CN106338552B - 一种检测油制品中的3-氯丙醇酯的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及3‑氯丙醇酯的检测领域，公开了一种检测油制品中的3‑氯丙醇酯的方法，包括：(1)将待测油制品与氢氧化钠的甲醇溶液接触以进行水解，得到水解产物；(2)将所述水解产物与含有硫酸和卤化钠的混合液接触以进行中和，得到中和产物；其中，所述卤化钠为溴化钠和/或碘化钠；(3)用有机溶剂对所述中和产物进行萃取，并将得到的萃取液与苯硼酸接触反应；(4)对步骤(3)中反应得到的反应产物进行气相色谱‑质谱分析。通过上述技术方案，使用氢氧化钠的甲醇溶液对待测样品进行碱水解，使用溴化钠和硫酸的混合液对碱水解后的产物进行中和处理，能够有效提高后续检测的灵敏度、特异性以及精密度。
Description
技术领域
本发明涉及3-氯丙醇酯(3-MCPD酯)检测领域，具体地，涉及一种检测油制品中的3-氯丙醇酯的方法。
背景技术
3-MCPD酯是由甘油中1号或者3号位的羟基被氯原子取代而形成的一氯取代物，无色，具有愉快性香味。易溶于乙醇、水、丙酮等。1980年Davidek等首次在酸水解植物蛋白(HVP)中发现3-氯丙醇(3-MCPD)酯，此后陆续有研究者在各类热加工食品中发现了不同水平的3-MCPD酯。3-MCPD酯主要形成于食品的加工过程中，尤其是热加工过程，如油脂的精炼、氢化、脱臭等。3-MCPD酯目前引起人们的广泛关注主要是由于3-MCPD酯被人体摄入后，会被脂肪酸酶水解成游离的3-MCPD，游离的3-MCPD具有潜在的致癌性，并且能抑制雄性激素的分泌，使精子数减少，精子活性降低，使雄性动物生殖能力减弱，甚至不育。
3-MCPD酯测定方法的研究已经成为食品安全检测的热点之一，目前对油脂中3-MCPD的测定主要有间接测定和直接测定的方法，间接测定的原理是将3-MCPD酯水解形成游离的3-MCPD，再将3-MCPD进行衍生，使用气相色谱-质谱分析(GC-MS)进行测定，而直接测定是将样品净化后经液相色谱分离再使用质谱测定。
其中，直接测定的方法比较难获得所需要的标准品且费用较高。
其中，间接测定的方法经济，所需标准品种类少，且灵敏度较高。间接法测定过程中，衍生化试剂有丙酮、全氟酰基咪唑(HFBI)和苯基硼酸(PBA)等。丙酮在衍生时，需要利用甲苯-4-磺酸进行催化。HFBI可与许多氯丙醇作用，在羟基上引入七氟丁酰基，HFBI法衍生前需要确保溶液经过充分的脱水，此外还要采用硅藻土基质固相分散萃取法净化，操作复杂、繁琐，并且HFBI试剂价格很高。PBA只能与二醇类物质能够发生专一性化学反应，可直接在水溶液中与3-MCPD反应，所需前处理步骤较少，成本较低，在3-MCPD酯检测中较为常用。目前间接法测定3-MCPD酯的检出限可达到27-1000μg/kg。
目前，在间接测定的方法中，灵敏度、特异性和精密度仍有待进一步提高。
发明内容
本发明的目的是为了克服以上缺陷，提供一种能够提高检测灵敏度、特异性以及精密度的油制品中的3-氯丙醇酯的检测方法。
为了实现上述目的，本发明提供了一种检测油制品中的3-氯丙醇酯的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将待测油制品与氢氧化钠的甲醇溶液接触以进行水解，得到水解产物；
(2)将所述水解产物与含有硫酸和卤化钠的混合液接触以进行中和，得到中和产物；其中，所述卤化钠为溴化钠和/或碘化钠；
(3)用有机溶剂对所述中和产物进行萃取，并将得到的萃取液与苯硼酸接触反应；
(4)对步骤(3)中反应得到的反应产物进行气相色谱-质谱分析。
优选地，在所述含有硫酸和卤化钠的混合液中，硫酸和卤化钠的摩尔比为0.27-0.28：1。
优选地，所述卤化钠为溴化钠。
优选地，所述有机溶剂萃取的步骤包括：所述萃取的步骤包括：用正己烷对所述中和产物进行萃取，得到下层萃取液；用乙醚和乙酸乙酯的混合液对所述下层萃取液进行萃取，得到上层萃取液。其中，所述上层萃取液即为如上所述的萃取液。
