CN106188006A - 含1,2,3三氮唑杂环类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了含1,2,3三氮唑杂环类化合物及其制备方法和应用，其中，含1,2,3三氮唑杂环类化合物具有以下结构通式：通过细胞水平实验发现，本发明提供的含1,2,3三氮唑杂环类化合物均可以抑制K562-3d、HL60、KG1a细胞的增殖，特别是实例2化合物在药物浓度低于阳性对照药物伊马替尼的情况下，可以同样实现抑制K562-3d、HL60、KG1a细胞增殖的效果，因此本发明提供的含1,2,3三氮唑杂环类化合物可以用于治疗白血病。
Description
技术领域
本发明涉及含1,2,3三氮唑杂环类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
白血病，亦称作血癌，是一类造血干细胞异常的克隆性恶性疾病。其克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟的能力而停滞在细胞发育的不同阶段。在骨髓和其他造血组织中白血病细胞大量增生积聚并浸润其他器官和组织，同时使正常造血受抑制，临床表现为贫血、出血、感染及各器官浸润症状。
白血病通常分为:1)急性白血病；2)慢性白血病；3)特殊类型白血病。
急性白血病是一种造血干细胞异常的克隆性恶性疾病。其克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟的能力而停滞在细胞发育的不同阶段。临床表现为贫血、出血、感染及各器官浸润症状。已通过引入新治疗方案完成最新的改进，如针对Ph-阳性(Ph+)ALL而在早期加入酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼或针对B-系ALL的CD20+病例使用抗-CD20抗体利妥昔单抗(Rituximab)。但是这些药对复发性急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的疗效极差，约30％的患者将最终复发。
特征类型白血病又可包括早幼粒细胞白血病、浆细胞白血病、淋巴瘤白血病以及中枢性白血病。这种特殊类型白血病，除了具有一般白血病临床表现(发热、出血、贫血、浸润症状、肝脾淋巴结肿大)外，主要有如下特点：发病急，进展快，出血明显，可发生致命性脑出血或合并弥散性血管内凝血，如未能及时诊断和治疗，在短时间内可因出血导致死亡。因此，是人类健康的隐形杀手。
其中，慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia，CML)又叫慢性髓细胞白血病，它是血液系统的造血干细胞恶性克隆增殖性疾病，导致病人出现贫血、出血、感染等症状。根据CML患者的疾病进展状况和严重程度分为慢性期(CP)、加速期(AP)和急变期(BP)。CML形成的主要原因是9号和22号染色体发生异位t(9:22)(q34:q11)(费城染色体Ph)形成一种融合基因即BCR-ABL融合基因，该基因能够编码BCR-ABL蛋白，是一种活性酪氨酸激酶。这种BCR-ABL激酶能使下游的一些底物磷酸化，进而激活与细胞增殖有关的信号转导通路，造成成熟粒细胞无限增殖而导致CML的发生。
目前，临床上对CML的治疗方法主要是传统的药物治疗、造血干细胞移植和新兴的分子靶向治疗。普通的药物治疗包括烷化剂白消安、羟基脲、干扰素(IFN-α)、阿糖胞苷及高三尖杉酯碱、阿霉素等。其中，由于白消安副反应比较大，目前在临床上已经停止使用；羟基脲、阿霉素等均是通过非特异地抑制肿瘤细胞与正常细胞的脱氧核糖核酸代谢发挥抗癌作用，而对CML发病的分子机理无特异的逆转作用，故对肿瘤组织与正常组织的选择性较差，毒性较大，疗效欠佳；α-干扰素较前两者毒副作用更小，病人耐受性也好，能够产生持续的细胞遗传学缓解使CML病患者的生存期延长，但是其对加速期和急变期的CML患者效果很差。这种普通药物治疗的一个很大弊端是在对肿瘤细胞产生杀伤作用的同时也能对正常的机体细胞产生损伤。
而造血干细胞移植在实际操作起来存在很多困难，比如对患者的年龄有一定的要求，手术复杂，成功率低，耗费高，而且存在移植配型成功率过低，占病人总数30％的白血病人对化疗药物完全不敏感，治疗后难以清除病人体内残存的微小白血病病灶，导致白血病复发率高达30-40％，只有少数年轻患者能长期存活。另外，造血干细胞移植花费较高，动辄花费数十万元，一般病人家庭很难接受。
2001年全球第一个与肿瘤发生相关的信号转导抑制剂伊马替尼上市，主要用于治疗急性和慢性白血病，近年来，随着伊马替尼被大量使用，其耐药性现象也逐渐凸显，且多发生在CML加速期或急变期的患者。
所以寻找一种有效治疗白血病、复发率低并且能够克服伊马替尼耐药的化合物迫在眉睫。
发明内容
为了解决现有技术中用于治疗白血病的药物疗效不佳的问题，根据本发明的一个方面，提供了一种含1,2,3三氮唑杂环类化合物，其中，具有以下结构通式：
在上述含1,2,3三氮唑杂环类化合物中，所述结构通式中R包括以下基团：
根据本发明的另一方面，还提供了一种含1,2,3三氮唑杂环类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下合成路线：
