CN106198509B - 用于测定肌酐的试剂盒和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于测定肌酐的试剂盒和方法。所述试剂盒包含试剂组1和试剂组2，所述试剂组1包含肌酸酶、肌氨酸氧化酶、色原和过氧化氢酶，所述试剂组2包含肌酐酶、4‑氨基安替吡啉和过氧化物酶，其中，所述色原选自N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3,5‑二甲氧基苯胺或其钠盐和N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑5‑二甲氧基苯胺。本发明的试剂盒和方法可以降低肌酐检测中由样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰。

Description

用于测定肌酐的试剂盒和方法
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域。特别地，本发明涉及一种用于检测肌酐的试剂盒和方法。
背景技术
肌酐是一种相对分子质量较小(Mw＝113.1)的极性有机氮化合物。血清肌酐来源分为外源性和内源性，外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物；内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。在肉类食物摄入量稳定且身体的肌肉代谢基本不变时，肌酐的生成恒定。肌酐可通过肾球滤过，在肾小管内很少吸收，每日体内产生的肌酐几乎全部随尿液排出，一般不受尿量影响。在临床上，血肌酐浓度用于反映例如肾脏损害、肾小球滤过率等肾功能。
测定血清肌酐的方法主要有两种：一种是碱性苦味酸速率法(Jaffe法)，一种是肌氨酸氧化酶法。Jaffe法由于线性范围窄，特异性差，易受样本中其他物质(如酮体、抗坏血酸、胆红素、头孢、多巴胺等)干扰，出现检测偏差，已逐渐退出市场。目前市场使用较多的为肌氨酸氧化酶法。
羟苯磺酸钙(calcium dobesilate)(又称多贝斯(doxium))是微血管保护剂，主要用于治疗微血管病、静脉曲张综合症以及与微循环障碍伴发额静脉功能不全，还用于静脉剥离和静脉硬化法的辅助治疗，用于预防术后综合症，水肿及组织浸润。羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰在1986年被Guder和Hoffman首次报道，而该干扰的机理目前尚不清楚。
酚磺乙胺(又名止血敏)的化学名称为2,5-二羟基苯磺酸二乙胺盐。其具有止血作用。酚磺乙胺在临床上主要用于预防和治疗外科手术出血过多，血小板减少性紫癜或过敏性紫癜以及其他原因引起的出血。酚磺乙胺对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰已有报道。
羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰对被施用这两种药物的患者造成很大的不便。例如，对于糖尿病患者而言，常伴发肾功能不全，而所施用的羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰可能造成糖尿病患者肾功能不正确评估，掩盖并延误病情。而对于手术患者，所施用的酚磺乙胺对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰可能使得不能正确评估其肾功能，造成术后并发症，影响患者的预后。
本领域中需要满足以下一种或多种特性的肌酐测定试剂盒：能够抵抗羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰；具有良好的重复性以及宽的线性范围；和/或能抵抗抗坏血酸、血红蛋白、乳糜对肌酐检测的干扰。
发明内容
一方面，本发明提供了一种肌酐测定试剂盒，其利用肌氨酸氧化酶法检测肌酐。
肌氨酸氧化酶法检测肌酐测定肌酐一般而言所涉及反应为以下：通过肌酐酶将肌酐转化为肌酸，肌酸通过肌酸酶转化为肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成过氧化氢(H2O2)，最后H2O2在Trinder反应中呈色，即，过氧化氢与4-AAP和色原在过氧化物酶的作用下生成醌亚胺。用于进行肌氨酸氧化酶法的试剂盒通常包含肌酸酶、肌氨酸氧化酶、色原、肌酐酶、4-氨基安替吡啉(4-AAP)和过氧化物酶。
