CN106214767A - 一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法 - Google Patents

一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，包括以下步骤：(1)将原料牡丹籽壳粉碎，过筛，得到牡丹籽壳粉；(2)准确称取牡丹籽壳粉，按料液比1:8～1:25(g/mL)加入质量浓度为40％～95％的乙醇溶液，混合均匀后，在水浴锅中保温静置浸提时间为0～90min，匀浆，匀浆次数1～4次；(3)离心，取上清液；(4)步骤(3)中上清液，部分作为样品溶液测其吸光值，计算出该溶液浓度，从而测定黄酮化合物的含量；部分经减压浓缩、冷冻干燥，得牡丹籽壳中总黄酮提取物。本发明所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，牡丹籽壳中总黄酮的提取率高，具有操作简单、适用性强、适合大规模生产、低成本的优点。

Description

一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法
技术领域
本发明属于食品生物技术领域，尤其是涉及一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法。
背景技术
牡丹是毛莫科、芍药属植物，有“国色天香”之称。牡丹籽富含脂肪酸、蛋白质、18种氨基酸、多种微量元素和多种维生素，经牡丹籽开发的牡丹籽油是集营养和保健为一体的天然无公害食。自牡丹籽油于2011年3月22日获得新资源食品批准以来，牡丹资源的利用成为人们研究的热点。
牡丹种子是受果壳和籽壳双层保护的坚果，牡丹籽去壳可以榨取牡丹籽油，牡丹籽油不饱和脂肪酸含量达90％以上，被誉为迄今为止最适合人类营养的油，牡丹籽壳则一般作为废弃物处理，不仅造成资源浪费，还造成环境污染。
研究发现，牡丹籽皮中含有大量的类黄酮物质，黄酮泛指具有两个酚轻基的苯环通过中央三碳链相互连接而成的一系列化合物，黄酮类物质的作用包括：(1)预防和治疗心血管疾病，如葛根素可以扩张血管；黄豆苷类可以降低胆固醇；茶多酚和茶色素可以调节血脂；(2)抗癌抗肿瘤，增强自身免疫力抑制肿瘤生长，促进肿瘤凋亡，抑制肿瘤细胞分裂；(3)抗菌抗病毒，抑制细菌体内能量生成以及各种代谢反应；可以抑制病毒活性，降低病毒的活动与复制能力；(4)抗氧化，抗疲劳，抗衰老等作用。
现有技术中，黄酮类物质提取的方法有热水提取法、有机溶剂提取法、碱提取酸沉淀法、超临界流体萃取法、酶辅助提取法和超声波辅助提取法等。
申请号为201410638164.7的专利公开了一种从牡丹籽皮中提取类黄酮的方法，用水提取法提取牡丹籽皮中的类黄酮，提取方法以水为溶剂，设备要求不高、成本低，对环境及人类无毒害等优点，但对黄酮类化合物提取效率低，且提取物中含有大量的杂质。
发明内容
针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，通过优化实验条件，提高牡丹籽壳中总黄酮的提取率，为牡丹籽壳的进一步开发和利用提供理论依据。
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
(1)将原料牡丹籽壳粉碎，过筛，得到牡丹籽壳粉；
(2)准确称取牡丹籽壳粉，按料液比1:8～1:25(g/mL)加入质量浓度为40％～95％的乙醇溶液，混合均匀后，在水浴锅中保温静置浸提时间为0～90min，匀浆，匀浆次数1～4次；
(3)离心，取上清液；
(4)步骤(3)中所述上清液，部分作为样品溶液测其吸光值，计算出该溶液浓度，从而测定黄酮化合物的含量；部分经减压浓缩、冷冻干燥，得牡丹籽壳中总黄酮提取物。
本发明所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其中，步骤(2)中料液比为1:10～1:25。
本发明所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其中，步骤(2)中乙醇溶液的质量浓度为40％～80％。
本发明所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其中，步骤(2)中匀浆时间为1～8min。
本发明所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其中，步骤(2)中在30～60℃水浴锅中保温静置浸提。
本发明所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其中，步骤(2)中浸提时间为0～60min。
本发明所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其中，乙醇溶液的质量浓度为70％，料液比为1:25(g/ml)，匀浆时间为8min以及匀浆次数为4次。
本发明有益效果：
本发明所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，牡丹籽壳中总黄酮的提取率高，且具有操作简单、适用性强、适合大规模生产、低成本的优点，本发明为进一步开发利用牡丹种皮黄酮提供理论依据，而且对于牡丹的资源化利用，牡丹种皮的变废为宝，具有重要的经济价值和生态意义。
附图说明
图1为本发明的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法的流程图；
图2为本发明中不同料液比对牡丹籽壳中总黄酮的提取量的示意图；
图3为本发明中不同乙醇浓度对牡丹籽壳中总黄酮的提取量的示意图；
图4为本发明中不同匀浆时间对牡丹籽壳中总黄酮的提取量的示意图；
图5为本发明中不同匀浆次数对牡丹籽壳中总黄酮的提取量的示意图；
图6为本发明中不同浸提时间对牡丹籽壳中总黄酮的提取量的示意图；
图7为本发明中不同浸提温度对牡丹籽壳中总黄酮的提取量的示意图。
下面将结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
具体实施方式
实施例1
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，包括以下步骤：
(1)将原料牡丹籽壳粉碎，过60目筛，得到牡丹籽壳粉；
(2)准确称取5.00g牡丹籽壳粉，按料液比1:10(g/mL)加入乙醇溶液，混合均匀后，在30℃水浴锅中保温静置浸提30min，匀浆时间3min，匀浆次数2次，乙醇溶液的质量分数为50％；
(3)以4000r/min离心20min，取上清液；
(4)步骤(3)中所述上清液，部分作为样品溶液测其吸光值，计算出该溶液浓度，从而测定黄酮化合物的含量；部分经减压浓缩、冷冻干燥，得牡丹籽壳中总黄酮提取物。
实施例2
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中料液比为1：8(g/mL)外，其它同实施例1。
实施例3
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中料液比为1：12(g/mL)外，其它同实施例1。
实施例4
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中料液比为1：15(g/mL)外，其它同实施例1。
实施例5
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中料液比为1：20(g/mL)外，其它同实施例1。
实施例6
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中料液比为1：25(g/mL)外，其它同实施例1。
实施例7
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中乙醇溶液的质量分数为40％外，其它同实施例5。
实施例8
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中乙醇溶液的质量分数为60％外，其它同实施例5。
实施例9
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中乙醇溶液的质量分数为70％外，其它同实施例5。
实施例10
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中乙醇溶液的质量分数为80％外，其它同实施例5。
实施例11
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中乙醇溶液的质量分数为95％外，其它同实施例5。
实施例12
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中匀浆时间为1min外，其它同实施例5。
实施例13
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中匀浆时间为2min外，其它同实施例5。
实施例14
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中匀浆时间为4min外，其它同实施例5。
实施例15
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中匀浆时间为6min外，其它同实施例5。
实施例16
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中匀浆时间为8min外，其它同实施例5。
实施例17
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中匀浆次数为1次外，其它同实施例5。
实施例18
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中匀浆次数为3次外，其它同实施例5。
实施例19
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中匀浆次数为4次外，其它同实施例5。
实施例20
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中保温浸提时间为0外，其它同实施例1。
实施例21
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中保温浸提时间为60min外，其它同实施例1。
实施例22
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中保温浸提时间为90min外，其它同实施例1。
实施例23
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中浸提温度为40℃外，其它同实施例1。
实施例24
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中浸提温度为50℃外，其它同实施例1。
实施例25
一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，除步骤(2)中浸提温度为60℃外，其它同实施例1。
本发明实验结果：
实施例1-6中，不同料液比(m:v)1:8、1:10、1:12、1:15、1:20和1:25对牡丹籽壳中总黄酮提取含量的影响如图2所示，结果表明，从节约资源的角度来说，1:20为最适料液比。
实施例5和实施例7-11中，不同乙醇溶液的质量分数40％、50％、60％、70％、80％和95％对牡丹籽壳中总黄酮提取含量的影响如图3所示，结果表明，质量分数80％的乙醇为最适浓度。
实施例5和实施例12-16中，不同匀浆时间1min、2min、3min、4min、6min和8min对牡丹籽壳中总黄酮提取含量的影响如图4所示，结果表明，最适匀浆时间为6min。
实施例5和实施例17-19中，不同匀浆次数1、2、3、4次对牡丹籽壳中总黄酮提取含量的影响如图5所示，结果表明，最佳匀提取次数为4次。
实施例5和实施例20-22中，不同浸提时间0min、30min、60min和90min对牡丹籽壳中总黄酮提取含量的影响如图6所示，结果表明，保温浸提60min时为最佳浸提时间。
实施例5和实施例23-25中，不同浸提温度30℃、40℃、50℃和60℃的水浴锅静置30min对牡丹籽壳中总黄酮提取含量的影响如图6所示，结果表明，浸提温度为40℃时总黄酮提取含量最高。
根据上述实施例1-25中牡丹籽壳中总黄酮的提取率的单因素结果，将该提取方法中的乙醇浓度、料液比、匀浆次数和匀浆时间作为指标，进行四因素三水平正交试验，正交实验的因素设计和结果见表1，由表1可知，各因素的影响顺序从大到小依次为：乙醇浓度、料液比、匀浆次数、匀浆时间。最优工艺条件组合为：乙醇质量分数为70％、料液比为1:25(g/ml)、匀浆时间为8min以及匀浆次数为4次。
根据上述最优工艺组合进行三次试验，从牡丹籽壳中提取出黄酮类化合物的含量分别为：75.45mg/g、76.15mg/g、75.62mg/g，平均含量为75.74mg/g，因此，可以得出此优化方案可行性较高。
表1正交试验设计表
水平 A/乙醇浓度 B/料液比/(m:v) C/匀浆时间(min) D/匀浆次数
1 70％ 1:15 4 2
2 80％ 1:20 6 3
3 95％ 1:25 8 4
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (7)

1.一种牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将原料牡丹籽壳粉碎，过筛，得到牡丹籽壳粉；
(2)准确称取牡丹籽壳粉，按料液比1:8～1:25加入质量浓度为40％～95％的乙醇溶液，混合均匀后，在水浴锅中保温静置浸提时间为0～90min，匀浆，匀浆次数1～4次；
(3)离心，取上清液；
(4)步骤(3)中所述上清液，部分作为样品溶液测其吸光值，计算出该溶液浓度，从而测定黄酮化合物的含量；部分经减压浓缩、冷冻干燥，得牡丹籽壳中总黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其特征在于：步骤(2)中料液比为1:10～1:25。
3.根据权利要求1所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其特征在于：步骤(2)中乙醇溶液的质量浓度为40％～80％。
4.根据权利要求1所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其特征在于：步骤(2)中匀浆时间为1～8min。
5.根据权利要求1所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其特征在于：步骤(2)中在30～60℃水浴锅中保温静置浸提。
6.根据权利要求1所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其特征在于：步骤(2)中浸提时间为0～60min。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的牡丹籽壳中总黄酮的提取方法，其特征在于：乙醇溶液的质量浓度为70％，料液比为1:25(g/ml)，匀浆时间为8min以及匀浆次数为4次。
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