在纳米氧化亚铜(Cu2O-NP)催化作用下，使{4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔与叠氮化合物(R-N3)反应，生成所述含1,2,3三氮唑杂环类化合物；
其中，所述含1,2,3三氮唑杂环类化合物具有以下结构通式：
在上述制备方法中，所述结构通式中R包括以下基团：
在上述制备方法中，所述{4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔的制备方法进一步包括：在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、二氯甲烷、N-甲基吗啡啉和1-羟基苯并三唑一水物存在下，使4-甲基-2-[4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酸与二甲羟胺盐酸盐反应，生成N-甲氧基-N-甲基-4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酰胺；在四氢呋喃存在下，使N-甲氧基-N-甲基-4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酰胺与LiAlH4反应，生成4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲醛；以及在甲醇、四氢呋喃和碳酸钾存在下，使4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲醛与(1-重氮基-2-氧代丙基)-磷酸二甲酯反应，生成{4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔。
在上述制备方法中，所述(1-重氮基-2-氧代丙基)-磷酸二甲酯的制备方法进一步包括：在丙酮存在下，使对甲基苯磺酰氯和叠氮化钠反应，生成4-甲基苯磺酰基叠氮；以及在四氢呋喃和氢化钠存在下，使4-甲基苯磺酰基叠氮与丙酮基膦酸二甲酯反应，生成所述(1-重氮基-2-氧代丙基)-磷酸二甲酯。
在上述制备方法中，所述叠氮化合物(R-N3)的制备方法进一步包括：在亚硝酸钠和盐酸存在下，使苯胺化合物(R-NH2)与叠氮化钠反应，生成所述叠氮化合物(R-N3)；其中，所述R包括以下基团：
根据本发明的又一方面，还提供了上述含1,2,3三氮唑杂环类化合物在用于治疗白血病的药物中的应用。
在上述应用中，所述用于治疗白血病的药物包含所述含1,2,3三氮唑杂环类化合物、所述含1,2,3三氮唑杂环类化合物在药学上可接受的盐、酯、水合物或它们的组合以及辅料。
在上述应用中，所述治疗白血病的药物的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂或它们的组合。
在上述应用中，所述治疗白血病的药物的给药方式包括口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入或它们的组合。
从而，本发明提供了一类新的含1,2,3三氮唑杂环类化合物及其制备方法和应用，通过细胞水平实验发现，本发明提供的含1,2,3三氮唑杂环类化合物均可以抑制K562-3d、HL60、KG1a细胞的增殖，通过测定IC50和IC90值发现，本发明提供的含1,2,3三氮唑杂环类化合物对K562-3d、HL60、KG1a细胞的增殖的抑制作用均可达到90％，并且特别是本发明提供的实例2化合物(化合物8b)在药物浓度低于阳性对照药物伊马替尼的情况下，可以同样实现抑制K562-3d、HL60、KG1a细胞增殖的效果，因此本发明提供的含1,2,3三氮唑杂环类化合物可以用于治疗白血病。
附图说明
图1是化合物3的1H NMR。
图2是化合物4的1H NMR。
图3是化合物5的1H NMR。
图4是化合物5的ESI-MS。
图5是化合物8a的1H NMR。
图6是化合物8a的13C NMR。
图7是化合物8a的ESI-MS。
图8是化合物8b的1H NMR。
图9是化合物8b的13C NMR。
图10是化合物8b的ESI-MS。
图11是化合物8c的1H NMR。
图12是化合物8c的13C NMR。
图13是化合物8c的ESI-MS。
图14是化合物8d的1H NMR。
图15是化合物8d的13C NMR。
图16是化合物8d的ESI-MS。
图17是化合物8e的1H NMR。
图18是化合物8e的13C NMR。
图19是化合物8e的ESI-MS。
图20是化合物8f的1H NMR。
图21是化合物8f的13C NMR。
图22是化合物8f的ESI-MS。
图23是化合物8g的1H NMR。
图24是化合物8g的13C NMR。
图25是化合物8g的ESI-MS。
图26是化合物8h的1H NMR。
图27是化合物8h的13C NMR。
图28是化合物8h的ESI-MS。
图29示出了伊马替尼、实例1化合物和实例3-8化合物对K562细胞的抑制。
图30示出了实例2化合物对K562细胞的抑制。
图31示出了伊马替尼、实例1-8化合物对HL60的抑制。
图32示出了实例1化合物、实例3-4化合物和实例6-8化合物对KG1a细胞的抑制。
图33示出了实例2化合物、实例5化合物对KG1a细胞的抑制。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1含1,2,3三氮唑杂环类化合物的化学合成和结构鉴定