本发明的一些实施方案的肌酐测定试剂盒可以采用肌氨酸氧化酶二步酶法测定肌酐。所述肌氨酸氧化酶二步法可以包括两个步骤。第一步骤用于消除内源性肌酸，其中内源性肌酸在肌酸酶和肌氨酸氧化酶的作用下生成H2O2，生成的H2O2被过氧化氢酶(CAT)分解成H2O和O2，在此步骤中H2O2并不与色原发生反应；在第二步骤中，加入肌酐酶后，肌酐在肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶的作用下生成H2O2，过氧化氢酶在过氧化氢酶抑制剂的作用下失活，从而生成的H2O2在Trinder反应中呈色。
在一些实施方案中，使用所述肌氨酸氧化酶二步酶法测定肌酐的肌酐测定试剂盒可以包含试剂组1和试剂组2。其中，所述试剂组1包含肌酸酶、肌氨酸氧化酶、色原和过氧化氢酶。所述试剂组2包含肌酐酶、4-氨基安替吡啉(4-AAP)和过氧化物酶。其中，所述色原选自N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐(HDAOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-5-二甲氧基苯胺(DAOS)或其组合。
本发明人出乎意料地发现，在利用肌酐氧化酶法的检测肌酐时，包含选自HDAOS、DAOS或其组合的色原与4-AAP的组合物能够降低样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对肌酐检测所造成的负干扰。
在一些实施方式中，所述4-氨基安替吡啉的量在0.25-5g/L，优选0.5-2.5g/L的范围内。4-AAP的量在0.25-5g/L的范围内时可以有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对肌酐测定所造成的干扰。在一些实施方式中，所述试剂盒中4-AAP的量可以为0.7g/L、1g/L、1.5g/L、2g/L、3g/L或4g/L。
在一些实施方式中，使用这样的组合物测得的样品中的肌酐值与对对照样品测得的肌酐值相比，偏差小于10％，优选小于9％，更优选小于8％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
所述试剂盒中所述色原的量可以在0.1-60mmol/L，优选0.3-50mmol/L的范围内，例如，所述色原的量可以为0.4mmol/L、1mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L或40mmol/L。
在一些实施方式中，所述试剂盒中肌酐酶的量为105-800KU/L，优选120-500KU/L。例如，所述肌酐酶的量可以为150KU/L、200KU/L、250KU/L、300KU/L、350KU/L、400KU/L、450KU/L、500KU/L、550KU/L、600KU/L、650KU/L、700KU/L或750KU/L。肌酐酶的量在105-800KU/L范围内时可以更有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对肌酐测定所造成的干扰。
所述试剂组1中的过氧化氢酶用于消除内源性肌酸产生的过氧化氢，从而消除内源性肌酸的干扰。在一些实施方式中，所述过氧化氢酶的量在20-1000KU/L，优选50-600KU/L的范围内。例如，所述过氧化氢酶的量可以为50KU/L、100KU/L、150KU/L、200KU/L、250KU/L、300KU/L、350KU/L、400KU/L、450KU/L、500KU/L、550KU/L、600KU/L、650KU/L、700KU/L、750KU/L、800KU/L、850KU/L、900KU/L或950KU/L。将过氧化氢酶的量提高至例如50KU/L及以上可以更好地充分消除内源性肌酸的干扰。过氧化氢酶的量控制在20-1000KU/L的范围内时可以更有效地降低羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺对肌酐测定所造成的干扰。