优选地，在所述乙醚和乙酸乙酯的混合液中，乙醚和乙酸乙酯的体积比为1.2-1.8:1。
优选地，该方法还包括：将萃取产物与无水硫酸镁接触的步骤。
优选地，将所述萃取液与苯硼酸接触的步骤包括将所述萃取液与苯硼酸的饱和乙醚溶液接触。
通过上述技术方案，在3-MCPD酯的间接法检测中，使用氢氧化钠的甲醇溶液对待测样品进行碱水解，使用卤化钠和硫酸的混合液对碱水解后的产物进行中和处理，能够有效提高后续检测的灵敏度、特异性以及精密度。在硫酸和卤化钠的摩尔比为0.27-0.28：1、所述卤化钠为溴化钠、依次使用正己烷以及乙醚和乙酸乙酯的混合液对中和产物进行萃取、苯硼酸衍生前将萃取产物与无水硫酸镁接触、使用苯硼酸的饱和乙醚溶液进行衍生等优选的条件下，检测的灵敏度、特异性以及精密度能够得到进一步提高。
本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是为大豆油对水解时间的响应曲线。
图2是为花生油对水解时间的响应曲线。
图3是为菜籽油对水解时间的响应曲线。
图4是为棕榈油对水解时间的响应曲线。
图5是为芝麻油对水解时间的响应曲线。
图6是为玉米油对水解时间的响应曲线。
图7是为橄榄油对水解时间的响应曲线。
图8是为葡萄籽油对水解时间的响应曲线。
图9是为葵花籽油对水解时间的响应曲线。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
一方面，本发明提供了一种检测油制品中的3-氯丙醇酯的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将待测油制品与氢氧化钠的甲醇溶液接触以进行水解，得到水解产物；
(2)将所述水解产物与含有硫酸和卤化钠的混合液接触以进行中和，得到中和产物；；其中，所述卤化钠为溴化钠和/或碘化钠
(3)用有机溶剂对所述中和产物进行萃取，并将得到的萃取液与苯硼酸接触反应；
(4)对步骤(3)中反应得到的反应产物进行气相色谱-质谱分析。
现有技术中通常使用甲醇钠对油制品进行碱水解，然后使用冰乙酸和氯化钠的混合液对碱水解后的油制品进行中和反应。但在研究的过程中，本发明的发明人发现，通过使用氢氧化钠的甲醇溶液，以及硫酸和选自溴化钠和碘化钠的卤化钠的混合液对碱水解后的油制品进行中和反应，能够提高后续检测的灵敏度、特异性以及精密度，起到意料不到的协同效果，从而完成了本发明。
根据本发明，在所述氢氧化钠的甲醇溶液中，氢氧化钠的含量可以在较宽的范围内变化。综合考虑待测油制品的水解效果，优选的，相对于1L所述氢氧化钠的甲醇溶液，氢氧化钠的含量为23-28g。
根据本发明，加入到待测油制品中的氢氧化钠的甲醇溶液的量也可以在较宽的范围内，只要能够将待测油制品充分水解即可。优选的，综合考虑待测油制品的水解效果，优选的，当在所述氢氧化钠的甲醇溶液中，氢氧化钠的含量优选在如上范围内时，相对于100mg的所述待测油制品，所述氢氧化钠的甲醇溶液的用量为180-220μL。
本发明对所述水解的条件没有特别的限制，可以采用本领域常规的对油制品进行碱水解的条件进行水解。优选的，所述水解的时间为1-2.5min。
根据本发明，为了便于后续气相色谱-质谱联用分析待测油制品中的3-氯丙醇酯的含量，本发明的方法还包括在水解前，向待测油制品中加入内标。所述内标可以为本领域常规的用于测定3-氯丙醇酯的内标，例如，可以为但并不限于，氘代同位素d5-3-MCPD酯标准品。
另外，根据本发明的方法，还包括在对所述待测油制品进行碱水解前，将所述待测油制品与有机溶剂接触的步骤，优选的，所述有机溶剂为甲基叔丁基醚。所述有机溶剂的用量可以在较宽的范围内进行选择，例如，相对于100mg的所述待测油制品，可以为80-120μL。
优选的，在加入氘代同位素d5-3-MCPD酯标准品和甲基叔丁基醚之后，还包括将所得的待测油制品与氘代同位素d5-3-MCPD酯标准品和甲基叔丁基醚形成的混合液进行充分搅拌的步骤，以使所述混合液能够得到充分混合。所述搅拌例如可以为漩涡搅拌。
