CN106153758A - 一种依维莫司中间体的含量测定方法 - Google Patents
一种依维莫司中间体的含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106153758A CN106153758A CN201510205557.3A CN201510205557A CN106153758A CN 106153758 A CN106153758 A CN 106153758A CN 201510205557 A CN201510205557 A CN 201510205557A CN 106153758 A CN106153758 A CN 106153758A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- everolimus
- content assaying
- assaying method
- methanol
- buffer salt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及一种依维莫司中间体的含量测定方法,用于依维莫司中间体的质量控制,是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(C18,4.6×250mm,5μm),以缓冲盐溶液和甲醇为流动相,以检测波长为272~282nm,柱温为55~65℃,进行高效液相色谱法含量测定。本发明的含量测定方法可以有效的将依维莫司中间体及其杂质分开,而且该方法具有灵敏度及分离度高,操作简单,重复性及耐用性好,结果稳定可靠的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种物质的含量测定方法,尤其是依维莫司中间体的含量测定方法。
背景技术
依维莫司(everolimus)是新一代大环内酯类雷帕霉素衍生物药物。该药由诺华制药公司(Novartis Corp.)开发并于2004年首先在德国上市,主要用于1)其它药物治疗无效的晚期肾癌;2)可增补神经钙蛋白抑制剂环孢素的免疫抑制作用,用于预防心脏或肾脏移植的排异反应;3)药物支架用药,是目前药物洗脱支架最常用的药物之一。
(3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E,21S,23S,26R,27R,34aS)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氢-9-三甲基硅氧基-27-羟基-3-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-羟基-3-甲氧环己基]-1-甲基乙基]-10,21-二甲氧基-6,8,12,14,20,26-六甲基-23,27-环氧-3H-吡啶并[2,1-c][1,4]-氧杂氮杂三十一环烯-1,5,11,28,29(4H,6H,31H)-戊酮是合成依维莫司的重要中间体,其化学式为C54H87NO13Si,结构式如下:其中,TMS为三甲基硅基团,即Si(CH3)3。
专利WO2012103959A1和CN101175760A中虽然记载了依维莫司及雷帕霉素相关衍生物的分析方法,但并未记载该中间体的含量测定方法,而且对该中间体的含量测定在中间体产品的质量控制过程乃至依维莫司的质量控制过程中都起着非常重要的作用,所以建立一种稳定有效的含量测定方法对该中间体进行质量控制是非常必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种依维莫司中间体的含量测定方法,用于依维莫司中间体的质量控制。
为了实现本发明的目的,发明人通过大量试验,最终获得如下技术方案:
依维莫司中间体的含量测定方法,是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(C18,4.6×250mm,5μm),以缓冲盐溶液和甲醇的混合溶液为流动相,以检测波长为272~282nm,柱温为55~65℃,进行高效液相色谱法分析测定。
所述流动相中缓冲盐溶液与甲醇的体积比为5~15:95~85,优选为8:92。
所述流动相中缓冲盐溶液的浓度为0.01~0.04mol/L,缓冲盐选自磷酸二氢铵、磷酸氢二铵和醋酸铵中的一种,优选为磷酸二氢铵。
所述的检测波长优选为277nm,柱温优选为60℃。
本发明所述的含量测定方法,可通过以下步骤实现:
a、取依维莫司中间体样品适量,用甲醇或乙腈溶解,配制成每1mL含依维莫司中间体0.1~0.6mg的样品溶液;
b、设置流动相流速为0.7~1.2mL/min,检测波长为272~282nm,柱温为55~65℃;
c、取a的样品溶液10μL注入高效液相色谱仪,完成含量测定;
其中:
高效液相色谱仪:Agilent 1260液相色谱系统;
色谱柱:Agilent,SB-C18适用;4.6×250mm,5μm;
流动相:体积比为8:92的0.02mol/L的磷酸二氢铵溶液与甲醇;
检测波长:277nm;
柱温:60℃;
流速:1.0mL/min。
本发明涉及的含量测定方法,可以有效的将依维莫司中间体及其杂质分开,而且该方法分离度(高达2.99)及灵敏度高,操作简单,重复性及耐用性好,结果稳定可靠,从而可用于依维莫司中间体的质量控制,为最终成品的质量提供有效保障。
附图说明
图1实施例1的依维莫司中间体HPLC图谱。
图2实施例2的依维莫司中间体HPLC图谱。
图3实施例3的依维莫司中间体HPLC图谱。
图4实施例4的依维莫司中间体HPLC图谱。
图5实施例5的依维莫司中间体HPLC图谱。