在本发明的一些优选实施方式中，所述试剂盒包含0.1-60mmol/L，优选0.3-50mmol/L的选自HDAOS和DAOS的色原；0.25-5g/L，优选0.5-2.5g/L的4-AAP；105-800KU/L，优选120-500KU/L的肌酐酶；以及20-1000KU/L，优选50-600KU/L的过氧化氢酶。在这些实施方式中，测得的样品中的肌酐值与对对照样品测得的肌酐值相比，偏差小于10％，优选小于8％，更优选小于6％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
在一些实施方式中，所述试剂盒中肌酸酶、肌氨酸氧化酶和过氧化物酶的量可以通过本领域技术人员常规地确定。例如肌酸酶的量可以为1-300KU/L，优选5-150KU/L；肌氨酸氧化酶的量可以为0.5-150KU/L，优选2-100KU/L；过氧化物酶的量可以为1-100KU/L，优选1-50KU/L。
所述试剂组1和/或试剂组2中还可以包含缓冲溶液，其可以为本领域中常规使用的缓冲溶液。在一些实施方式中，所述缓冲溶液可以各自独立地为MOPS、good's缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液以及其任意组合。在一些实施方式中，所述缓冲液的量在5-1000mmol/L、优选10-500mmol/L的范围内。所述缓冲液的pH可以在6.0-8.5的范围内。
本发明试剂盒还可以包含本领域通常使用的其他辅助成分。
例如，所述试剂组1还可以包含以下试剂中的一种或更多种：稳定剂、防腐剂、表面活性剂和抗坏血酸氧化酶。其中，所述稳定剂可以为蔗糖、BSA、糖醇等或其任意组合，其量可以为0.5-200g/L，优选1-50g/L。所述防腐剂可以为二氯乙酰胺、咪唑烷基脲、生物防腐剂ProClin系列、山梨酸钾、苯甲酸钠、尼泊金酯等或其任意组合，其量可以为0.1-100g/L，优选0.1-50g/L。所述抗坏血酸氧化酶用于抑制肌酐检测中抗坏血酸的干扰，其量可以为1-100KU/L，优选1-50KU/L。所述表面活性剂可以为TWEEN、SPAN、TRITON、EMULGEN系列表面活性剂，其量可以为0.1-100g/L，优选0.1-50g/L。
例如，所述试剂组2还可以包含防腐剂和/或表面活性剂。所述防腐剂可以为叠氮钠、二氯乙酰胺、咪唑烷基脲、生物防腐剂ProClin系列、山梨酸钾、苯甲酸钠、尼泊金酯，其量可以为0.1-100g/L，优选0.1-50g/L。所述表面活性剂可以为TWEEN、SPAN、TRITON、EMULGEN系列表面活性剂，其量可以为0.1-100g/L，优选0.1-50g/L。
本发明试剂盒中的各试剂可以各自独立地为液体形式或冻干粉形式。同一试剂组中的试剂可以放置在同一容器中或单独放置。
本发明的试剂盒可以采用本领域技术人员熟知的方法配制。例如，可以通过将同一试剂组中的试剂混合均匀来配制本发明试剂盒。
本发明的试剂盒特别适合用于检测正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的患者的样品中的肌酐，所述患者例如正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的微血管病、静脉曲张综合症以及与微循环障碍伴发额静脉功能不全、外科手术出血过多，血小板减少性紫癜或过敏性紫癜以及其他原因引起的出血的患者，所述样品可以例如是血液或尿液。
另一方面，本发明提供了一种使用上文所述试剂盒检测样品中的肌酐含量的方法，这种方法可以被称为二步酶法。所述方法包括以下步骤：
(a)将样品和校准品分别与所述试剂组1混合并孵育所得的混合物，测定所得混合物的吸光度A1，
(b)将所述试剂组2与经孵育的步骤(a)的混合物混合并孵育，测定所得混合物的吸光度A2，
(c)根据下式计算肌酐浓度，
样品中肌酐浓度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC
上式中，A2U和A1U分别表示样品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分别表示校准品的吸光度A2和A1；CC表示校准品的浓度。
所述“校准品”指的是纯肌酐的溶液，纯肌酐可以商购获得，可以将其配置为合适的浓度，例如10-10000μmol/L。
在上述方法中，步骤(a)和步骤(b)中的孵育时间可由本领域技术人员常规地确定。例如，孵育时间可以为2-30分钟，例如5分钟、10分钟或20分钟。
