转接至Hoagland`sE+培养基中，继续培养。
上述的方法，优选的，所述步骤S1中，所述Hoagland`sE+培养基的液面高度为5cm～10cm；培养过程中，每隔5天更换一次Hoagland`sE+培养基。
上述的方法，优选的，所述步骤S2中，所述的Hoagland`sE+培养基的液面高度为3cm；培养过程中，每隔2天更换一次Hoagland`sE+培养基。
上述的方法，优选的，所述步骤S1中所述灭菌具体为：将去根后的浮萍用0.1％次氯酸钠浸泡灭菌1min，再清水冲洗3次。
上述的方法，优选的，所述步骤S1中所述Hoagland`sE+培养基的pH为6～9。
上述的方法，优选的，所述步骤S1中，所述浮萍的培养密度为15～30叶/缸。
上述的方法，优选的，所述步骤S1中，所述步骤S1的培养条件为：温度24±2℃；采用全波长荧光灯照明，光照强度6500～10000Lux；光照比为16h/8h(光照条件下放置16h，黑暗条件下放置8h)。进一步的，所述全波长荧光等固定在距植株30cm～50cm的上方。
上述的方法，优选的，所述步骤S2中所述继续培养的条件为：温度24±2℃；光照强度6500～10000Lux；光照比为16h/8h(光照条件下放置16h，黑暗条件下放置8h)。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
(1)本发明提供了一种浮萍室内培养与繁殖的方法，操作简单易行，成本低，该方法可保证浮萍的生长，存活率高，符合非洲浮萍的生活规律，可为药物安全性评价提供高质量的生物试材，可实现浮萍的批量培养。
(2)本发明提供了一种浮萍室内培养与繁殖的方法法，选取一簇单克隆浮萍，标记浮萍的名称品系及世代。
(3)本发明提供了一种浮萍室内培养与繁殖的方法，在pH为6～9的环境下培养，低pH对浮萍的生长具有抑制作用，浮萍对pH耐受的低限在5～6之间，在6～9的pH范围内，能够正常生长。
(4)本发明提供了一种浮萍室内培养与繁殖的方法，将浮萍在温度为24±2℃，光照强度6500～10000Lux；光照比为16h/8h的条件先培养，其中浮萍在温度为24±2℃下可防止浮萍在低温下形成冬芽；将灯固定在距植株30～50cm的上方，控制光照强度6500～10000Lux可预防热损伤。
附图说明
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。
图1为实施例1中浮萍的生长曲线图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
实施例
以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。
实施例1：
一种本发明的浮萍室内培养与繁殖方法，包括以下步骤：
(1)选择体积为30L，长×宽×高＝5cm×3cm×2cm的方形玻璃缸作为浮萍的养殖缸，使用前用2mg/L高锰酸钾溶液(或者采用4mg/L次氯酸钠溶液)浸泡养殖缸30min，再用清水冲洗干净。
(2)在洗净的养殖缸内放置Hoagland`sE+培养基，控制养殖缸内的液面高度为10cm(液面高度为5～10cm均可实施)。
使用的Hoagland`sE+培养基，其配方为：
表1：Hoagland`sE+培养基配方表
| 成分 | 浓度 |
| Ca(NO3)2·4H2O | 1.18g/L |
| KNO3 | 0.51g/L |
| MgSO4·7H2O | 0.49g/L |
| KH2PO4 | 0.14g/L |
| H3BO3 | 2.86mg/L |
| MnCl2·4H2O | 1.81mg/L |
| ZnSO4·7H2O | 0.22mg/L |
| CuSO4·5H2O | 0.08mg/L |
| H2MoO4·H2O/Na2MoO4·2H2O | 0.02/0.03mg/L |
| FeEDTA溶液 | 2mL/L |
表1中，FeEDTA溶液的制备方法为：取2.78g的七水硫酸亚铁和3.73g的乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)，用蒸馏水定容至500mL，配制成乙二胺四乙酸铁盐(FeEDTA)溶液。
(3)在野外使用1L烧杯及孔径为2mm的抄网于田间采集健康的浮萍，用清水冲洗干净，再刀片去根得到去根浮萍。
(4)将去根浮萍用0.1％次氯酸钠浸泡灭菌1min，然后用清水冲洗灭菌后的浮萍3次。
(5)将经过步骤(2)灭菌后的去根浮萍置于步骤2的含Hoagland`sE+培养基(用HCl和KOH调整Hoagland`sE+培养基pH为7.0)的养殖缸中培养，控制浮萍的培养密度为20叶/缸，培养温度为24±2℃，光照强度为8000Lux±200Lux，光照时间为16h，黑暗时间为8h。培养过程中，每5天更换一次Hoagland`sE+培养基。
(6)按照步骤(5)的培养方法培养一个月后，从养殖缸中随机选取4片浮萍，在无菌环境下转接至含100mL的无菌Hoagland`sE+培养基(pH为7)的组织培养瓶中(组织培养瓶的体积为250mL，控制培养温度为24±2℃，光照强度为8000Lux±200Lux，光照时间为16h，黑暗时间为8h。培养过程中，每2天更换一次培养基，共设3个重复，每天统计叶片总数，周期为7天。表2为浮萍叶片数的统计结果，图1为浮萍的生长曲线图。
表2：浮萍的叶片数量统计表
从表2的结果中可知：6天叶状体数目平均可增长20倍，最高增长近21倍，浮萍的生长基本为指数增长。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明的精神实质和技术方案的情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。
Claims (8)
1.一种浮萍室内培养与繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将浮萍去根、灭菌后，置于Hoagland`sE+培养基中培养；
S2、选择培养后的一簇单克隆浮萍，在无菌环境下转接至Hoagland`sE+培养基中，继续培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述Hoagland`sE+培养基的液面高度为5cm～10cm；培养过程中，每隔5天更换一次Hoagland`sE+培养基。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述的Hoagland`sE+培养基的液面高度为3cm；培养过程中，每隔2天更换一次Hoagland`sE+培养基。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中所述灭菌具体为：将去根后的浮萍用0.1％次氯酸钠浸泡灭菌1min，再清水冲洗3次。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中所述Hoagland`sE+培养基的pH为6～9。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述浮萍的培养密度为15～30叶/缸。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述步骤S1的培养条件为：温度24±2℃；采用全波长荧光灯照明，光照强度6500～10000Lux；光暗比为16h/8h。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中所述继续培养的条件为：温度24±2℃；光照强度6500～10000Lux；光照比为16h/8h。
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| CN105638484B (zh) | 2018-09-18 |
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Assignee: CHANGSHA AGRI BIOLOGY TECHNOLOGY CO.,LTD. Assignor: HUNAN PLANT PROTECTION INSTITUTE Contract record no.: X2020430000013 Date of cancellation: 20231227 |
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