尽管将使用氢氧化钠的甲醇溶液的水解步骤和使用含有硫酸和卤化钠的混合液的中和步骤进行结合即能够实现本发明的发明目的，但本发明的发明人发现，当在所述含有硫酸和卤化钠的混合液中，硫酸和卤化钠的摩尔比优选为0.27-0.28：1；更优选的，相对于100mg的所述待测油制品，所述含有硫酸和卤化钠的混合液的用量为550-650μL时，本发明的目的能够得到进一步实现，也即，能够进一步提高检测的灵敏度、特异性以及精密度。
根据本发明，所述卤化钠优选为溴化钠，当所述卤化钠为溴化钠时，如上所述氢氧化钠的甲醇溶液与含有硫酸和卤化钠的混合液在反应中的协同效果能够得到进一步提升。
本发明对所述中和反应的条件也没有特别的限制，可以采用本领域常规的对油制品碱水解后的产物进行中和反应的条件进行中和。优选的，所述中和反应的时间为1-2.5min。
根据本发明，用于对中和产物进行萃取的有机溶液可以为本领域常规使用的各种有机溶剂，例如但并不限于，正己烷、环己烷、异辛烷、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷中的一种或多种。但本发明的发明人发现，当用于萃取的有机溶剂选自选自正己烷、乙酸乙酯和乙醚中的一种或多种时，所述萃取效果更佳。
更为优选的，本发明的发明人发现，通过如下萃取方法对中和产物进行萃取能够进一步提高后续气相色谱-质谱分析的灵敏度、特异性和精密度：先使用正己烷对所述中和产物进行萃取，得到下层萃取液；然后再使用乙醚和乙酸乙酯的混合液对所述下层萃取液进行萃取，得到上层萃取液的。具体的，所述萃取的方法可以包括：相对于100mg的所述待测油制品，将550-650μL的正己烷加入到所述中和产物中，搅拌混合(例如，可以为漩涡搅拌)后，至少静置5min，待溶液分层后，弃去上层正己烷溶液，重复萃取2-3次，最后得到下层萃取液；然后再相对于100mg的所述待测油制品，将550-650μL的乙醚和乙酸乙酯的混合液加入到所述下层萃取液中，搅拌混合(例如，可以为漩涡搅拌)后，至少静置5min，待溶液分层后，分离出上层萃取液，重复萃取2-3次。
优选的，在所述乙醚和乙酸乙酯的混合液中，乙醚和乙酸乙酯的体积比为1.2-1.8:1。
根据本发明，为了进一步增加对油制品中的3-氯丙醇酯检测的灵敏度、特异性以及精密度，本发明的方法还优选包括将所述萃取产物与无水硫酸镁进行接触的步骤，然后再与苯硼酸接触进行衍生化。其中，此处所指的所述萃取产物与如上所述的下层萃取液是等同的。
根据本发明，使用苯硼酸进行衍生化的条件可以为本领域常规的苯硼酸衍生的条件，例如，接触的时间为1-12min，接触的温度为20-25℃。
根据本发明，优选的，将所述萃取液与苯硼酸接触的步骤包括将所述萃取液与苯硼酸的饱和乙醚溶液接触的步骤，在这样优选的情况下，能够进一步实现本发明的发明目的。
本发明的方法还优选包括将苯硼酸衍生化后的产物进行纯化的步骤，所述纯化的步骤可以通过例如萃取的方法实现。优选的，将苯硼酸衍生后的产物用惰性气体吹干，然后用有机溶剂复溶，搅拌混合并静置分层，得到含有目标产物的萃取液，即纯化液。其中，所述惰性气体优选为氮气，用于复溶的有机溶剂优选为正己烷、乙酸乙酯，更优选为正己烷。
所述气相色谱-质谱分析的方法可以为本领域常规的气相色谱-质谱的分析方法。
其中，所述色谱的条件可以包括：进样口温度为275-285℃；程序升温条件：初始温度80-90℃，保持10-15min，以18-22℃/min升至160-170℃，保持8-12min，然后再以18-22℃/min升至280-320℃，保持5-10min；载气：(高纯)氦气，流速为1.0-1.5mL/min；进样方式：脉冲不分流；进样体积：0.8-1.2μL。
其中，质谱的条件可以包括：电子轰击离子源(EI)，离子源温度为200-250℃；四级杆温度130-180℃；溶剂延迟4-8min；扫描方式：选择离子监测(SIM)模式。
根据本发明，所述待测油制品可以为食用油，优选的，所述食用油选自棕榈油、大豆油、花生油、菜籽油、芝麻油、橄榄油、葡萄籽油、葵花籽油和玉米油中的一种或多种。
根据本发明一种具体的检测油制品中3-MCPD酯的实施方式，首先根据测定的待测油制品的种类，选择具有空白本底值的相同基质，在其中加入3-MCPD酯，分别制备一系列浓度的标准样品，然后采用如上的方法对该一系列的标准样品进行处理以及GC-MS分析，得到一系列的对应于3-MCPD酯的峰面积值(S)，并以所得的一系列S值为纵坐标，所述标准样品中3-MCPD酯的浓度为横坐标，绘制标准曲线。然后采用相同的方法和条件对待测油制品进行处理以及GC-MS分析，得到待测油制品中相应于3-MCPD酯的峰面积值(S1)，将S1带入所绘制的标准曲线中，即可得到待测油制品中3-MCPD酯的浓度。
根据本发明另一种具体的检测油制品中3-MCPD酯的实施方式，首先根据测定的待测油制品的种类，选择具有空白本底值的相同基质，在其中加入3-MCPD酯和已知浓度的内标(例如，d5-3-MCPD酯)，分别制备一系列浓度的标准样品，然后采用如上的方法对该一系列的标准样品进行处理以及GC-MS分析，得到一系列的内标的峰面积与3-MCPD酯的峰面积的比值(Y)，并以所得的一系列Y值为纵坐标，所述标准样品中3-MCPD酯的浓度为横坐标，绘制标准曲线。然后采用相同的方法和条件对待测油制品进行处理以及GC-MS分析，得到待测油制品中内标的峰面积与3-MCPD酯的峰面积的比值(Y1)，将Y1带入所绘制的标准曲线中，即可得到待测油制品中3-MCPD酯的浓度。
根据本发明另一种具体的检测油制品中3-MCPD酯的实施方式，首先在待测油制品中加入已知浓度的内标(例如，d5-3-MCPD酯)，然后采用如上的方法对待测油制品进行处理以及GC-MS分析，得到待测样品中3-MCPD酯的峰面积与内标的峰面积的比值(Y1)，由于待测油制品中3-MCPD酯的浓度与内标的浓度的比值与它们峰面积的比值(Y1)相等，从而计算出待测油制品中3-MCPD酯的浓度。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
以下实施例中，
3-MCPD酯标准品(纯度98％：加拿大Toronto Research Chemicals公司；
氘代同位素d5-3-MCPD酯标准品(纯度98％)：加拿大Toronto ResearchChemicals公司；
甲基叔丁基醚(tBME，色谱纯)：德国Sigma-Aldrich公司；
苯硼酸(PBA，分析纯)：德国Sigma-Aldrich公司；
HP-5MS色谱柱(0.25mm×30m×0.25μm)、安捷伦7890B/5977气相色谱/质谱联用仪：美国Agilent科技有限公司；
TTL-DC II氮吹仪：北京同泰联科技发展有限公司；
XS-105电子天平：瑞士METTLER TOLEDO公司。
实施例1
本实施例用于说明本发明提供的检测油制品中的3-氯丙醇酯的方法
(1)碱水解
取100mg不含有3-MCPD酯的大豆油样品，并加入3-MCPD酯，分别制备浓度为50μg/kg、150μg/kg、300μg/kg、1500μg/kg、12000μg/kg的标准样品，每个样品6个重复，然后分别加入0.0397mL氘代同位素内标d5-3-MCPD酯标准品溶液(126μg/mL)和100μL的tBME，漩涡使其充分溶解并混匀。向其中加入200μL 25g/L的NaOH甲醇溶液(25g NaOH溶解到1L甲醇中)，漩涡震荡1min以进行水解，得到水解产物。
(2)酸中和
向步骤(1)的水解产物中加入600μL的NaBr-H2SO4混合液(3.5mL 25％的H2SO4溶解在100mL 600g/L的NaBr溶液中)，涡旋充分混匀以进行中和反应1min，得到中和产物。
(3)有机溶剂萃取