在一些实施方式中，所述方法中所检测的样品来自正在接受或已经接受羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺治疗的患者。
在一些实施方式中，所述方法中使用的样品与试剂组1、试剂组2的量的比例为样品：试剂组1：试剂组2＝1:45:15。例如，样品、试剂组1和试剂组2的用量可以分别为4μl、180μl和60μl。
又一方面，本发明提供了包含选自N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-5-二甲氧基苯胺的色原与4-AAP的组合物用于降低在肌酐检测中样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的用途。
在一些实施方式中，所述用于降低在肌酐检测中样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的组合物中，所述4-氨基安替吡啉的量为0.25-5g/L，优选0.5-2.5g/L。
在一些实施方式中，所述用于降低在肌酐检测中样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的组合物还包含105-800KU/L，优选120-500KU/L的肌酐酶和/或20-1000KU/L，优选50-600KU/L的过氧化氢酶。
在一些实施方式中，所述用途使用上文所述的试剂盒。
在本发明中，对于一个方面所描述的特征、实施方案、优选实施方案同样适用于本发明的其他方面。
在本发明的一些实施方案中，组合物、试剂组、试剂盒以及方法用“包含”或“包括”描述。但本领域技术人员可以理解，所述组合物、试剂组、试剂盒以及方法也可以由基本上由相应化合物、试剂或步骤组成或由相应化合物、试剂或步骤组成。
除了与本发明的目的明显不相容的情况外，本发明的描述应理解为包括本发明的各种实施方式或要素的组合，以及它们的替代方式的组合。
具体实施方式
现将描述实施本发明的一些方面的一些说明性且非限制性的实施例以及对比例。
实施例1：肌酐测定试剂盒的配制
将下表1和下表2中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂组1和2。
表1：试剂组1
表2：试剂组2
实施例2：肌酐测定试剂盒的配制
将下表3和下表4中所示的所有组分按照如下所示浓度混合以制备试剂组1和2。
表3：试剂组1
表4：试剂组2
实施例3：肌酐检测方法以及重复性试验
收集3名健康体检人员无溶血、无脂浊、无黄疸的新鲜混合血清作为样品。采用四川迈克生物科技股份有限公司的肌酐校准品(浓度：352.8μmol/L批号：0715031)对试剂进行校准。通过全自动生化仪(日立7170)，将样品和校准品与实施例1和实施例2中的试剂组1混匀，在37℃下反应5分钟得混合物1；用空白管调零，在600nm处测定混合物的吸光度A1，然后在混合物中加入实施例1和实施例2中的试剂组2，再在37℃下反应5分钟，得混合物2，再按照如上所述测定混合物2的吸光度A2；根据下式计算肌酐浓度。其中样品用量为4μl，试剂组1试剂用量为180μl，试剂组2用量为60μl。
样品中肌酐浓度＝(A2U-A1U)/(A2C-A1C)*CC
上式中，A2U和A1U分别表示样品的吸光度A2和A1；A2C和A1C分别表示校准品的吸光度A2和A1；CC表示校准品的浓度。
利用上述方法重复测定肌酐浓度10次。计算变异系数。结果参见下表5。
表5.肌酐测定试剂盒重复性实验
由以上结果可见，肌酐测定试剂盒精密度CV<3％，重复性好。
实施例4：线性范围检测
取肌酐浓度2000.0μmol/L左右的线性样品，用生理盐水稀释成9个不同的浓度(稀释梯度分别为0、1/64、1/32、1/16、1/8、1/4、1/2、9/10、1)作为理论浓度。用实施例1和2制备的试剂盒按照实施例3所述检测方法对每个浓度测定3次，计算平均值，作为实测浓度。以理论浓度为自变量，以实测浓度为因变量求出线性回归方程，计算线性回归相关系数r；将理论浓度代入线性回归方程，计算估算浓度及实测浓度与估算浓度的偏差。结果如下表7所示。
表6：肌酐测定试剂盒的线性范围检测
由以上结果可见：肌酐测定试剂盒线性相关系数r为1.00，大于0.99；偏差范围小，线性可达2000.0μmol/L。证实所述试剂盒线性范围满足肌酐行业标准要求。
实施例5：抗抗坏血酸、血红蛋白、乳糜、胆红素、酚磺乙胺和羟苯磺酸钙干扰的测定
