CN106236767B - cGAMP在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药、食品、试剂等技术领域，是cGAMP在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用。本发明经小鼠局部脑缺血模型的药理试验，结果表明，本发明的cGAMP能显著降低小鼠线栓法致局脑缺血引起的脑损伤百分率，并显著改善小鼠缺血后的神经行为。cGAMP对脑保护作用强，而且由于分子量小，易于通透血脑屏障，具有显著的脑通透性优势。因此，本发明提供的cGAMP具有在制备防治缺血性脑血管病药物中良好的应用前景。

Description

cGAMP在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药、食品、试剂等技术领域，具体地说是涉及一种环二核苷酸cGAMP用于制备抗缺血性脑血管疾病产品的新用途。

背景技术

缺血性脑血管病（缺血性脑卒中）是世界上发病率、死亡率、致残率最高的疾病之一，极大威胁着人类、特别是老年人的健康和生活质量，已经成为全球社会健康资源的巨大负担。临床上，缺血性脑卒中死亡率和致残率已在神经系统疾病中占首位。目前国内外应用于治疗缺血性脑血管病的有效药物很少。因此，深入开展缺血性脑血管病的药物防治研究具有重要意义。

最近有研究表明，环二核苷酸合成酶（cGAS）在结合DNA 后的活化条件下催化cGAMP 的合成，进一步通过STING介导IRF-3 的活化，进而促进IFN-β的合成。重组cGAS在DNA 结合条件下促进环二核苷酸cGAMP的生成，发挥抗病毒、增强免疫的作用。也有专利报道，体外合成的环二核苷酸cGAMP 具有抗肿瘤的应用。

目前，尚没有文献报道环二核苷酸用于缺血性脑血管病，而我们研究发现，cGAMP具有明显的脑缺血保护作用，有望用于制备治疗缺血性脑血管病的药物。

发明内容

本发现所需要解决的技术问题是公开了cGAMP的新用途，即cGAMP具有抗缺血性脑血管疾病的新作用，能够用于制备抗缺血性脑血管疾病的产品，为抗缺血性脑血管疾病的预防、保护和治疗提供更有效的产品。

所述的用于制备抗缺血性脑血管疾病产品的cGAMP为环化-鸟嘌呤核苷酸 - 腺嘌呤核苷酸。

所述的抗缺血性脑血管疾病产品是指医药、食品或试剂等技术领域中，用于预防、保护、治疗缺血性脑血管疾病及其直接相关疾病的产品，是包括药物、试剂、食品或保健品等类型中的一种或多种。

本发明提供cGAMP在制备防治缺血性脑血管疾病中的应用。

本发明经小鼠的脑缺血再灌注模型药理试验，结果表明， cGAMP能显著减少小鼠局部脑缺血引起的脑梗死比例，并显著改善小鼠缺血后的神经行为。与目前在临床使用的治疗脑缺血的药物依达拉奉相比，cGAMP脑缺血保护作用强；而且由于分子量小，易于通透血脑屏障，具有显著的脑通透性优势。

本发明的cGAMP可以按常规药剂学制备成各种剂型，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂或注射剂等。

本发明的cGAMP可以采取口服或注射（包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一种或多种）等中的一种或多种给药途径进行缺血性脑血管疾病及其直接相关疾病的预防、保护或治疗。

本发明提供的cGAMP在制备防治缺血性脑血管疾病中具有良好的应用前景。

具体实施方式

下面通过实施例证具体说明本发明的内容。在本发明中，以下所述的实施例是为了更好地阐述本发明，并不是用来限制本发明的范围。

实施例1：cGAMP的制备方法

cGAMP（环化-鸟嘌呤核苷酸-腺嘌呤核苷酸）按文献方法在结合DNA 后的活化条件下，由环化二核苷酸合成酶（cGAS）催化合成，纯度在98％以上。（Pingwei Li，et al.,Immunity, 2013, 39(6), 1019-1031.）

实施例2：cGAMP用于治疗缺血性脑血管病的动物实验

小鼠线栓法制作局部脑缺血模型的药理实验是验证药物具有防治缺血性脑血管病作用常用的动物实验，因此用其验证cGAMP对实验性动物脑缺血的保护作用。

1、动物

健康雄性ICR小鼠，体重18～20g，每组10只/笼群养，共分10组。购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，质量合格证号（动物合格证号：SCXK（沪）2007-0005）。饲养于清洁级动物房。