1.本发明提供的含1,2,3三氮唑杂环类化合物具有以下结构通式：
在上述结构通式中，取代基R包括以下基团:
2.本发明提供的含1,2,3三氮唑杂环类化合物的化学合成实验步骤：
2.1通用合成路线为:
在上述合成路线中反应条件a代表：NMM、EDCI、HOBT、rt；反应条件b代表：LiAlH4、THF、0℃；反应条件c代表：(1-重氮-2-氧代丙基)磷酸二甲酯、K2CO3、MeOH、rt、6h；反应条件d代表：NaNO2、HCl、NaN3、H2O、3h、0℃；反应条件e代表：纳米氧化亚铜、CH3CN、rt。
2.2实验部分
2.2.1 N-甲氧基-N-甲基-4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酰胺(3)的合成
取50ml三口圆底烧瓶，在0℃下，依次加入4-甲基-2-[4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酸(2)(1.00g，3.26mmol)、1-羟基苯并三唑一水物(HOBt)(0.49g，3.63mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(0.69g，3.60mmol)，二氯甲烷(30ml)，N-甲基吗啡啉(NMM)(1.1ml，9.79mmol)，反应体系保持0℃不变搅拌30min，然后加入二甲羟胺盐酸盐(0.62g，4.82mmol)，室温搅拌反应6h。反应过程中通过TLC监测反应进程。反应结束后将反应液加入到50ml饱和NaHCO3溶液中，用二氯甲烷(3×100ml)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗，无水Na2SO4干燥，过滤，旋蒸，浓缩得到的粗品用硅胶拌样，通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝50:1)分离纯化得到N-甲氧基-N-甲基-4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酰胺(3)(1.02g，产率：89.52％)为淡黄色固体，TLC:Rf＝0.65(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.27(d,J＝1.2HZ,1H),8.74(d,J＝3.6Hz,1H),8.58(d,J＝1.2Hz,1H),8.53(d,J＝5.2Hz,1H),8.44(m,1H),7.47-7.40(m,2H),7.30(s,1H),7.22(d,J＝5.2Hz,1H),7.02(s,1H),3.65(s,3H),3.41(s,3H),2.43(s,3H)。
2.2.2 4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲醛(4)的合成
取25ml三口圆底烧瓶，依次加入化合物N-甲氧基-N-甲基-4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酰胺(3)(0.80g，2.29mmol)，四氢呋喃(30ml)，开启搅拌，在0℃下，慢慢加入LiAlH4(0.26g，6.87mmol)，反应体系保持0℃不变，继续反应3h。反应过程中通过TLC监测反应进程。反应结束后将反应液慢慢滴加到冷却的NaOH水溶液中，观察到有白色絮状物生成，混合夜用乙酸乙酯萃取(3×100ml)，饱和食盐水洗，合并有机相，用无水硫酸镁干燥，旋蒸，浓缩得到的粗品用硅胶拌样，通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝50:1)分离纯化得到4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲醛(4)(0.59g，产率：88.75％)为黄色固体，TLC:Rf＝0.39(CH2Cl2:CH3OH＝20:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.03(s,1H),9.26(d,J＝2.0Hz,1H),8.82(s,1H),8.73(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.42(m,1H),7.56(dd,J＝1.2,7.6Hz,1H),7.46(dd,J＝4.8,7.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,1H),7.24(d,J＝5.2Hz,1H),7.21(s,1H),2.45(s,3H)。
2.2.3 (1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(10)的合成
取50ml三口圆底烧瓶，加入对甲基苯磺酰氯(2.0g，10.5mmol)，丙酮(30ml)，搅拌，在0-5℃下滴加叠氮化钠(0.75g，11.5mmol)的水溶液,滴加完毕后继续搅拌2h。反应过程中通过TLC监控反应的进程。反应完成后将丙酮旋除，再将水相用甲基叔丁基醚萃取(3×50ml)，合并有机相，有机相用饱和食盐水水洗，无水Na2SO4干燥，浓缩，得到4-甲基苯磺酰基叠氮(9)为无色透明油状物，TLC:Rf＝0.58(石油醚：乙酸乙酯＝8:1)。取50ml的三口圆底烧瓶，加入重蒸的四氢呋喃(25ml)，然后慢慢加入NaH(260mg，10mmol)，在0℃下滴加丙酮基膦酸二甲酯(1.5g，9.0mmol)的四氢呋喃溶液，滴加完毕继续搅拌1h，然后滴加4-甲基苯磺酰基叠氮(9)(1.96g，9.90mmol)的四氢呋喃溶液，在0℃下搅拌30min，反应过程中通过TLC监控反应的进程。反应完成后反应液经硅藻土过滤，浓缩，浓缩得到的粗品用硅胶拌样，通过硅胶柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离纯化得到(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(10)(1.53g，产率：88.35％)为黄色液体，TLC:Rf＝0.20(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)；MS(ESI+):193.13。
2.2.4 {4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔(5)的合成
取25ml干燥的三口圆底烧瓶，在室温下，依次加入K2CO3(0.28g，2.00mmol)，4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲醛(4)(0.29g，1.00mmol)，(1-重氮基-2-氧代丙基)-磷酸二甲酯(10)(0.19g，1.00mmol)，最后将MeOH-THF(体积比为1:1，20ml)加入到反应体系中，室温下继续搅拌应6h。反应过程中通过TLC监测反应进程。反应结束，将反应液过滤，除去K2CO3固体，加入20ml饱和食盐水，用乙酸乙酯萃取(3×50ml)，合并有机相，有机相用无水硫酸镁干燥，浓缩得到的粗品用硅胶拌样，通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝100:1)分离纯化得到{4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔(5)(0.21g，产率：73.32％)为亮黄色固体，TLC:Rf＝0.45(CH2Cl2:CH3OH＝20:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.29(s,1H),8.76(d,J＝4.0Hz,1H),8.55(d,J＝4.8Hz,1H),8.42(d,J＝8.0Hz,1H),8.35(s,1H),7.48(dd,J＝5.2,8.0Hz,1H),7.24-7.21(m,3H),7.05(s,1H),3.08(s,1H),2.39(s,3H)；MS(ESI+):287.25。
2.2.5 7a-7h的合成通法
取100ml三口圆底烧瓶，依次加入苯胺化合物(6)(1.10mmol)，NaNO2(2.19mmol)，超纯水(15ml)搅拌，在0℃下，滴加HCl(2.30mmol)的水溶液，滴加速度不宜过快，滴加完毕后，保持反应体系的温度在0-5℃继续反应1.5h，然后滴加入NaN3(1.32mmol)的水溶液，滴加完毕保持温度不变继续反应2h。反应过程中通过TLC监测反应进程。反应结束，将反应液用二氯甲烷萃取(5×80ml)，合并有机相，用饱和食盐水水洗，无水MgSO4干燥，加入10ml乙腈，浓缩，蒸除二氯甲烷，得到叠氮化合物(7)的乙腈溶液直接投下一步。
2.2.6 8a-8h的合成通法
取25ml三口圆底烧瓶，在室温下，依次加入{4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔(5)(478mg，1.67mmol)，重蒸的CH3CN(10ml)，在氮气保护下加入催化量的Cu2O-NP(Cu2O-NP中加入适量的超纯水，并在超声的作用下分散均匀)，将该混合物在超声发生器上超声15min，然后加入叠氮化合物(7)(1.67mmol)，氮气保护下继续搅拌反应12h。反应过程中通过TLC来监控反应进程。反应结束，过滤除去固体颗粒，滤液浓缩除去CH3CN，加入饱和食盐水(10ml)，二氯甲烷萃取(3×80ml)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到的粗品用硅胶拌样，通过硅胶柱色谱进行纯化得到化合物(8a-8h)。
实例1化合物8a：N-(5-[1-(4-(二乙胺基)苯基]-1H-1,2,3-[三氮唑]-4-基)-2-甲基苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的结构鉴定
通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝100:1,50:1)进行纯化得到化合物(8i)(202mg，产率：80.80％)为土黄色固体，TLC:Rf＝0.26(CH2Cl2:CH3OH＝50:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.32(s,1H),8.87(s,1H),8.47(s,1H),8.59-8.54(m,2H),8.08(s,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,3H),7.48(dd,J＝4.8,7.6Hz,1H),7.33(d,J＝7.6Hz,1H),7.23(d,J＝5.2Hz,1H),7.12(s,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,2H),3.44(q,J＝7.2Hz,4H),2.43(s,3H),1.23(t,J＝7.2Hz,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ162.5,160.7,159.2,151.5,148.4,147.9,137.8,134.9,131.0,129.3,128.1,122.3,120.8,118.8,117.6,111.7,108.2,44.7,18.0,12.5；MS(ESI+):477.19。
实例2化合物8b：N-(2-甲基-5-{1-{4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基}-1H-[1,2,3]-三氮唑-4-基}苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的结构鉴定
通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝30:1,10:1)进行纯化得到化合物(8b)(146mg，产率：51.16％)为淡黄色固体，TLC:Rf＝0.23(CH2Cl2:CH3OH＝10:1)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.43(s,1H),9.29(d,J＝2.0Hz,1H),9.08(s,1H),8.68(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.55(d,J＝5.2Hz,1H),8.48(d,J＝8.0Hz,1H),8.27(d,J＝9.2Hz,3H),7.98(d,J＝8.4Hz,1H),7.66(dd,J＝1.6,6.0Hz,1H),7.52(dd,J＝4.8,2.8Hz,1H),7.47(d,J＝5.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),3.69(s,2H),2.56-2.50(m,8H),2.32(s,6H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)：δ162.0,161.6,160.0,151.9,148.6,148.1,138.9,138.0,136.0,134.8,132.9,132.6,131.4,128.4,125.6,124.3,124.0,122.9,122.4,121.8,119.9,117.6,108.2,57.5,54.7,52.4,45.3,18.5；MS(ESI+):586.21。
实例3化合物8c：N-{5-[1-(4-甲氧基苯基)-1H-[1,2,3]-三氮唑-4-基]-2-甲苯基}-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的甲磺酸盐的结构鉴定
通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝100:1,50:1)进行纯化得到化合物(8c)的游离态(196mg，产率：85.88％)为黄色固体，TLC:Rf＝0.30(CH2Cl2:CH3OH＝50:1)；将得到的固体加入25ml的三口圆底烧瓶中，加入无水乙醇(5ml)，加热回流，慢慢滴加甲磺酸(29μl，0.45mmol)的乙醇溶液，会观察到溶液的黄色加深，继续回流1.5h，冷却，有黄色固体析出，过滤，干燥，得到的黄色固体即为化合物(8c)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.41(s,1H),9.30(s,1H),9.18(s,1H),9.01(d,J＝8.0Hz,1H),8.95(d,J＝4.8Hz,1H),8.65(d,J＝5.2Hz,1H),8.23(s,1H),8.03-8.00(m,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,2H),7.68(d,J＝7.6Hz,1H),7.56(d,J＝5.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz 1H),7.16(d,J＝8.8Hz,2H),3.84(s,3H),2.39(s,3H),2.31(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ161.2,160.3,159.9,159.7,147.6,146.2,143.4,141.2,138.5,135.1,132.9,131.5,130.6,128.8,126.9,122.5,122.2,122.0,119.7,115.4,108.5,56.1,18.4；MS(ESI+):436.64。
实例4化合物8d：N-(2-甲基-5-{1-[4-(四氢吡咯-1-基甲基)苯基]-1H-[1,2,3]-三氮唑-4-基}苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的结构鉴定
通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝20:1)进行纯化得到化合物(8d)(192mg，产率：75.00％)为淡黄色固体，TLC:Rf＝0.22(CH2Cl2:CH3OH＝20:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.35(d,J＝1.6Hz,1H),8.93(s,1H),8.75(dd,J＝1.2,4.8Hz,1H),8.56-8.52(m,2H),8.22(s,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,2H),7.62(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.23(d,J＝4.8Hz,1H),7.13(s,1H),3.72(s,2H),2.58(m,4H),2.43(s,3H),1.86-1.83(m,4H).13C NMR(100MHz,CDCl3)：δ162.5,160.6,159.2,151.6,148.5,148.5,140.1,137.9,136.0,134.8,132.7,131.0,130.1,128.8,128.2,123.8,120.8,120.4,118.6,117.4,108.3,60.0,54.2,23.5,18.0；MS(ESI+):489.18。
实例5化合物8e：(2-甲基-5-{1-[4-(吗啉-1-基甲基)-苯基]-[1,2,3]三氮唑-4-基}-苯基)-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺的结构鉴定
通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝20:1)进行纯化得到化合物(8e)(154mg，产率：58.33％)为淡黄色固体，TLC:Rf＝0.22(CH2Cl2:CH3OH＝50:1,30:1,20:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.35(s,1H),8.91(s,1H),8.74(s,1H),8.53(m,2H),8.21(s,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,2H),7.60(dd,J＝1.2,7.6Hz,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,2H),7.46(dd,J＝4.8,7.2Hz,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.21(d,J＝5.2Hz,1H),7.16(s,1H),3.75(t,J＝4.4Hz,4H),3.58(s,2H),2.49(t,J＝4.4Hz,4H),2.42(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)：δ162.5,160.6,159.2,151.5,148.6,148.5,138.8,137.9,136.1,134.8,131.0,130.3,128.8,128.2,120.8,120.4,118.7,117.4,108.2,67.0,62.7,53.6,18.0；MS(ESI+):505.25。
实例6化合物8f：N-{2-甲基-5-[1-(4-吗啉基苯基)-1H-[1,2,3]-三氮唑-4-基]苯基}-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的结构鉴定
通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝100:1,50:1)进行纯化得到化合物(8f)(167mg，产率：64.98％)为淡黄色固体，TLC:Rf＝0.25(CH2Cl2:CH3OH＝50:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.34(s,1H),8.90(s,1H),8.75(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.56(d,J＝5.2Hz,2H),8.14(s,1H),7.72(d,J＝9.2Hz,2H),7.61(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.48(dd,J＝4.8,7.6Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.23(d,J＝4.8Hz,1H),7.10(s,1H),7.04(d,J＝9.2Hz,2H),3.92(t,J＝4.8Hz,4H),3.26(t,J＝4.8Hz,4H),2.43(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ162.5,160.6,159.1,151.4,148.4,148.2,137.9,135.0,131.0,129.6,129.0,128.2,121.7,120.8,118.8,117.4,115.8,108.2,66.7,48.9,18.0；MS(ESI+):491.13。
实例7化合物8g：N-{2-甲基-5-[1-(2-吗啉基苯基)-1H-[1,2,3]-三氮唑-4-基]苯基}-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的结构鉴定
通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝100:1,50:1)进行纯化得到化合物(8g)(187mg，产率：72.76％)为淡黄色固体，TLC:Rf＝0.25(CH2Cl2:CH3OH＝50:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.31(s,1H),8.91(s,1H),8.74(s,1H),8.60(d,J＝8.0Hz,1H),8.57-8.55(m,2H),7.69(d,J＝7.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,2H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.24(d,J＝5.6Hz,2H),7.12(d,J＝7.6Hz,2H),3.65(t,J＝4.0Hz,4H),2.77(t,J＝4.0Hz,4H),2.45(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ162.6,160.7,159.1,151.4,148.3,147.8,145.5,138.0,135.0,131.1,130.8,130.3,129.0,128.3,126.9,123.8,121.0,120.7,119.6,118.7,108.3,67.0,51.4,18.0；MS(ESI+):491.15。
实例8化合物8h：N-(2-甲基-5-{1-[2-吗啉基-5-(三氟甲基)苯基]-1H-[1,2,3]-三氮唑-4-基}苯基)-4-(吡啶-3-基)嘧啶-2-胺的结构鉴定
通过硅胶柱色谱(CH2Cl2:CH3OH＝100:1,50:1)进行纯化得到化合物(8h)(198mg，产率：67.80％)为淡黄色固体，TLC:Rf＝0.24(CH2Cl2:CH3OH＝50:1)；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.32(s,1H),8.95(d,J＝1.2Hz,1H),8.73(d,J＝2.4Hz,1H),8.59-8.56(m,2H),8.51(s,1H),7.95(d,J＝1.6Hz,1H),7.72(dd,J＝1.6,8.4Hz,1H),7.58(dd,J＝1.6,8.0Hz,1H),7.48(dd,J＝4.8,8.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.26-7.24(m,2H),7.17(s,1H),3.67(t,J＝4.8Hz,4H),2.81(t,J＝4.8Hz,4H),2.453(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ162.7,160.6,159.2,151.6,148.5,148.4,138.1,134.9,131.2,130.2,128.6,128.4,127.3,127.2,124.6,124.5,123.8,120.7,120.6,119.6,118.6,108.4,66.7,50.9,18.0；MS(ESI+):559.67。
实施例2在实施例1中制备得到的实例1至实例8化合物的活性测试
MTT粉末购买于Sigma公司，用磷酸缓冲液(PBS)将其配制成浓度为5毫克/毫升的溶液，选取0.22μm滤膜进行过滤，然后于4℃下避光保存。K562细胞(慢性粒细胞白血病细胞系)购于自北京金紫晶生物科技有限公司。实验中所使用的细胞培养基为改良型RPMI-1640(Hyclone)基础培养基，添加10％的胎牛血清(Hyclone)。
MTT比色法测定细胞活性包括下面几个步骤(以K562细胞的测试方法为例，KG1a HL60细胞的测试方法与K562细胞的方法一致)：
(1)选取处于对数生长期的K562细胞，按每孔3×103接种于96孔板，5％CO2，37℃孵育培养过夜。
(2)加药，本实验中设置了9个浓度梯度，体系中药物终浓度梯度为：30μM，15μM，7.5μM，3.7μM，1.8μM，0.9μM，0.5μM，0.2μM，0.1μM。每个浓度5个复孔，同时设置对照组(不加药仅接种细胞)及空白孔(未接种细胞仅加培养基)，5％CO2，37℃培养箱孵育72小时。
(3)每孔再加入20μL MTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，继续培养4小时。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲洗2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
(4)4小时后终止培养，小心地吸去孔内的液体。并向每孔加入150μL的二甲基亚砜。然后置于摇床上低速振荡15min左右，使结晶物充分溶解。采用酶联免疫检测仪MULTISKAN FC(Thermo scientific)测定490nm处及570nm各孔的吸光度值，测量时以空白孔作为调零孔。