用混合血清配制以下浓度的抗坏血酸(g/L)：0.2、0.4、0.6、0.8、1.0；以下浓度的血红蛋白(g/L)：1、2、3、4、5；以下浓度的乳糜(mmol/L)：5、10、15、20、25、35。用实施例1和实施例2的试剂盒按照实施例3所述方法测定不含上述干扰物质的基础血清和以上配制的样品中的肌酐浓度，并计算样品与基础血清所测值之间的相对偏差，偏差在10％以内认为是没有干扰。结果参见下表7。
表7：抗坏血酸、血红蛋白、乳糜和胆红素干扰的测定
由以上可见，Vc 0.6g/L，血红蛋白5g/L，胆红素800μmol/L，乳糜35mmol/L对肌酐测定的结果无干扰。证明试剂抗干扰能力强。本申请人出乎意料地发现，使用实施例1和2的试剂盒，酚磺乙胺250mg/L以及羟苯磺酸钙100mg/L对肌酐测定结果无干扰。
实施例6：抗酚磺乙胺干扰条件的探讨
1.不同色原类型与4-AAP的量
配制浓度如下表8所示的4-AAP溶液，配制10mmol/L N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOPS)(同仁化工)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)(同仁化工)、苯酚(成都科龙)、N,N-双(4-磺丁基)-3-5-二甲基苯胺(MADS)(同仁化工)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-5-二甲基苯胺(MAOS)(同仁化工)、HDAOS(同仁化工)、DAOS(同仁化工)的色原溶液。除了4-AAP以及色原外，其余成分均按照实施例1所示配方制备肌酐测定试剂盒。
收集健康体检人员无溶血、无脂浊、无黄疸的新鲜混合血清，添加纯肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差异，各配方测得值会略有差异，具体参见各表格中0mg/L药物浓度样本值)作为基础血清。将酚磺乙胺水溶液(山东方明药业集团股份有限公司)与基础血清按1：9比例配制成药物浓度为250mg/L的干扰样品；对照样品为生理盐水与基础血清按1：9比例配制；不同药物浓度干扰样品由250mg/L药物干扰样品与对照样本不同比例配制而得。按照实施例3所述测定对照样品以及不同浓度的干扰样品中的肌酐浓度，计算相对于对照样品的偏差，结果如下表12所示。
表8.不同色原类型和4-AAP的量对抗酚磺乙胺干扰的影响
由上表可见，使用色原HADOS和DAOS测定且4-AAP量在0.25-5g/L范围内的结果相对于对照样品的偏差在10％之内。
2.不同色原量
配制浓度为下表9所示的色原溶液，所述色原为TOPS、TOOS、苯酚、MADS、MAOS、HDAOS、DAOS。配制4-AAP浓度为0.5g/L。除了色原和4-AAP外，其余组分均按照实施例1所示配方制备肌酐测定试剂盒。
收集健康体检人员无溶血、无脂浊、无黄疸的新鲜混合血清，添加纯肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差异，各配方测得值会略有差异，具体参见各表格中0mg/L药物浓度样本值)。将酚磺乙胺水溶液与基础血清按1：9比例配制成药物浓度为250mg/L的干扰样品；对照样品为生理盐水与基础血清按1：9比例配制；不同药物浓度干扰样品由250mg/L药物干扰样品与对照样本不同比例配制而得。按照实施例3所述测定对照样品以及不同浓度的干扰样品中的肌酐浓度，计算相对于对照样品的偏差，结果如下表9所示。
表9.不同色原量对抗酚磺乙胺干扰的影响
由上表可见，在0.1mmol/L-60mmol/L的大浓度范围内的HDAOS和DAOS均可以抵抗250mg/L以下的酚磺乙胺的干扰，仅在酚磺乙胺浓度很高时出现稍大于10％的偏差。
3.肌酐酶的量
配制如表10所示浓度的肌酐酶，除肌酐酶和色原类型外，其余组分均按照实施例1所示配方来制备肌酐测定试剂盒。
收集健康体检人员无溶血、无脂浊、无黄疸的新鲜混合血清，添加纯肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差异，各配方测得值会略有差异，具体参见各表格中0mg/L药物浓度样本值)。将酚磺乙胺水溶液与基础血清按1：9比例配制成药物浓度为250mg/L的干扰样品；对照样品为生理盐水与基础血清按1：9比例配制；不同药物浓度干扰样品由250mg/L药物干扰样品与对照样本不同比例配制而得。按照实施例3所述测定对照样品以及不同浓度的干扰样品中的肌酐浓度，计算相对于对照样品的偏差，结果如下表10所示。
表10.不同肌酐酶的量对抗酚磺乙胺干扰的影响
由上表可见，所有浓度的肌酐酶都可以实现与对照样品相比小于10％的偏差。但在105-800KU/L，尤其是120-500KU/L的范围内，偏差更小。
4.过氧化氢酶的量
配制如表11所示浓度的过氧化氢酶，除过氧化氢酶和色原类型外，其余组分均按照实施例1所示配方来制备肌酐测定试剂盒。
收集健康体检人员无溶血、无脂浊、无黄疸的新鲜混合血清，添加纯肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差异，各配方测得值会略有差异，具体参见各表格中0mg/L药物浓度样本值)。将酚磺乙胺水溶液与基础血清按1：9比例配制成药物浓度为250mg/L的干扰样品；对照样品为生理盐水与基础血清按1：9比例配制；不同药物浓度干扰样品由250mg/L药物干扰样品与对照样本不同比例配制而得。按照实施例3所述测定对照样品以及不同浓度的干扰样品中的肌酐浓度，计算相对于对照样品的偏差，结果如下表11所示。
表11.不同过氧化氢酶的量对抗酚磺乙胺干扰的影响
由上表可见，基本所有浓度范围的过氧化氢酶都可以实现与对照样品相比小于10％的偏差。但在50-1000KU/L的范围内，偏差更小。
5.肌氨酸氧化酶、肌酸酶和过氧化物酶的量
配制如表12所示浓度的肌氨酸氧化酶、肌酸酶和过氧化物酶，除肌氨酸氧化酶、肌酸酶和过氧化物酶和色原类型外，其余组分均按照实施例1所示配方来制备肌酐测定试剂盒。
收集健康体检人员无溶血、无脂浊、无黄疸的新鲜混合血清，添加纯肌酐至200.0-250.0μmol/L(由于配方差异，各配方测得值会略有差异，具体参见各表格中0mg/L药物浓度样本值)。将酚磺乙胺水溶液与基础血清按1：9比例配制成药物浓度为250mg/L的干扰样品；对照样品为生理盐水与基础血清按1：9比例配制；不同药物浓度干扰样品由250mg/L药物干扰样品与对照样本不同比例配制而得。按照实施例3所述测定对照样品以及不同浓度的干扰样品中的肌酐浓度，计算相对于对照样品的偏差，结果如下表12所示。
由上可见，肌氨酸氧化酶、肌酸酶和过氧化物酶的量对于抵抗酚磺乙胺对肌酐检测的干扰没有影响。
6.与市售试剂盒的对比
6.1与市售试剂盒1的对比
6.1.1市售试剂盒1的主要成分
试剂组1包含2000U/L肌酸酶、6000U/L肌氨酸氧化酶、5000U/L过氧化物酶和0.4mmol/L N-乙基-N-(3-丙磺基)-3-甲基苯胺(ESPMT)；试剂组2包含25000U/L肌酐酶和1.0mmol/L 4-AAP。
6.1.2结果
按照以上所述方法进行检测，结果如下表13所示：
表13：利用市售试剂盒1检测时酚磺乙胺干扰的情况
可见，市售试剂盒1无法抵抗酚磺乙胺对肌酐检测的干扰。
6.2与市售试剂盒2的对比
6.2.1市售试剂盒2的主要成分
试剂组1包含75IU/ml肌酸脱水酶、11IU/ml肌氨酸氧化酶、0.3mmol/L N-乙基-N-(2-羟-3-磺丙)-3-5-二甲氧-4-氟苯胺(F-DAOS)；试剂组2包含330IU/ml肌酐酶和4.9mmol/L 4-AAP。
6.1.2结果
按照以上所述方法进行检测，结果如下表14所示：
表14：利用市售试剂盒2检测时酚磺乙胺干扰的情况
酚磺乙胺 0mg/L 50mg/L 100mg/L 150mg/L 200mg/L 250mg/L
1 177.6 120.4 93.8 83.9 74.0 69.8
2 177.5 119.7 93.9 82.7 75.6 69.5
M 177.6 120.1 93.9 83.3 74.8 69.7
RE/％ / -32.39％ -47.14％ -53.08％ -57.87％ -60.77％
是否干扰 / 是 是 是 是 是
可见，市售试剂盒2无法抵抗酚磺乙胺对肌酐检测的干扰。
6.3与其他市售试剂盒的对比