图6实施例9的依维莫司中间体线性工作曲线。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例,对本发明的技术方案做进一步的描述,但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1
仪器与条件:Agilent 1260液相色谱系统,DAD检测器,色谱柱:Agilent,SB-C18适用;4.6×250mm,5μm,检测波长277nm,柱温60℃,流速1.0mL/min,流动相:体积比为8:92的0.02mol/L的磷酸二氢铵溶液与甲醇。
实验步骤:将依维莫司中间体用乙腈溶解并定量稀释制成每1mL中含依维莫司中间体0.5mg的溶液,作为供试品溶液,精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见附图1。
附图1表明,在该色谱条件下,依维莫司中间体峰和杂质峰可以完全分离,且依维莫司中间体峰的保留时间在8.687min,分离度为2.96。
实施例2
仪器与条件:Agilent 1260液相色谱系统,DAD检测器,色谱柱:Agilent,SB-C18适用;4.6×250mm,5μm,检测波长277nm,柱温60℃,流速0.7mL/min,流动相:体积比为5:95的0.01mol/L的磷酸二氢铵溶液与甲醇。
实验步骤:将依维莫司中间体用甲醇溶解并定量稀释制成每1mL中含依维莫司中间体0.5mg的溶液,作为供试品溶液,精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见附图2。
附图2表明,在该色谱条件下,依维莫司中间体峰和杂质峰可以完全分离,且依维莫司中间体峰的保留时间在9.634min,分离度为2.78。
实施例3
仪器与条件:Agilent 1260液相色谱系统,DAD检测器,色谱柱:Agilent,SB-C18适用;4.6×250mm,5μm,检测波长277nm,柱温60℃,流速1.2mL/min,流动相:体积比为15:85的0.04mol/L的磷酸二氢铵溶液与甲醇。
实验步骤:将依维莫司中间体用乙腈溶解并定量稀释制成每1mL中含依维莫司中间体0.5mg的溶液,作为供试品溶液,精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见附图3。
附图3表明,在该色谱条件下,依维莫司中间体峰和杂质峰可以完全分离,且依维莫司中间体峰的保留时间在7.848min,分离度为2.83。
实施例4
仪器与条件:Agilent 1260液相色谱系统,DAD检测器,色谱柱:Agilent,SB-C18适用;4.6×250mm,5μm,检测波长277nm,柱温60℃,流速1.0mL/min,流动相:体积比为8:92的0.03mol/L的磷酸氢二铵溶液与甲醇。
实验步骤:将依维莫司中间体用乙腈溶解并定量稀释制成每1mL中含依维莫司中间体0.5mg的溶液,作为供试品溶液,精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见附图4。
附图4表明,在该色谱条件下,依维莫司中间体峰和杂质峰可以完全分离,且依维莫司中间体峰的保留时间在8.256min,分离度为2.75。
实施例5
仪器与条件:Agilent 1260液相色谱系统,DAD检测器,色谱柱:Agilent,SB-C18适用;4.6×250mm,5μm,检测波长277nm,柱温60℃,流速1.0mL/min,流动相:体积比为8:92的0.02mol/L的醋酸铵溶液与甲醇。
实验步骤:将依维莫司中间体用甲醇溶解并定量稀释制成每1mL中含依维莫司中间体0.5mg的溶液,作为供试品溶液,精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪,按上述条件进行高效液相色谱分析,记录色谱图,结果见附图5。
附图5表明,在该色谱条件下,依维莫司中间体峰和杂质峰可以完全分离,且依维莫司中间体峰的保留时间在9.318min,分离度为2.44。
实施例6
系统适应性实验
仪器与条件:与实施例1中的相同。
实验步骤:取本品适量,精密称定,加乙腈溶解并稀释制成每1mL中含0.5mg的溶液,作为供试品溶液。取供试品溶液,连续进样六次,分别计算依维莫司中间体峰峰面积以及保留时间的相对标准偏差,实验结果见表1。
表1依维莫司中间体系统适用性实验结果
由表1可知,依维莫司中间体峰与相邻杂质峰的分离度均大于1.5,对称因子均小于1.5,理论板数均高于2500,峰面积的相对标准偏差为0.21%,保留时间的相对标准偏差为0.02%。可见,各参数均符合中国药典要求的限度,故在该色谱条件下,依维莫司中间体及其杂质可以完全分离,峰形较好,而且相对标准偏差较小,所得结果稳定可靠。
实施例7
重复性实验
仪器与条件:与实施例1中的相同。
实验步骤:取本品适量,精密称定,加乙腈溶解并稀释制成每1mL中含0.5mg的溶液,作为供试品溶液,同法配制6份供试品溶液。取供试品溶液,连续进样六次,按面积归一化法计算依维莫司中间体的含量,并计算其相对标准偏差,实验结果见表2。
表2依维莫司中间体重复性实验结果
由表2可知,各供试品溶液中依维莫司中间体的含量没有明显差异,相对标准偏差为0.04%,可见本分析检测方法的重复性良好。
实施例8
耐用性实验
仪器与条件:除柱温、流速和检测波长外(见表3),其他条件与实施例1中的相同。
实验步骤:取本品适量,精密称定,加乙腈溶解并稀释制成每1mL中含0.5mg的溶液,作为供试品溶液。分别通过改变柱温、流速和检测波长,记录依维莫司中间体含量的变化情况(按面积归一化法计算),实验结果见表3。
表3依维莫司中间体耐用性实验结果