向步骤(2)的中和产物中加入600μL的正己烷，充分涡旋后，至少静置5min，待溶液分层后，弃去上层正己烷溶液，重复萃取两次。最后加入600μL乙醚-乙酸乙酯混合液(体积比为1.5:1)，充分涡旋后，至少静置5min，将上层溶液转移至10mL装有少量无水MgSO4的玻璃试管中，重复萃取3次，得到萃取液。
(4)苯硼酸衍生化
向步骤(3)的萃取产物中加入100μL的饱和PBA溶液(溶剂为乙醚)，涡旋混匀，反应时间为1min，得到衍生产物。
(5)纯化
将步骤(4)的衍生产物用氮气缓慢吹干，用1mL正己烷复溶，涡旋1min，静置1min。将上清液过膜转移至GC瓶中备用。
(6)GC-MS分析
色谱条件：进样口温度：280℃；程序升温条件：初始温度85℃，保持12min，以20℃/min升至165℃，保持10min，然后再以20℃/min升至300℃，保持8min；载气：高纯氦气，流速为1.2mL/min；进样方式：脉冲不分流；进样体积：1μL。
质谱条件：电子轰击离子源(EI)，离子源温度230℃；四级杆温度150℃；溶剂延迟6min；扫描方式：选择离子监测(SIM)模式。
选用m/z＝147和m/z＝150分别作为3-氯丙醇衍生物和d5-3-氯丙醇衍生物的定量离子；定性离子则分别为：m/z＝91，147，196，198和m/z149，150，201，203。
(7)以内标d5-3-MCPD酯和3-MCPD峰面积比值Y(平均值)和样品中3-MCPD酯的浓度X(μg/kg)计算线性回归方程为Y＝0.7654X+0.0241，以3倍信噪比作为检出限，10倍信噪比作为定量限。线性回归系数为0.9998、检出限为15μg/kg，定量限为50μg/kg。
其中，检出限可代表检测的灵敏度。
(8)在相同的不含有3-MCPD酯的大豆油样品中加入3-MCPD酯以进行回收率的测定。具体方法为：分别制备150μg/kg、300μg/kg、1500μg/kg浓度的大豆油样品并分别加入与上述步骤(1)相同量的内标，按照如上步骤(1)-(6)中的方法分别对如上制备的样品进行处理以及GC-MS分析。分别得到3份样品中内标d5-3-MCPD酯和3-MCPD峰面积比值Y(平均值)，并代入步骤(7)得到的线性回归方程中进行计算，分别得到3份大豆油样品各自对应的实测值，并根据实测值计算回收率，结果见表1。其中，回收率＝实测值/真实值×100％。其中，每个加标水平均进行6次重复，结果取均值。
表1
| 加标水平(μg/kg) | 本底值(μg/kg) | 实测值(μg/kg) | 回收率(％) | RSD(％) |
| 15 | ND | 14 | 94 | 10.8 |
| 30 | ND | 31 | 105 | 5.8 |
| 150 | ND | 143 | 95 | 3.7 |
其中，RSD可代表检测的精密度。
实施例2
本实施例用于说明本发明提供的检测油制品中的3-氯丙醇酯的方法
(1)碱水解
取100mg不含有3-MCPD酯的橄榄油样品，并加入3-MCPD酯，分别制备浓度为50μg/kg、150μg/kg、300μg/kg、1500μg/kg、12000μg/kg的标准样品，每个样品6个重复，然后分别加入0.0397mL氘代同位素内标d5-3-MCPD酯标准品溶液(126μg/mL)和80μL的tBME，漩涡使其充分溶解并混匀。向其中加入180μL 28g/L的NaOH甲醇溶液(28g NaOH溶解到1L甲醇中)，漩涡震荡1.5min以进行水解，得到水解产物。
(2)酸中和
向步骤(1)的水解产物中加入650μL的NaBr-H2SO4混合液(3.5mL 25％的H2SO4溶解在100mL 600g/L的NaBr溶液中)，涡旋充分混匀以进行中和反应1min，得到中和产物。
(3)有机溶剂萃取
向步骤(2)的中和产物中加入550μL的正己烷，充分涡旋后，至少静置5min，待溶液分层后，弃去上层正己烷溶液，重复萃取两次。最后加入650μL乙醚-乙酸乙酯混合液(体积比为1.2:1)，充分涡旋后，至少静置5min，将上层溶液转移至10mL装有少量无水MgSO4的玻璃试管中，重复萃取3次，得到萃取液。
(4)苯硼酸衍生化
向步骤(3)的萃取产物中加入80μL的饱和PBA溶液(溶剂为乙醚)，涡旋混匀，反应时间为6min，得到衍生产物。
按照实施例1中步骤(5)、(6)、(7)的方法进行标准曲线的绘制，得到线性回归系数、检出限、定量限，结果与实施例1类似。
按照实施例1中步骤(8)中的方法进行回收率的测定，结果与实施例1类似。
实施例3
本实施例用于说明本发明提供的检测油制品中的3-氯丙醇酯的方法
(1)碱水解
取100mg不含有3-MCPD酯的芝麻油样品，并加入3-MCPD酯，分别制备浓度为50μg/kg、150μg/kg、300μg/kg、1500μg/kg、12000μg/kg的标准样品，每个样品6个重复，然后分别加入0.0397mL氘代同位素内标d5-3-MCPD酯标准品溶液(126μg/mL)和120μL的tBME，漩涡使其充分溶解并混匀。向其中加入220μL 23g/L的NaOH甲醇溶液(23g NaOH溶解到1L甲醇中)，漩涡震荡2.5min以进行水解，得到水解产物。
(2)酸中和
向步骤(1)的水解产物中加入550μL的NaBr-H2SO4混合液(3.5mL 25％的H2SO4溶解在100mL 600g/L的NaBr溶液中)，涡旋充分混匀以进行中和反应？min，得到中和产物。
(3)有机溶剂萃取
向步骤(2)的中和产物中加入650μL的正己烷，充分涡旋后，至少静置5min，待溶液分层后，弃去上层正己烷溶液，重复萃取两次。最后加入550μL乙醚-乙酸乙酯混合液(体积比为1.8:1)，充分涡旋后，至少静置5min，将上层溶液转移至10mL装有少量无水MgSO4的玻璃试管中，重复萃取3次，得到萃取液。
(4)苯硼酸衍生化
向步骤(3)的萃取产物中加入120μL的饱和PBA溶液(溶剂为乙醚)，涡旋混匀，反应时间为12min，得到衍生产物。
按照实施例1中步骤(5)、(6)、(7)的方法进行标准曲线的绘制，得到线性回归系数、检出限、定量限，结果与实施例1类似。
按照实施例1中步骤(8)中的方法进行回收率的测定，结果与实施例1类似。
通过上述技术方案，在3-MCPD酯的间接法检测中，使用氢氧化钠的甲醇溶液对待测样品进行碱水解，使用溴化钠和/或碘化钠的卤化钠和硫酸的混合液对碱水解后的产物进行中和处理，能够有效保障后续检测的灵敏度、特异性以及精密度。
实施例4
本实施例用于说明不同食用油的最佳水解时间
按照实施例1的方法对棕榈油、大豆油、花生油、菜籽油、芝麻油、橄榄油、葡萄籽油、葵花籽油和玉米油进行处理和3-氯丙醇酯的测定，不同的是，分别测定水解0.5min、1min、1.5min、2min、2.5min、3min、5min、7min和10min的3-氯丙醇酯的测定值，也即3-氯丙醇酯对不同时间的响应情况。不同食用油对水解时间的响应如图1-9所示。
结果显示，不同食用油最佳水解时间不相同，如图4所示。以棕榈油为例，当水解时间为2min时，响应值为最大响应值的78.6％。当水解时间为2.5min时，响应值达到最大。水解时间延长后，响应值逐渐降低，当水解时间为10min时，响应值仅为最大响应值的41.9％。因此在0.5-2.5min，3-MCPD酯处于水解阶段，而在2.5-10min是3-MCPD的消除阶段。因此水解时间选择为2.5min。由图1-3和5-9可知，大豆油的最佳水解时间为1min。花生油在水解时间为1.5min时，响应值达到最大。芝麻油和橄榄油的最佳水解时间分别为2.5min和1.5min，而玉米油、葵花籽油和葡萄籽油的最佳水解时间都为2min。
测试例
对市场中销售的棕榈油、大豆油、花生油、菜籽油、芝麻油、橄榄油、葡萄籽油、葵花籽油和玉米油中含有的3-氯丙醇酯的情况进行检测，具体的：
按照实施例1中的方法分别以不含有3-氯丙醇酯的棕榈油、大豆油、花生油、菜籽油、芝麻油、橄榄油、葡萄籽油、葵花籽油和玉米油为基质制备线性回归方程，然后按照相同的处理方法和条件对待测油制品进行处理和GC-MS分析。分别得到各待测油制品中内标d5-3-MCPD酯和3-MCPD酯峰面积比值Y(平均值)，并分别代入各自对应的线性回归方程中进行计算，分别得到各待测油制品中3-MCPD酯的含量。结果见表2。
表2
| 食用油 | 含量(mg/kg) |
| 大豆油 | 未检测到 |
| 花生油 | 1.19 |
| 菜籽油 | 1.46 |
| 棕榈油 | 7.31 |
| 芝麻油 | 2.28 |
| 玉米油 | 0.94 |
| 橄榄油 | 未检测到 |
| 葡萄籽油 | 1.26 |
| 葵花籽油 | 0.59 |
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
Claims (14)
1.一种检测油制品中的3-氯丙醇酯的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将待测油制品与氢氧化钠的甲醇溶液接触以进行水解，得到水解产物；
(2)将所述水解产物与含有硫酸和卤化钠的混合液接触以进行中和，得到中和产物；其中，所述卤化钠为溴化钠和/或碘化钠；
(3)用有机溶剂对所述中和产物进行萃取，并将得到的萃取液与苯硼酸接触反应；
(4)对步骤(3)中反应得到的反应产物进行气相色谱-质谱分析。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，相对于1L所述氢氧化钠的甲醇溶液，氢氧化钠的含量为23-28g。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，相对于100mg的所述待测油制品，所述氢氧化钠的甲醇溶液的用量为180-220μL。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在所述含有硫酸和卤化钠的混合液中，硫酸和卤化钠的摩尔比为0.27-0.28：1。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，相对于100mg的所述待测油制品，所述含有硫酸和卤化钠的混合液的用量为550-650μL。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述卤化钠为溴化钠。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，用于萃取的有机溶剂选自正己烷、环己烷、异辛烷、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述有机溶剂选自正己烷、乙酸乙酯和乙醚。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述萃取的步骤包括：用正己烷对所述中和产物进行萃取，得到下层萃取液；用乙醚和乙酸乙酯的混合液对所述下层萃取液进行萃取，得到上层萃取液。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，在所述乙醚和乙酸乙酯的混合液中，乙醚和乙酸乙酯的体积比为1.2-1.8:1。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法还包括：将所述萃取液与无水硫酸镁接触的步骤。
12.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述萃取液与苯硼酸接触的步骤包括将所述萃取液与苯硼酸饱和的乙醚溶液接触。
13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述待测油制品为食用油。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述食用油选自棕榈油、大豆油、花生油、菜籽油、芝麻油、橄榄油、葡萄籽油、葵花籽油和玉米油。
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