使用市售试剂盒3、4和5检测时酚磺乙胺干扰的情况见表15。其中，市售试剂盒3的主要成分为，试剂组1：肌酸脒基水解酶≥40KU/L，肌氨酸氧化酶≥7KU/L，抗坏血酸氧化酶≥2KU/L，过氧化氢酶≥100KU/L，ESPMT≥0.47mmol/L；试剂组2：肌酐胺基水解酶≥400KU/L，过氧化物酶≥50KU/L，4-AAP≥2.95mmol/L。市售试剂盒4的主要成分为，试剂组1：肌酸酶60U/ml，肌氨酸氧化酶15U/ml，EMSE1.4mmol/l；试剂组2：过氧化物酶30U/ml，肌酐酶310U/ml，；4-AAP 2.5mmol/L。市售试剂盒5的主要成分为，试剂组1：肌酸酶≥332μkat/L，肌氨酸氧化酶≥132μkat/L，过氧化氢酶≥1.67μkat/L；HTIB 1.2g/L，抗坏血酸氧化酶≥33μkat/L；试剂组2：肌酸酐酶≥498μkat/L，过氧化物酶≥16.6μkat/L，4-AAP 0.5g/L。
表15：利用市售试剂盒3-5检测时酚磺乙胺干扰的情况
实施例7：抗羟苯磺酸钙干扰条件的探讨
按照实施例6所示方法，探讨抗羟苯磺酸钙干扰的条件。发现在能够抵抗酚磺乙胺的组分浓度条件下，均可以实现抗羟苯磺酸钙的干扰。数据如下表16所示：
表16：抗羟苯磺酸钙干扰条件的探讨
2.与市售试剂盒的对比
2.1与市售试剂盒1的对比
市售试剂盒1组分如实施例6中6.1.1部分所述。按照以上所述方法进行检测，结果如下表17所示：
表17：利用市售试剂盒1检测时羟苯磺酸钙干扰的情况
可见，市售试剂盒1无法抵抗羟苯磺酸钙对肌酐检测的干扰。
2.2与市售试剂盒2的对比
市售试剂盒2组分如实施例6中5.2.1部分所述。按照以上所述方法进行检测，结果如下表18所示：
表18：利用市售试剂盒2检测时羟苯磺酸钙干扰的情况
酚磺乙胺 0mg/L 20mg/L 40mg/L 60mg/L 80mg/L 100mg/L
1 177.5 144.1 123.5 106.4 95.8 88.1
2 175.8 144.7 121.6 106.4 96.6 88.8
M 176.7 144.4 122.6 106.4 96.2 88.5
RE/％ / -18.26％ -30.63％ -39.77％ -45.54％ -49.93％
是否干扰 / 是 是 是 是 是
可见，市售试剂盒2无法抵抗羟苯磺酸钙对肌酐检测的干扰。

Claims (7)

1.包含选自N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺或其钠盐和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-5-二甲氧基苯胺的色原与4-氨基安替吡啉的组合物用于降低在利用肌氨酸氧化酶法进行的肌酐检测中样品中存在的羟苯磺酸钙和/或酚磺乙胺所造成的干扰的用途；其中所述4-氨基安替吡啉的量为0.25-5g/L，所述色原的量为0.1-60mmol/L。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述4-氨基安替吡啉的量为0.5-2.5g/L。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述组合物还包含120-500KU/L的肌酐酶和/或50-600KU/L的过氧化氢酶。
4.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中使用所述组合物测得的样品中的肌酐值与对照样品测得的肌酐值相比偏差小于10％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
5.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中使用所述组合物测得的样品中的肌酐值与对照样品测得的肌酐值相比偏差小于8％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
6.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中使用所述组合物测得的样品中的肌酐值与对照样品测得的肌酐值相比偏差小于6％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
7.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中使用所述组合物测得的样品中的肌酐值与对照样品测得的肌酐值相比偏差小于4％，其中所述对照样品为除不含羟苯磺酸钙和酚磺乙胺之外，其他均与所述样品相同的样品。
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