CN106282169A - 一种快速批量提取鱼组织总rna的方法 - Google Patents

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杨弘
祝璟琳
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    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor

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Abstract

本发明涉及一种快速批量提取鱼组织总RNA的方法，属于鱼类RNA提取技术领域。其通过处理前准备、鱼的前处理、研磨、离心、二次离心、干燥和溶解得到鱼组织总RNA。本发明将样品、研磨珠和Trizol加入冷冻管中，经液氮冷冻以后装入高通量研磨仪中处理，一方面保证样品研磨过程中始终处于Trizol保护和低温状态，双重保护RNA防止降解；另一方面，相比于液体状态下（手动或者电动匀浆器匀浆）匀浆，低温干磨能缩短匀浆时间、匀浆更彻底。同时，研磨过程中样品始终在封闭的冻存管中，基本无样品损耗，因此本发明对初始样品量要求低，适于微量组织样品的总RNA提取。最后，本发明可同时研磨1‑50个样品，实现样品的批量处理，大大缩短了试验时间。

Description

一种快速批量提取鱼组织总RNA的方法
技术领域
本发明涉及一种快速批量提取鱼组织总RNA的方法，尤其是一种适合快速批量提取鱼组织总RNA的方法，属于鱼类RNA提取技术领域。
背景技术
总RNA提取技术是分子生物学的基础实验技术之一。纯度高、完整性好的总RNA是进行基因克隆、基因表达、基因功能分析等研究的必要前提。目前试验室常用的总RNA提取技术是低温匀浆后Trizol法提取。低温匀浆一般采用液氮研磨法、手动或电动匀浆器研磨法。液氮研磨法处理样品时，由于液氮极易挥发，研磨过程中需要持续地向研钵中添加液氮，耗费时间长，操作不方便，存在安全隐患。手动或者电动匀浆器研磨法要求在冰上完成，防止样品过热引起RNA降解。但是实践中极易引起样品局部温度升高。并且，两者的共同不足之处在于（1）每次只能处理一个样品，无法批量操作；（2）损耗部分样品，这对于初始样品量少的试验影响大；（3）处理过程中样品位于开放容器中，容易引起样品污染。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一种适合快速批量提取鱼组织总RNA的方法，既实现样品批量操作，又能降低样品损耗和污染。
按照本发明提供的技术方案，一种快速批量提取鱼组织总RNA的方法，步骤如下：
（1）处理前准备：取研磨珠，用乙醇溶液浸泡15-30分钟后晾干；取若干2mL冻存管，每个冻存管中均添加研磨珠，并加入1mL Trizol；
（2）鱼的前处理：解剖鱼，取得鱼组织20-100mg，经焦碳酸二乙酯DEPC处理过的水漂洗后，剪碎组织块，迅速投入步骤（1）处理过的冻存管中，旋上管盖，投入液氮冷冻；
（3）研磨：取步骤（2）处理后的样品1-50个，装入高通量组织研磨仪，以100-120次/分的速度研磨5-10分钟；
（4）离心：取步骤（3）处理后的若干样品室温放置4-6分钟，分别转移至1.5mL的离心管中，每支离心管加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15-30秒，室温放置2-4分钟；2-8℃、10000×g离心14-16分钟；
（5）二次离心：取步骤（4）所得上清液转移到新管中，加入等量异丙醇，室温放置10分钟；2-8℃、10000×g离心10分钟，移去上清，得到RNA沉淀；
（6）干燥：用1mL乙醇溶液洗涤步骤（5）所得RNA沉淀，2-8℃、7500×g离心5分钟，弃去上清，得到RNA沉淀；
（7）溶解：室温放置干燥或真空抽干步骤（6）所得RNA沉淀，加入20-200μL无RNase的水，-70℃保存。
所述乙醇溶液的质量浓度为70%-75%。
步骤（1）所述研磨珠为2mm的氧化锆珠，每个2mL冻存管中加入研磨珠2-4颗。
本发明的有益效果：本发明将样品、研磨珠和Trizol加入冷冻管中，经液氮冷冻以后装入高通量研磨仪中处理，一方面保证样品研磨过程中始终处于Trizol保护和低温状态，双重保护RNA防止降解；另一方面，相比于液体状态下（手动或者电动匀浆器匀浆）匀浆，低温干磨能缩短匀浆时间、匀浆更彻底。同时，研磨过程中样品始终在封闭的冻存管中，基本无样品损耗，因此本发明对初始样品量要求低，适于微量组织样品的总RNA提取。最后，本发明可同时研磨1-50个样品，实现样品的批量处理，大大缩短了试验时间。
附图说明
图1是实施例1对提取罗非鱼肝总RNA后进行琼脂糖电泳后的结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
以下实施例中液氮和Trizol均为市场上采购的常规产品。
实施例1 采用从罗非鱼分离的肝作为样品，具体包括以下工艺步骤：
（1）处理前准备：取研磨珠，用乙醇溶液浸泡15分钟后晾干；取若干2mL冻存管，每个冻存管中均添加研磨珠，并加入1mL Trizol；
（2）鱼的前处理：解剖鱼，取得鱼组织30mg，经焦碳酸二乙酯DEPC处理过的水漂洗后，剪碎组织块，迅速投入步骤（1）处理过的冻存管中，旋上管盖，投入液氮冷冻；
（3）研磨：取步骤（2）处理后的样品6个，装入高通量组织研磨仪，以100次/分的速度研磨7分钟；
（4）离心：取步骤（3）处理后的样品室温放置6分钟，随后转移至1.5mL的离心管中，每支离心管加入0.2mL氯仿，剧烈振荡30秒，室温放置4分钟；4℃、10000×g离心16分钟；
（5）二次离心：取步骤（4）所得上清液转移到新管中，加入等量异丙醇，室温放置10分钟；随后在4℃、10000×g离心10分钟，移去上清，得到RNA沉淀；
（6）干燥：用1mL乙醇溶液洗涤步骤（5）所得RNA沉淀，4℃、7500×g离心5分钟，弃去上清，得到RNA沉淀；
（7）保存：室温放置干燥或真空抽干步骤（6）所得RNA沉淀，加入30μL无RNase的水，-70℃保存。
所述乙醇溶液的质量浓度为70%。
步骤（1）所述研磨珠为2mm的氧化锆珠，每个2mL冻存管中加入研磨珠2颗。
实施例2采用从罗非鱼分离的头肾组织作为样品，具体包括以下工艺步骤：
（1）处理前准备：取研磨珠，用乙醇溶液浸泡30分钟后晾干；取若干2mL冻存管，每个冻存管中均添加研磨珠，并加入1mL Trizol；
（2）鱼的前处理：解剖鱼，取得鱼组织70 mg，经焦碳酸二乙酯DEPC处理过的水漂洗后，剪碎组织块，迅速投入步骤（1）处理过的冻存管中，旋上管盖，投入液氮冷冻；
（3）研磨：取步骤（2）处理后的样品40个，装入高通量组织研磨仪，以120次/分的速度研磨6分钟；
（4）离心：取步骤（3）处理后的样品室温放置4分钟，转移至1.5mL的离心管中，每支离心管加入0.2mL氯仿，剧烈振荡20秒，室温放置2分钟；4℃、10000×g离心15分钟；
（5）二次离心：取步骤（4）所得上清液转移到新管中，加入等量异丙醇，室温放置10分钟； 4℃、10000×g离心10分钟，移去上清，得到RNA沉淀；
（6）干燥：用1mL乙醇溶液洗涤步骤（5）所得RNA沉淀，4℃、7500×g离心5分钟，弃去上清，得到RNA沉淀；
（7）溶解：室温放置干燥或真空抽干步骤（6）所得RNA沉淀，加入50μL无RNase的水，-70℃保存。
所述乙醇溶液的质量浓度为75%。
步骤（1）所述研磨珠为2mm的氧化锆珠，每个2mL冻存管中加入研磨珠3颗。
实施例3采用从罗非鱼分离的肌肉组织作为样品，具体包括以下工艺步骤：
（1）处理前准备：取研磨珠，用乙醇溶液浸泡30分钟后晾干；取若干2mL冻存管，每个冻存管中均添加研磨珠，并加入1mL Trizol；
（2）鱼的前处理：解剖鱼，取得鱼组织90mg，经焦碳酸二乙酯DEPC处理过的水漂洗后，剪碎组织块，迅速投入步骤（1）处理过的冻存管中，旋上管盖，投入液氮冷冻；
（3）研磨：取步骤（2）处理后的样品50个，装入高通量组织研磨仪，以120次/分的速度研磨10分钟；
（4）离心：取步骤（3）处理后的样品室温放置4分钟，转移至1.5mL的离心管中，每支离心管加入0.2mL氯仿，剧烈振荡30秒，室温放置2分钟；4℃、10000×g离心15分钟；
（5）二次离心：取步骤（4）所得上清液转移到新管中，加入等量异丙醇，室温放置10分钟； 4℃、10000×g离心10分钟，移去上清，得到RNA沉淀；
（6）干燥：用1mL乙醇溶液洗涤步骤（5）所得RNA沉淀，4℃、7500×g离心5分钟，弃去上清，得到RNA沉淀；
（7）溶解：室温放置干燥或真空抽干步骤（6）所得RNA沉淀，加入60μL无RNase的水，-70℃保存。
所述乙醇溶液的质量浓度为75%。
步骤（1）所述研磨珠为2mm的氧化锆珠，每个2mL冻存管中加入研磨珠4颗。

Claims (3)