由表3可知,改变柱温、流速和检测波长后,依维莫司中间体含量的测定结果没有明显差异,可见本发明分析检测方法的耐用性良好。
实施例9
线性与范围
仪器与条件:与实施例1中的相同。
实验步骤:精密称取本品50.45mg,置50mL容量瓶中,加乙腈溶解并稀释至刻度作为线性储备液。精密量取线性储备液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL分别置10mL容量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,依法测定。以供试品溶液的浓度(mg/mL)为横坐标,以依维莫司中间体峰面积为纵坐标进行线性回归,得线性回归方程y=26242.8148x+117.2706,趋势线的相关系数R2=1.0000,结果见图6。
图6表明,本品在0.1009~0.6054mg/mL的浓度范围内线性关系良好。
实施例10
检测限
仪器与条件:与实施例1中的相同。
实验步骤:取本品适量,精密称定,加乙腈溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液作为储备液。加乙腈采用逐步稀释法,以S/N≈3时的浓度作为检测限浓度,此时依维莫司中间体的浓度为0.0306μg/mL,检测限为0.306ng,可见本方法及仪器的灵敏度较高。
Claims (6)
1.一种依维莫司中间体的含量测定方法,采用高效液相色谱法进行测定,其特征在于包括以下步骤:
a、取依维莫司中间体样品适量,用甲醇或乙腈溶解,配制成每1mL含依维莫司中间体0.1~0.6mg的样品溶液;
b、设置流动相流速为0.7~1.2mL/min,检测波长为272~282nm,柱温为55~65℃;
c、取a的样品溶液10μL注入高效液相色谱仪,完成含量测定;
其中,色谱柱:C18,4.6×250mm,5μm;所述流动相为缓冲盐溶液和甲醇的混合溶液体系,缓冲盐溶液的浓度为0.01~0.04mol/L。
2.如权利要求1所述的含量测定方法,其特征在于:所述流动相中缓冲盐溶液与甲醇的体积比为5~15:95~85。
3.如权利要求2所述的含量测定方法,其特征在于:所述流动相中缓冲盐溶液与甲醇的体积比为8:92。
4.如权利要求1、2或3所述的含量测定方法,其特征在于:所述流动相中缓冲盐选自磷酸二氢铵、磷酸氢二铵和醋酸铵中的一种。
5.如权利要求4所述的含量测定方法,其特征在于:所述流动相中缓冲盐为磷酸二氢铵。
6.如权利要求1所述的含量测定方法,其特征在于:所述的流动相流速为1.0mL/min,检测波长为277nm,柱温为60℃。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510205557.3A CN106153758B (zh) | 2015-04-25 | 2015-04-25 | 一种依维莫司中间体的含量测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510205557.3A CN106153758B (zh) | 2015-04-25 | 2015-04-25 | 一种依维莫司中间体的含量测定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106153758A true CN106153758A (zh) | 2016-11-23 |
CN106153758B CN106153758B (zh) | 2020-03-31 |
Family
ID=57347492
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510205557.3A Active CN106153758B (zh) | 2015-04-25 | 2015-04-25 | 一种依维莫司中间体的含量测定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106153758B (zh) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6277983B1 (en) * | 2000-09-27 | 2001-08-21 | American Home Products Corporation | Regioselective synthesis of rapamycin derivatives |
CN101633669A (zh) * | 2008-07-23 | 2010-01-27 | 中国科学院上海药物研究所 | 选择性硅醚化保护雷帕霉素31位或42位羟基的新方法 |
WO2012103959A1 (en) * | 2011-02-04 | 2012-08-09 | Synthon Bv | Process for making everolimus |
CN102786534A (zh) * | 2012-05-25 | 2012-11-21 | 上海现代制药股份有限公司 | 一种依维莫司的制备方法 |
US20140299765A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-10-09 | Thermo Finnigan Llc | Apparatus for Improved Immunosuppressant Drug Monitoring |
-
2015