2、药物

将实验小鼠进行分组：

假手术组：给予与药物实验组等量的生理盐水，不进行脑缺血手术

阴性对照组：给予与药物实验组等量的生理盐水进行脑缺血手术。

阳性对照组：给予依达拉奉注射液 5.0mg/kg（南京先声东元制药有限公司生产）

药物1组：给予cGAMP 5.0mg/kg。

药物2组：给予cGAMP 10.0mg/kg。

3、实验方法

实验小鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，颈正中切口，分离并结扎右侧颈总动脉近心段、颈外动脉及其分支血管。分离右侧颈内动脉，沿着颈内动脉向下分离翼颚动脉，根部结扎该分支。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉处切口，扎入4-0尼龙线，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。撤去动脉夹，扎紧备线，缝合皮肤，术后回笼饲养。以上过程均在室温恒定情况下进行，以利于评价脑缺血程度。缺血2小时后尾静脉给药，拔出尼龙线进行再灌注，再灌注8小时后再给一次药。

术后24小时进行行为学评分，评分采用单盲法，评分参考Zea Longa的5分制评分标准，方法为：0分，小鼠正常，无神经损伤症状；1分，不能完全伸展对侧前爪；2分，向外侧转圈；3分，向对侧倾倒；4分，不能自发行走，意识丧失。

评分后，断头取脑，将大脑平均冠状分为5片，放于TTC溶液中，37℃温育10～15min染色。梗死区不着色，正常脑组织染成红色。用图像分析软件测出各区面积，计算梗死区面积占全脑面积的百分比。

所有的数据均用±s表示，统计学分析采用t检验。

（1）药物对小鼠脑缺血模型行为学评分的影响

结果显示，cGAMP 5 mg/kg和10 mg/kg静脉注射给药均能改善局部性脑缺血小鼠行为学评分；阳性对照药依达拉奉5mg/kg静脉注射给药也可显著降低模型小鼠的行为学评分（p<0.05，与阴性对照组相比）。见表1。

表1实验各组小鼠脑缺血后的行为学评分（±s）

*p<0.05，**p<0.01，与阴性对照组比较

（2）药物对小鼠脑缺血模型脑梗塞百分率的影响

结果显示，cGAMP 5 mg/kg和10 mg/kg静脉注射给药对局部性脑缺血模型小鼠的脑梗死百分率有非常显著的降低作用（p<0.01，与阴性对照组相比）；阳性对照药依达拉奉5mg/kg静脉注射给药可显著降低模型小鼠的脑坏死百分率（p<0.05，与阴性对照组相比）。见表2。

表2 实验各组小鼠脑缺血后的脑梗塞百分率（± s）

*p<0.05，**p<0.01，与阴性对照组比较

上述实验结果表明，cGAMP（5mg/kg和10mg/kg）对小鼠线栓法致局脑缺血有明显治疗作用，能改善小鼠的行为学缺陷，降低脑坏死百分率。因此，cGAMP可用于制备防治缺血性脑血管疾病药物。

实施例3、cGAMP在制备防治缺血性脑血管疾病药物产品方面的剂型

1 cGAMP注射剂的制备

取cGAMP 10g，加入新鲜注射用水配成10000ml，加热至约40℃，加入活性炭5 g，充分搅拌，调节pH5.5-7.5，经砂芯减压过滤，微孔滤膜精滤。半成品检查合格后灌封，灭菌，即得。每支注射剂（2ml）含cGAMP 20mg。

2 cGAMP片剂的制备

取cGAMP 30 g、淀粉6 g、乳糖8g粉碎过80目筛，混匀。加入适量50%乙醇拌匀，制成颗粒，60℃以下干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁混匀，压片。可制成1000 片（每片含30mgcGAMP）的片剂。

3 cGAMP胶囊的制备

取处方量cGAMP 30g，粉碎过80目筛，加入处方量的淀粉14g、微粉硅胶1g中，混匀，直接装入胶囊，可制成1000 粒。每粒含30mg cGAMP。

Claims (1)

1. cGAMP在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用。