1.一种快速批量提取鱼组织总RNA的方法，其特征是步骤如下：
（1）处理前准备：取研磨珠，用乙醇溶液浸泡15-30分钟后晾干；取若干2mL冻存管，每个冻存管中均添加研磨珠，并加入1mL Trizol；
（2）鱼的前处理：解剖鱼，取得鱼组织20-100mg，经焦碳酸二乙酯DEPC处理过的水漂洗后，剪碎组织块，迅速投入步骤（1）处理过的冻存管中，旋上管盖，投入液氮冷冻；
（3）研磨：取步骤（2）处理后的样品1-50个，装入高通量组织研磨仪，以100-120次/分的速度研磨5-10分钟；
（4）离心：取步骤（3）处理后的若干样品室温放置4-6分钟，分别转移至1.5mL的离心管中，每支离心管加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15-30秒，室温放置2-4分钟；2-8℃、10000×g离心14-16分钟；
（5）二次离心：取步骤（4）所得清液转移到新管中，加入等量异丙醇，室温放置10分钟；2-8℃、10000×g离心10分钟，移去上清，得到RNA沉淀；
（6）干燥：用1mL乙醇溶液洗涤步骤（5）所得RNA沉淀，2-8℃、7500×g离心5分钟，弃去上清，得到RNA沉淀；
（7）溶解：室温放置干燥或真空抽干步骤（6）所得RNA沉淀，加入20-200μL无RNase的水，-70℃保存。
2.如权利要求1所述快速批量提取鱼组织总RNA的方法，其特征是：所述乙醇溶液的质量浓度为70%-75%。
3.如权利要求1所述快速批量提取鱼组织总RNA的方法，其特征是：步骤（1）所述研磨珠为2mm的氧化锆珠，每个2mL冻存管中加入研磨珠2-4颗。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109652408A (zh) * 2019-02-28 2019-04-19 广东美立康生物科技有限公司 从微量酒精溶液保存样品中快速提取高浓度dna的方法
CN111518796A (zh) * 2020-04-30 2020-08-11 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种草鱼肠系膜脂肪组织高质量总rna的提取方法
CN114397158A (zh) * 2022-01-07 2022-04-26 重庆师范大学 一种鱼类预警信息素的制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005116209A1 (en) * 2004-05-26 2005-12-08 Keygene N.V. Method and device for the isolation of nucleic acid from nucleic acid comprising material
CN102690806A (zh) * 2012-05-02 2012-09-26 江苏大学 一种简单、快速提取柳枝稷组织总rna的方法
CN102965366A (zh) * 2012-11-27 2013-03-13 江南大学 一种提取毕赤酵母各生长时期总rna的改良方法
CN103160497A (zh) * 2013-04-07 2013-06-19 北京市水产科学研究所 一种快速提取鱼类总rna的方法
CN103642793A (zh) * 2013-11-01 2014-03-19 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 一种用于转录组测序的建鲤肌肉rna的提取方法
CN104313014A (zh) * 2014-10-08 2015-01-28 福建农林大学 一种快速提取杉木总rna的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005116209A1 (en) * 2004-05-26 2005-12-08 Keygene N.V. Method and device for the isolation of nucleic acid from nucleic acid comprising material
CN102690806A (zh) * 2012-05-02 2012-09-26 江苏大学 一种简单、快速提取柳枝稷组织总rna的方法
CN102965366A (zh) * 2012-11-27 2013-03-13 江南大学 一种提取毕赤酵母各生长时期总rna的改良方法
CN103160497A (zh) * 2013-04-07 2013-06-19 北京市水产科学研究所 一种快速提取鱼类总rna的方法
CN103642793A (zh) * 2013-11-01 2014-03-19 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 一种用于转录组测序的建鲤肌肉rna的提取方法
CN104313014A (zh) * 2014-10-08 2015-01-28 福建农林大学 一种快速提取杉木总rna的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TRIANT, DA ET AL.: "Simultaneous Extraction of High-Quality RNA and DNA from Small Tissue Samples", 《JOURNAL OF HEREDITY》 *
张克中 等: "《生物化学与分子生物学实验指导》", 31 August 2015, 中国林业出版社 *
王玉亭: "《生物反应及制药单元操作技术》", 30 September 2014, 中国轻工业出版社 *
路长林: "《神经肽基础与临床》", 31 December 2000, 第二军医大学出版社 *
魏杰 等: "宽口裂腹鱼不同组织总RNA提取与质量分析", 《科技创新导报》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109652408A (zh) * 2019-02-28 2019-04-19 广东美立康生物科技有限公司 从微量酒精溶液保存样品中快速提取高浓度dna的方法
CN111518796A (zh) * 2020-04-30 2020-08-11 中国水产科学研究院珠江水产研究所 一种草鱼肠系膜脂肪组织高质量总rna的提取方法
CN114397158A (zh) * 2022-01-07 2022-04-26 重庆师范大学 一种鱼类预警信息素的制备方法

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