- 2015-04-25 CN CN201510205557.3A patent/CN106153758B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6277983B1 (en) * | 2000-09-27 | 2001-08-21 | American Home Products Corporation | Regioselective synthesis of rapamycin derivatives |
CN101633669A (zh) * | 2008-07-23 | 2010-01-27 | 中国科学院上海药物研究所 | 选择性硅醚化保护雷帕霉素31位或42位羟基的新方法 |
WO2012103959A1 (en) * | 2011-02-04 | 2012-08-09 | Synthon Bv | Process for making everolimus |
CN102786534A (zh) * | 2012-05-25 | 2012-11-21 | 上海现代制药股份有限公司 | 一种依维莫司的制备方法 |
US20140299765A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-10-09 | Thermo Finnigan Llc | Apparatus for Improved Immunosuppressant Drug Monitoring |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
SHUANG CAO ET AL.: "Selective Substitution of 31/42-OH in Rapamycin Guided by an in Situ IR Technique", 《MOLECULES》 * |
刘飞 等: "依维莫司合成路线综述", 《国外医药(抗生素分册)》 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106153758B (zh) | 2020-03-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104655751B (zh) | 一种检测达泊西汀中有机溶剂残留的方法 | |
CN110320293B (zh) | 一种测定苯酞类化合物中残留溶剂的方法 | |
CN105334274B (zh) | 枸橼酸托法替布含量及其有关物质的反相高效液相色谱法测定方法 | |
CN104062375B (zh) | 一种同时检测药品及其对映异构体杂质的方法 | |
CN108226309A (zh) | 一种右丙亚胺的分析方法 | |
CN105699524B (zh) | 一种替格瑞洛中异构体杂质含量的检测方法 | |
CN107543872B (zh) | 通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法 | |
CN103344733A (zh) | 一种硼替佐米对映异构体的高效液相色谱分离检测方法 | |
CN105203658A (zh) | 一种依折麦布中残留溶剂的检测方法 | |
CN105510482B (zh) | 一种替格瑞洛原料中异构体杂质含量的检测方法 | |
CN105388223A (zh) | 一种地西他滨杂质的检测方法 | |
CN106053625A (zh) | 一种用hplc法测定盐酸去甲乌药碱有关物质的方法 | |
CN105004803B (zh) | 一种分离测定托伐普坦中多个杂质的液相色谱方法 | |
CN104535690B (zh) | 一种测定桂利嗪固体制剂中桂利嗪含量的方法 | |
CN103884784B (zh) | 一种培美曲塞二钠中间体的分析检测方法 | |
CN106525994A (zh) | 一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法 | |
CN104515816A (zh) | 一种安立生坦原料及制剂有关物质的检测方法 | |
Urbánek et al. | Development and validation of a liquid chromatography method for the simultaneous determination of α‐tocopherol, retinol and retinyl esters in human serum using a monolithic column for the monitoring of anticancer therapy side effects | |
CN106153758A (zh) | 一种依维莫司中间体的含量测定方法 | |
CN106153756B (zh) | 一种检测依维莫司中雷帕霉素的高效液相色谱法 | |
CN102928525A (zh) | 硫酸头孢匹罗/氯化钠注射液中的头孢匹罗有关物质ⅱ的检测方法 | |
CN104655757B (zh) | Bc-02的液相色谱检测方法 | |
CN104965031B (zh) | 复方酮洛芬奥美拉唑缓释胶囊的含量测定方法 | |
Yasui-Furukori et al. | Determination of fluvoxamine and its metabolite fluvoxamino acid by liquid–liquid extraction and column-switching high-performance liquid chromatography | |
CN112684031A (zh) | 聚维酮k30含量的hplc测定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |