CN106319029A - 用于测定葡萄糖的试剂盒和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于测定葡萄糖的试剂盒和方法。所述试剂盒包含试剂组1和试剂组2，所述试剂组1包含抗坏血酸氧化酶和色原，所述试剂组2包含4‑氨基安替比林、过氧化物酶和葡萄糖氧化酶，其中，所述色原是或者包含N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3,5‑二甲氧基苯胺或其钠盐。本发明的试剂盒和方法可以降低葡萄糖检测中由样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰。

Description

用于测定葡萄糖的试剂盒和方法
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域。特别地，本发明涉及一种用于检测葡萄糖的试剂盒和方法，更具体地涉及一种主要用于全自动生化分析仪的葡萄糖测定试剂盒。
背景技术
葡萄糖(Glucose，Glu)是存在于人体血液中最主要的碳水化合物。血液中的葡萄糖(俗称血糖)是人类生命活动的必要物质，主要来源于食物经消化吸收生成。
葡萄糖(例如血糖)含量必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要，其含量测定对临床检测具有重要意义。一般情况下葡萄糖病理性增高主要见于各种糖尿病、甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能亢进、垂体前叶嗜碱性细胞功能亢进、颅外伤、颅内出血、脑膜炎、脱水引起高血糖等。葡萄糖病理性降低主要见于肾上腺皮质功能减退症、甲状腺功能减退症、严重肝病、过量使用降糖药物、尿毒症晚期，严重营养不良、肝脏疾病等。因此，临床检测血清葡萄糖浓度具有非常重要的参考价值和意义。
目前葡萄糖测定的方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法、邻甲苯胺法、葡萄糖氧电极法、同位素稀释质谱法等。其中葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖有较高的特异性、灵敏度和准确性，试剂稳定，价格适中，是当前全国临床检验中心推荐的常规方法。
葡萄糖氧化酶法的主要原理是：D-葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOD)的催化作用下氧化生成D-葡萄糖酸，并产生过氧化氢(H2O2)，H2O2偶联Trinder反应呈色。即H2O2与4-氨基安替比林(4-AAP)和色原性氧受体在过氧化物酶(POD)的作用下生成醌亚胺，其生成量与样本中的Glu含量成正比。反应式如下：
然而，在临床应用中发现一些药物或试剂(例如，羟苯磺酸钙和酚磺乙胺等)对酶法测定葡萄糖具有明显的干扰作用。例如，参见程涌江等，“酚磺乙胺对部分生化检验项目干扰的相关研究，《国际检验医学杂志》，2011年第11期。
羟苯磺酸钙(calcium dobesilate)(又称多贝斯(doxium))是一种微血管保护剂，主要用于治疗微血管病、静脉曲张综合症以及与微循环障碍伴发额静脉功能不全，还用于静脉剥离和静脉硬化法的辅助治疗，用于预防术后综合症，水肿及组织浸润，以及糖尿病性视网膜病的治疗和预防。
酚磺乙胺(又名止血敏)的化学名称为2,5-二羟基苯磺酸二乙胺盐。其能使血小板数量增加，并增强血小板的凝集和黏附力，促进凝血活性物质的释放，从而产生止血作用。酚磺乙胺在临床上主要用于预防和治疗外科手术出血过多，血小板减少性紫癜或过敏性紫癜以及其他原因引起的出血。
羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对酶法检测葡萄糖的干扰对被施用这两种药物的患者造成很大的不便。例如，对于糖尿病患者而言，常伴发糖尿病视网膜病变、静脉曲张，而所施用的羟苯磺酸钙对酶法检测葡萄糖的干扰可能造成不能正确评估糖尿病患者的葡萄糖水平，从而掩盖并延误病情。而对于手术患者，所施用的酚磺乙胺对酶法检测葡萄糖的干扰可能使得不能正确评估其葡萄糖水平，造成术后并发症，影响患者的预后。因此，这种干扰作用严重影响检测结果的准确性，影响临床医生做出正确判断，最终延误患者治疗，或采用不合理治疗措施导致患者伤亡。
目前，市场上出售的酶法检测试剂盒普遍存在无法有效抵抗羟苯磺酸钙和酚磺乙胺干扰的缺陷。
因此，本领域中需要满足以下一种或多种特性的葡萄糖测定试剂盒：能够抵抗羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对酶法检测葡萄糖的干扰；具有良好的重复性以及宽的线性范围。
发明内容
通过采用根据本发明的试剂盒，能够实现上述目标。
一方面，本发明提供了一种葡萄糖测定试剂盒，其利用酶法检测葡萄糖。
在一些实施方式中，本发明提供葡萄糖测定试剂盒，其包含试剂组1和试剂组2，所述试剂组1包含色原，所述试剂组2包含4-氨基安替比林(4-AAP)、过氧化物酶(POD)和葡萄糖氧化酶(GOD)，其中，所述色原是或者包含N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐(DAOS)。
在一些优选实施方式中，所述色原的量为1-24mmol/L，优选10-20mmol/L。所述色原的量可以为1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L、4mmol/L、5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L、8mmol/L、9mmol/L、10mmol/L、11mmol/L、12mmol/L、13mmol/L、14mmol/L、15mmol/L、16mmol/L、17mmol/L、18mmol/L、19mmol/L、20mmol/L、21mmol/L、22mmol/L、23mmol/L或24mmol/L。
本发明人出乎意料地发现，在利用酶法检测葡萄糖时，包含特定用量的色原与4-AAP、过氧化物酶的组合物能够降低样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对葡萄糖检测所造成的干扰。更优选地，所述色原是或者包含N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐(DAOS)，所述色原的量为1-24mmol/L，优选10-20mmol/L。尤其是根据本发明的组合物或试剂盒能够降低样品中存在的100mg/L及以下的羟苯磺酸钙和/或250mg/L及以下的酚磺乙胺对葡萄糖检测所造成的干扰。
在一些实施方式中，所述4-氨基安替比林的量在0.49-1.8g/L、优选0.5-1.5g/L的范围内。4-AAP的量在上述范围内时可以有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对葡萄糖测定所造成的干扰。在一些实施方式中，所述试剂盒中4-AAP的量可以为0.49g/L、0.5g/L、0.6g/L、0.7g/L、0.8g/L、0.9g/L、1g/L、1.1g/L、1.2g/L、1.3g/L、1.4g/L、1.5g/L、1.6g/L、1.7g/L或1.8g/L。
在一些实施方式中，所述过氧化物酶的量在4.5-18KU/L，优选5-15KU/L的范围内。例如，所述所述过氧化物酶的量可以为4.5KU/L、4.6KU/L、4.7KU/L、4.8KU/L、4.9KU/L、5KU/L、6KU/L、7KU/L、8KU/L、9KU/L、10KU/L、11KU/L、12KU/L、13KU/L、14KU/L、15KU/L、16KU/L、17KU/L或18KU/L。将过氧化物酶的量控制在4.5-18KU/L，优选5-15KU/L的范围内时可以更有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对葡萄糖测定所造成的干扰。
在一些实施方式中，所述葡萄糖氧化酶的量在21-170KU/L，优选25-150KU/L的范围内。在一些实施方式中，所述试剂盒中葡萄糖氧化酶的量可以为21KU/L、22KU/L、25KU/L、30KU/L、35KU/L、40KU/L、45KU/L、50KU/L、55KU/L、60KU/L、65KU/L、70KU/L、75KU/L、80KU/L、85KU/L、90KU/L、95KU/L、100KU/L、105KU/L、110KU/L、115KU/L、120KU/L、125KU/L、130KU/L、135KU/L、140KU/L、145KU/L、150KU/L、160KU/L或170KU/L。葡萄糖氧化酶的量在上述优选范围内时可以有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对葡萄糖测定所造成的干扰。
在阅读了本申请的内容的基础上，本领域技术人员能够合理地确定各组分的用量比例。例如，在一些实施方式中，所述色原与所述4-氨基安替比林的摩尔比为0.2:1-50:1，优选1:1-40:1，更优选5:1-30:1，最优选11:1-17:1。在一些实施方式中，所述试剂盒中色原与4-氨基安替比林的摩尔比可以为0.2:1、0.5:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、10.2:1、10.3:1、10.4:1、10.5:1、10.8:1、11:1、12.2:1、13:1、14:1、15:1、16.2:1、17:1、18:1、19:1、20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1、27:1、30:1、32:1、35:1、37:1、40:1、42:1、45:1、47:1或者50:1。发明人发现，当采用上述优选的摩尔比(例如，色原与4-氨基安替比林的摩尔比在10.5:1-20:1范围内)时，能够更有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对葡萄糖测定所造成的干扰。
在一些优选实施方式中，试剂组1还包含抗坏血酸氧化酶。
在一些实施方式中，所述抗坏血酸氧化酶的量在0.45-5.5KU/L，优选0.5-5KU/L的范围内。在一些实施方式中，所述试剂盒中抗坏血酸氧化酶的量可以为0.45KU/L、0.5KU/L、0.6KU/L、0.7KU/L、0.8KU/L、0.9KU/L、1KU/L、1.2KU/L、1.4KU/L、1.5KU/L、2KU/L、2.5KU/L、3KU/L、3.5KU/L、4KU/L、4.5KU/L、5KU/L或5.5KU/L。抗坏血酸氧化酶的量在上述范围内时可以有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对葡萄糖测定所造成的干扰。
在一些实施方式中，试剂组1与试剂组2的体积比在6:1-2:1，优选5:1-3:1范围内，最优选地为4:1。在一些实施方式中，所述试剂盒中试剂组1与试剂组2的体积比可以为6:1、5:1、4:1、3:1、2:1。
在一些实施方式中，使用这样的组合物测得的样品中的葡萄糖值与对对照样品测得的葡萄糖值相比偏差小于10％，优选小于8％，更优选小于5.5％，最优选小于4％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
为了进一步提高试剂盒的抗干扰性，可以组合使用上述各组分的优选方式。
在本发明的一些优选实施方式中，所述试剂盒包含10-20mmol/L的DAOS；0.5-1.5g/L的4-氨基安替比林；5-15KU/L的过氧化物酶。更优选地，所述试剂盒还包含25-150KU/L的葡萄糖氧化酶。还更优选地，所述试剂盒还包含0.5-5KU/L抗坏血酸氧化酶。在这些实施方式中，测得的样品中的肌酐值与对对照样品测得的肌酐值相比，偏差小于10％，优选小于8％，更优选小于6％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
所述试剂组1和/或试剂组2中还可以包含缓冲溶液，其可以为本领域中常规使用的缓冲溶液。在一些实施方式中，所述缓冲溶液可以各自独立地为MOPS、good's缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液以及其任意组合。在一些实施方式中，所述缓冲液的量在5-1000mmol/L、优选10-500mmol/L、更优选地50-100mmol/L的范围内。所述缓冲液的pH可以在5.5-8.5、优选6.0-8.0、更优选地6.5-7.5的范围内。
本发明试剂盒还可以包含本领域通常使用的其他辅助成分。
在一些实施方式中，所述试剂组1还可以包含以下试剂中的一种或更多种：稳定剂、防腐剂和表面活性剂。其中，所述稳定剂可以为蔗糖、BSA、糖醇等或其任意组合，其量可以为0.5-200g/L，优选1-50g/L、更优选地1-10g/L。所述防腐剂可以为二氯乙酰胺、咪唑烷基脲、山梨酸钾、苯甲酸钠、尼泊金酯、PC系列、NaN3等或其任意组合，其量可以为0.02％-0.25％、优选0.025％-0.2％。所述表面活性剂可以为TWEEN、SPAN、TRITON、EMULGEN系列表面活性剂、胆酸钠、聚氧乙烯衍生物、月桂醇聚氧乙烯醚等，其量可以为0.01％-0.8％、优选0.02％-0.5％。
在一些实施方式中，所述试剂组2还可以包含以下试剂中的一种或更多种：稳定剂、防腐剂和表面活性剂。其中，所述稳定剂可以为蔗糖、BSA、糖醇等或其任意组合，其量可以为0.5-200g/L，优选1-50g/L、更优选地1-10g/L。所述防腐剂可以为二氯乙酰胺、咪唑烷基脲、山梨酸钾、苯甲酸钠、尼泊金酯、PC系列、NaN3等或其任意组合，其量可以为0.02％-0.25％、优选0.025％-0.2％。所述表面活性剂可以为TWEEN、SPAN、TRITON、EMULGEN系列表面活性剂、胆酸钠、聚氧乙烯衍生物、月桂醇聚氧乙烯醚等，其量可以为0.01％-0.8％、优选0.02％-0.5％。
本发明试剂盒中的各试剂可以各自独立地为液体形式或冻干粉形式。同一试剂组中的试剂可以放置在同一容器中或单独放置。
本发明的试剂盒可以采用本领域技术人员熟知的方法配制。例如，可以通过将同一试剂组中的试剂混合均匀来配制本发明试剂盒。
本发明的试剂盒特别适合用于检测正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的患者的样品中的葡萄糖，所述患者例如正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的微血管病、静脉曲张综合症以及与微循环障碍伴发额静脉功能不全、外科手术出血过多，血小板减少性紫癜或过敏性紫癜以及其他原因引起的出血的患者，所述样品可以例如是血液或尿液。
另一方面，本发明提供了一种使用上文所述试剂盒检测样品中的葡萄糖含量的方法。所述方法包括以下步骤：
(a)将样品和校准品分别与所述试剂组1混合并孵育所得的混合物，测定所得混合物的吸光度A1，
(b)将所述试剂组2与经孵育的步骤(a)的混合物混合并孵育，测定所得混合物的吸光度A2，
(c)根据下式计算葡萄糖浓度，
样品中葡萄糖浓度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC
上式中，A2U和A1U分别表示样品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分别表示校准品的吸光度A2和A1；CC表示校准品的浓度。
所述“校准品”指的是已知浓度的葡萄糖的溶液，已知浓度的葡萄糖可以商购获得，可以将其配置为合适的浓度，例如0.2-10mmol/L。
在上述方法中，步骤(a)和步骤(b)中的孵育时间可由本领域技术人员常规地确定。例如，孵育时间可以为2-30分钟，例如5分钟、10分钟或20分钟。
在一些实施方式中，所述方法中所检测的样品来自正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的患者。
在一些实施方式中，所述方法中使用的样品与试剂组1、试剂组2的量的比例为样品：试剂组1：试剂组2＝1:80:20。例如，样品、试剂组1和试剂组2的用量可以分别为3μl、240μl和60μl。
在另一方面，本发明提供了包含色原与4-氨基安替比林、过氧化物酶的组合物或试剂盒用于降低在用酶法进行的葡萄糖检测中由样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的用途，其中所述色原是或者包含N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐(DAOS)。在一些优选实施方式中，所述组合物或试剂盒还可以包含如下物质的一种或多种：葡萄糖氧化酶和抗坏血酸氧化酶。
在一些实施方式中，在根据本发明的用途中，使用本文中所述的试剂盒。
本发明包括但不限于如下的实施方式：
实施方式1.一种葡萄糖测定试剂盒，其包含试剂组1和试剂组2，所述试剂组1包含色原，所述试剂组2包含4-氨基安替比林、过氧化物酶和葡萄糖氧化酶，其中，所述色原是或者包含N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐，其中所述色原的量为1-24mmol/L、优选10-20mmol/L，所述4-氨基安替比林的量为0.49-1.8g/L、优选0.5-1.5g/L，所述过氧化物酶的量为4.5-18KU/L，优选5-15KU/L。
实施方式2.根据实施方式1所述的葡萄糖测定试剂盒，其中所述葡萄糖氧化酶的量为21-170KU/L，优选25-150KU/L。
实施方式3.根据前述实施方式中任一项所述的葡萄糖测定试剂盒，其中所述试剂组1还包含抗坏血酸氧化酶。
实施方式4.根据实施方式3所述的葡萄糖测定试剂盒，其中所述抗坏血酸氧化酶的量为0.45-5.5KU/L，优选0.5-5KU/L。
实施方式5.一种使用前述实施方式中任一项所述的试剂盒检测样品中的葡萄糖的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)将样品和校准品分别与试剂组1混合并孵育所得的混合物，测定所得混合物的吸光度A1，
(b)将试剂组2与经孵育的步骤(a)的混合物混合并孵育，测定所得混合物的吸光度A2，
(c)根据下式计算葡萄糖浓度，
样品中葡萄糖浓度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC
式中，A2U和A1U分别表示样品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分别表示校准品的吸光度A2和A1；CC表示校准品的浓度。
实施方式6.包含色原与4-氨基安替比林、过氧化物酶的组合物用于降低在利用酶法进行的葡萄糖检测中由样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的用途，其中所述色原是或者包含N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐，并且所述色原的量为1-24mmol/L、优选10-20mmol/L，所述4-氨基安替比林的量为0.49-1.8g/L、优选0.5-1.5g/L，所述过氧化物酶的量为4.5-18KU/L，优选5-15KU/L。
实施方式7.根据实施方式6所述的用途，其中所述组合物还包含抗坏血酸氧化酶。
实施方式8.根据实施方式7所述的葡萄糖测定试剂盒，其中所述抗坏血酸氧化酶的量为0.1-10KU/L，优选0.5-5KU/L。
实施方式9.根据实施方式6-9中任意一项所述的用途，其中使用所述组合物测得的样品中的葡萄糖值与对对照样品测得的葡萄糖值相比偏差小于10％，优选小于8％，更优选小于5.5％，最优选小于4％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
在本发明中，对于一个方面所描述的特征、实施方案、优选实施方案同样适用于本发明的其他方面。
在本发明的一些实施方案中，组合物、试剂组、试剂盒以及方法用“包含”或“包括”描述。但本领域技术人员可以理解，所述组合物、试剂组、试剂盒以及方法也可以由基本上由相应化合物、试剂或步骤组成或由相应化合物、试剂或步骤组成。
除了与本发明的目的明显不相容的情况外，本发明的描述应理解为包括本发明的各种实施方式或要素的组合，以及它们的替代方式的组合。
具体实施方式
现将描述实施本发明的一些方面的一些说明性且非限制性的实施例以及对比例。
实验材料
使用下表1中所示的材料来制备试剂组1(R1)和试剂组2(R2)。
表1：
对比例1：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表2和下表3中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表2：R1配制
表3：R2配制
对比例2：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表4和下表5中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表4：R1配制
表5：R2配制
对比例3：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表6和下表7中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表6：R1配制
表7：R2配制
对比例4：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表8和下表9中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表8：R1配制
表9：R2配制
对比例5：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表10和下表11中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表10：R1配制
表11：R2配制
对比例6：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表12和下表13中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表12：R1配制
表13：R2配制
实施例1：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表14和下表15中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表14：R1配制
表15：R2配制
实施例2：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表16和下表17中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表16：R1配制
表17：R2配制
实施例3：葡萄糖测定试剂盒的配制
根据下表18和下表19中所示的组分和浓度，将各组分混合以分别制备试剂组1和2。
表18：R1配制
表19：R2配制
实施例4：葡萄糖测定试剂盒检测方法
1.仪器
具有波长为600nm的全自动生化分析仪或半自动生化分析仪。
2.参数设置及操作
方法：终点法 样本/试剂：1/100 主波长：600nm
反应温度：37℃ 反应时间：10min 副波长：700nm
样本测定具体操作方法如表20所示。
表20
单位：微升(μL)
3.计算公式
ΔA＝A2-A1
样本中葡萄糖含量
式中：
ΔAU――测定样本吸光度变化值；
ΔAC――校准品吸光度变化值；
CC――校准品浓度。
实施例5：葡萄糖测定试剂盒抗药物干扰实验
1.基础血清准备：收集健康体检人员无溶血、无脂浊、无黄疸的新鲜混合血清。
2.干扰样本配制：
1)将羟苯磺酸钙水溶液与基础血清按1:9比例配制成药物浓度为100mg/L的干扰样本；对照样本为生理盐水与基础血清按1:9比例配制；不同药物浓度干扰样本由100mg/L羟苯磺酸钙药物干扰样本与对照样本不同比例配制而得；
2)将酚磺乙胺水溶液与基础血清按1:9比例配制成药物浓度为250mg/L的干扰样本；对照样本为生理盐水与基础血清按1:9比例配制；不同药物浓度干扰样本由250mg/L酚磺乙胺药物干扰样本与对照样本不同比例配制而得。
3.葡萄糖测定试剂盒经校准后测定干扰样本，以对照样本±10％偏差为干扰判断标准，考察试剂盒抗药物干扰能力。
结果如下表21和22所示。
表21：不同的羟苯磺酸钙浓度对各对比例和实施例的效果的影响
表22：不同的酚磺乙胺浓度对各对比例和实施例的效果的影响
从以上结果可以看出，羟苯磺酸钙100mg/L、酚磺乙胺250mg/L对本发明葡萄糖测定试剂盒测定结果无影响。
实施例6：实施例1-3葡萄糖测定试剂盒其他性能评价
1.准确度验证：
测定朗道质控品(HN1530，批号:918UN；HE1532，批号:697UE)，重复测定3次，计算测定值与靶值偏差，并看结果是否在质控范围内。
表23：朗道质控品(HN1530)
表24：朗道质控品(HN1532)
从以上结果可以看出，根据本发明的试剂盒得到的测定结果的平均值位于质控品范围内，且与靶值偏差＜5、更具体地2％，说明本发明试剂盒准确性非常好。
2.重复性实验：
以常规临床样本作为待测样品，用本发明实施例1-3试剂盒重复测定10次，计算变异系数CV％，结果如下表25所示。
表25：变异系数测试
由以上结果可见，本发明试剂盒变异系数CV为1.42％，0.81％，1.00％，均明显＜5％，符合YY/T 1200-2013《葡萄糖测定试剂盒(酶法)》标准要求。以上结果说明：根据本发明的试剂盒具有非常好的重复性。
3.线性范围检测：
取葡萄糖浓度25.00mmol/L左右的样本，稀释成6个不同的浓度(xi)，用本发明试剂按照检测方法每个浓度测定3次，计算平均值(yi)。以xi为自变量，以yi为因变量求出线性回归方程，计算线性回归相关系数r；将xi代入线性回归方程，计算yi的估算值yi'及yi与估算值yi'的偏差。结果示于下表26中。
表26：实施例1-3的线性范围检测
从以上结果可以看出，本发明的试剂盒具有非常优异的线性，实施例1-3分别获得了0.9996、0.9996和0.9998的线性相关系数r，符合YY/T1200-2013《葡萄糖测定试剂盒(酶法)》标准中线性区间(2.2mmol/L～25mmol/L)及线性相关系数r(不小于0.9900)的要求。以上结果表明：根据本发明的试剂盒的线性区间完全满足临床需求。

Claims (9)

1.一种葡萄糖测定试剂盒，其包含试剂组1和试剂组2，所述试剂组1包含色原，所述试剂组2包含4-氨基安替比林、过氧化物酶和葡萄糖氧化酶，其中，所述色原是或者包含N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐，其中所述色原的量为10-20mmol/L，所述4-氨基安替比林的量为0.5-1.5g/L，所述过氧化物酶的量为4.5-18KU/L，优选5-15KU/L。
2.根据权利要求1所述的葡萄糖测定试剂盒，其中所述葡萄糖氧化酶的量为21-170KU/L，优选25-150KU/L。
3.根据前述权利要求中任一项所述的葡萄糖测定试剂盒，其中所述试剂组1还包含抗坏血酸氧化酶。
4.根据权利要求3所述的葡萄糖测定试剂盒，其中所述抗坏血酸氧化酶的量为0.45-5.5KU/L，优选0.5-5KU/L。
5.一种使用前述权利要求中任一项所述的试剂盒检测样品中的葡萄糖的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)将样品和校准品分别与试剂组1混合并孵育所得的混合物，测定所得混合物的吸光度A1，
(b)将试剂组2与经孵育的步骤(a)的混合物混合并孵育，测定所得混合物的吸光度A2，
(c)根据下式计算葡萄糖浓度，
样品中葡萄糖浓度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC
式中，A2U和A1U分别表示样品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分别表示校准品的吸光度A2和A1；CC表示校准品的浓度。
6.包含色原与4-氨基安替比林、过氧化物酶的组合物用于降低在利用酶法进行的葡萄糖检测中由样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的用途，其中所述色原是或者包含N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐，并且所述色原的量为10-20mmol/L，所述4-氨基安替比林的量为0.5-1.5g/L，所述过氧化物酶的量为4.5-18KU/L，优选5-15KU/L。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述组合物还包含抗坏血酸氧化酶。
8.根据权利要求7所述的葡萄糖测定试剂盒，其中所述抗坏血酸氧化酶的量为0.1-10KU/L，优选0.5-5KU/L。
9.根据权利要求6-9中任意一项所述的用途，其中使用所述组合物测得的样品中的葡萄糖值与对对照样品测得的葡萄糖值相比偏差小于10％，优选小于8％，更优选小于5.5％，最优选小于4％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109596550A (zh) * 2018-12-24 2019-04-09 苏州科铭生物技术有限公司 一种基于分光光度法的海藻糖含量测定试剂盒及其方法
CN111733208A (zh) * 2020-08-15 2020-10-02 中山标佳生物科技有限公司 一种可消除羟苯磺酸钙，酚磺乙胺的肌酐试剂盒及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102141568A (zh) * 2010-12-30 2011-08-03 北京九强生物技术股份有限公司 一种稳定的液体单试剂血糖试剂盒
CN103266166A (zh) * 2013-05-24 2013-08-28 宁波美康生物科技股份有限公司 一种葡萄糖检测试剂
CN104714040A (zh) * 2015-04-06 2015-06-17 天津市宝坻区人民医院 血清中葡萄糖氧化酶双试剂测定方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102141568A (zh) * 2010-12-30 2011-08-03 北京九强生物技术股份有限公司 一种稳定的液体单试剂血糖试剂盒
CN103266166A (zh) * 2013-05-24 2013-08-28 宁波美康生物科技股份有限公司 一种葡萄糖检测试剂
CN104714040A (zh) * 2015-04-06 2015-06-17 天津市宝坻区人民医院 血清中葡萄糖氧化酶双试剂测定方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109596550A (zh) * 2018-12-24 2019-04-09 苏州科铭生物技术有限公司 一种基于分光光度法的海藻糖含量测定试剂盒及其方法
CN111733208A (zh) * 2020-08-15 2020-10-02 中山标佳生物科技有限公司 一种可消除羟苯磺酸钙，酚磺乙胺的肌酐试剂盒及其制备方法
CN111733208B (zh) * 2020-08-15 2021-02-02 中山标佳生物科技有限公司 一种可消除羟苯磺酸钙、酚磺乙胺的肌酐试剂盒及其制备方法
CN112708656A (zh) * 2020-08-15 2021-04-27 中山标佳生物科技有限公司 一种稳定性好且能快速消除药物干扰的肌酐试剂盒及其制备方法

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