(5)处理数据。以药物浓度为横坐标，细胞数为纵坐标，用数据处理软件SPSS软件(IBM公司)进行几率单位加权回归法(Bliss法)进行数据处理，作图，得到IC50和IC90值，IC50和IC90见表1。
表1实例1-8化合物对K562-3d、HL60、KG1a细胞的IC50和IC90值
通过表1，可以看出在实施例中制备的实例1至实例8化合物(分别对应于化合物8a-8h)均可以有效地抑制K562-3d、HL60、KG1a细胞的增殖，特别是实例2化合物(化合物8b)在药物浓度低于阳性对照药物伊马替尼的情况下，仍可以同样实现有效抑制K562-3d、HL60、KG1a细胞增殖的效果，因此，本发明提供的实例1至实例8化合物可以用于治疗白血病。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (11)
1.一种含1,2,3三氮唑杂环类化合物，其特征在于，具有以下结构通式：
2.根据权利要求1所述的含1,2,3三氮唑杂环类化合物，其特征在于，所述结构通式中R包括以下基团：
3.一种含1,2,3三氮唑杂环类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下合成路线：
在纳米氧化亚铜(Cu2O-NP)催化作用下，使{4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔与叠氮化合物(R-N3)反应，生成所述含1,2,3三氮唑杂环类化合物；
其中，所述含1,2,3三氮唑杂环类化合物具有以下结构通式：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述结构通式中R包括以下基团：
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述{4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔的制备方法进一步包括：
在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、二氯甲烷、N-甲基吗啡啉和1-羟基苯并三唑一水物存在下，使4-甲基-2-[4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酸与二甲羟胺盐酸盐反应，生成N-甲氧基-N-甲基-4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酰胺；
在四氢呋喃存在下，使N-甲氧基-N-甲基-4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲酰胺与LiAlH4反应，生成4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲醛；以及
在甲醇、四氢呋喃和碳酸钾存在下，使4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯甲醛与(1-重氮基-2-氧代丙基)-磷酸二甲酯反应，生成{4-甲基-2-[(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-胺基]苯基}乙炔。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述(1-重氮基-2-氧代丙基)-磷酸二甲酯的制备方法进一步包括：
在丙酮存在下，使对甲基苯磺酰氯和叠氮化钠反应，生成4-甲基苯磺酰基叠氮；以及
在四氢呋喃和氢化钠存在下，使4-甲基苯磺酰基叠氮与丙酮基膦酸二甲酯反应，生成所述(1-重氮基-2-氧代丙基)-磷酸二甲酯。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述叠氮化合物(R-N3)的制备方法进一步包括：
在亚硝酸钠和盐酸存在下，使苯胺化合物(R-NH2)与叠氮化钠反应，生成所述叠氮化合物(R-N3)；
其中，所述R包括以下基团：
8.根据权利要求1-7中任一项所述的含1,2,3三氮唑杂环类化合物在用于治疗白血病的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述用于治疗白血病的药物包含所述含1,2,3三氮唑杂环类化合物、所述含1,2,3三氮唑杂环类化合物在药学上可接受的盐、酯、水合物或它们的组合以及辅料。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述治疗白血病的药物的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂或它们的组合。
11.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述治疗白血病的药物的给药方式包括口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入或它们的组合。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20161207 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |